液相色谱使用中样品预处理注意的几个环节
液相色谱仪操作注意事项
液相色谱仪操作注意事项液相色谱仪操作注意事项流动相：1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质；3、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C （进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相；A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶，用于存放水相流动相。
样品：1、采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体颗粒；2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液；3.手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时，进样体积应为定量管的3～5倍；色谱柱：1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH 值范围、流动相类型等；2、使用符合要求的流动相；3、使用保护柱；4、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。
5、色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密封闭两端保存；6、不要高压冲洗柱子；7、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；使用过程中注意轻拿轻放。
操作过程：1、开机操作：（1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server（一般启动时已打开）；（2）、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开On line）；（3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准；（4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；（5）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。
液相色谱教程相色谱实验操作
液相色谱教程相色谱实验操作液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于化学、生物、制药、环境科学和食品科学等领域的分析技术。
本文将介绍液相色谱实验的基本操作步骤，以帮助读者更好地了解和掌握该技术。
实验前准备：1.准备好实验所需的HPLC仪器和耗材，包括色谱柱、固定相、溶剂、样品和标准品等。
2.进行前的实验室准备，确保实验台面整洁，试剂摆放井然有序。
步骤一：样品准备1.样品制备：准备好需要分析的样品，确保样品质量和净度，并按照实验要求进行前处理。
2.样品溶解：将样品溶解于适当的溶剂中，以获得所需浓度的溶液，并用过滤器除去杂质。
步骤二：色谱柱选择和准备1. 色谱柱选择：根据实验要求和分析目的选择合适的色谱柱材质和类型。
常见的色谱柱材质包括C18、C8、Silica gel等。
2.色谱柱准备：根据色谱柱的要求进行装柱，包括柱后法、柱前法和封口法等。
步骤三：溶剂体系选择和准备1.溶剂体系选择：根据样品的特性和所需的分离效果选择合适的溶剂体系，包括单溶剂和混合溶剂等。
2.溶剂准备：准备好所需的溶剂，并使用高纯度的有机溶剂，并用过滤器或其他方法除去杂质。
步骤四：HPLC仪器设置和优化1.仪器设置：按照实验要求设置好HPLC仪器的参数，如波长、流速、柱温等。
2.优化条件：对于分离效果不佳的样品，可逐渐调整实验条件，并记录下各条件下的结果，以找到最佳分离条件。
步骤五：实验操作1.样品进样：将样品溶液注射到色谱柱中。
通常采用自动进样器或手动进样器进行操作。
2.色谱柱运行：打开HPLC仪器，开始柱运行。
随着溶液通过色谱柱的过程，样品中的组分将逐渐分离并通过检测器。
3.数据收集与分析：利用检测器检测样品组分，并采集色谱图谱和峰面积等数据。
