生物药物分析
生物药物分析第七章作业答案
单选题1、下列不属于水溶性的维生素的是1/46A.维生素EB.维生素B12C.泛酸D.维生素C正确答案：A试题解析：水溶性维生素包括维生素B族和C族，维生素E属于脂溶性2、维生素是一类？2/46A.高分子有机化合物B.低分子有机化合物C.无机化合物D.微生物化合物正确答案：B试题解析：维生素是一类维持人体正常生理代谢功能所必需的低分子有机化合物3、下列维生素中参与转氨基作用的是3/46A.磷酸吡哆醛B.泛酸C.TPPD.烟酰胺正确答案：A试题解析：磷酸吡哆醛和磷酸吡哆酸是维生素Ｂ６在生物体内存在的主要形式，它们是氨基转移酶的辅酶，它们之间相互转变起着传递氨基的作用4、维生素E的多种异构体中哪个活性最高4/46A.α－生育酚B.β－生育酚C.γ－生育酚D.δ－生育酚正确答案：A试题解析：维生素Ｅ又名生育酚，包括８种化合物，即α－生育酚、β－生育酚、γ－生育酚、δ－生育酚和α－生育酚、β－生育酚、γ－生育酚、δ－三烯生育酚，α生育酚是自然界中分布最广泛、含量最丰富、活性最高的维生素Ｅ形式。
5、下列不是维生素E鉴别方法的是5/46A.硝酸反应B.三氯化铁反应C.三氯化锑反应D.紫外光谱法正确答案：C试题解析：三氯化锑反应用于鉴别维生素A6、在维生素E的三氯化铁鉴别反应中，与联吡啶生成红色配离子的是6/46A.NO3-B.Cl-C.Fe3+D.Fe2+正确答案：D试题解析：维生素Ｅ在碱性条件下，水解生成游离的生育酚，生育酚经乙醚提取后，可被FeCl3氧化成生育醌；同时被还原为Fe2+ ,Fe2+与联吡啶生成红色的配位离子。
7、维生素E的0.01%无水乙醇液，有最大吸收的波长处在7/46A.284nmB.254nmC.332nmD.620nm正确答案：A8、关于维生素C，不正确的是8/46A.不溶于水B.不溶于乙醚C.含有不饱和键D.无臭味酸正确答案：A试题解析：维生素C属于水溶性9、下列药物的碱性溶液，加入铁氰化钾后，再加正丁醇，显蓝色荧光的是9/46A.维生素AB.维生素CC.维生素B1D.维生素E正确答案：C试题解析：维生素B1鉴别-硫色素荧光反应10、能发生硫色素特征反应的药物是10/46A.维生素AB.维生素CC.维生素B1D.维生素E正确答案：C试题解析：硫色素反应是维生素B1的专属性鉴别反应11、2，6-二氯靛酚反应利用什么性质进行鉴定维生素C11/46A.糖的性质B.酸性C.还原性D.荧光反应正确答案：C试题解析：2，6-二氯靛酚为氧化剂，维生素C具有还原性12、测定维生素C注射液的含量时，在操作过程中要加入丙酮，这是为了12/46A.保持维生素C的稳定B.增加维生素C的溶解度C.加快反应速度D.消除抗氧剂的干扰正确答案：D试题解析：注射剂中常含有作为抗氧剂的亚硫酸氢钠，在滴定前应加入丙酮（或甲醛）使之与亚硫酸氢钠反应生成加成物而掩蔽起来，以消除干扰13、维生素C碘量法测定要排除亚硫酸的影响则在滴定前加入13/46A.丙酮B.酒石酸C.草酸D.丙醇正确答案：A试题解析：注射剂中常含有作为抗氧剂的亚硫酸氢钠，在滴定前应加入丙酮（或甲醛）使之与亚硫酸氢钠反应生成加成物而掩蔽起来，以消除干扰14、维生素C可在三氯醋酸或盐酸存在下，经水解、脱羧、失水等反应，转变成糠醛，再与吡咯在50℃反应生成什么颜色14/46A.蓝色B.无色C.红色D.黄色正确答案：A试题解析：维生素C利用糖的性质鉴别15、维生素C的含量测定主要基于其什么性质15/46A.糖的性质B.酸性C.还原性D.荧光反应正确答案：C试题解析：维生素C的含量测定基于其具有强的还原性，可被不同氧化剂定量氧化而进行。
第九章生物碱类药物分析
学习目标
掌握**：生物碱类典型药物的结构特征与性质；
特征鉴别试验。
了解：其他鉴别反应；其他杂质检查方法；
第一节 典型药物的基本结构与性质
