芒果苷的离解常数和脂水分配系数的测定方法研究
芒果的保鲜技术及其相关指标的检测
芒果的保鲜技术及其相关指标的检测（20课时）一、实验目的1、熟悉芒果常用采后保鲜技术的原理。
2、掌握好果率、总固形物、可滴定酸、总糖的测定原理和方法。
二、实验原理芒果是一种核果类的热带名贵水果，有“热带果王”的美称。
芒果以其独特的风味和维生素含量高，在世界的生产与贸易上占有一定的地位。
但是芒果属于易腐烂难贮藏的水果，是呼吸跃变型水果，采后代谢旺盛，果实容易后熟而变黄、变软，直到变黑、腐烂。
方案一：采用涂膜技术对芒果进行保鲜研究，配置一定浓度的成膜溶液（壳聚糖、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠）溶液进行涂膜处理对芒果进行保鲜研究，同时做空白对照保鲜实验。
本实验主要利用成膜延缓芒果的呼吸作用来起到保鲜效果。
方案二：采用一定浓度的有机酸（柠檬酸、草酸、水杨酸）处理芒果，通过检测好果率、总固形物、可滴定酸、总糖来评价其保鲜效果。
柠檬酸可参与植物果实呼吸代谢，延缓果实衰老。
草酸通过诱导植物抗病性和影响植物抗氧化系统发挥保鲜作用。
三、仪器和试剂1、仪器：组织捣碎机、干燥箱、分光光度计、阿贝折光仪、恒温水浴锅等。
2、试剂：葡萄糖、72%硫酸、0.1%蒽酮显色液（称取0.1g蒽酮和1.0g硫脲，溶于100mL72％硫酸中，贮存于棕色瓶，现配现用）、柠檬酸、草酸、1%酚酞指示剂（1g酚酞溶于95%乙醇中）、0.1mol/L氢氧化钠溶液（经标定）均为分析纯。
3、材料：芒果、壳聚糖、海藻酸钠等。
四、实验步骤1、涂膜液的制备及芒果的涂膜：首先配制1%的涂膜液，然后用于芒果涂膜保鲜，同时做空白实验。
（1）1%壳聚糖涂膜液的制备：将一定量的壳聚糖溶解于1%的冰醋酸溶液中。
（2）1%海藻酸钠（或羧甲基纤维素钠）成膜液的制备：称取一定量的海藻酸钠（或羧甲基纤维素钠）用蒸馏水溶解即可。
然后将芒果放入涂膜液中浸泡3min，使溶液均匀覆盖果皮表面，捞出后放于通风处自然晾干，涂膜和空白分别放于托盘中置于室温条件下进行保藏，隔日测定相关指标，连续测定5-6次，综合评价保鲜效果。
汉防己甲素的表观溶解度_油水分配系数和解离常数的测定_张颖_解读
1
颖，姜
2
倩，张
322*
焓，宋爱查，蒋学华
（1．中国医药集团总公司四川抗菌素工业研究所，四川成都610052；2．四川大学华西药学院，四川成都610041；3．成都军区四川成都610061）总医院药剂科，摘要：目的
测定汉防己甲素的表观溶解度、油水分配系数和解离常数。方法
分别采用平衡溶解度法、摇瓶法测定汉防己
Tetrandrine is a strong base with high lipophilia，it ’s absorption position may be at
作者简介：张颖（1972—），女，博士，研究员，从事药物新制剂与新剂型的研究工作。Email：zhangy0817@163．com *通信作者（Correspondent author），Email：jxh1013@scu．edu．cn
An equilibrium solubility method and shake flask method were established to determine the apparent solubility and oil /water
partition coefficients（P）of tetrandrine in phosphoric buffer solutions with different pH，respectively．The dissociation constant（pK a）of tetrandrine in ethanol solution with different concentrations was measured according to spectrophotometric indicator method．RESULTS With pH increased，apparent solubility of tetrandrine was decreased while its apparent P showed the increasing trend．The pK a of tetrandrine in water was 8．08．CONCLUSION small intestine．
α-熊果苷平衡溶解度、表观油水分配系数和解离常数的测定
