β-内酰胺酶的分类及检测
金属β-内酰胺酶检测方法学研究进展
一
Ｂｓ ｕｈ等对 口内酰胺 酶 功 能 的 分类 ， Ｌ分 别 属 于 Ｂ 一 ＭＢ 类 和第三 类 群 。该 酶 广 泛 水 解 （ 括 碳 青 霉 烯 类 、 包 广
霉 烯 类抗 生 素耐 药 ， 用 ＭＢ 运 Ｌ酶抑 制 剂 、一 口 内酰 胺 类 抗 生 素 （ 用 头 孢 他 啶或 亚 胺 培 南 ） 同增 效 原 理 。 多 协 由于 酶抑制 剂对 ＭＢ Ｌ不 同 的抑 制 水 平 以及 ＭＢ Ｌ对 头 孢 他啶或 亚胺 培南 不 同 的抗 性 ， 待测 细 菌 常 易漏 诊 特 别是肠 杆 菌属 细菌 ， 而且 铜 绿 假单 胞 菌 常 因为 外 膜 蛋 白（ ｒ 水 平 的改 变 而 出 现 假 阳 性 结 果 ， 以 目 Ｏｐ Ｄ） 所 前 还没 有一 个准 确 的表型检 测 方法 用 于所 有 ＭＢ Ｌ的 检 测 。随着 ＭＢ Ｌ种类 、 数量 不 断增 加 ， 种 表 型检 测 各
谱头孢 菌 素类 等 ） 多种 ｐ内酰 胺 类 抗 生 素 ， 常 用 ０ 烯 类抗 生 素 的 ＭＩ 假 单 胞 菌属 天 然 高 于 肠 杆 菌属 ， 对 一 Ｃ， 内酰 胺酶抑 制 剂（ 克拉 维 酸 、 巴坦 等 ） 敏 感 。近 所 以没 有 严 格 的 ＭＩ 如 舒 不 Ｃ限 定 标 准 ， 者 建 议 当假 单 胞 学 十年 来 ， 得 性 ＭＢ 在 世 界 范 围 被 广 泛 地 发 现 ， 获 Ｉ 以 菌属 、 动杆 菌 属 和 肠 杆 菌 属 对 亚 胺 培 南 的 ＭＩ 分 不 Ｃ
Ｉ ＭＰ、 Ｍ 型为 主 且 可 分 为 多种 亚 型 。此 外 ， ＶＩ 还包 括
细菌的耐药性与超广谱β—内酰胺酶
细菌的耐药性与超广谱β—内酰胺酶细菌耐药性分为固有耐药（intrinsic resistance）与获得耐药（acquired resistance）。
固有耐药是由细菌染色体决定，代代相传的耐药性。
获得性耐药是指细菌在接触抗生素后，改变代谢途径，自身对抗生素或抗菌药物具有不被杀灭的抵抗力。
这种获得性耐药大多由质粒介导，少数由染色体介导[1]。
β—内酰胺酶可由质粒介导或染色体介导而产生，分别称之为质粒介导酶（plamid-mediatedβ-lactamase）和染色体介导酶（chromosome-mediatedβlactamase）。
超广酶β-内酰胺酶（ectended-spectrumβ-lactamases,ESBLs）是能水解第三代头孢菌素如头孢他啶、头孢噻肟及单氨类抗生素如氨曲南并介导细菌对这些抗生素耐药的β-内酰胺酶[2]。
目前临床分离产ESBLs菌不断增加，医院感染暴发流行也时有报道[3、4]，其难治性愈来愈引起临床医生重视。
所以，弄清产ESBLs细菌的种类、生物特性、了解产ESBLs细菌在医院内的易感因素及流行概况，对选择适当抗生素进行治疗以及探索新药研制途径均有重要意义。
1 β-内酰胺类抗生素的发展概况与β-内酰胺酶自1929年发现青霉素，1940年将其研制成功并用于临床至今，β-内酰胺类抗生素经历了半个多世纪的发展（见表1），为治疗人类感染性疾病起了重要作用。
目前，用于临床的各类抗生素近200种，其中仅β-内酰胺类抗生素就达130多种。
然而随着抗生素的应用，细菌的耐药性随之产生，细菌产生耐药性的原因很多，如产生各种各样的酶，水解、钝化相应抗生素；细胞壁通透性下降或排泄力提高；抗生素作用的靶位发生改变等等[1]，但是β-内酰胺酶仍是细菌对抗生素耐药的主要原因[5]。