根据实验目的可以选择不同的检测器，如紫外检测器、荧光检测器和质谱检测器等。
步骤六：结果解释和报告1.观察色谱图谱：根据检测器得到的色谱图谱，观察各峰的形状、峰高、峰面积等，并根据相关标准进行数据分析。
液相色谱送样要求
液相色谱送样要求液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的高效分离和分析技术，广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。
正确的送样操作对于获得准确的分析结果至关重要。
以下是液相色谱送样的要求。
1.样品准备样品准备是送样的关键步骤之一、在送样前，必须确保样品完整无杂质。
应根据分析要求选择合适的样品制备方法，如提取、净化等。
同时，应使用合适的容器储存样品，避免样品受到污染。
2.样品标记在进行液相色谱分析时，样品标记是非常重要的。
每个样品都应有唯一的标识符，如样品编号、日期、样品名称等。
这样可以避免样品混淆和错误。
3.样品溶解与稀释在液相色谱分析中，样品通常需要在溶剂中进行溶解和稀释。
选择合适的溶剂是非常重要的，应选择与样品性质相容的溶剂，并通过实验确定最佳的溶剂浓度。
注意避免使用含有杂质的溶剂，以免影响分析结果。
4.样品过滤在送样前，对于含有悬浮物或颗粒物的样品，应进行过滤处理。
选择合适的滤膜或过滤器，将悬浮物或颗粒物去除。
过滤后的样品应迅速进行进一步的操作，以防止样品的污染。
5.送样量控制液相色谱分析的结果受到送样量的影响，因此应控制好送样量。
一般来说，送样量应在仪器规定的范围内，并严格按照分析方法要求进行操作。
过高或过低的送样量都可能导致结果的不准确。
6.送样顺序送样时应根据样品的特性和分析要求确定送样顺序。
有些样品可能需要特殊的预处理或实验条件，如温度、紧急性等。
送样时要避免不必要的延迟，尽量减少样品在等待分析之前的降解、变化或污染。
7.样品保存对于不能立即进行分析的样品，应按照要求进行适当的保存。
不同样品有不同的保存要求，如冷藏、冷冻、避光等。
保存期间应注意防止样品的污染或损坏。
最后，参与液相色谱送样的人员应接受相关的培训，了解分析方法的要求，并遵循实验室的操作规程。
只有保证送样操作的正确性，才能得到准确的分析结果。
高效液相色谱法操作注意事项[1]
![高效液相色谱法操作注意事项[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/2a0ca534657d27284b73f242336c1eb91a3733f5.png)
高效液相色谱法操作注意事项[1]高效液相色谱法操作注意事项（草案）1 实验前准备事项1.1 对照品的配制1.1.1 配制方法取干燥情况下的对照品（注意是否吸潮），每次称取量不得少于5mg，置一定容量量瓶中，加入少量溶剂，超声溶解冷却后再定容、混匀（高浓度）。
再用移液管吸取1~2ml至先配制成高浓度的对照品，一定容量量瓶中，加入溶剂定容、混匀，即得（低浓度）。
配置后的对照品均需用封口膜封好。
1.1.2 配制浓度严格按照标准配制对照品浓度（低浓度），不可超过或低于一倍。
1.1.3所需玻璃仪器和容器所需玻璃仪器和容器，尽量选用棕色容量瓶进行配制。
每次临用前需要用纯水清洗干净后，再用无水乙醇冲洗三次，阴（烤）干、冷却后方可使用。
1.1.4标签配制好的对照品标签上应注明：品名、批号、取样量、稀释倍数（浓度）、配制日期。
1.1.5 干燥器干燥器中的干燥剂每月至少处理一次。
1.2 供试品的制备1.2.1 取样方法成品：取10袋装量差异项下的样品，按照相关品种标准含量测定项下有关要求，精密称取两份，进行平行实验。
药材：取样袋中药材全部打粉至规定目数（一般为3～4号筛），按照05年版中国药典相关品种含量测定项下有关要求，精密称取两份，进行平行实验。
1.2.2称样要求用万分之一天平称取，使用中注意天平稳定。
1.2.3量取要求均用移液管量取或刻度量管。
1.2.4 所需玻璃仪器和容器所需玻璃仪器和容器，每次临用前需要用纯水清洗干净后，再用无水乙醇冲洗三次，阴（烤）干、冷却后方可使用。
2 实验中注意事项2.1 实验仪器的准备2.1.1 仪器安装后是否存在漏液现象？压力是否稳定？柱子是否安反？2.1.2 检查完毕后，打开电脑、N2000工作站电源开关后，再打开泵电源开关、控制面板上泵开关。