α-熊果苷平衡溶解度、表观油水分配系数和解离常数的测定滕希峰;李钟;刘龙元;何洋;王亚青;陈星宇;梁颖欣;何琳【期刊名称】《中成药》【年(卷),期】2016(038)011【摘要】目的测定α-熊果苷的平衡溶解度、表观油水分配系数和解离常数.方法HPLC法测定37℃下α-熊果苷在水和不同pH值磷酸盐缓冲液中的平衡溶解度,以及在正辛醇-水和正辛醇-磷酸盐缓冲液中的表观油水分配系数(Papp),紫外吸光度法测定其解离常数.结果37℃下,α-熊果苷在水中的平衡溶解度为325.7mg/mL,Papp(lgPapp)为0.65(-0.187);在磷酸盐缓冲液(pH 3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0)中分别为395.4、523.4、405.8、427.7、407.2、369.6mg/mL,Pappp(lgPapp)分别为0.37(-0.432)、0.61(-0.215)、0.81(-0.091)、0.58(-0.236)、0.57(-0.244)、0.58(-0.236).其解离常数为4.22.结论α-熊果苷溶解性好,表观油水分配系数小,属于生物药剂学分类系统(BCS)Ⅲ类药物.【总页数】5页(P2366-2370)【作者】滕希峰;李钟;刘龙元;何洋;王亚青;陈星宇;梁颖欣;何琳【作者单位】广东药科大学中药学院,国家中医药管理局岭南药材生产与开发重点研究室,广东广州510006;广东药科大学中药学院,国家中医药管理局岭南药材生产与开发重点研究室,广东广州510006;广东药科大学医药化工学院,广东省化妆品工程技术研究中心,广东中山528458;广东药科大学医药化工学院,广东省化妆品工程技术研究中心,广东中山528458;广东药科大学中药学院,国家中医药管理局岭南药材生产与开发重点研究室,广东广州510006;广东药科大学中药学院,国家中医药管理局岭南药材生产与开发重点研究室,广东广州510006;广东药科大学中药学院,国家中医药管理局岭南药材生产与开发重点研究室,广东广州510006;广东药科大学医药化工学院,广东省化妆品工程技术研究中心,广东中山528458【正文语种】中文【中图分类】R927.11【相关文献】1.蜘蛛香总缬草三酯的平衡溶解度、表观油水分配系数和稳定性测定 [J], 刘开萍;程盛勇;郁林娜;杨军;刘兴赋;尹航;罗喜荣;2.蜘蛛香总缬草三酯的平衡溶解度、表观油水分配系数和稳定性测定 [J], 刘开萍;程盛勇;郁林娜;杨军;刘兴赋;尹航;罗喜荣3.抗痛风药SE-10平衡溶解度、表观油水分配系数及解离常数的测定 [J], 李慧;张起;赵燕芳;刘晓红;张向荣;4.格列吡嗪油水分配系数和平衡溶解度的测定 [J], 杨秀丽;孙进;何仲贵;5.常绿钩吻碱平衡溶解度、油水分配系数及解离常数的测定 [J], 蒋文文;张媛洁;李高攀;宋煜;吴水生因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
灯盏花乙素苷元离解常数和油水分配系数测定
形式 。此外 ，在对 灯盏 花 乙素苷元 代谢产 物 的研 究 中发 现 ，灯盏花 乙素苷 元 口服吸 收后在体 内主要转
化成 灯盏 花 乙素 。
还包 括少量 灯盏 花 甲素 （ 菜 素 一 芹 ７—０ 一葡 萄 糖
醛酸 苷 ） 。灯 盏 花 乙素 苷 元 （ ｃｔｌ ｒｉ） 的 化 学 Ｓｕｅ ａｅ ｌ ｎ 结 构是是 ５ ６ ７ ４ 一四羟基 黄酮 ，与灯 盏花 乙素 ， ， ， 的区别在 于 ７位 羟基上 未接葡 萄糖醛 酸 。结 构式 见
第 ３ 第 ５期 ３卷
２１ ００年 ｌ Ｏ月
云 南 中 医 学 院 学报
Ｊ ｕ ａ ｆＹｕ ｎ ｎ Ｕｎｖ ｒｉ ｆＴ ａ ｉｏ ａ ｈｎ ｓ ｄｃｎ ｏ ｒｌ ｏ ｎ ａ ｉｅｓｔ ｏ ｒｄｔ ｎ ｌＣ ｉｅｅＭｅ ｉｉｅ ｎ ｙ ｉ
Ｖｏ ＿ ３ ． ５ ｌ ３ Ｎｏ
Ｇ ３ ２ 真 空 脱 气 机 ， Ｇ１ １ Ａ 四 元 梯 度 泵 ， １２Ａ ３１
Ｈ
Ｇ ３９ 自动 进样 器 ，Ｇ ３６ １２Ａ １１Ａ柱 温 箱 ，Ｇ ３５ １１Ｄ二
极管 阵 列 检 测 器 ，Ｃ ｅ ｓ ｔ ｎ化 学 工 作 站 。Ｌ ｎ ｈｍ ｔｉ ａｏ ｕａ ５ １ ５ ４ ６ ｍ 色谱 柱 。雷 磁 ｐ Ｓ一３ ｕＣ ８ １０× ． ｍ Ｈ Ｃ酸 度
图 １ 灯 盏 花 乙素 苷 元 结 构式 ＯＨ
Ｈ
计灯 盏花 乙素苷元 对 照品 ：昆 明制 药集 团股份 有限
公 司药物 研 究 院制 备 ，含量 ９． ％． 尿 嘧 啶 对 照 ９５ 品 ：Ｆ ＭＣ公 司 ，含量 ９． ％． 甲醇 、四氢 呋 喃 为 ９５ 色谱 纯 ，磷 酸 、磷 酸氢 二钠 、氯化 钠 、正 辛醇 为分
丁香苦苷解离常数及油水分配系数的测定_曹颖
[收稿日期]20110716(007[基金项目]哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目(2007RFXXS059[第一作者]曹颖,硕士,助理实验师,从事药物制剂研究与分析工作,Tel :022-********,E-mail :five43@tom．com[通讯作者]*李永吉,博士,教授,博士研究生导师,从事中药新药、剂型改革研究及经皮给药制剂的研究,Tel :0451-********,E-mail :liyongji@public．hr．hl．cn丁香苦苷解离常数及油水分配系数的测定曹颖1,2,李永吉2*,吕邵娃2,王艳宏2(1.天津中医药大学实验教学部,天津300193; 2.黑龙江中医药大学药学院,哈尔滨150040[摘要]目的:测定丁香苦苷解离常数和油水分配系数。
方法:采用紫外分光光度法,测得丁香苦苷解离常数,应用HPLC 测定丁香苦苷的表观正辛醇/水分配系数。
结果:丁香苦苷解离常数pKa 为9.6284ʃ0.14。