β-内酰胺酶分类主要有Richmond &Sykes分类、Bush分类和分子分类三种[6、7]。
（1）Richmond &Sykes分类：1973年Richmond &Sykes对来源于革兰阴性菌β-内酰胺酶进行了分类。
AmpC酶的检测方法及在临床耐药菌检测中的意义
AmpC酶的检测方法及在临床耐药菌检测中的意义抗生素耐药性问题已成为全球关注的焦点，而我国又是世界上滥用抗生素最为严重的国家之一，因此，有必要加强对细菌耐药性的检测、监测，才能及时发现并控制耐药菌的传播。
目前，对于耐药菌产生的重要β-内酰胺酶—超广谱β-内酰胺酶（ESBLs），大家有比较深入的认识，其检测技术也日趋成熟，但是对于在革兰氏阴性杆菌耐药中扮演着同样重要角色的酶—AmpC酶却了解甚少。
1 什么是AmpC酶AmpC酶属Ambler分类中的C组酶，其基因为ampC而得名。
AmpC酶是由细菌染色体或质粒介导产生的一类β-内酰胺酶，其作用于头孢菌素，且不被克拉维酸所抑制，故AmpC酶又称为头孢菌素酶。
染色体介导的AmpC酶可被β-内酰胺类抗生素诱导，属于诱导酶。
质粒介导的AmpC酶（pAmpC酶）与前者不同，pAmpC酶高水平持续表达，且可通过转化、接合等方式转移给其它菌种，造成耐药性的广泛传播。
1989年韩国首次报道发现一种质粒介导的AmpC酶（CMY-1），1990年在美国发现另一种pAmpC酶（MIR-1），目前已有20多种pAmpC酶被陆续报道。
根据AmpC酶的遗传学关系，可将pAmpC酶分为5个家族：（1）枸橼酸杆菌起源的LAT族；（2）未知起源的FOX族；（3）阴沟肠杆菌起源的Entb族；（4）摩根摩根菌起源的Morg族；（5）蜂房哈夫尼起源的Haf族 [1]。
根据AmpC酶的产生方式又可将其分为3类：诱导高产酶、持续高产酶和持续低产酶。
（1）诱导高产酶：AmpC酶的合成往往与β-内酰胺类抗生素的存在有关。
大部分肠杆菌科细菌和铜绿假单胞菌在无β-内酰胺类抗生素存在的条件下只产生少量的AmpC酶。
当有诱导作用的β-内酰胺类抗生素存在时，AmpC酶的产量明显增加。
（2）持续高产酶：即产AmpC酶的菌株无论在有无β-内酰胺类抗生素存在的条件下均可持续高水平产生AmpC酶，其原因为去阻遏突变。
超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析
超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析莫志航;宁炎【摘要】目的了解临床产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌(E.coli)和肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)的发生率、耐药性,以便于对ESBLs进行监测和治疗.方法对102株E.coli和78株K.pneumoniae采用美国临床实验室标准委员会(NCCLS)规定的ESBLs表型筛选和确证试验确定ESBLs的发生率,并检测产ESBLs的E.coli 和K.pneumoniae的耐药性.结果 13.7％ (14/102)的大肠埃希菌和26.9％ (21/78)的肺炎克雷伯菌产ESBLs;产ESBLs菌株对亚胺培南耐药率为0％,除对阿米卡星、头孢西丁、替卡西林/克拉维酸联合酶抑制剂耐药率较低外,对三代头孢菌素、磺胺类和喹诺酮类药物均出现较高耐药.结论对产ESBLs菌株引起的感染,亚胺培南为首选.