一、基本结构和分类 （一）苯烃胺类 本类药物的结构特征为N在侧链上，为脂肪胺。 代表药物：盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱。
H OH CH3 CH3
H NH
.HCL
盐酸麻黄碱
2、盐酸吗啡中罂粟酸的检查 罂粟酸遇三氯化铁显红色。 要求本品加入试剂，不得显红色。
硫酸奎宁中其它金鸡纳碱的检查 检查方法：供试品溶液自身稀释对照法 有关物质的检查 方法：HPLC
旋光法*
硫酸阿托品（05版药典）
【检查】莨菪碱 取本品，按干燥品计算，加水制成每1ml 中含 50mg的溶液，依法测定（附录Ⅵ E），旋光度 不得过－0.40°。（已知莨菪碱的比旋度为32.5 ° ）求杂质限量是多少？
终点
（3）提取剩余滴定法
用于对热不稳定的生物碱
有机层（
B）定量过量的酸滴定液
水层（BH H） 有机层（弃去）
水层
碱滴定液滴定
终点
（二）测定条件的选择
1. 碱化试剂 最常用氨水**
优点：使大部分生物碱游离，不会和生物碱发生 反应，不易乳化，易挥发，易除去，无干扰。
2. 提取溶剂
（1）提取溶剂选择的原则 对生物碱溶解度大，而对其他共存物溶解度
《生物药物分析与检验》课程教学大纲
《生物药物分析与检验》课程教学大纲一、课程性质本课程是生物工程专业本科学生的专业课，也是一门专业拓展课，在教学计划中占有重要的地位，本课程主要学习药物结构与药效的关系，药物的理化性质、鉴别方法、合成方法等，为后续课程如药剂学、药用分析化学等的学习打下基础，是全面掌握药学领域各学科知识的重要桥梁。
本课程需先修无机化学、有机化学、生物化学等课程。
二、教学目的通过生物药物分析与检验课程的教学，使学生掌握生物药物特有的一些分析思路和分析手段，能够设计生物药物的标准规格，培养学生独立思考工作的能力。
同时培养学生强烈的药物质量观念以及生物药物分析的基本知识和技能。
学习本门课程后，要求学生不仅能够熟练掌握普通生物药物分析的方法、而且能够独立设计药物质量标准、建立质量分析方法及方法学评价。
三、教材教参教材：《生物药物分析》，何华，化学工业出版社（第一版），2001年。
教参：《生物药物分析》，曾经泽，北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，2000年；《生物药物分析》，白秀峰，中国医药科技出版社，1999年。
四、教学方式本课程以课堂讲授为主、自学和讨论为辅的方式组织教学，内容采用多媒体辅助手段。
五、教学内容及时数根据生物工程专业人才培养方案，本课程共1学分，总的教学时数为18学时，其中讲授18学时。
具体如下：1. 生物药物分析学概述 (1.5学时，其中讲授1.5学时)基本内容：药物分析的性质、任务、药品质量标准的内容、生物药品的分类和科学管理、生物药品分析检验的基本程序和检验内容、药物代谢与药物动力学中的分析方法。
重点：生物药物分析的性质、概念、应用范围、工作方法及有关内容。
难点：药物代谢与药物动力学中的分析方法。
新知识点：药品质量标准的内容。
2. 生物药物分析信息的获取（自学）3. 药物分析方法的选择、建立和认证（1.5学时，其中讲授1.5学时）基本内容：分析质量控制、标准、标准物质等概念、质量控制图、实验室内外部的质量控制、准确度、精密度、线性范围等参数的概念、考察方法。
药物分析中的药物生物利用度研究
药物分析中的药物生物利用度研究药物生物利用度是指药物进入体内后与生物体发生相互作用的程度，通常用来评估药物对人体的吸收、分布、代谢和排泄等药物动力学参数。
药物生物利用度的研究对于药物研发和临床应用具有重要意义。
本文将探讨药物分析中的药物生物利用度研究。
一、药物生物利用度的定义和意义药物生物利用度是指经过给药途径或途径组合后，药物在人体内有效吸收并达到疗效所需的程度。
药物生物利用度的高低直接影响着药物的疗效和副作用。
因此，准确测定药物的生物利用度对于发展新药、优化药物剂型以及制定合理的临床用药方案非常重要。