油水分配系数P app 为1.2069(log P app =0.0817,当pH 4.5,5.5,6.5,7.5,8.5时,油水分配系数P app 分别为1.3881,1.3529,1.3358,1.3704,1.1333,表明丁香苦苷的表观正辛醇/缓冲溶液分配系数受缓冲溶液pH 的影响不大。
结论:在生理pH 下,丁香苦苷大部分以未解离的分子状态存在,但丁香苦苷水溶性好,脂溶性较差,可能会对丁香苦苷的吸收分布及设计药物剂型产生影响。
[关键词]丁香苦苷;解离常数;油水分配系数;药物吸收分布[中图分类号]R284.1[文献标识码]A[文章编号]1005-9903(201123-0065-04Determination of Dissociation Constants and Apparent Oil /WaterPartition Coefficient of SyringopicrosideCAO Ying 1,2,LI Yong-ji 2*,LV Shao-wa 2,WANG Yan-hong 2(1.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine ,Tianjin 300193,China ;2.Heilongjiang University of Chinese Medicine ,Harbin 150040,China[Abstract ]Objective :To determine the dissociation constants of syringopicroside and its partitioncoefficients for the n-octanol-water /buffer solution systems．Method :To determine the dissociation constants of syringopicroside were determined by UV-visible spectrophotometer ,at the same time ,the partition coefficients in the n-octanol-water/buffer solution systems of syringopicroside were determined by shaking flask method．Result :The pka value is 9.6284ʃ0.14,and the n-octanol /water partition coefficient P app is 1.2069(log P app =0.0817．When the pH is 4.5,5.5,6.5,7.5,8.5,the n-octanol /water partition coefficient P app is 1.3881,1.3529,1.3358,1.3704,1.1333respectively ,indicating that there is little effect on the n-octanol /water partition coefficient of syringopicroside in different pH values buffer solution．Conclusion :In the physiological environment ,drugs most existed as most molecular state．The syringopicroside has good hydrophilicity ,but poor liposolubility ,it maybe affect the absorption ,distribution of syringopicroside and the design of dosage forms．[Key words ]syringopicroside ;dissociation constants ;n-octanol /water partition coefficient紫丁香叶中的丁香苦苷具有抗菌、抗病毒、抗炎、保肝等作用[1-3],其他一些以丁香叶为原料生产的药物制剂在治疗痢疾、急性黄疸性肝炎上均有较好的疗效,但口服剂量较大、生物利用度不高[4],已成为影响其发挥药效的主要因素。
高效液相色谱法测定知母配方颗粒中芒果苷的含量
高效液相色谱法测定知母配方颗粒中芒果苷的含量
高效液相色谱法测定知母配方颗粒中芒果苷的含量
彭颖
【期刊名称】《中国实用医药》
【年(卷),期】2007(002)022
【摘要】目的研究知母配方颗粒中芒果苷的含量测定方法.方法采用高效液相色谱法.色谱柱:Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-1%冰醋酸(20:80,V/V);流速:1.0 ml/min;检测波长:320 nm;柱温:30℃,进样量:10μl.结果芒果苷在30～150 ng范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为99.1%(RSD=1.63%,n=5).结论本法简便、准确、可行,灵敏度高、重现性好,可用于知母配方颗粒中芒果苷的含量测定.
