遗传学实验有丝分裂的制片与观察

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经典遗传学实验(绝对经典)

经典遗传学实验(绝对经典)
[附]冷冻分片法:这种方法快速简单。对准备制作永久片的玻片,先用液态二氧化碳干冰冷冻, 或用冰冻致冷器进行冷冻,待完全冷冻结冰后,用刀片将盖玻片同载玻片分开,将载玻片和盖玻 片放在 37℃左右的温箱内烘干。取出后放在二甲苯内浸泡 10~20 分钟,滴加树胶封片即可。
四、作业和思考题
1.写出制片步骤流程图。 2.制作两张质量较好的临时片(有条件可制作永久片),并绘制减数分裂粗线期、终变期、 中 I、后 I、中 II、后 II 的图像。
二、实验材料和实验用品
1.实验材料 玉米雄花序 2.实用品 显微镜、解剖针、载玻片、盖玻片、镊子、培养皿、酒精灯、吸水纸、纱布、刀片、滤纸、 火柴、等。 3.实验药品 无水乙醇、95%乙醇、重铬酸钾、浓盐酸、浓硫酸、冰醋酸、二甲苯、加拿大树胶和洋红(或 苏木精)。
三、实验方法与步骤
1.取材:选取适当大小的花蕾,是观察花粉母细胞减数分裂的关键性步骤。不同植物取材时 期不同。
(3)封片:片子从最后一级培养皿内取出后稍凉,于载玻片上原来加盖玻片的位置中间滴一 滴完整的加拿大树胶,然后翻转盖玻片(使有材料的一面朝下),按原来的方向和位置轻轻盖在树 胶上。要使盖玻片随着胶的扩展自然下沉,不要施加压力或移动盖玻片。然后平放在阴凉处晾干 再镜检。对于镜检符合要求的片子,在载玻片右端贴上标签,注明标本名称,制片日期。
实验一 植物花粉母细胞减数分裂制片和染色体观察
一、实验原理
减数分裂是生物在性母细胞成熟形成配子过程中发生的一种特殊有丝分裂,它包括连续两次 的细胞分裂,第一次分裂是减数的,第二次是等数的。第一次分裂的前期较长,染色体变化较复 杂,可细分为 5 个时期,即细线期、偶线期、粗线期、双线期和终变期。染色体在减数分裂的行 为对遗传物质的分配和重组产生重大影响。