%Objective To investigate the prevalence of strains producing extended spectrum beta-lactamases (ESBLs) among Escherichia coil and Klebsiella pneumoniae, and to determine the drug resistance of the strans for better control and treatment of ESBLs. Methods One hundred and two strains of E. coli and 78 strains of K. pneumoniae were investigated for production of ESBLs by phenotypic screening and confirmatory test provided by the NCCLS. The drug resistance of ESBLs-producing strains was also investigated. Results 13.7% (14/102) of E. coli and 26.9% (21/78) of K. pneumoniae investigated were found to produce ESBLs. All ESBLs-producing strains were found to be susceptible to imipenem, relatively lowly resistant to of amikacin, cefoxitin, cefoperazone/β-lactamase inhibitor com-binations, and highly resistant to third generation cephalosporins, sulfonamides and quinolones. Conclusion Imipen-em isthe premium antibiotics for the treatment.of infection caused by ESBLs-producing strains.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2012(023)018【总页数】2页(P78-79)【关键词】超广谱β-内酰胺酶;大肠埃希菌;肺炎克雷伯菌;耐药性【作者】莫志航;宁炎【作者单位】增城市新塘医院检验科,广东增城511340;增城市新塘医院检验科,广东增城511340【正文语种】中文【中图分类】R446超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)主要由大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生，能水解青霉素类、头孢菌素类和单酰胺类抗生素，从而使之失效[1]。
β内酰胺类抗生素β内酰胺酶抑制剂合剂临床应用专家共识
β-内酰胺类抗生素/β-内酰胺酶抑制剂合剂临床应用专家共识一、概述革兰阴性菌是我国细菌感染性疾病最常见的病原体。
近年来，革兰阴性菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性不断增加，最重要的耐药机制是细菌产生各种β-内酰胺酶。