【总页数】1页(63)
【关键词】知母配方颗粒;芒果苷;高效液相色谱法
【作者】彭颖
【作者单位】523900,广东省东莞市太平人民医院药剂科
【正文语种】中文
【中图分类】R2
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定芦荟配方颗粒中芦荟苷的含量[J], 张特利; 李军山; 陈钟; 李振江
2.用高效液相色谱法测定银翘散配方颗粒中连翘酯苷A的含量[J], 王婵; 韦刃; 黄晓玉; 林广; 黄志权; 周永强
3.高效液相色谱法测定黄芩配方颗粒中黄芩苷的含量 [J], 支敏倩。
抗病毒颗粒中芒果苷的高效液相色谱法的含量测定
【中图分类号】 R 917
【文献标志码】 A 【文章编号】 1672-787（8 2020）02-165-003
Determination of Mangiferin in Kangbingdu Granular by HPLC
WANG Hai-bo，LI Yang
He'nan Institute for Food and Drug Control, Zhengzhou 450018, China
供试品含芒果苷量 (w/mg) 0.260 7 0.262 8 0.266 3 0.268 5 0.264 6 0.265 3 0.269 2 0.263 6 0.266 4
加入芒果苷量 (w/mg) 0.208 2 0.208 ห้องสมุดไป่ตู้ 0.208 2 0.260 2 0.260 2 0.260 2 0.312 2 0.312 2 0.312 2
ABSTRACT Objective：To establish a method for the determination of mangiferin in Kangbingdu Granular by HPLC. Methods：The Phenomenex Lunar C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) was used, the column temperature was 30 ℃, acetonitrile-0.2% aceoic acid glacial was used as mobile phase, the detection wavelength was 258 nm, and the flow rate was 1.0 mL/min. HPLC method was used to determine the content of mangiferin in Kangbingdu Granular. Results：The concentration of mangiferin was well linear in the range of 2.50~50.08 μg/mL, and the regression equation A= 42 817 ρ－45 898(r=0.999 5) was obtained. The average recovery was 99.71%, RSD was 1.45%(n=9), and the average mangiferin content was 0.258 5 mg/g. Conolusion：The method is simple, accurate and reproducible. It can be used for the determination of the content of mangiferin in Kangbingdu Granular. KEY WORDS Kangbingdu granular; mangiferin; determination; HPLC
一测多评法同时测定芒果止咳片中6种药效成分的含量
一测多评法同时测定芒果止咳片中6种药效成分的含量作者：梁梓敏覃洁萍郭海姣罗宇东胡华来源：《中国药房》2020年第08期摘要目的：建立同时测定芒果止咳片中没食子酸、原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷和异槲皮苷含量的方法。
方法：采用高效液相色谱法。
色谱柱为Phenomenex GeminiC18，流动相为0.1%磷酸水溶液-乙腈（梯度洗脱），流速为1.0 mL/min，检测波长为258 nm，柱温为30 ℃，进样量为5 μL。
以没食子酸为内参物，计算原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷和异槲皮苷的相对校正因子，并将一测多评法与外标法测定结果进行比较。