使用显微镜观察有丝分裂的固定装片实验

使用显微镜观察有丝分裂的固定装片实验

使用显微镜观察有丝分裂的固定装片实验引言:有丝分裂是细胞生物学中最基本的过程之一,它是生物体生长和发育的基础。

通过显微镜观察有丝分裂的固定装片实验,可以更加清晰地观察到细胞在不同阶段的变化和细胞核的分裂过程。

本文将介绍有丝分裂的基本概念、固定装片的方法以及显微镜观察的步骤和注意事项。

一、有丝分裂的基本概念有丝分裂是指细胞在生命周期中的染色体复制和分离过程。

它包括有丝分裂前期、有丝分裂中期、有丝分裂后期和有丝分裂末期四个阶段。

在有丝分裂前期,染色体开始复制,形成姐妹染色单体。

在有丝分裂中期,染色体线型排列在细胞的中央区域,通过纺锤体将染色体分离到两个极端。

在有丝分裂后期,染色体到达极端,并开始解缠。

有丝分裂末期,细胞质分裂完全,形成两个新的细胞。

二、固定装片的方法固定装片是将细胞材料固定在载玻片上,使其形态、结构和染色质不发生变化,便于显微镜观察。

固定装片的方法主要有热固定法和化学固定法。

热固定法是将细胞材料迅速放入加热的甲醛溶液中,使细胞组织固定。

化学固定法则是将细胞材料浸入适当的化学试剂中,如乙醛、甲醛、酒精等,使细胞组织固定。

三、显微镜观察的步骤和注意事项1. 准备固定装片。

将固定好的细胞材料取出,用显微镜镊子轻轻夹在载玻片上。

2. 加入染色剂。

将载玻片上的细胞材料浸入适当的染色剂中,如甲苯染色剂或其他核染色剂。

3. 镜片清洁。

使用棉签轻轻擦拭显微镜物镜和目镜,确保镜片清洁,避免杂质干扰观察。

4. 调整显微镜。

将载玻片放入显微镜的载物台上,用机械旋钮调整焦距,使细胞材料清晰可见。

5. 观察细胞结构。

通过显微镜观察细胞的核、细胞质和其他结构的形态和位置,记录观察到的现象。

6. 拍摄照片。

使用显微镜配备的相机或手机相机,拍摄细胞结构的照片,以便后续分析和报告。

7. 注意事项。

在观察过程中,要注意保持显微镜和载玻片的清洁,避免指纹或灰尘污染样品。

同时,调整光源的亮度和对比度,以获得清晰的图像。

结论:通过使用显微镜观察有丝分裂的固定装片实验,我们可以更加清晰地观察到细胞在有丝分裂不同阶段的变化和细胞核的分裂过程。

生物实验报告有丝分裂

生物实验报告有丝分裂

生物实验报告有丝分裂实验目的探究有丝分裂的过程和特点。

实验原理有丝分裂是细胞周期中最重要的一个阶段,是细胞生命的延续和增殖的基础。

有丝分裂通过准确地将一份细胞中的染色体复制成两份,然后将这两份染色体分配到两个新的细胞中。

有丝分裂分为前期、中期、后期和末期四个阶段。

前期是指染色体开始凝聚,成为可见的条状结构;中期是指染色体进一步缩短和增粗,同时细胞核膜消失和纺锤体形成;后期是指染色体在细胞中排列整齐,准备分离;末期是指细胞开始分裂,形成两个完整的新细胞。

实验材料1. 大麦芽(或其他适用的种子)2. 显微镜3. 蒸馏水4. 10% 氯化钠溶液5. 甲醇-乙醇(1:3)固定液6. 甲醇-醋酸乙酯(3:1)溶液7. 蒸馏水洗涤液8. 甲醇实验步骤1. 取一小勺大麦芽,将其放于一个宽口培养皿中,并加入适量的蒸馏水。

