微生物设计性实验报告

微生物设计性实验报告

项目组长——————

成员

实验项目名称——《淀粉酶（α-淀粉酶）菌株的分离纯化》

指导老师——杨书香

系别班级——生技（2）班

实验时间——

淀粉酶（α-淀粉酶）菌株的分离纯化

1.实验目的：

1.1掌握从环境中采集样品并从中分离纯化某种微生物的完整操作步骤。

1.2巩固以前所学的微生物学实验技术。

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2.实验原理：

2.1α-淀粉酶是一种液化型淀粉酶，它的产生菌芽孢杆菌，广泛分布于自然界，尤其是在含有淀粉类物质的土壤等样品中。

2.2从自然界筛选菌种的具体做法，大致可以分成以下四个步骤：采样、富集培养、初步筛选、分离纯化。

2.2.1采样

在土壤中几乎各种微生物都可以找到，土壤可说是微生物的大本营。食堂旁边土壤、厨房土壤、面粉加工厂和菜园土壤中淀粉的分解菌较多。因此选择从食堂旁边菜地采集土壤样品。

2.2.2富集培养及初步筛选

在淀粉作为唯一碳源的选择培养基中，只有能产生胞外淀粉酶利用淀粉的菌体才能成为优势菌种。在淀粉选择培养基中，产胞外淀粉酶的菌种可以得到富集及分离。

2.2.3分离纯化

通过平板划线分离法可以将上述初筛出来的菌种得以分离纯化。

3.实验材料

3.1土壤样品

从食堂旁边菜地采集的土壤样品。

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3.2培养基

淀粉琼脂培养基

3.3溶液和试剂

牛肉膏，蛋白胨，NaCl，可溶性淀粉，1mol/L NaoH，1mol/L HCl，碘液

3.4仪器和设备

培养皿35套，试管6支，移液管6支，三角瓶4个（其中一个装有玻璃珠），烧杯，玻璃棒，天平，牛角匙，高压蒸汽锅，报纸，接种环，酒精灯等。

4实验步骤

4.1培养基的制备

称量1.0 g可溶性淀粉，5.0 g蛋白胨，2.5 g牛肉膏，2.5 g NaCl至烧杯中，加少量蒸馏水加热溶解，然后称量8 g琼脂加入烧杯中熔化，补蒸馏水至500 ml，再用1mol/L NaOH，1mol/L HCl调节PH在7.2-7.4只间。将上述培养基分装到三个250 ml的三角瓶中。待灭菌。

4.2无菌水制备

分别取9 ml蒸馏水加入6支试管中，并将试管编号1，2，3，4，5，6用报纸包扎捆绑。取90 ml蒸馏水加入装有玻璃珠的250 ml三角瓶中，包扎捆绑。试管与三角瓶均待灭菌。

4.3器皿准备

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取6支吸管，35个培养皿分别用报纸包扎，待灭菌。

4.4灭菌

将上述带灭菌的物品置于高压蒸汽灭菌锅中，0.1Mpa121℃条件下灭菌20min。

4.5采集土样

在食堂旁边菜园采集土样，用无菌报纸包好。

4.6菌悬液的制备

称取10 g土壤样品加入装有90 ml无菌水的三角瓶中震荡，然后静置2min。

4.7梯度稀释

在酒精灯旁用无菌吸管从菌悬液中取1 ml上清液加入1号试管中，震荡摇匀。再另取一支无菌吸管从1号试管中吸取1 ml菌悬液加入到2号试管中，震荡摇匀。再另取一支无菌吸管按上述操作依次操作剩下的4管，得到10-1-10-6六个稀释度的菌悬液。

4.8稀释混合倒平板法分离产淀粉酶细菌

在酒精灯旁用移液枪取1 ml稀释度为10-4菌悬液滴入无菌平皿，然后加入适量的经过融化的培养基，摇匀冷却，标记后倒置于37℃恒温培养箱中培养24h。依次对10-5,，10-6两稀释度的菌悬液进行上述操作。此三个平板记为第一组平板。

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再将10-4，10-5，10-6三个稀释度的试管放入沸水浴3min。分别用移液枪从三支试管取沸水浴过的菌悬液1 ml注入无菌培养皿，然后加入适量的经过融化的培养基，摇匀冷却标记后，倒置于37℃恒温培养箱中培养24h。此三个平板记为第二组平板。

4.9平板划线法分离纯化产淀粉酶菌株

4.9.1碘液检测产淀粉酶菌苔

4.9.1.1取第一组平板，分别一次性滴入适量的碘液，置于桌面摇匀。观察水解圈的大小。

4.9.1.2取第二组平板，找到与第一组平板水解圈最大的菌苔相似的菌苔，用接种环在酒精灯旁平板划线于无菌培养基平皿中。倒置于37℃恒温培养箱中培养24h。

5实验结果（待测）

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