先用色谱甲醇冲洗柱子，等待机器平稳后，再打开检测器电源开关、控制面板上检测器开关。
30分钟后方可进针做实验。
2.1.3 打开电脑桌面上的N2000在线工作站，选择通道，设定保存路径、波长（注意控制面板上同样需要设置）等实验信息。
HPLC操作注意事项
HPLC（高效液相色谱）操作注意事项
换上新的流动相：停流——换上新流动相——阀门转到冲洗端——4mL/min流速，变化率10min（实现流速前再确认一下是否转到冲洗端）——冲洗20min——停流——阀门转到过柱端——设定流速（总流量为1mL/min），变化率为5min。
缓冲盐会在高有机相浓度的溶液中析出，导致管路堵塞，损伤仪器。
因此使用缓冲盐时有机溶液的含量应小于80%。
三．柱压上限
建立的液相方法其柱压上限应小于3800psi
四．流动相的使用
任何流动相必须用0.22um滤膜抽滤两遍。
其pH值及流动相的选择必须在色谱柱允许范围内。
五．样品的处理
样品进样前必须过0.22um的滤膜。
其pH值，分子量大小，在流动相中的溶解性及纯度必须符合要求。
六.色谱柱的清洗
色谱柱使用前以及使用后都必须用10%甲醇水，流速1mL/min冲洗45min。
七.仪器关机步骤
进样完以后，关闭检测器及柱温箱——将流动相换为甲醇和水——用10%甲醇水，流速1mL/min清洗色谱柱45min——用100%甲醇（HILIC 极性柱用90%甲醇水），流速1mL/min保存色谱柱45min——停流——拆下色谱柱——关闭脱气机，二元溶剂管理器及电脑。
液相色谱仪使用注意事项
液相色谱仪使用注意事项1岛津液相色谱仪使用注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。
清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。
更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
1、样品的前处理：a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项高效液相色谱仪（HPLC）是一种常见的分析仪器，用于分离、检测和定量化合物。
在使用和维护HPLC时，需要注意以下几点：1. 样品处理在样品处理过程中，必须避免样品受到污染，否则会影响分析的准确性。
因此，在样品的制备和处理过程中应该使用高质量的试剂和纯水，并避免使用有机溶剂和其他可能对分析产生干扰的物质。
2. 色谱柱选择选择合适的色谱柱是非常重要的，因为不同的色谱柱会对分析结果产生影响。
在选择色谱柱时，应该考虑要分析的样品和分离的目标化合物，以及柱的反相、离子交换、凝胶过滤等不同类型。
3. 溶液配制HPLC中的溶液应该严格按照配方进行配制，以确保分析结果的准确性。
溶液中可能存在的离子、杂质或气泡都会对流速、峰形和灵敏度产生影响。
4. 色谱条件在进行分析时，需要根据样品和柱的特性，选择适当的流速、洗脱剂和温度等条件。
这些条件对分析结果的准确性和分离效率都有很大的影响。
5. 维护和保养为了保证仪器的长期稳定和良好工作状态，需要定期进行维护和保养。
维护包括冷却系统、压力检测、检测器等组件的检查和清洗。
保养包括柱的定期调整和更换、溶液的更换等。
在使用和维护HPLC时，需要严格按照实验室规程操作，注意安全和环保，并做好记录和统计分析工作。
只有保证仪器操作正确、保养到位，才能获得准确、可重复的分析结果。
6. 检测器选择HPLC检测器的选择对分析结果的准确性和可重复性起着至关重要的作用。
常用的检测器包括紫外线（UV）检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
根据需要分析的化合物的性质进行选择。
7. 校正和标定在使用HPLC进行分析之前，必须进行校正和标定，以确保分析结果的准确性。
校正过程中通常涉及标准曲线的制备、内标物的选择和添加等。
8. 数据照实记录HPLC分析结果的准确性需要依赖于实验数据的准确记录。
在使用过程中应保持谨慎和可重复性，制定实验方案，不断记录实验数据，并评估结果的准确性。
实验室高效液相色谱安全使用及注意事项
实验室高效液相色谱安全使用及注意事项高效液相色谱是一种非常常用的分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