2. 将大麦芽放入恒温箱中,在25-30度的恒温条件下培养4-6小时。

3. 用显微镜观察大麦芽中有丝分裂的情况。

4. 用显微镜观察大麦芽中有丝分裂的各个阶段并拍照记录。

5. 将大麦芽放入离心管中。

6. 加入等体积的10%氯化钠溶液,并轻轻摇晃离心管,使芽籽完全浸泡在溶液中。

7. 使用离心机离心5 分钟。

8. 倒掉上清液,并加入甲醇-乙醇固定液,使其完全覆盖芽籽。

9. 放置室温下5 分钟,再次离心去掉甲醇-乙醇固定液。

10. 加入甲醇-醋酸乙酯溶液,浸泡5 分钟。

11. 用蒸馏水洗涤液洗涤离心管三次。

12. 用甲醇洗涤离心管三次。

13. 将芽籽取出并放入一个平底玻璃皿中,加入甲醇。

14. 用显微镜观察芽籽中有丝分裂的情况。

15. 用显微镜观察芽籽中有丝分裂的各个阶段并拍照记录。

实验结果经过显微镜观察,我们成功观察到大麦芽和芽籽中的有丝分裂现象。

在大麦芽中,我们观察到了有丝分裂的四个阶段:前期、中期、后期和末期。

每个阶段都具有特定的染色体分布和细胞核变化。

实验讨论有丝分裂是细胞生命的基础,对于生物学研究和医学应用具有重要意义。

遗传学实验

遗传学实验

洋葱、大蒜的鳞茎,玉米、蚕豆的种子等。本 实验1 植物细胞有丝分裂及染色体行为的观察
实验1 植物细胞有丝分裂及染色体行为的观察
实验选用大蒜。 实验3 染色体组型分析
压片时应注意的问题有哪些?
实验4 果蝇唾腺染色体的观察
实验用品: 实验5 果蝇的形态观察
☺ 果蝇的自由组合杂交试验 2 画出在显微镜下看到的有丝分裂各时期的图像;
遗传学实验
☺ 植物染色体制片及有丝分裂观察 ☺ 大葱小孢子母细胞的减数分裂观察 ☺ 果蝇的形态观察及杂交试验 ☺ 果蝇的单因子杂交试验 ☺ 果蝇的自由组合杂交试验 ☺ 果蝇的伴性遗传杂交试验 ☺ 果蝇的三点测交试验 ☺ 两对非等位基因的相互作用研究 ☺ 染色体组型分析 ☺ 果蝇的唾腺染色体制片及观察 ☺ 植物原生质体的分离 ☺ 植物多倍体的诱发及鉴定
丝分裂及染色体行为的观察 ☺ 植物原生质体的分离
第三部分 研究性实验
7 压片:盖上盖玻片,在酒精灯上烤片。 ☺ 植物原生质体的分离 2 预处理:将剪取的新鲜材料于0. 实验4 果蝇唾腺染色体的观察 ☺ 植物原生质体的分离 3 固定:将经过预处理和未经预处理的材料冲洗后转移至卡诺氏固定液中,室温下处理3~24小时。 药品:蒸馏水、卡诺氏固定液、45%醋酸、秋水仙素、改良苯酚品红染液等。 实验3 染色体组型分析 第三部分 研究性实验
2 预处理:将剪取的新鲜材料于0.1%秋水仙素 溶液中室温下处理3~4小时。
3 固定:将经过预处理和未经预处理的材料冲 洗后转移至卡诺氏固定液中,室温下处理3~24小时。
4 解离:将冲洗后的根尖放入1mol/L的盐酸中, 室温下处理10~15min。
5 软化:将解离好的根尖冲洗后,放入45%醋 酸中软化10min左右。
请注意比较经过预处理和未经预处理的材料有何不同?

遗传学实验操作规程:染色体标本制备与观察实验操作规程染色体制片

遗传学实验操作规程:染色体标本制备与观察实验操作规程染色体制片

遗传学实验操作规程:染色体标本制备与观察实验操作规程染色体制片技术显示染色体一般的形态和结构,成功的关键是获得大量染色体缩短适宜的分裂细胞。

1. 压片法1.1 取材在适当的时间选取细胞分裂旺盛的组织。

1.2 预处理秋水仙素进行活体或离体处理。

1.3 固定卡诺固定液固定,迅速杀死生活细胞使染色体的组成蛋白变性,保持染色体形态和结构。

1.4 解离1mol/L HCl60℃进行酸解,不同的材料的酸解时间不同。

1.5 染色改良石炭酸品红染色。

1.6 压片染色后盖上盖片,用大拇指按压有材料的部位,粗滤纸吸干多余染液,再用铅笔头轻敲,使重叠细胞分散,得到理想的分裂相。

1.7 观察低倍镜找到分散良好的分裂相后换高倍镜或油镜。

1.8 绘图会制分散良好的细胞染色体图或拍照进行核型分析。

2. 去壁低渗法2.1 前低渗经预处理的材料转入0.075mol/L或蒸馏水中室温下30min。

2.2 酶解去壁纤维素酶和果胶酶混合液处理2~4h。

2.3 后低渗洗去酶液,蒸馏水处理10~30min。

2.4 固定制备细胞悬液倒去蒸馏水将材料充分夹碎,加入固定液。

2.5 制片用吸管吸取细胞悬液,高度30~40cm,滴在预冷的载玻片上,在酒精灯火焰上微微加热,室温晾干。

2.6 染色10% Giemsa染液染色。

2.7 观察低倍找到分散良好的分裂向后换高倍镜观察。

2.8 绘制分散良好的细胞染色体图或拍照进行核型分析。

3. 注意事项显微镜使用完毕后须对油镜头进行清洁,并将电源关闭,罩上防尘罩。

染色体组型分析实验操作规程染色体组型分析是对染色体组中处于有丝分裂中期时染色体的数目、大小、形态、着丝点的位置以及次缢痕、随体的有无等形态特征作一描述.将一个细胞内的染色体按照一定的顺序排列起来所构成的图像就称为该细胞的组型。