结果：没食子酸、原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷和异槲皮苷检测质量浓度的线性范围分别为45.75～1 830 μg/mL（r=0.999 9）、2.525～101.0 μg/mL（r=0.999 9）、65.33～2 613μg/mL（r=0.999 6）、9.058～362.3 μg/mL（r=0.999 9）、3.885～155.4 μg/mL（r=0.999 9）、1.870～74.8 μg/mL（r=0.999 9）;定量限分別为0.571、0.643、1.053、0.854、0.830、1.500μg/mL，检测限分别为0.171、0.193、0.316、0.256、0.249、0.450 μg/mL;精密度、稳定性、重复性试验RSD均小于3%;加样回收率分别为 98.8%～101.9%（RSD=1.3%，n=6）、94.3%～101.5%（RSD=3.3%，n=6）、97.9%～100.5%（RSD=0.9%，n=6）、98.2%～101.6%（RSD=1.2%，n=6）、102.3%～106.1%%（RSD=1.3%，n=6）、 96.6%～99.3%（RSD=1.0%，n=6）。
以没食子酸为内参物，原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷、异槲皮苷的相对校正因子分别为0.568 3、0.500 3、0.687 6、0.939 1、0.826 3;一测多评法测得原儿茶酸等5种成分的含量范围分别为0.197～0.440、3.263～11.250、0.201～1.196、0.168～0.381、0.115～0.293 mg/片，外标法测得的含量范围分别为0.198～0.441、3.329～11.570、0.206～1.194、0.171～0.380、0.119～0.298 mg/片，两种方法测量结果的相对误差为-3.80%～0.74%，且差异无统计学意义（P>0.05）。
芒果中不同成分的提取技术研究进展
doi:10.16736/41-1434/ts.2021.10.007
芒果中不同成分的提取技术研究进展
Research Progress on Extraction Technology of Different Components in Mango
赵仕花等人采用纤维素酶酶解法协助水提取法
提取了芒果果皮中的多糖，并研究了其体外抗氧化活 性。在最佳条件下芒果果皮多糖得率为 5.17%，芒果 果皮多糖具有较强的体外抗氧活性，对 DPPH·和·OH 清 除 的 半 数 抑 制 浓 度 IC50 分 别 为 1.385 mg·mL-1、 3.612 mg·mL-1，但与维生素 C 比较，抗氧化活性较弱 [4]。
Industry Review 行业综述
芒果多糖粗品。采用苯酚 - 硫酸法测其多糖含量为 （46.3±1.75）mg·g-1。多糖是由鼠李糖、半乳糖和葡 萄糖等单糖组成，其含量分别为（6.3±1.40）mg·g-1、 （11.9±1.76）mg·g-1 和（13.8±1.52）mg·g-1[3]。
孙 延 芳 等 人 采 用 热 水 浸 提、 乙 醇 沉 淀 法 得 到
作者简介：孙俊（1983—），男，硕士，工程师，研究方向为天然产物与深加工。 18 / 现代食品 XIANDAISHIPIN
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赵东兴等人研究了芒果叶中芒果苷的提取条
件，采用单因素法和正交设计对提取条件进行优化， 结 果 表 明 超 声 萃 取 法 可 以 缩 短 提 取 时 间， 提 高 了 效 率，与浸渍提取法相比，超声萃取提取芒果苷量增加 21.60% ～ 26.69%[6]。
超声辅助提取芒果核中芒果苷的工艺优化
朱芙蓉，王霜秀，毛德源，等. 超声辅助提取芒果核中芒果苷的工艺优化[J]. 食品工业科技，2024，45（2）：161−167. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2023020273ZHU Furong, WANG Shuangxiu, MAO Deyuan, et al. Optimization of Ultrasound Assisted Extraction of Mangiferin in Mango (Mangifera indica L.) Kernel[J]. Science and Technology of Food Industry, 2024, 45(2): 161−167. (in Chinese with English abstract).doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023020273· 工艺技术 ·超声辅助提取芒果核中芒果苷的工艺优化朱芙蓉*，王霜秀，毛德源，韦 澳，刘韦清（南宁学院食品与质量工程学院，广西南宁 541699）摘 要：本研究旨在探究超声辅助提取芒果核中芒果苷的工艺。