在实验室中使用高效液相色谱需要注意一些安全问题，本文将介绍高效液相色谱的使用方法以及注意事项，以帮助实验室工作者更好地使用高效液相色谱。
一、高效液相色谱的使用方法1. 实验前准备在进行高效液相色谱实验前，需要进行一些准备工作。
首先，要检查设备是否正常工作，包括系统的泵、检测器、进样器、柱等是否工作正常。
其次，要检查试剂的浓度和纯度是否符合要求。
最后，要准备好实验所需的溶液和样品，并按照实验要求进行处理和标记。
2. 操作步骤高效液相色谱的操作步骤包括：样品进样、柱温控制、流动相控制、检测器设置等。
具体步骤如下：（1）样品进样将样品注入进样器中，注意不要超出进样器的容积范围。
（2）柱温控制根据实验要求设置柱温，通常情况下柱温为室温或略高于室温。
（3）流动相控制设置合适的流动相组合和流速，以达到最佳分离效果。
（4）检测器设置根据实验要求选择合适的检测器，比如紫外检测器、荧光检测器等，并设置检测器的参数，如波长、灵敏度等。
3. 实验后处理实验结束后，需要对设备和试剂进行清洗和储存。
首先，要将进样器和柱进行清洗，以避免残留样品和流动相对下一次实验的影响。
其次，要将检测器进行清洗和维护，以保证检测器的正常工作。
最后，要妥善储存试剂和设备，以便下一次实验使用。
二、高效液相色谱的注意事项1. 实验室安全在使用高效液相色谱时，需要注意实验室的安全问题。
首先，要穿戴好实验室所需的防护设备，如实验服、手套、护目镜等。
其次，要保持实验室的整洁和干净，避免化学品的混合和交叉污染。
最后，要遵守实验室的规定和操作程序，以确保实验室的安全。
2. 操作注意事项在进行高效液相色谱实验时，需要注意以下几个方面：（1）样品的选择和准备在选择样品时，要注意样品的性质和纯度，以避免对实验结果的影响。
同时，要进行适当的样品处理和标记，以确保样品的准确性和可靠性。
hplc 到样品测定之间的注意事项
HPLC（高效液相色谱法）是一种高效的分离和检测技术，被广泛应用于化学、生物、环境等领域的分析和检测工作中。
在进行HPLC样品测定之前，需要注意一些重要的事项，以确保测试结果的准确性和可靠性。
下面将针对HPLC到样品测定之间的注意事项进行详细介绍。
一、准备工作1. 样品准备：在进行HPLC样品测定之前，首先需要对样品进行充分的准备工作。
这包括样品的提取、预处理、稀释等步骤，确保样品的纯度和稳定性。
2. 良好的实验室条件：HPLC样品测定需要在干净整洁、通风良好的实验室条件下进行，避免外部环境因素对样品的影响。
3. 仪器准备：在进行HPLC样品测定之前，需要对HPLC仪器进行充分的检查和准备工作，确保仪器的正常运行和稳定性。
包括检查柱温、流速、检测器灵敏度等参数。
二、方法选择1. 合适的色谱柱选择：根据样品的特性和分析的目的，选择合适的色谱柱进行样品分离和检测。
不同的样品可能需要不同类型的色谱柱，如C18、Phenyl、Cyano等。
2. 流动相的选择：根据样品的特性和分析的需要，选择合适的流动相进行样品分离和检测。
流动相的选择包括溶剂的种类、浓度、pH值等参数。
3. 柱温的控制：对于热敏感的样品，需要控制好色谱柱的温度，以避免样品在分离过程中出现降解或变性现象。
三、样品处理1. 样品的过滤：在进行HPLC样品测定之前，需要对样品进行过滤处理，以去除杂质和颗粒物，避免对色谱柱和检测器的污染。
2. 样品的稀释：有些样品可能含有高浓度的成分，需要进行适当的稀释处理，以符合HPLC检测的范围和灵敏度。
3. 样品的保护：一些特殊的样品需要在分析过程中进行保护处理，以避免其在分离和检测过程中发生变化或降解。
四、检测过程1. 流速的控制：在进行HPLC样品测定时，需要控制好流速的参数，以确保色谱分离的效果和检测结果的准确性。
2. 检测器的选择：根据样品的特性和分析的需要，选择合适的检测器进行检测。
常用的检测器包括紫外检测器、荧光检测器、光电导检测器等。
HPLC色谱样品预处理
毛细管固相微萃取 毛细管固相微萃取是将气体或液体样品通过 内壁键合了萃取剂的石英毛细管，使欲分离组分 从萃取剂中解析下来，进行分析。 毛细管固相微萃取可获得比使用固相微萃取 时萃取体积大十倍以上的萃取体积，使萃取的富 集倍数大大提高，另外可以加速萃取平衡，可比 SPME萃取头的使用寿命更长10倍以上。
SPE-HPLC在线联用
五 发展方向
样品的微量化 在线联用 经济快速
自动化
减少有机溶剂的使用
环境友好
谢谢！！！