1. 染色体制片→显微照相→放大。

2. 测量测量染色体的长短臂长度,并记录。

3. 计算臂比值、相对长度,根据臂比值确定染色体类型。

E1植物细胞有丝分裂与减数分裂观察-PPT课件

E1植物细胞有丝分裂与减数分裂观察-PPT课件
3
一、实验目的
1. 熟悉普通光学显微镜的使用 2. 观察植物细胞有丝分裂过程及染色体形 态结构变化
3. 观察植物细胞减数分裂过程及染色体形 态结构与数目变化
Hale Waihona Puke 农学院生物技术系遗传学课程组
4
二、实验材料
1. 蚕豆(Vicia faba, 2n=12)根尖细胞有丝分 裂永久片 2. 黑麦(Secale cereale,2n=14)花粉母细胞 减数分裂永久片
农学院生物技术系遗传学课程组
22
黑麦(S. cereale,2n=14)(PI4-5)
农学院生物技术系遗传学课程组
23
黑麦(S. cereale,2n=14)(MI)
农学院生物技术系遗传学课程组
24
黑麦(S. cereale,2n=14)(AI)
农学院生物技术系遗传学课程组
25
黑麦(S. cereale,2n=14)(TI)
农学院生物技术系遗传学课程组
14
蚕豆(V. faba, 2n=12) 核型
农学院生物技术系遗传学课程组
15
蚕豆(V. faba, 2n=12)有丝分裂前期
农学院生物技术系遗传学课程组
16
蚕豆(V. faba, 2n=12)有丝分裂中期
农学院生物技术系遗传学课程组
17
蚕豆(V. faba, 2n=12)有丝分裂后期
农学院生物技术系遗传学课程组
12
五、实验结果与分析
1. 绘制有丝分裂各时期细胞图像(4) 2. 绘制减数分裂各时期细胞图像(12) 3. 结合观察比较有丝分裂、减数分裂过程,并分 析其遗传学意义
农学院生物技术系遗传学课程组
13
请按步骤进行操作

遗传学试验指导

遗传学实验指导张霞黄先忠李桂芳张婷婷二0一零年三月实验一植物有丝分裂制片及多倍体诱发和鉴定一、实验目的1. 学习植物根尖有丝分裂制片技术;2.辨别有丝分裂各时期的染色体变化和特征;3.掌握染色体的观察和计数方法;4.初步掌握秋水仙素诱发多倍体的方法;5.学习植物多倍体的细胞学鉴定。

二、实验原理有丝分裂是生物体细胞增殖的主要方式。

在有丝分裂过程中,细胞核内染色体准确复制、均等分裂,使母、子细胞在遗传物质组成上达到等质同量。

既维持个体正常生长发育,又保证物种的连续性和稳定性。

高等植物的有丝分裂主要发生在根尖、茎尖及幼叶等部位的分生组织,将这些分生组织固定、水解、染色和压片,再置于显微镜下即可观察到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。

用秋水仙碱浸渍、涂抹或点滴植物的分生组织,能抑制细胞分裂时纺锤丝的形成,使染色体不走向两极而被阻止在分裂中期,这样细胞不能继续分裂,从而产生染色体数目加倍的核。

若染色体加倍的细胞继续分裂,就形成多倍性的组织和器官。

从多倍体组织分化产生的性母细胞,经减数分裂产生的雌雄配子受精后仍形成多倍体植株。

植物多倍体在探讨物种的演化,克服远缘杂交不育和育成作物新类型方面具有重要意义。

三、实验材料二倍体洋葱根尖(2n=2x=16)四倍体洋葱根尖(2n=4x=32)四、仪器、药品、用具显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、冰箱、恒温箱或水浴锅、天平、量筒、培养皿、青霉素小瓶、盖玻片、载玻片、镊子、刀片、吸管、洗瓶、吸水纸等改良苯酚品红染色液、1N盐酸、秋水仙碱、8-OH喹啉、无水酒精、冰醋酸、KCl等五、实验内容和方法1.解离取出供试材料二倍体洋葱根尖(2n=2x=16)和四倍体洋葱根尖(2n=4x=32),分别放入不同的青霉素小瓶中水洗3遍,弃去水。

再加入1N盐酸,放入60℃恒温箱解离4—10min后,弃去盐酸,水洗根尖3遍。

2.染色取一根尖于载玻片上,仅切取生长点部位,弃去其余部分。

加一滴改良苯酚品红染液,边用镊子夹碎边染色5min,或整染30min,再加上盖玻片。

(完整版)有丝分裂的教学案例

(完整版)有丝分裂的教学案例有丝分裂的教学案例介绍有丝分裂是生物学中一个重要的概念,理解有丝分裂的过程和机制对于学生理解细胞生物学和遗传学非常重要。

本教学案例旨在通过一个实践性的活动,帮助学生深入理解有丝分裂的过程。

教学目标- 了解有丝分裂的基本概念和步骤- 掌握有丝分裂的遗传重组原理- 观察和记录有丝分裂的各个阶段教学准备- 细胞生物学教科书- 幻灯片或者绘图展示有丝分裂的步骤和示意图- 实验用显微镜- 染色体模型(可选)- 实验记录表格教学步骤1. 通过幻灯片或绘图向学生展示有丝分裂的步骤和示意图,讲解每个步骤的关键点。