通过单因素实验和Box-Behnken 响应面设计，探究料液比、乙醇浓度、超声温度、超声时间和超声功率5个因素对芒果苷提取率的影响。
结果显示，最佳提取参数为乙醇浓度为75%，料液比为1:50 g/mL ，超声温度为45 ℃，超声时间为40 min 和超声功率为288 W 。
在此最优工艺条件下，芒果苷得率为4.78%，预测值为4.75%。
该研究可为芒果核中芒果苷的提取提供理论参考依据。
关键词：超声辅助，芒果核，芒果苷，提取工艺优化本文网刊:中图分类号：TS209 文献标识码： B 文章编号：1002−0306（2024）02−0161−07DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2023020273Optimization of Ultrasound Assisted Extraction of Mangiferin inMango (Mangifera indica L.) KernelZHU Furong *，WANG Shuangxiu ，MAO Deyuan ，WEI Ao ，LIU Weiqing（College of Food and Quality Engineering, Nanning University, Nanning 541699, China ）Abstract ：This study aimed to explore the process of ultrasound-assisted extraction of mangiferin from mango kernels.Through single factor experiments and Box-Behnken response surface design, investigated the effects of five factors:Material liquid ratio, ethanol concentration, ultrasound temperature, ultrasound time, and ultrasound power on the extraction rate of mangiferin. The results showed that the optimal extraction parameters were as follows: Ethanol concentration of 75%, liquid-to-solid ratio of 1:50 g/mL, ultrasonic temperature of 45 ℃, ultrasonic time of 40 min, and ultrasonic power of 288 W. Under this optimal process condition, the yield of mangiferin was 4.78%, with a predicted value of 4.75%. This study can provide a theoretical reference for the extraction of mangiferin from mango kernels.Key words ：ultrasound assisted ；mango kernel ；mangiferin ；optimization of extraction technology芒果（Mangifera indica L .）是漆树科的“水果之王”，在热带地区广受欢迎，由于其特有的营养、经济、药用和植物化学特性，被广泛生产。
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芒果苷的离解常数和脂水分配系数的测定方法研究 董知旭;张伟 【摘 要】目的 建立芒果苷离解常数和脂水分配系数的测定方法.方法 采用紫外分光光度法和pH-HPLC色谱法测定了芒果苷离解常数,并对两种方法进行比较;用摇瓶法—高效液相色谱(HPLC)法测定了芒果苷在正辛醇-不同pH缓冲溶液中的脂水分配系数.结果 通过高效液相色谱(HPLC)法和紫外分光光度法对芒果苷离解常数进行测定方法研究.紫外分光光度法中,测定了芒果苷的离解常数为6.52,在高效液相色谱法中,测定了芒果苷的离解常数为6.1.采用摇瓶法—HPLC法测定了芒果苷在正辛醇-不同pH缓冲溶液中的脂水分配系数.当pH2.0～5.0时,芒果苷在正辛醇—缓冲溶液中的脂水分配系数受溶液的pH值影响不大,当pH6.70～8.18时,芒果苷的脂水分配系数大幅度减小,说明在酸性条件下,芒果苷的脂溶性增加,水溶性下降,而在碱性条件下,芒果苷的脂溶性下降,水溶性增加.结论 用所建立的方法分别测定了芒果苷的离解常数和脂水分配系数,HPLC法准确度高,重现性好,方便简单,分析快速、准确.
