大孔吸附树脂分离纯化白芍总皂苷的研究

轻缺血性脑损伤[3,4]。本研究结果显示:脑梗死组血清VEGF水平明显高于健康对照组,而且脑梗死急性期的2周内VEGF的变化随着病程呈动态变化过程。患者血清VEGF浓度呈高表达,从第1~7天为上升趋势,以第7天为最高,第14天开始回降,这表明VEGF对缺氧因素的反应,存在负反馈机制。在缺血性卒中急性期,脑血流减少,迅速上调VEGF表达,促进缺血半暗带脑血管新生,随侧支循环的建立,脑血供得到改善,VEGF的产生逐渐减少。本研究结果显示:脑梗死患者急性期经脑心通胶囊干预治疗后,血清VEGF能保持在一个相对较高的水平,1~14天各时间段VEGF水平均高于对照组,表明脑心通胶囊能促进VEGF的产生和分泌。本文还显示,由于两组患者都同样接受抗凝、抗栓等治疗,故治疗组与对照组间的fib水平在各时间点比较并无显著性差异,但经过脑心通胶囊干预治疗后,治疗组患者血清VEGF一直保持在一个相对较高的水平,且治疗组的神经功能评分较对照组明显改善(P<0󰀁05),证明脑梗死患者临床症状的改善与血清VEGF浓度高低有关。亦有文献报道,VEGF水平与患者预后密切相关[5]。脑心通胶囊由黄芪、川芎、全蝎、地龙、水蛭等组成,属于中药复方制剂,具有益气活血、化瘀通络之功效。现代药理研究证实,该药对大鼠实验性脑缺血具有明显的保护作用,可降低脑缺血所致脑血管通透性及脑含水量增加等病理改变[6]。结合本研究结果,我们认为该药主要通过诱导VEGF的表达,从而加强脑梗死患者新生血管的形成和侧支循环的建立,改善脑血液供应,改善脑缺血缺氧,达到临床治疗作用。目前研究发现,外源性VEGF的给予能减轻缺血性脑损伤梗死面积,增加半暗带区脑组织中毛细血管的密度,改善神经功能[7]。但由于存在着给药途径、剂量和安全给药的问题,要过渡到临床还需要很长的一段时间。因此,利用中医中药来辩证治疗,促进内源性VEGF的生成及分泌,是今后中西医结合治疗脑梗死的重要研究方向。参考文献1󰀁NishijimaK,NgYS,ZhongL,etal.Vascularendothelialgrowthfactor-Aisasurvivalfactorforretinalneuronsandacriticalneuroprotectantduringtheadaptiveresponsetoischemicinjury.AmJPatho,l2007,171(1):53-672󰀁中华神经科学会.各类脑血管病诊断要点.中华神经科杂志,1996,29(6):379-3813󰀁ShinYJ,ChoiJS,LeeJY,etal.Differentialregulationofvascularendo󰀂thelialgrowthfactor-Canditsreceptorintherathippocampusfollow󰀂ingtransientforebrainischemia.ActaNeuropatho,l2008,116(5):517-5274󰀁StoweAM,PlautzEJ,Eisner-JanowiczI,etal.VEGFproteinassoci󰀂atestoneuronsinremoteregionsfollowingcorticalinfarct.JCerebBloodFlowMetab,2007,27(1):76-855󰀁潘秋荣.急性脑梗塞治疗前后血清VEGF、TGF-󰀁1水平的变化及其临床意义.放射免疫学杂志,2007,20(6):595-5966󰀁魏瑞,何明大,刘石梅,等.步长脑心通对血管性痴呆大鼠血管内皮细胞生长因子作用的影响.脑与神经疾病杂志,2006,14(2):108-1097󰀁MaurerMH,ThomasC,B󰀁rgersHF,etal.Transplantationofadultneu󰀂ralprogenitorcellstransfectedwithVascularEndothelialGrowthFactorrescuesgraftedcellsintheratbrain.IntJBiolSc,i2008,4(1):1-7(收稿:2010-04-22)