2. 引导学生回顾细胞生物学教科书中有关有丝分裂的知识,强调重要概念和术语。

3. 将学生分成小组,每个小组分配一台显微镜和染色体模型(可选)。

4. 要求学生观察显微镜下的细胞样本,记录每个细胞在有丝分裂过程中的不同阶段。

5. 鼓励学生进行讨论,分享并比较各自观察到的结果和观察的困难。

6. 引导学生总结观察到的共同点和差异,并和课堂上讲解的知识进行对比和讨论。

7. 答疑,解释学生可能存在的问题或误解。

8. 鼓励学生通过实验记录表格或绘图来总结和展示他们的观察结果。

教学评估- 针对学生的观察记录和讨论,给予及时反馈和指导。

- 设计简单的细胞分裂测试题目,用以检验学生对有丝分裂的理解程度。

参考资料提供一份参考资料,以帮助学生进一步研究和探索有丝分裂的相关知识。

小结通过本教学案例的实践活动,学生将能够更深入地理解有丝分裂的过程和机制,提高对细胞生物学和遗传学的理解和应用能力。

遗传学实验复习

步骤:先轻轻敲打培养瓶,使果蝇落到培养瓶底部,然后将培养瓶口向下扣在麻醉瓶口上,使两瓶口对正对平,以防飞逸,用左手紧握上下对准的两瓶口处,并用右手拍打上瓶使果蝇落入麻醉瓶里,待果蝇不动后,移去上瓶立即塞上瓶塞,将已麻醉的果蝇倒在白瓷盘上。
16、果蝇伴性遗传为什么要做正反交?
因为正反交结果不同,是伴性遗传的典型特点,正反交后代雌雄性状表现是区分伴性遗传和常染色体遗传的一个重要特征。
~ 1 / 4 ~
10、经过预处理和未经处理的片子有何不同?为什么?
预处理的作用:为了阻止纺锤体的活动以获得较多的中期分裂相,同时染色体相对缩短,便于染色体分散和计数。
11、固定、解离、染色、烤片、压片的作用分别是什么?它们对时间有什么要求?
固定:用药物将活细胞迅速杀死,使得染色体基本保持原有形态,一般为2-24小时。
人工诱发:抑制细胞分裂时纺锤体的形成,使染色体向两级的移动被阻止,而停留在分裂中期,这样细胞不能继续分裂,从而产生染色体数目加倍的核。
5、染色体组型分析的染色体形态依据是?
染色体的数目,大小和着丝粒位置,臂比、次缢痕、随体等形态特征。
6、染色体组型分析的粘贴依据?
对染色体进行测量,根据测量数据将染色体配对,并依据从大到小,短臂向上,长臂向下的顺序,把染色体的着丝粒排在一条直线上。如果染色体长度相同,则以短臂长度为标准,从大到小排列,有特殊标记的以及性染色体可单独排列。
-至此,有丝分裂全过程就被认为划分为前期、中期、后期、末期和间期5个时期,有丝分裂全过程的描述得到了统一。
有丝分裂的过程:
间期:包括G1、S、G2期。
G1期,合成细胞生长必需的蛋白质、糖类和脂质等生化物质;染色质去凝集,为DNA合成做准备,因此又称DNA合成预备期或复制前期。有些细胞暂时离开了细胞周期进入G0期,停止分裂;一旦得到信号指令便又会返回细胞周期,分裂增殖。G0期细胞多发生于G1期,人体绝大多数细胞是处于G0期。像肝细胞,当它受到外部因素刺激后,如切割掉部分肝,便可使细胞从G0期返回到细胞周期中。