二、药物生物利用度的测定方法1. 体内标记法体内标记法是通过给药药物加入标记物（如放射性同位素）进行测定。
利用体内标记法可以直接观察药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄情况，但由于其特殊性和辐射安全性问题，应用较为有限。
2. 体外标记法体外标记法是通过体外实验测定药物的生物利用度。
常见的体外标记法包括体外释放法、回归模型法、lumen中法等。
体外标记法具有操作简便、重复性好的优点，适用于大规模筛选和初步评价药物生物利用度。
3. 统计学方法统计学方法是通过大量样本的数据分析，获得药物生物利用度的定量信息。
利用统计学方法可以对药物的体内行为进行描绘和预测，常用的统计学方法包括直接比较、回归分析等。
三、药物生物利用度研究的实际应用药物生物利用度的研究在药物研发和临床应用中具有重要地位。
首先，在新药研发过程中，药物生物利用度的测定可以用来评估药物的吸收特性和药物代谢产物，指导药物优化和制剂选择。
其次，在临床应用中，药物生物利用度的研究可以提供药物的有效剂量和给药途径，指导合理的用药方案，保证药物疗效和安全性。
四、药物生物利用度研究的挑战与前景药物生物利用度研究仍面临一些挑战。
首先，药物的生物利用度受到许多因素的影响，如剂型、给药途径、体内环境等，因此研究过程需要综合考虑多个因素。
其次，药物生物利用度的测定方法需要准确可靠，且与体内情况相符合。
药物分析讲稿-第九章生物碱类药物分析
第九章生物碱类药物分析生物碱(alkaloids)是一类存在于生物体内的含氮有机化合物，绝大多数存在于植物体内，大部分呈碱性，目前通过提取或人工合成方式得到的生物碱已有约一万余种之多，而其中近百种具有显著的药理及生理作用，已广泛应用于临床医疗。
但生物碱同时也具有较强的毒性，因此，一方面临床应用须十分慎重，另一方面，对其质量也应严格控制，以保证用药安全有效。
生物碱的数目多，结构复杂，其基本母核多种多样，现按其结构重点讨论六类生物碱的结构，以及与鉴别，检查，含量测定相关的性质，以便详细阐述药物结构、性质与分析方法的关系。
第一节典型药物的结构与性质一、苯烃胺类药物这类生物碱的结构特点是氮原子不在环状结构内，其代表药主要有盐酸麻黄碱(ephedrine hydrochloride)，盐酸伪麻黄碱(pseudoepedrine hydrochloride)，秋水仙碱(eolchicin)等。
麻黄碱与伪麻黄碱在结构上均属于有机胺大类中的苯丙胺小类，其氮原子在侧链上，都是仲胺，碱性较强，易与酸成盐；而秋水仙碱由于酰胺键p-π共轭，故碱性减弱，几乎呈中性。
苯烃胺类生物碱分子结构中，都含有芳环，因此都在紫外光谱区有特征吸收。
该类生物碱侧链上具有不对称碳原子，盐酸麻黄碱的比旋度为-330～-35.50，盐酸伪麻黄碱的比旋度为+61.00～+62.50，秋水仙碱为左旋体，比旋度为-4250～-4500。
二、托烷类药物(莨菪烷类)这类生物碱大多数是由莨菪烷衍生的氨基醇和不同有机酸缩合成酯类的生物碱，常见的有颠茄生物碱类和古柯生物碱类，现以硫酸阿托品(atropine sulfate)和氢溴酸山莨菪碱(anisodamine hydrobmmide)为例进行讨论。
阿托品和山莨菪碱，具有酯的结构，易水解，五元酯环上有氮原子，故碱性较强，易与酸成盐。
氢溴酸山莨菪碱结构中有不对称碳原子，为左旋体，比旋度-9.00～-11.50，而阿托品虽也有不对称碳原子，但因外消旋化而为消旋体，无旋光性。
生物碱类药物分析 非水滴定法
非水滴定基本原理
BH+·A- + HClO4
BH+·ClO4- + HA
BH+·A 生物碱类盐
HA
置换出的弱酸
02
测定方法
供试品
以消耗标准液8ml计算
溶剂
HAc，一般用量10~30ml
滴定剂
0.1mol/L HClO4/HAc
溶液
指示剂
结晶紫
做空白试验
03
问题讨论
溶剂的选择