【期刊名称】《云南中医学院学报》 【年(卷),期】2016(039)005 【总页数】7页(P18-24) 【关键词】芒果苷;紫外分光光度法;高效液相色谱法;解离常数;脂水分配系数 【作 者】董知旭;张伟 【作者单位】昆药集团股份有限公司药物研究院,云南昆明650100;昆药集团股份有限公司药物研究院,云南昆明650100 【正文语种】中 文 【中图分类】R284.1 芒果苷（Mangiferin）又称芒果素，莞知母宁，为淡灰黄色针状结晶（50%乙醇。熔点267～272℃（分解）。旋光度+43.3°（c=0.9，吡啶），32°（乙醇）。略溶于甲醇、乙醇、水、可溶于热稀甲醇、热稀乙醇，不溶于非极性溶剂。是一种氧杂蒽酮类化合物，化学名为氧杂蒽酮C2葡萄糖苷，系统名为22C2β2D2吡喃葡萄糖21，3，6，72四羟基氧杂蒽酮[1]。存在于漆树科植物芒果（Mangifera indica L.）的果实、叶、树皮，百合科植物知母（Anemarrhena asphodeloides Bge.）的根茎、地上部分，鸢尾科植物射干[Belamcanda chinensis（L.）DC.]的花、叶等植物中。本品具有平喘止咳祛痰作用免疫[1-2]、抗病毒作用[3-4]、抗炎、镇痛作用、保肝利胆作用、抗脂质过氧化作用、抗肿瘤作用[5-7]、对中枢神经系统作用、对心血管系统的作用、抗菌作用[8]等。最新药理研究表明，芒果苷具有显著的降血清尿酸作用[9]。 化合物脂水分配系数和离解常数是药物在生产、制剂、分析、储存及药物在体内吸收、分布、代谢等研究中的一个重要理化参数.且与药物溶解度和pH值有关的理化常数，药物离解常数和脂水分配系数的测定可为在分子水平上研究药物的吸收与受体结合提供重要的信息，同时也在药物新剂型和新配方的研制中具有重要的指导意义。离解常数的测定有电位滴定法[10]、分光光度法[11]、薄层色谱pH法[12]、反高效液相色谱法.本文针对芒果苷基本理化性质，拟采用UV和pH-HPLC法测定离解常数，并对这2种方法进行比较.采用摇瓶法—HPLC法测定了芒果苷在正辛醇-不同pH缓冲溶液中的脂水分配系数。 芒果苷（20090723由昆明制药药物研究院提供）、芒果苷对照品（98.4%111607-201503中国食品药品检定研究院）、正辛醇（分析纯20010205中国五联化工厂上海）甲醇（分析纯20100627云南杨林工业开发区汕滇药业有限公司）、磷酸（分析纯20091220云南杨林工业开发区汕滇药业有限公司）、磷酸氢二钾（分析纯20020815汕头市达濠精细化学品有限公司）、氨水（分析纯20080716汕头市达濠精细化学品有限公司）、PE20 pH计（美国梅特勒公司）、UV-2450紫外分光光度计（日本岛津公司）、美国Agilent 1200高效液相色谱仪（包括G1322A真空脱气机、G1311A四元梯度泵、G1329A自动进样器、G1316A柱温箱、G1315D二极管阵列检测器、Chemstation化学工作）、Agilent ZORBAX SB-C10 5μm 4.6×150mm色谱柱。 紫外分光光度法测离解常数的原理[13]：其原理基于在强酸性溶液中全部为分子型［HA］，而在强碱性溶液中全部解离为离子型［A-］，因而可在强酸强碱性缓冲液中强酸在某波长λ时的完全分子型和完全离子型的吸收度AM和AI，在其他适宜pH缓冲液中，在相同波长处测出相同浓度弱酸溶液的吸收度A值为分子型和离子型的混合吸收度，即： A=AI′+AM′ 由下式即可求出解离常数： pH高效液相色谱法测离解常数的原理[14]：有机酸或生物碱经同一色谱柱中洗脱，但每次洗脱时，所使用流动相都用不同pH值缓冲溶液调配。这样即可得到一系列tR值，用尿嘧啶测定死时间t0，再根据物质保留因子κ值与tR值的关系求出κ值。然后用κ值和对应的pH（pOH）值作图，就可得到该物质的κ-pH（pOH）曲线。依此曲线采用恰当的数理模型拟合，并求出该曲线的拐点，即二阶导数为0所对应pH，就可求得该物质的离解常数。 分配系数与保留时间的关系： 分配系数与保留体积关系： 容量因子与保留时间关系： 振荡—高效液相色谱法测脂水分配系数原理[15]：正辛醇极性与多数有机体液的极性相差不大，其溶解度参数与生物膜的溶解度参数一致，可以选用正辛醇作为模拟生物膜相的有机溶剂，故本实验中采用正辛醇—水体系。正辛醇-水体系是研究药物在角质层-水中分配的良好模型。药物表观脂水分配系数（P）的数学表达式为： CO为油相中药物的浓度；CW为水相中药物的浓度。