󰀁󰀁基金项目:浙江省科技厅科研院所研究开发项目(2006F13025)󰀁󰀁作者单位:310007󰀁杭州,浙江中医药大学

大孔吸附树脂分离纯化白芍总皂苷的研究郑军献󰀁浦锦宝󰀁胡轶娟󰀁梁卫青󰀁魏克民摘󰀁要󰀁目的󰀁研究大孔吸附树脂分离纯化白芍总皂苷的工艺条件及参数。方法󰀁以白芍总皂苷的吸附量和洗脱率为指标,筛选大孔吸附树脂,并研究所选树脂分离纯化白芍总皂苷的吸附和洗脱条件。结果󰀁AB-8树脂对白芍总皂苷有较好的吸附分离性能。最佳工艺条件为:上样浓度为0.2g(生药)/m,l以10BV70%乙醇溶液洗脱,吸附及洗脱流速均为2BV/h,洗脱液蒸干,即得纯化的白芍总皂苷提取物。纯化后白芍总皂苷含量大于60%。结论󰀁AB-8大孔吸附树脂分离纯化白芍总皂苷是可行的。关键词󰀁白芍󰀁总皂苷󰀁大孔吸附树脂󰀁分离纯化

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󰀁󰀂论󰀁󰀁著󰀂JMedRes,Nov2010,Vo.l39No.11󰀁󰀁StudyonSeparationandPurificationofTotalGlucosidesfromPaeoniaLactifloriaPall.byMacroporousResins.󰀁ZhengJunxian,PuJin󰀂bao,HuYijuan,LiangWeiqing,WeiKemin.ZhejiangTraditionalChineseMedicineAcademy,Zhejiang310007,ChinaAbstract󰀁Objective󰀁TooptimizethetechnicalparametersofseparationandpurificationoftotalGlucosidesfromPaeonialactifloriapal.lbymacroporousresins.Methods󰀁BasedonabsorptivecapacityandelutionefficiencyoftotalglucosidesfromPaeonialactifloriapal.l,thebesttypeofresinandtheconditionstoseparateandpurifytotalglucosidesbymacroporousresinswereopti-mized.Results󰀁TheAB-8resinwaschosen,washedwith10BVof70%ethano,landwiththeabsorptionandelutionvelocityofflow2BV/h.Theopti󰀂malconcentrationoftherawmaterialwas0.2g/m.lThepurityoftotalgucosidesobtainedwasover60%.Conclusion󰀁UsingAB-8res󰀂intoseparateandpurifytotalglucosidesfromPaeonialactifloriaPal.lisfeasible.Keywords󰀁Paeonialactifloriapal.l;Totalglucosides;Macroporousresins;Separationandpurification