Kb﹤10-8的有机碱盐
（1）水中酸强度相等 （2）HAc中酸强度不相同 HClO4＞HBr＞HCl＞H2SO4＞HNO3＞其它弱酸
03
问题讨论
终点指示方法
最常用的指示剂是： 结晶紫 Crystal Violet（CV）
紫 蓝 蓝绿 黄绿 黄
（碱性区）
（酸性区）
终点的颜色应用电位法校准
03
问题讨论
注意事项
水分的影 响及排除
0
0
1
2
适用范围
Kb为10-8~10-10 选冰醋酸作溶剂
0 4
Kb ﹤10-12 选醋酐作溶剂
0 3
Kb为10-10~10-12
选冰醋酸和醋酐作溶剂
03
问题讨论
酸根的影响
01 置换滴定，即用强酸（HClO4），
置换出与生物碱结合的较弱的 酸（HA）
02 HA不同，对滴定反应的影响也不同
HClO4、HBr、HCl、H2SO4、HNO3
05
思考题
在测定硫酸奎宁含量时，为什么用 非水滴定法？
非水滴定法
目录
01 02 03
非水滴定法概述 测定方法 问题讨论
生物药物检测技术课后答案
生物药物检测技术课后答案一、名词解释:生物药物分析:应用微生物学、分子生物学、免疫学、生物化学、有机化学、数学、分析化学、生化工程等学科的理论及其技术成就，检测和研究各种生物药物质量的一门综合性学科。
生物药物:指的是生物体生命活动过程中产生的，或者通过生物技术加工的，用作疾病的诊断、预防、治疗的初级和次级代谢产物，包括微生物药物、基因工程药物、动植物细胞组织制备的生化药物。
药品标准:是指国家对药品的质量规格及其检验方法所做的技术规定，是药品的生产、流通、使用及检验、监督管理部门共同遵守的法定依据。
药典:-一个国家记载药品标准，规格的法典，一般由国家药品监督管理局主持编撰颁布实施，具有法定约束力。
基因工程药物:是先确定对某种疾病有预防和治疗作用的蛋白质，然后将控制该蛋白质合成过程的基因取出来，经过一系列基因操作，最后将该基因放入可以大量产生的受体细胞中去，在受体细胞不断繁殖的过程中，大规模生产预防和治疗这些疾病的蛋白质。
药物杂质:药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，甚至对人体健康有害的物质。
面积归一法:计算各杂质峰面积及其总和，并求出占总峰面积的百分率以测定杂质含量。
内消法:是指将一--定重尿的纯物质作为内标物加到一定量的被分析样品混合物中，然后对含有内标物的样品进行色谱分析，分别测定内标物和待测组分的峰面积及相对校正因子，按桕应公式和方法叩可求得被测组分在样品中的百分含量。
外消法:用己知个同含最的标样系列等量进行分析，然后做出响应信号与含最之间的关系曲线。
定量分析样品时，在测校正曲线相同条件卜进同等样量的等测样品，从色谱图上测出峰高或峰面积，在从校正曲线查出样品的含量。
微生物限度检查法:系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的- -种检查方法。
放射性免疫测定法:利用免疫学上的抗原抗体高度特异性反应与放射性同位素测量技术的高度灵敏性相结合的超微量分析方法。
酶免疫测定法:利用抗原和抗体的免疫学反应和酶的高效催化作用来测定抗原或抗体含量的技术。
生物药物分析与检验
1. 凡例（General Notices）
把一些与标准有关的、共性的、需要 明确的问题，以及采用的计量单位、 符号与专门术语等，用条文加以规定， 以避免在全书中重复说明。
凡例是标准的一部分，同样具 有法律约束力。
2. 正文（Monographs）
是药典的主要内容，收载药品及其制 剂的质量标准。
• 举例：简介细胞因子 •
二、生物药物的质量标准
• 药品质量标准是药品生产、供应、 使用和监督管理部门共同遵循的法定 技术依据，也是药品生产和临床用药 水平的重要标准。
世界上第一本药典
• 唐朝《新修本草》 • 苏敬等人编著 • 比世界上有名的欧洲纽伦堡药典要早800余