实验中，因为水相和油相的体积相等，故在药物分配达到平衡时CO=CW初-CW，即油相中药物的浓度等于初始水相中药物的浓度与水相中药物的浓度测定后的差值。 本实验用公式（2）计算芒果苷的脂水分配系数[16]。 而水相的药物浓度CW又可以根据外标法求出，公式如下： 3.1 离解常数测定 3.1.1 紫外分光光度法测芒果苷的pKa 3.1.1.1 缓冲液的配制 缓冲溶液用0.1 mol/L的磷酸氢二钾和0.1%磷酸混合配制[17]成pH为1.53、2.19、3.09、4.67、5.62、6.38、7.28、8.01、9.29的缓冲液，用氨水-氯化铵配制pH为10.34的缓冲液。 3.1.1.2 供试液的制备 称取芒果苷10mg用甲醇溶于100mL容量瓶中并用甲醇超声10min溶解然后定容制成储备液。把25mL容量瓶编号1～10，用移液管分别从储备液中移取5mL到各个容量瓶中，分别用不同的缓冲液超声5min溶解然后室温条件下定容，得到不同pH的芒果苷供试液。 3.1.1.3 供试液的测定 分别将不同PH的芒果苷溶液置1cm吸收池中，以对应的pH缓冲液做空白，在190～400波长范围内扫描，得到不同pH值的芒果苷溶液的紫外吸收光谱（图1）。 3.1.1.4 数据计算 根据芒果苷的分子型和离子型的紫外吸收光谱不同（因为随着pH值的改变溶液中分子型、离子型药物浓度的比值发生改变，所以产生不同的紫外吸收光谱）。从图1判断出芒果苷分子型和离子型时的吸光度，然后把所得数据代入上面公式（2）求出pKa的值。 3.1.1.5 数据处理与结果 （1）从图2可以看出pH为1.53和pH为2.19时芒果苷溶液的紫外吸收光谱重合，所以此时为光度为AI′，当pH为8.01～9.29时，光谱几乎重合，所以选pH为9.29时应该都为分子型此时的A为AM′。 （2）为了使测定结果更准确，可在多个波长进行检测。从图中可以看出，在258nm、320nm波长处，吸收度随pH值有明显变化，所以选以上两个波长为测定波长。 在选定波长处，分别测定以上溶液的吸光度，结果见表1。 选取波长为258nm、320nm的吸光度按（2）式计算pKa值，结果见表2.不同PH值溶液在不同波长处测得pKa值应该是一致的，其差异是由测量误差引起的。 （3）利用Origin75作图软件做图法求芒果苷的pKa值，如图2。 利用Sigmoidal数理模型拟合曲线方程Y=A2+（A1-A2）/（1+exp（（x-x0）/dx）进行二阶求导，其中A1、A2、x0都在图中可知。x0就为所求的值。 即可求出258nm和320nm时的值. λ=320nm时，pKa1=6.491相关系数：R2= 0.99613；λ=258nm时pKa2=6.546相关系数：R2= 0.9901，所以所得的pKa值比较可靠。即求平均值： 比较计算得的pKa值与作图得到的pKa值相差不大。 3.1.2 pH-高效液相色谱法测芒果苷的pKa 3.1.2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C10 5μm 4.6× 150mm；流动相：甲醇—不同pH值的缓冲溶液（23：77）；检测波长：258nm；流速：1.0ml/min；柱温：30°C；色谱时间：20min。 3.1.2.2 样品处理 称取尿嘧啶对照品25mg用80%甲醇溶解并在25mL容量超声10min，然后定容作为储备液，又称取5mg芒果苷用一定量的80%甲醇溶解转入50ml容量瓶中，然后用2mL移液管移取尿嘧啶对照品溶液2mL加入50mL容量瓶并用80%甲醇定容，制备成芒果苷尿嘧啶待测液。 3.1.2.3 不同pH条件流动相的制备 试验设计缓冲溶液的pH范围为2.00～9.00，此范围的缓冲溶液用0.1mol/L的磷酸氢二钾和0.1%磷酸混合配制，其中加入一定量的氯化钠作为离子强度调节剂（氯化钠的加入量为0.01mol/L），然后用0.45μm滤膜过滤。然后配制成pH为2.44、3.21、4.47、5.33、6.25、6.70、7.25、8.18的缓冲液。每一种缓冲溶液的pH值用酸度计检测，准确度为±0.02pH单位。 3.1.2.4 pH-HPLC测定过程 按照规定的色谱条件，精密吸取芒果苷尿嘧啶待测液5μL注入液相色谱仪用不同pH值缓冲液-甲醇（77：23）作为流动相测定，即得芒果苷的保留时间即tR，和尿嘧啶的保留时间即死时间t0（如图3），从而根据公式（4）求得容量因子κ，随得到κ-pH图，再利用数理模型用Origin75作图软件作图法求得芒果苷的离解常数，结果见表3，图4。 3.1.2.5 实验结果与数据处理 下面图4是利用Origin75作图软件根据Sigmoidal数理模型[18]拟合的κ-pH图。 结合以上图表根据Origin75作图[软件做出的Sigmoidal数理模型拟合曲线方程，再利用拟合曲线方程进行二阶求导，可求出pKa。所求就为图5中的X0.即