󰀁󰀁白芍来源于毛茛科植物芍药Paeonialactifloriapal.l的干燥根[1]。其主要有效成分为芍药苷(paeon󰀂iflorin)、芍药内酯苷(albiflorin)、氧芍药苷(oxypaeoni󰀂florin)、苯甲酰芍药苷(benzoylpaeoniflorin)等,通称为白芍总苷(totalglucosidesofpaeony,TGP),具有镇静、镇痛、抗炎、保肝等活性[2]。参考有关文献[3~10],本文通过对AB-8型大孔吸附树脂富集纯化白芍总苷工艺条件参数的研究,进一步探索其合理的工艺流程。材料与方法1.试验材料:白芍饮片,本院中药房提供,经鉴定为毛茛科植物芍药(Paeonialactiflorapall)的干燥根;苯甲酸对照品,中国药品生物制品检定所,批号:100419-200301;AB-8大孔吸附树脂;纯净水:自制;甲醇、异丙醇:色谱纯;其他试剂为分析纯。2.试验仪器:KQ3200DB型不锈钢新型电热恒温水浴锅(嘉兴市中新医疗仪器有限公司);液相色谱仪:prostar230(三元泵)、prostar330(二极管阵列检测器)、prostar410(自动进样器)。YMC-PackODS-A色谱柱(250 4.6mm)(编号:042582528)。3.试验方法:(1)树脂预处理:以95%乙醇浸泡树脂24h,充分溶胀后湿法装柱,以95%乙醇洗脱至流出液澄清,流出液与95%乙醇紫外扫描吸收相近为止,再用蒸馏水洗至无醇味,备用。(2)白芍总苷的含量测定方法[11]:1)色谱条件:色谱柱:YMC-PackODS-A(5󰀂m,150mm 4.6mm)HPLC色谱柱;流动相:甲醇-0.05mol/L磷酸-异丙醇-冰乙酸(85!155!4!6);流速:1.0ml/min;检测波长:230nm,柱温:30∀。在此条件下,样品中苯甲酸与相邻成分达到基线分离。2)对照品溶液的制备:精密称取苯甲酸对照品50.5mg,置50ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取1ml置5ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,即得。3)上柱药液的制备:取白芍饮片200g,加8倍量70%乙醇加热回流3次,每次2h,合并滤液,回收乙醇,加水稀释1000ml。4)大孔吸附树脂的筛选:称取经过预处理的6种树脂DM-130、860021、AB-8、DM-2、DM-131、D101各5.0g,于100∀干燥至恒重,计算出每克处理后的树脂相当于干树脂的质量(W)。另取1份上述大孔吸附树脂(相当于5g干重),置于50ml具塞锥形瓶中,加入15ml(V)已知浓度(C0)的样品液,25∀在水浴恒温振荡器上振荡至吸附平衡(24h),过滤,测定吸附液中总黄酮的平衡浓度(Ce)。将达到吸附平衡的树脂过滤,然后置于50ml具塞锥形瓶中,加入50ml(v)70%乙醇,25∀在水浴恒温振荡器上振荡解吸24h,测定解吸液浓度(C1)。按下式分别计算静态吸附量、静态吸附率和解吸率,静态吸附量(mg/g)=(C0-Ce) V/W,解吸率(%)=V1C1/[(C0-Ce) V] 100%。5)AB-8大孔吸附树脂纯化白芍总皂苷的工艺参数研究:#最大动态吸附量的考察:称取已预处理的AB-8树脂大孔吸附树脂80g(干重),装柱,取白芍提取液[2.0g(生药)/ml]50m,l以1BV/h的速度上样,收集流出液。放置2h后,加去离子水以1BV/h的速度洗脱,1BV/份收集,测定流出液及洗脱液中白芍总皂苷的含量;∃洗脱预实验:取经过预处理的AB-8大孔吸附树脂装柱(4cm 20cm),取白芍提取液100m,l上柱,静置2h,用大量的水洗脱至洗脱液近无色,再分别用10%、20%、30%、40%、50%、70%的乙醇洗脱,流速为1BV/h,体积为200m,l测定洗脱液中白芍总皂苷的含量;%上柱速度的考察:取白芍提取液100ml[2.0g(生药)/ml],分别以1BV/h、2BV/h、3BV/h的速度上样,收集流出液,放置2h后,加去离子水以1BV/h的速度洗脱至流出液颜色基本无变化,1BV/份收集洗脱液,测定流出液及洗脱液中白芍总皂苷的含量;&上样液浓度的考察:照上柱药液的制备方法制备上样液,分别制备了浓度为2.0g(生药)/ml、1.0g(生药)/ml、0󰀁4g(生药)/ml、0.2g(生药)/ml、0.1g(生药)/ml的上样液,将4种不同浓度的上样液分别通过80g(湿重)已处理好的AB-8树脂进行吸附,加去离子水10BV以1BV/h的速度洗脱,1BV/份收集,测定流出液和洗脱液中白芍总皂苷的含量;∋洗脱剂浓度及用量的考察:取已预处理的AB-8大孔吸附树脂80g(干重),共3根,分别取白芍提取液80m,l以80ml/h的速度上样,放置2h后,加去离子水以1BV/h的速度洗脱至流出液颜色基本无变化,再分别用50%、60%、70%乙醇以1BV/h的速度洗脱至流出液颜色基本无变化,1BV/份收集,测定洗脱液中白芍总皂苷的含量;(洗脱速度的考察:取白芍提取液[2.0g(生药)/ml]80m,l共4份,上样,放置2h后,加去离子水以1BV/h的速度洗脱至流出液颜色基本无变化,分别用70%乙醇10BV对3根柱子以1BV/h、2BV/h、3BV/h、4BV/