年。
• 我国药典的全称为《中华人民共和国药典》， 其后以括号注明是哪一年版，可以简称为 《中国药典》 （2005年版），英文缩写为 CHP。
(2)溶解度是药品的一种物理性质。
2.检验方法和限度
按规定检验方法进行检验。
标准中规定的各种限度数值的规定, 系包括上限和下限两个数值本身及中 间数值。
未规定上限,指不超过101.0%
3、对比解析：标准品 对照品
(1) 标准品 指用于生物检定、抗生素或生物药品中含 量或效价测定的标准物质，以效价单位(U) 表示。
ＵＳＰ收载药物及其制剂 ＮＦ收载药用辅料，两种用途相兼 者收载于ＵＳＰ
二者合并为一册，缩写为 USP(31)NF(26)，已于2008年5月生效。
2．英国药典 British Pharmacopoeia，缩写BP， 目前为2008 年版，即BP（2008）
3．日本药局方 缩写JP，目前 为15 版，即JP（15），2002年版。
谱 分 析
谱 分
生物体内药物分析方法的选择及应用通用版
生物体内药物分析方法的选择及应用通用版生物体内药物分析方法的选择及应用药物分析是研究药物在生物体内分布、代谢和排泄过程中的定量分析方法。
准确的药物分析方法可以帮助科学家们了解药物的吸收、转化和排泄情况，从而为药物研发和临床应用提供依据。
本文将介绍生物体内药物分析方法的选择及应用。
一、药物分析方法的选择1. 仪器分析法：包括质谱法、色谱法和光谱法等，这些方法具有高灵敏度、高选择性和高准确性的特点，能够实现对药物的快速检测和定量分析。
质谱法主要用于药物的结构鉴定和代谢产物的检测，色谱法则广泛应用于药物的分离和纯化，光谱法可以用于药物的定量测定。
2. 生物活性测定法：利用生物体对药物的代谢过程进行定量测定。
这种方法可以直接反映药物在生物体内的药效，并能够检测出活性代谢产物。
常见的生物活性测定法包括生物感应法、荧光法和酶动力学法等。
3. 标记药物法：通过给药物标记同位素或放射性核素，利用同位素的放射性特性进行定量分析。
标记药物法在药物的代谢研究中被广泛应用，可以监测药物在生物体内的代谢和排泄过程。
4. 分子生物学方法：包括PCR、基因芯片和蛋白质组学等技术，可以用于药物的基因表达分析和蛋白质互作分析。
这些方法在药物代谢酶和转运蛋白等方面具有重要应用价值。
二、药物分析方法的应用1. 药代动力学研究：药代动力学研究是药物分析方法在药物代谢和排泄过程中的应用。
通过药物的测定和分析，可以了解药物在生物体内的吸收、分布、代谢和排泄情况，为药物的治疗剂量和给药方案的制定提供依据。
2. 药物相互作用研究：药物相互作用是指两种或更多种药物在生物体内发生的相互作用现象。
药物相互作用的研究可以帮助科学家了解不同药物在体内的相互作用机制，以及药物的副作用和相互作用对治疗效果的影响。
3. 药物毒性研究：药物毒性研究主要是研究药物对机体的不良反应和副作用。
通过药物分析方法的应用，可以对药物的毒性进行定量分析，从而提醒患者和医生注意药物的使用安全性，并评估药物的毒性风险。
天然药物化学生物碱类药物分析
天然药物化学生物碱类药物分析天然药物是指从动植物以及微生物等天然来源中提取的药物物质，一直以来在医学领域中扮演着重要的角色。
其中，化学生物碱类药物作为天然药物的主要分类之一，具有广泛的药理活性和药物应用。
本文将对天然药物化学生物碱类药物进行分析与探讨。
1. 对化学生物碱类药物的定义和分类进行介绍化学生物碱类药物是一类从植物、动物等自然资源中提取得到的含有生物碱结构的药物物质。
它们具有较复杂的结构和多样的药理活性，常被用于治疗多种疾病。
根据其来源和结构特点，可以将化学生物碱类药物分为植物生物碱、动物生物碱和微生物生物碱等几个子类。
2. 分析化学生物碱类药物的提取与分离方法2.1 植物生物碱的提取与分离植物生物碱的提取与分离一般采用溶剂提取法、薄层色谱、液-液萃取等方法。