液相微萃取 1996年首次提出液相微萃取第一个模型即Drop in Drop模型。该技术是在液-液萃取(LLE)的基础上发 展起来的，主要是基于相平衡的原理，该技术集采 样、萃取和浓缩于一体，所需有机溶剂只需要几或 几十微升，是一项环境友好的新型样品前处理技术， 其特别适合于环境样品中痕量、超痕量污染物的测 定。 如今发展出了单滴溶剂微萃、取直接液相微萃 取(DI．LPME)、顶空液相微萃取(HS．LPME)、中空 纤维液相微萃取(HF．LPME)和分散液相微萃取 (DLLME)。
HPLC色谱样品预处理
一、概述
HPLC已成为当今分析化学领域应用最广泛 的一种分析测试手段，应用范围涉及医药、环 保、生命科学、石油化工等几乎所有基础和研 究领域。由于HPLC常常用于各种复杂的基体以 及低含量组分的分析，因此，对样品进行前处 理变得非常重要。
二、样品处理的目的
将待测物质有效地从样品基质中释放出来 出去杂质，纯化样品，使得色谱柱的分辨率和 使用寿命得到保护 富集浓缩样品或进行衍生化
用于液相色谱分析的样品溶液必须均匀而无 颗粒，有颗粒会损坏进样器并堵塞柱头。 HPLC常用的滤膜孔径为滤膜的成分为纤维素、 聚四氟乙烯或聚酰胺，聚酰胺应用最广，它是 亲水材料，适合于水溶液的滤过，也不被HPLC 常用溶剂所腐蚀，不含添加剂，不会将杂质带 进样品中。
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液相色谱使用中样品预处理注意的几个环节高效液相色谱具有分离效率高、分析速度快和应用范围广等特点,特别适合于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分离分析。
目前高效液相色谱已成为化学、生化、医学、工业、农业、环保、商检和法检等学科领域中重要的分离技术,是分析化学家和生物化学家手中用于解决他们面临的各种实际分析和分离课题必不可少的工具之一。
虽然在检测分析中使用了昂贵的、性能优越的高档精密仪器,但是由于在样品的前处理,标准溶液的制备,样品液的测定,分析中的污染,仪器常见故障等等问题上的不注意,而引起大的系统误差,使整个测定分析失败。
现就液相色谱分析的应用中样品预处理注意的几个环节,作简要分析,以达到更好的检测效果。
1 样品预处理方法样品预处理应包括进样前的一切操作。
除了称重、溶解、稀释等步骤外,样品需要: ①过滤; ②萃取; ③衍生化(柱前衍生) ; ④液相色谱(低压柱层析) 。
这些操作可以是手工进行或实行自动化操作。
样品预处理的目的是除去干扰物、增加检测器灵敏度(富集) 、保护色谱柱等。
样品预处理同时也是为了避免色谱分离故障,其中样品萃取是关键的一步,要从大量的干扰物中萃取出微量组分难度极大。
有些样品经预处理后还不能作进样分析,需进行衍生化处理,使一些无紫外吸收或无荧光的组分,经过衍生化后能用紫外和荧光检测器检测,这样既提高了灵敏度,又改善了分离度(质量变化) 。
样品预处理的同时也会带来一些问题,如样品损失、样品被污染、衍生化反映不完全或多种反应物生成等。
衍生反应常会影响试验的精确度,或者在整个样品预处理过程中带来误差。
用于液相色谱分析的样品溶液必须均匀而无颗粒,有颗粒会损坏进样器并阻塞柱头。
处理好的样品在准备上柱前应对准光线摇动,检查样品溶液中有无颗粒。
只要看到颗粒、混浊或乳化,就应过滤一下,过滤膜要能截留住015μm 以上的颗粒,样品过滤的过程中可能引起:样品被污染,因过滤吸附降低样品组分的含量,样品溶剂挥发引起误差。
萃取的目的是从共溶的样品介质中分离出被分析的组分,或者减少损坏柱的物质(如蛋白质等)和干扰物。
一般采用有机溶剂萃取,要求萃取用的溶剂毒性低、挥发性好、杂质少、对待测样品有良好的溶解度且又与水不相混溶。
常用的有乙醚、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者两种以上的混合溶剂。
萃取后一般可直接进样,有时需要浓缩或吹干浓缩,再用定体积的液体或流动相溶解进样。
这样增加了样品浓度,提高了灵敏度,同时避免了溶剂峰对样品峰的干扰。
在萃取是要考虑样品分子的溶解能力。
除了脂溶性和水溶性组分外,还有用脂溶性的组分制成水溶性的盐。
萃取方法如下:1.1 水溶性样品(1) 酸性组分及生成的盐萃取方法:有机溶剂萃取杂质后调成酸性,再加有机溶剂萃取或进样,或在N2 流下吹干,用适当的溶剂解后进样。