实验植物细胞有丝分裂的观察


二、材料和用品
材料:
洋葱、大蒜的鳞茎;或玉米、黑麦、小麦、 蚕豆的种子等。本实验以洋葱为实验材料。
用具及药品:
显微镜、镊子、刀片、解剖针、载玻片、盖 玻片、滤纸、培养皿、酒精灯、95%乙醇、浓 盐酸、改良苯酚品红等。
三、实验步骤
1、取材:选取健壮的大蒜根尖,自尖端约1cm 处,将其剪下备用
2、固定处理:将根尖放入卡诺固定液中,室 温固定3-24h;如不立即使用,可转入70%的 乙醇中置于冰箱或阴暗处长期保存
中期
☺ 核膜解体, 核仁消失,染 色体排列在赤 道板上,此时 最有利于对染 色体进行观察 和计数。
后期
☺ 着丝点分裂, 每两个并列的 染色单体分开, 有纺锤丝牵引 分别移向两极。
末期
☺核膜、核仁重新 组成,染色体解旋, 形成两个新的子核, 两个子核间形成细 胞板,将母细胞分 成两个子细胞,此 时细胞分裂结束。
目的:将染色体染成深色, 便于观察
6、压片:在盖玻片上覆以吸水纸,用左手中 指压住盖玻片一角,用铅笔的橡皮头垂直敲 打盖玻片,使材料均匀散开
目的:将细胞压成一个薄层,便于观察
7、镜检:将压好的片子先置于低倍镜下 (10X),找到分生区细胞后,转换高倍镜 (40X)观察
分别找出前期、中期、后期、 末期等不同分裂期的细胞
总结
取材 染色
固定 压片
解离 镜检
漂洗
间期
两次细胞分 裂之间的时期, DNA复制分为 三个时期:复 制前期(G1期) 复制期(S期)、 复制后期(G2 期),该时期 一般看不到细 胞核中的染色 体。
前期
☺染色体开始 螺旋化,每个 染色体由两个 相同的染色单 体组成,两者 紧密相连(光镜 下很难区别), 细胞核呈线团 状。
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洋葱根尖Feulgen染色、有丝分裂制片及染色体变异观察
中国科学技术大学
徐导PB12210261
中国科学技术大学生命科学学院
【摘要】
本实验选取洋葱根尖作为实验材料,通过对洋葱根尖的培养取得生长旺盛的植物分生组织,然后对根尖细胞进行前处理、固定、解离、染色、压片来观察细胞有丝分裂的全过程。

【关键词】
有丝分裂间期前期中期后期末期
【Abstract】
This experiment selects the onion root tip as experimental material, has the vigorous growth of plants through the cultivation of onion root tip meristem of the root tip cells, and then the pretreatment, dyeing, fixation, dissociation, pressing to observe cells throughout the process of mitosis.
【Key words】
Mitosis interphase prophase metaphase anaphase telopha
【正文】
实验目的:
1、掌握植物根尖染色体制片技术
2、掌握Feulgen染色方法
3、熟悉有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化
实验原理:
1、有丝分裂
植物细胞分裂的主要方式,细胞分裂过程中,核内染色体准确地复制,并有规律地、均匀地分配到两个子细胞中去,保证了植物细胞的遗传性状的一致。

各种生长旺盛的植物组织中,如根尖组织、茎尖组织、居间分生组织、愈伤组织等,有大量处于分裂高峰期的细胞,此时经预处理,固定、解离、染色和涂抹压片等方法,在显微镜下可以观察到处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。

2、秋水仙素
秋水仙素,一种生物碱,因最初从百合科植物秋水仙中提取出来,故名,也称秋水仙碱。

纯秋水仙素呈黄色针状结晶,熔点157℃。

易溶于水、乙醇和氯仿。

味苦,有毒。

秋水仙素能抑制有丝分裂,破坏纺锤体,使染色体停滞在分裂中期。

这种由秋水仙素引起的不正常分裂,称为秋水仙素有丝分裂。

在这样的有丝分裂中,染色体虽然纵裂,但细胞不分裂,不能形成两个子细胞,因而使染色体加倍。

自1937年美国学者布莱克斯利(A.F.Blakeslee)等用秋水仙素加倍曼陀罗等植物的染色体数获得成功以后,秋水仙素就被广泛应用于细胞学、遗传学的研究和植物育种。

3、孚尔根(Feulgen)染色法
细胞内的DNA在1N HCl 60℃水解时部分地破坏了脱氧核糖与嘌呤碱之间的糖苷键而使嘌呤碱脱掉,从而使脱氧核糖的第一个碳原子上潜在的醛基获得了自由状态。

用无色的亚硫酸品红(schiff试剂)去染经酸解的细胞时,可与染色
体DNA上游离的醛基结合,生成呈红色的醌式结构,从而使DNA分子着色。

这一反应是1924年由Feulgen 和Rossonbek 所发现和确定的,已广泛用作鉴别DNA的一种特异性检查方法。

实验用品:
器具:解剖针载玻片盖玻片离心管试管架吸水纸长滴管废液缸试剂:漂染液蒸馏水45%醋酸
每大组(每张桌子):1NHCL 带盖瓷缸(内有保鲜膜)
实验方法和步骤:
1、材料准备
洋葱根尖:通过休眠的洋葱鳞茎,经日晒后,置于盛有清水的小烧杯上,根部与水接触,20-25℃光照条件下培养2-3天以后,待根长1-2cm或更长时,与上午9:00-11:00剪下根尖备用。