溶剂提取法是最常用的提取方法之一，通过选择合适的溶剂，将药材中的化学生物碱溶解出来。
随后，可以利用薄层色谱和液-液萃取等技术来分离和纯化目标物质。
2.2 动物生物碱的提取与分离动物生物碱的提取与分离方法相对较为复杂。
一般采用超声波提取、超临界流体萃取、膜分离等技术。
超声波提取利用超声波的机械效应和热效应促进生物碱的析出和转移，从而实现提取的目的。
超临界流体萃取则是利用压力和温度调节流体的性质，加速目标物质的转移和提取。
2.3 微生物生物碱的提取与分离微生物生物碱的提取与分离方法主要包括微生物发酵、固相微萃取等技术。
微生物发酵是指通过培养微生物，在特定条件下使其合成生物碱物质。
而固相微萃取则是利用富集柱或吸附材料将目标生物碱富集起来，再进行分离和纯化。
3. 分析化学生物碱类药物的质量控制方法质量控制是药物研发和生产过程中的关键环节。
对于化学生物碱类药物而言，质量控制方法主要包括外观检查、熔点测定、红外光谱分析、光学旋光度测定、高效液相色谱、质谱等。
外观检查是一种直观观察化学生物碱药物颗粒的形态和颜色，以判断其是否符合质量要求。
熔点测定则通过检测物质的熔化温度来确定其纯度和认证。
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第八章抗生素类药物的分析 一、效价的测定方法：1、稀释法：原理：用液体培养基逐级将抗生素稀释，在各管中加入等量的试验菌液，进行培养，观察抑制细菌生长的最低抗生素浓度，再与同法测定的标准品终点作比较，从而求得被测抗生素的效价。
X=(T/S)*C X 样品效价(U/ml) T 检品液最大稀释倍数S 标准品液最大稀释倍数 C 标准品液效价(U/ml)检测终点判断 1、试验菌生长完全抑制 2、生长50%抑制3、指示剂变色4、电位差的改变5、菌种的溶血现象等2、比浊法 原理：将一定量的抗生素加至接种有试验微生物的液体培养基内，混匀后，经短期培养（约3-4h ），测量培养基浊度，其浊度与细菌数、细菌群体质量存在直接关系，在一定的范围内符合比耳定律。
影响因素1) 物理因素:1、散射现象2、菌液浓度： 3、细菌体大小的变化 2) 培养基：成分、酸度、培养温度、通气等条件影响。
金黄色葡萄球菌，pH 在6.8-7.8。
3) 培养：温度、振摇。
3、琼脂扩散法即管碟法原理： 抗生素在涂布特定菌的琼脂培养基内扩散，形成一定浓度抗生素的球型区，抑制试验菌生长，通过透明培养基观察抑菌圈，抗生素剂量的对数与抑菌圈面积或直径成正比。
在同样条件下将已知效价的标准品溶液与未知效价的供试品溶液的剂量反应(抑菌圈)进行比较；当标准品和供试品是属于同一性质的抗生素时，标准品溶液和供试品溶液．对一定试验菌所得的剂量反应曲线，在一定剂量范围内应互相平行。
根据以上原理，可设计为一剂量法、二剂量法及三剂量法。
从而可以较为准确地测定供试品的效价 公式里各字母意义要记下。
影响抑菌圈半径的因素： （1）D 的影响因素：抗生素本身结构、分子量等 杂质： 琼脂含量：)4log (log 21.92DTH C M DT r π⨯-=菌种对抗生素的吸附作用：pH影响分子的形式、温度影响扩散D增大，r也增大（2）T的影响：一般T增加，r增大。
（3）M的影响：在一定的范围内，小管内M越大，抑菌圈直径越大。
（4）C的影响：C越小，抑菌圈直径越大（5）H的影响：培养基增厚，则抑菌圈减小。
操作步骤：1、试验菌的纯化与悬液的制备2 、缓冲液、灭菌水与培养基的制备3 、标准品、供试品的称量、溶解与稀释4 、双碟的制备及放管5 、滴加药液6 、恒温培养7 、测量抑菌圈直径或面积8 、计算二、可靠性测验:通过统计各组均数间的方差，以试品间、回归、剂间（列）、碟间（行）……的方差与误差项（S2）的比值（称F值），来确定各自差异的显著性程度和实验结果的可靠性。