(2) 碱性组分及生成的盐萃取方法:有机溶剂萃取杂质后调成碱性,再加有机溶剂萃取或进样,或在N2 流下吹干,用适当的溶剂溶解后进样。
(3) 中性组分萃取方法:有机溶剂萃取杂质后,直接用反相色谱法分析。
1.2 脂溶性组分萃取方法:有机溶剂萃取或进样,或在N2 流下吹干,用适当的溶剂溶解后进样。
2 分析中的污染一般检测的环境、容器、试剂都是影响测定结果的因素。
2.1 环境污染仪器室的有害气体、气溶液、灰尘等等都能造成污染,影响检测结果,这种污染很难校正。
因此,仪器室与其他实验室应隔离,保持清洁,仪器室内应安装空调,注意防潮、防腐、防震、空气相对湿度应小于70 %为宜。
2.2 容器实验室常用的器皿有玻璃类、瓷类、石英类、塑料类等,在进行分析时,应按照待则样品的要求来选则器皿,不管使用哪种器皿,容器的洗条清洁都是很重要的,也是取得好的检测结果的基本保证。
2.3 试剂在液相色谱分析中,所选用的试剂必须是色谱纯、优级纯或分析纯,如果用含量有杂质的试剂,则会出现杂峰而影响测定结果。
3 标准溶液的配置在配置标准溶液时,先要配置现定浓度的内标溶液,在标准溶液和样品溶液中最好使用同一批次配制的内标溶液以减少误差。
(1) 配制标准溶液的物质应当是色谱纯的、性质稳定。
(2) 常用的标准溶液应存放在棕色溶液瓶中低温保存。
(3) 在配制维生素类标准品时,要放置在棕色容量瓶中或避光放置以免分解。
4 样品预处理过程中的主要故障与解决办法(1) 色谱图中出现无关的峰,原因有可能是样品过滤器带来污染,解决方法如下:①将过滤器浸泡在样品溶剂中并进样试验; ②改变过滤器类型; ③采用交替清洗技术。
(2) 一些或全部化合物的峰比预期的小,尤其是低浓度的样品,原因可能是样品过滤器表面吸附下降,解决方法如下:①改变过滤器类型; ②严格按相同条件处理所用样品; ③采用交替清洗技术。
(3) 回收率太低或差,原因可能是萃取不完全,解决方法如下:①增加萃取时间,使用热溶剂; ②修改清洗方法。
(4) 色谱峰变宽,柱寿命缩短,原因可能是样品带来的干扰与污染,应改进清洗方法。
(5) 精度差,原因可能是回收不完全,解决方法如下:①改进或替换衍生化、分离、萃取或其他条件; ②用自动化处理装置提高精度。
总之,对分析仪器来说,避免故障的最主要的做法是正确的操作和调节,切忌盲目操作,对核心部位如离子室、微电流放大器等减少震动和碰撞,保证绝缘,并减少各种系统误差要注意以上要点,但还要注意日常的仪器保养,色谱柱子的维护,仪器室保持清洁,这样才能使液相色谱处于最佳工作状态,在分析中发挥其重要的作用。
液相色谱流动相的性质要求一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
选好填料（固定相）后，强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少，相应的容量因子k降低；而较弱的溶剂使溶质在填料表面吸附增加，相应的容量因子k升高。
因此，k值是流动相组成的函数。
塔板数N一般与流动相的粘度成反比。
所以选择流动相时应考虑以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。
低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。
碱性流动相不能用于硅胶柱系统。
酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。
②纯度。
色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。
③必须与检测器匹配。
使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。
当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。
④粘度要低（应<2cp）。
高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。
最好选择沸点在100℃以下的流动相。
⑤对样品的溶解度要适宜。
如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。
⑥样品易于回收。
应选用挥发性溶剂。