2、预处理
为获得较多中期分裂相的细胞,且使染色体缩短和分散,可对根尖进行预处理,方法如下(取其一即可):
(1)0.05%-0.2%的秋水仙碱水溶液处理2-4小时;
(2)0.002M的8-羟基喹啉溶液处理3-4小时;
(3) 根尖浸在蒸馏水中于在1-4℃低温下处理24小时。

3、固定
用蒸馏水洗净材料,再用卡诺氏固定液室温下固定至少30-60分钟。

固定的材料如暂不制片,可经90%酒精→80%酒精→70%酒精(各半小时)浸泡进行转换,最后置于70%酒精内放入0-4℃冰箱,约可保存半年。

如保存时间太长,需重新固定后再用。

实验步骤:
1、洋葱(2n=16)根尖(老师预先放入离心管中),充分吸去试管里的液体。

2、到水浴锅加预热好的1N HCl 60℃,8-10分钟
3、水洗2-3次(加5-10ML水),每次1-2分钟
4、吸净水分,加入Schiff试剂(老师统一加),在黑暗条件下染色至少30分钟,也可过夜(每组一个带盖瓷缸,千万不要洒的到处都是)
5、漂染液冲洗三次(5 ML),每次至少1-2分钟(漂染液每次大组一份,放在水池上)
6、水冲洗三次(每4-6 ML),每次1-2 MIN, 放于蒸馏水中待用
7、取根尖(紫红色部分)置载玻片上,加一滴45 醋酸(或蒸馏水),盖上盖玻片,压片。

实验结果:
有幸在一张图中找到各个时期的细胞分裂图(使用他人的载玻片观察)
1、间期
2、前期
3、中期
4、后期
5、末期
各时期总结:
间期(Interphase):图Ⅰ-1(a)所示,有丝分裂间期染色体以染色质形式存在,染色质缠绕成丝状的无规线团。

前期(Prophase):图Ⅰ-1(b)所示,染色体螺旋化,由无规线团逐渐变成比较清晰的染色体,核膜核仁消失。

中期(Metaphase):图Ⅰ-1(c)所示,染色体在分裂中期有序地排列在赤道板上,数目清晰,是染色体形态观察的最佳时期。

后期(Anaphase):图Ⅰ-1(d)所示,姐妹染色单体开始分离并在纺锤丝的牵引
下移向两极。

末期(Telophase):图Ⅰ-1(e)所示,染色体继续走向两极,同时染色体也开始解螺旋,由染色体状态逐渐变为无序线团,核膜核仁复现。

实验总结:
1、解离的时间要适当,大约4min,因为解离时间的长短与实验结果的好坏有非常直接的影响,时间过长,则不仅破坏分生组织之间的果胶与纤维素等物质,也使分生组织与伸长区脱离,染色效果将会降低,而过短,则又达不到分离细胞的结果。

2、在切取根尖时大约切从根尖开始算往上1.5mm左右,若切得太短,则只会看到成熟的根冠细胞,在视野中看不到分裂期细胞;若切得太长,则会看到有很多伸长区的成熟细胞,从而影响实验结果。

3、染色时间不宜过长或过短,染色过深或过浅都会影响最终的实验结果。

4、压片时用拇指从上往下垂直用力且要避免载玻片与盖玻片之间的滑动,否则会使细胞之间重叠,影响观察。

5、观察时先用低倍镜找到分裂相的位置,再换高倍镜观察
【参考文献】
1 黄秋婵;韦友欢;韦方立;;改进观察植物细胞有丝分裂方法的探讨[J];科学教育;2008年04期
2 卢小玉;张豪;;“观察植物细胞有丝分裂实验”的整体优化设计[J];生物学通报;2007年07期
3 柯达珊;;一种“观察植物细胞的有丝分裂”实验的新方法[J];实验教学与仪器;2010年10期
4 尉青;;课例:观察植物细胞有丝分裂实验的改良教学设计[J];新课程(教师);2010年03期。

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