F值（F 值=该项方差/误差项S2）可作为观察实验显著性程度的一个指标试品间差异不显著（P>0.05）回归项非常显著（P<0.01）偏离平行不显著（P>0.05）剂间差异显著（P<0.05）碟间差异不显著（P>0.05）三、链霉素呈色反应:1、茚三酮反应：蓝紫色化合物2、坂口反应（sagaguchi test)：链霉素水解产物链霉胍特有。
链霉胍，8-羟喹啉分别与次溴酸钠反应，其各自的产物在相互作用生成橙红色化合物。
3、糖类反应：莫利西反应(Molisch test)，五碳糖或六碳糖在硫酸存在的条件下脱水成羟甲基糠醛，与蒽酮显蓝色，与α-奈酚呈红紫色。
4、埃尔松-摩根（Elson-Morgan test)：样品在强酸或强碱水解后释放出氨基己糖，在碱性条件下与乙酰丙酮缩合，形成吡咯的衍生物，在碱性条件下与对二甲胺基苯甲醛的乙醇及盐酸溶液（Ehrlich试剂）成红色，在540nm处可定量测定。
5、麦芽酚反应(maltol test)：链霉素在碱性溶液中水解，重排，生成麦芽酚在酸性溶液中与三价铁离子结合，形成紫红色络合物。
四、四环素类抗生素（了解）（一）呈色反应1、浓硫酸反应四环素深紫色；金霉素蓝色至绿色；土霉素朱红色；强力霉素黄色；2、三氯化铁反应：含有酚羟基，遇三氯化铁立即呈色反应，（二）荧光反应:土霉素绿色荧光，四环素黄色荧光（三）紫外光谱（四）色谱五、大环内酯抗生素（了解）(一）呈色反应1、硫酸反应：遇硫酸均呈红棕色2、莫利西反应：糖类的反应3、Seliwanaff 反应：脱水间苯二酚糖糖醛衍生物具颜色产物红霉素淡黄色；螺旋霉素亮紫红色；碳霉素深青紫色；柱晶白霉素淡青色；（二）薄层色谱(三) 光谱学鉴别紫外光谱红外光谱六、利福霉素类抗生素（了解）呈色反应：1 、浓盐酸反应：2 、三氯化铁：向1ml利福霉素的溶液中，滴加三氯化铁乙醇溶液，有绿色，蓝绿色。
表明有酚羟基3 、硝酸盐反应：利福平，溶液中加入硝酸钠溶液，颜色由橙色变为暗红色。
七、杂质检查1、青霉素过敏原：青霉噻唑多肽或青霉噻唑蛋白(青霉噻唑基团)凝胶过滤法分离，用Penamaldate法测定HgCl2青霉噻唑衍生物 Penamaldate衍生物（285nm）2、链霉素毒性杂质:链霉胍,链胍双氢链糖;双氢链霉素;链霉素醛基化合物;神经毒性：二链霉胺二链霉胺含量测定原理:二链霉胺等不被KBH4还原，能与盐酸氨基脲反应，生成的缩氨脲在233nm 有吸收峰3、四环素杂质：脱水四环素、差向四环素、差向脱水四环素(HPLC测定)4、土霉素杂质：脱水土霉素、差向土霉素、α-阿扑土霉素、β-阿扑土霉素等降解产物.( 薄层分离，荧光测定)第九章维生素及辅酶类药物分析一、维生素C类的分析1、性质1)酸性：烯二醇结构—酸性。
一元酸. 能与NaHCO3作用生成钠盐C3-OH， pKa=4.7(共轭效应)C2-OH，pKa=11.57(邻位羰基)2)还原性：烯二醇基—还原性。
与硝酸银反应可生成金属银黑色沉淀与2，6-二氯吲哚酚反应（2，6-二氯靛酚）3)荧光反应：4)糖的性质 : VC的结构很象糖结构，具有糖的性质。
可在三氯醋酸或盐酸存在下，经水解、脱羧、失水等反应，转变为糠醛，再与吡咯在50℃反应生成蓝色，用于鉴别反应2、鉴别：1)还原性：维生素C分子中的二个烯醇基具有强还原性可以被氧化为二酮基2)利用糖类的性质可在三氯醋酸或盐酸存在下，经水解、脱羧、失水等反应，转变成糠醛，再与吡咯在50℃反应生成蓝色。
3)紫外分光光度法:根据维生素C在盐酸液（0.01mol/L）中，243nm有最大吸收3、含量测定1)碘量法：维生素C由于分子中的烯二醇基具有还原性,能被I2氧化成二酮基.1mol维生素C与1mol I2定量反应.终点颜色：无色→蓝色。
反应条件：酸性使VC在空气中氧化速度减慢。
溶剂新沸放冷的水。
减少水中溶解氧的影响要排除亚硫酸的影响则在滴定前加入丙酮或甲醛。
2)2,6-二氯靛酚滴定法原理：在酸性下，维生素C氧化型是红色的;还原型是无色的.酸性下直接用2,6-二氯靛酚滴定，用滴定剂自身的颜色变化指示终点，不需要另外的指示剂。