β-内酰胺酶抑制剂能够抑制大部分β-内酰胺酶，恢复β-内酰胺类抗生素的抗菌活性。
因此，β-内酰胺类抗生素/β-内酰胺酶抑制剂合剂在临床抗感染中的地位不断提升，已成为临床治疗多种耐药细菌感染的重要选择。
目前我国临床使用的β-内酰胺类抗生素/β-内酰胺酶抑制剂合剂的种类和规格繁多，临床医师对该类合剂的特点了解不够，临床不合理使用问题较突出。
为规范β-内酰胺类抗生素/β-内酰胺酶抑制剂合剂的临床应用，延缓其耐药性的发生和发展，特制定本共识。
二、主要β-内酰胺酶及β-内酰胺酶抑制剂β-内酰胺酶是由细菌产生的能水解β-内酰胺类抗生素的一大类酶。
β-内酰胺酶种类繁多，有多种分类方法，最主要的分类方法有根据β-内酰胺酶的底物、生化特性及是否被酶抑制剂所抑制的功能分类法（Bush分类法），将β-内酰胺酶分为青霉素酶、广谱酶、超广谱β-内酰胺酶、头孢菌素酶和碳青霉烯酶等；根据β-内酰胺酶末端的氨基酸序列特征的分子生物学分类法（Ambler分类法），将β-内酰胺酶分为丝氨酸酶和金属酶。
目前引用较多的是基于上述2种方法建立的分类方法。
见表1。
表1：β-内酰胺酶的分类和3种主要酶抑制剂的作用功能分类分子分型主要底物可被抑制代表性酶克拉维酸舒巴坦他唑巴坦1C头孢菌素类---AmpC,ACT-1,CMY-2,FOX-1,MIR-1 2a A青霉素类+++青霉素酶2b A青霉素类，窄谱头孢菌素类+++TEM-1，TEM-2，SHV-12be A青霉素类，超广谱头孢菌素类，单环酰胺类+++TEM-3,SHV-2,CTX-M-15,PER-1,VER-1 2br A青霉素类---TEM-30,SHV-10,TRC-12beA超广谱头孢菌素类，单环酰胺类---TEM-50r2c A青霉素类，羧苄西林+++PSE-1,CARB-32d D青霉素类，氯唑西林±±±OXA-1, OXA-102df D碳青霉烯类±±±OXA-23, OXA-482e A超广谱头孢菌素类+++CepA2f A碳青霉烯类±±±KPC-2,IMI-1,NMC-A,SME-13Bβ-内酰胺类（不包括氨曲南）---IMP-1,VIM-1,NDM-1,L1,CcrA （注：“+”示有抑制作用，“±”示抑制作用不明确，“-”示无抑制作用）超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）是由质粒介导的能水解青霉素类、头孢菌素及单环酰胺类等β-内酰胺类抗生素的β-内酰胺酶，其对碳青霉烯类和头霉素类水解能力弱。
生鲜牛乳中β-内酰胺酶检测方法-杯碟法的优化及应用
１５ ３ 平 板 的制 备 取 ９ ．． ０ｍｍ 灭 菌玻 璃 培 养 吼 ， 底层 加 １ 菌 的抗 生 素 检 测 用 培 养 基 Ⅱ， ０ｍＩ灭 凝
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ｍＩ藤 黄 微球 菌 的抗 生 素检 测 用 培 养 基 Ⅱ， 固 后 凝
乳 中 内 源 性 ８内 酰 胺 酶 的关 注 非 常 少 。笔 者 对 卫 生 一 部 指 定 的 《 及 乳 制 品 中 舒 巴 坦 敏 感 Ｊ内 酰 胺 酶 类 乳 ３ 一 药 物 检 验 方 法 一 碟 法 》 行 了 优 化 ， 对 重 庆 部 分 杯 进 并 地 区 奶 牛 养 殖 小 区 和 养 殖 户 乳 头 奶 样 开 展 了 Ｊ内 酰 ３ 一 胺 酶 的检测 。
巾 国兽 医 杂志 ２ １ ０ ０年 （ ４ 第 ６卷 ） １期 第
６ ７
生鲜 牛乳 中 ｌ 内酰胺 酶检 测 方 法一 碟 法 的优 化及 应 用 ３ 一 杯