高效液相色谱柱的使用与维护高效液相色谱(HPLC)是20世纪60年代后期发展起来的分离分析技术，是现代分离测定的重要手段。
问世以来，因其具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度好、能分析高沸点但不能气化的热不稳定生理活性物质的特点而被广泛应用于生物化学、药物及临床分析。
高效液相色谱是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂，缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入待测样品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后依次进入检测器，色谱信号由记录仪、积分仪或色谱工作站记录。
色谱柱是高效液相色谱的心脏，在高效液相色谱仪的使用中，保持色谱柱的柱效、容量和渗透粉性，延长柱子的使用寿命非常重要。
因此对高效液相色谱柱的维护是关键。
1 色谱柱的构造色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。
柱管多用不锈钢制成，压力不高于70㎏/㎝2时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。
为提高柱效，减小管壁效应，不锈钢柱内壁多经过抛光。
还有使用熔融硅或玻璃衬里的，用于细管柱。
色谱柱两端的柱接头内装有筛板，是烧结不锈钢或钦合金，孔径0.2-20 μm(5-10μm)，取决于填料粒度，目的是防止填料漏出。
色谱柱按用途可分为分析型和制备型两类，尺寸规格也不同:(I)常规分析柱(常量柱)，内径2-5mm(常用4.6mm，国内有4mm和5mm )，柱长10-30cm ;(2)窄径柱，又称细管径柱、半微柱，内径1 -2mm ,柱长10-20cm;(3)毛细管柱(又称微柱)，内径0.2-0.5mm;(4)半制备柱，内径>5mm;(5)实验室制备柱，内径20-40rnm，柱长10-30cm;(6)生产制备柱内径可达几十厘米。
柱内径一般是根据柱长、填料粒径和折合流速来确定，目的是为了避免管壁效应。
2色谱柱的使用和维护在日常分离分析工作中，色谱柱的正确使用和维护十分重要，色谱柱使用是否得当，直接影响色谱柱的寿命，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。
在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。
(1)柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。
必须防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。
(2)如果仪器用来做常规分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱，这样有助于延长柱子的寿命。
(3)避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
(4)应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。
(5)如使用柱温控制装置时，应注意在通人流动相后才能升温。
(6)一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。
否则反冲会迅速降低柱效。
(7)选择使用适宜的流动相，以避免固定相被破坏。
有时可以在进样器前面连接一个预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
液相色谱柱再生1、色谱柱的使用说明：（1）色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。
（2）流动相：流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
如果将所配得流动相再经过0.45μm 的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDS C18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。