3)与1，10-菲洛啉-铁（III）试剂的比色法基于维生素C将Fe(Ⅲ)还原生成Fe(Ⅱ),Fe(Ⅱ)与菲洛啉形成桔红色络合物，在510nm有最大吸收。
4)紫外分光光度法二、维生素E的分析合成型为dl-α-生育酚醋酸酯天然型为d-α-生育酚醋酸酯检查：天然维生素E采用硫酸铈滴定法检查游离生育酚。
游离生育具有还原性，可被硫酸铈定量氧化取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈滴定(0.01mol/L)滴定（黄色），消耗硫酸铈滴定液(0.01mol/L)不得过1.0ml。
每1ml硫酸铈滴定液(0.01mol/L)相当于0.002154g的游离生育酚，维生素E中所含的游离生育酚的限量相当于不得过2.15％。
三、辅酶Q10的分析1、鉴别1)根据氧化型和还原型颜色不同来鉴别氧化型辅酶Q10 还原型辅酶Q10（黄色）（无色）2)氧化型辅酶Q10可将还原型亚甲蓝（无色）氧化而显蓝3)紫外吸收光谱，275nm第十章核苷酸类药物分析一、嘌呤类核苷酸药物分析1、鉴别定糖法地衣酚orcinol反应：核酸与浓盐酸共热时，可形成糠醛(绿色 670nm)二苯胺反应：脱氧核糖核酸经酸水解后得脱氧核糖（蓝色 595nm）间苯三酚反应：其中的核糖在水溶液中加间苯三酚，水浴，显玫瑰红色第十三章酶类药物的分析一、酶活力测定方法1)固定时间法在适宜的条件下，使酶和底物共同保温一定时间，测定产物生成的量或底物消耗的量，计算出酶的含量（或活力）。
[E]表示酶浓度，[P]为反应产物浓度，t 表示酶作用时间，K为常数。
2)连续监测法在酶反应过程中，连续记录不同时间的底物消耗量或产物生成量。
（一）、需NAD+或NADP+作指示的连续监测法还原型辅酶（NADH和NADPH）在340nm处有紫外吸收，氧化型辅酶（NAD+和NADP+）在340nm处无紫外吸收.利用340nm处每分钟吸收度升高或降低的速率与酶活性成正比的关系，推算出酶的活力单位。
包括：直接测定法 :大多数需NADH（NADPH）参加的脱氢酶，可利用紫外分光光度法直接测定反应体系在340nm处吸收度的变化，计算酶活力单位。
丙酮酸＋NADH＋H+ 乳酸＋NAD+340nm处吸收度降低的速率与NADH的氧化速率成正比，与LDH的活力成正比。
偶联法:此类酶催化反应不需NAD+或NADP+，但当与需NAD+或NADP+的脱氢酶反应偶联以后，能用紫外分光光度法测定.由脱氢酶引起的反应为指示反应，脱氢酶是指示酶，指示酶活力要比测定酶活力至少大100倍。
例如：谷草转氨酶的测定：三联酶活测定:引入一个辅助酶反应，将被测酶反应系统与指示酶反应系统联系起来，组成一个“三合一”酶反应系统，使底物转化率、辅助酶反应和NADH（NADPH）氧化速率之间成正比函数关系，辅助酶和指示酶的活力必须大大超过测定酶活力。
例如：磷酸肌酸+ADP 肌酸＋ATP (1)葡萄糖＋ATP G-6-P ＋ADP (2)G-6-P + NADP+ 葡萄糖酸-6-磷酸 ＋ NADPH ＋ H+ (3)(1) 被测反应，(2)辅助反应，HK （己糖激酶）辅助酶，(3) 指示反应， G-6-PDH （6—磷酸葡萄糖脱氢酶）指示酶。
（二）、不需NAD+或NADP+作指示的连续监测法 3) 固定浓度法根据酶催化反应，使反应产物达到额定的浓度时其反应时间与酶浓度成反比的原理进行设计的. [P]=K[E]t以所需时间的倒数（1/t ）对酶浓度作图即可制备标准曲线。
优点：1、记录时间。
2、准确二、 酶活性测定方法的设计 一、 正交设计——多因素选择正交试验设计（Orthogonal experimental design ）是一种高效的利用正交表来安排多因素多水平设计试验的方法。
通过巧妙的安排和分组，用较少的试验次数，就能分析各因素的作用大小，找出最佳的试验条件。
利用各因素所对应指标的极差R 及平均极差D 作出判断。