米 自由 ，苏 亮 ，何 义 刚 ，周 莉 ，罗 小松 ，武 煊 ，胡 宇莉 ，程 红 ，江 燕
（ 庆 市 兽 药饲 料 检 测所 ， 庆 渝 北 ４ １ ２ ） 重 重 ０ １０ 中 图分 类 号 ： ８ ９ ８ ￥ ５． ４ 文 献 标 识 码 ： Ｂ 文 章 编 号 ： ５ ９６ ０ （ ０ ０ ０ ０ ７ ０ ０ ２ — ０ ５ ２ １ ） 卜０ ６ — ２
ｌ 材 料
１ ４ ２ 青 霉 素 标 准 溶 液 精 密 称 取 青 霉 素 和 青 霉 ．．
素 Ｇ对 照 品适 量 ， 磷 酸盐 缓 冲溶 液 （ Ｈ６ ０ 溶 解 用 ｐ ．） 并定 容 为 ０ １ｍｇ ｍＬ 的 标 准 溶 液 。 当 天 配 制 并 ． ／ 使用 。 １ ４ ３ １ 内酰 胺 酶 标 准储 备 液 称 取 一 定 量 的 Ｊ ． ． ３ － ３ 内酰 胺酶 标准 品 ， 用灭 菌 ｐ ６ ０磷 酸 盐 缓 冲 溶 液 Ｈ ． 并定 容 至 １ ０Ｉ ｍＩ， ２ ２ Ｕ／ 置 Ｃ～８ ℃冰 箱 保 存 ， 存 贮
β-内酰胺类抗生素β内酰胺酶抑制剂复方制剂临床应用专家共识(2020年版)
β-内酰胺类抗生素β内酰胺酶抑制剂复方制剂临床应用专家共识（2020年版）一、概述革兰阴性菌及少数革兰阳性菌对β-内酰胺类抗生素耐药的最重要机制是产生各种β-内酰胺酶。
β-内酰胺酶抑制剂能够抑制部分β-内酰胺酶，避免β-内酰胺类抗生素被水解而失活。
因此，β-内酰胺类抗生素/β-内酰胺酶抑制剂复方制剂（简称β-内酰胺酶抑制剂复方制剂）是临床治疗产β-内酰胺酶细菌感染的重要选择。
我国临床使用的β-内酰胺酶抑制剂复方制剂的种类和规格繁多，临床工作者对该类制剂的特点了解参差不齐，临床不合理使用问题比较突出。
二、主要β-内酰胺酶及产酶菌流行情况β-内酰胺酶是由细菌产生的，能水解β-内酰胺类抗生素的一大类酶。
β-内酰胺酶种类繁多，有多种分类方法，最主要的分类方法有两种：一、是根据β-内酰胺酶的底物、生化特性及是否被酶抑制剂所抑制的功能分类法（Bush分类法），其将β-内酰胺酶分为青霉素酶、广谱酶、超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、头孢菌素酶（AmpC酶）和碳青霉烯酶等；二、是根据β-内酰胺酶末端的氨基酸序列特征的分子生物学分类法（Ambler分类法），将β-内酰胺酶分为丝氨酸酶（包括A类、C类酶和D 类酶）及金属酶（B类酶）。
目前引用较多的是1995年Bush等基于上述二种方法建立的分类方法，2019年Bush等又将该分类表进一步完善和细化（表1）。
其中临床意义最大的是下列三类β-内酰胺酶：表1 常见β-内酰胺酶分类及特点，常见酶抑制剂抑酶活性1、ESBLs主要属2be\2br\2ber类酶，是由质粒介导的能水解青霉素类、头孢菌素及单环酰胺类等β-内酰胺类抗生素的β-内酰胺酶，其对碳青霉烯类和头霉素类水解能力弱。
ESBLs主要由肠杆菌科细菌产生，以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、变形杆菌最为常见。
根据编码基因的同源性，ESBLs可分为TEM型、SHV型、CTX-M型、OXA型和其他型共5大类型。
2、AmpC酶属C类酶，通常由染色体介导，可以被β-内酰胺类抗生素诱导。
产超广谱β-内酰胺酶细菌的监测及药敏分析
・医学检 验 ・
产超广谱 ｐ 内酰胺酶细 菌的监测及 药敏分析 院检 验科 ， 广 广东 云浮
５７ ０ ） ２ ３０
【 要】目的 ： 讨 产超 广 谱 Ｂ 摘 探 一内酰胺 酶 （ Ｓ Ｌ ） Ｅ Ｂ ｓ 菌株 的监 测 与 耐药 性 的临 床意 义 。方 法 ： 临床 分 离 出的 杆 菌 ， 对
ｗａ ｏ ｅ ａ ｈ ａ ｉ ｙ ｔ ｅ ｃ ｎ ｉ ａｏｙ ｔｓ ｉｈ ｒｃ ｍｍｅ ｄ ｄ ｂ ＣＬ ｉ １ ９ ｏ ａ ｈ ｏ ｅ ｓｒｉ ｓ ｓ ｄ ｎ ｔ ｔｅ ｓ ｍｅ ｔ ｍｅ ｂ ｈ ｏ ｆ ｍ ｒ ｔｒ ｅｔｗｈ ｃ ｅ ｏ ｎ ｅ ｙ ＮＣ ｓ ｎ ９ ９ ｆｒ ｅ ｃ ｆ ｔ ｔａｎ ． ｈ Ｒｅ ｕ ｔ：１ ２ ｓｒ ｎ ｆｅｂ ｓ ｒｄ ｃｎ ａ ｔｒａｗｅ ｅｄ ｔｃｅ ｒ ｍ ８ ｔａｎ ． ｅｔｔ ｅｅ ｔｄ ｒ ｔ ｓ２ ．％ ． ｎ ｌ ｄ ｓ ｌｓ ｔａ ｓｏ ｓ ｌ—ｐｏ ｕ ｉ ｇｂ ｃｅ ｒ ｅｅ ｔｄｆｏ ４ ６ ｓｒｉｓ ｔ ｏａ ｄ ｔｃｅ ａｅｗａ ７２ ３ ｉ ｉ ｈ ｌ ｉｃｕ ． ｉ ｇ４ ｔａｎ ｆｅ ｂｓ ｐｏ ｕ ｉ ｇ ｂ ｃｅ ａ ｗｈｃ ｒ ｅｅ ｔｄ ｆｏ １ ０ ｓｒ ｎ ｆＣｏｏ ｃｌ ｓ ｈ ｅｅ ｔ ｎ ｒｔ ｓ ｎ ２ ｓｒ ｓｏ ｓ ｌ— ｒｄ ｃｎ ａ ｔｒ ｉｈ ｗｅ ｅｄ ｔｃｅ ｒｍ ６ ｔａ ｓｏ ｌｎ Ｂａ ｉ ｕ ，ｔｅ ｄ ｔｃ ｏ ａｅＷａ ｉ ｉ ｉ ｌ ｉ ２ ．％ ．ａ ｄ ２ ｔａｎ ｆｅｂ ｓ ｐ ｏ ｕ ｉｇｂ ｃｅ ａ ｗｈｃ ｒ ｅｅ ｔｄｆｏ ７ ｔａｎ ｆＫｌｂ ｉｌ ｎ ｕ ｎａ ． ｈ ｅ ７０ ｎ ８ ｓｒｉ ｓｏ ｓ ｌ— ｒ ｄ ｃｎ ａ ｔｒ ｉｈ ｗｅｅ ｄ ｔｃｅ ｒ ｍ ６ ｓｒｉ ｓｏ ｅ ｓｅｌ Ｐ ｅ ｍｏ ｉｅ ｔｅ ｄ － ｉ ａ
细菌耐药性检测
细菌遗传变异
产β-内酰胺酶菌株 药敏试验的特点
可水解青霉素和半合成青霉素以及第一代、
第二代头孢菌素，多数可被酶制剂所抑制
对第三代、第四代头孢菌素、碳青霉烯类以
及酶抑制剂复方制剂均高度敏感。
细菌遗传变异
超广谱β－内酰胺酶是质粒介导
的能够水解头孢他啶、头孢噻肟等亚
氨基β-内酰胺类及氨曲南等单环酰胺
细菌遗传变异
产碳青霉烯酶菌株的药敏试验特点
产生菌：铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、部 分肠杆菌科细菌 可水解各种广谱β-内酰胺类抗生素包括第 三代、第四代头孢菌素和酶抑制剂复方制剂， 头霉素类、碳青霉烯类等 多为泛耐药菌株，并同时对喹诺酮类和氨基 糖苷类耐药。
细菌遗传变异
肠杆菌科细菌
大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和奇异变
细菌遗传变异
目前G＋球菌的主要耐药问题
葡萄球菌中最主要的问题是MRSA，耐药性高，致 病力强，引起全身感染病死率可高达50％！ MRSA应报告对所有β-内酰胺类抗菌药物耐药，常
类抗生素，并可被克拉维酸等β-内酰
胺酶抑制剂所抑制的一类β-内酰胺酶。
细菌遗传变异
产ESBLs菌株的药敏试验特点
ESBLs菌株：主要为大肠埃希氏和肺炎克雷伯 菌。 可水解各种β-内酰胺类抗生素包括第三代的 头孢他定、头孢噻肟、头孢曲松和氨曲南等含 氧亚氨基侧链的头孢菌素 多数可被酶抑制剂所抑制 对碳青霉烯类高度敏感，对头霉素类、头孢哌 酮/舒巴坦、哌拉西林/三唑巴坦等复方制剂多 数呈敏感。
细菌遗传变异
细菌产生耐药性的原因
服药疗程不足： 用药不当： 重复用药： 剂量不足： 药物交互作用：
细菌遗传变异