PH0213 离心柱型全血基因组DNA提取试剂盒实验操作手册
高纯度质粒大量快速提取试剂盒(离心柱型)操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://HighPure Plasmid Maxi Kit高纯度质粒大量快速提取试剂盒目录号：PL12试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存10次(PL1201)RNaseA（10mg/ml）－20℃750µl溶液P1 4℃77 ml溶液P2 室温77 ml溶液N3 室温77 ml去蛋白液PE 室温63 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温25 ml X 2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温20 ml吸附柱DC 室温10个收集管（50ml）室温10个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后（终浓度100μg/ml）置于4℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNase A即可。
2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌株如JM系列、HB101也可以轻松去除。
有效防止了质粒被核酸酶降解。
3.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
快速、方便，从150-300ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.2-1.5mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80 %左右。
大量全血基因组DNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书
大量全血基因组DNA提取试剂盒目录号：DN04DN0401 16次×10mlDN0402 32次×10mlDN0403 96次×10ml适用范围：适用于快速提取各种动物全血基因组DNA试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存16次×10ml 32次×10ml 96次×10ml10x红细胞裂解液室温50 ml 100 ml 300 ml细胞核裂解液室温180 ml 180×2 ml 250 m l×4蛋白沉淀液室温55 ml 110 ml 330 mlDNA溶解液室温15 ml 30 ml 90 ml 本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。
储存事项:1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。
首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞，细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA 溶解液。
产品特点：1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全。
2.不需要使用有毒的苯酚等试剂。
3.快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。
4.结果稳定，产量高（典型的产量10ml全血可提取出150-500µg），OD260/OD280典型的比值达 1.7～1.9，长度可达50kb-150kb，可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。
全血提取总DNA实验步骤
全血提取总DNA实验步骤1. 取4 ml全血离心弃血清（已处理），将血球转移至15 ml离心管中，加入Buffer FG1至9 ml（血球过多可12 ml），上下颠倒混匀5次，2,500×g离心15分钟，缓慢弃上清。
2. 把离心管倒置于干净的吸水纸上，放置2分钟。
注意：在极少情况下沉淀可能会松弛，所以要缓慢倒掉上清。
将离心管倒置在吸水纸上，可以减少管壁上清的回流。
3. 按照附表配制缓冲液FG2与Proteinase K的混合液（比例100:1）。
注意：此混合液最好现用现配，并在配好后1h之内用完。
4. 加入1.5 ml Buffer FG2/Proteinase K混合液，立即混匀至溶液无团块。
注意：1）如果有多个样品同时操作，加入Buffer FG2/Proteinase K混合液后立即涡旋震荡，不要等所有样品都加完后再震荡。
2）通常涡旋震荡3-4次，每次5秒可以使沉淀充分悬浮，如果涡旋震荡后发现沉淀中含胶状物质可以再加入300 μlBufferFG2/Proteinase K混合液，再次涡旋混匀。
5. 65℃水浴锅中孵育5分钟，其间颠倒混匀数次。
注意：如果样品颜色从红色变成橄榄绿说明蛋白消化完全。
水浴时间不能过长，防止DNA降解。
6. 加入1.5 ml异丙醇，上下颠倒彻底混匀直至看到DNA，用玻璃吸管吸出沉淀置于1.5 ml 的EP管中。
注意：与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要。
如果样品中白细胞含量少，可能看不到DNA，则至少上下颠倒离心管20次确保沉淀完全。
7. 加入1.5 ml 70%乙醇，涡旋震荡5秒，2,500×g离心5分钟，弃上清。
注意：如果沉淀贴壁不牢，可以适当延长离心时间或增大离心力。
8. 把离心管倒置于干净的吸水纸上5分钟，确保沉淀在管中，空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净（至少5分钟）。
注意：1）在极少情况下沉淀可能会松弛，所以要缓慢倒掉上清。
全血 DNA 抽提(QIAGEN,德国)
全血DNA 抽提(QIAGEN，德国)
采用血液基因组DNA 提取试剂盒按说明书进行操作，简述如下：
(1)先将无水乙醇加到漂洗液PW 和缓冲液GD 中，并将血液标本置于室温下平衡至标本完全溶解。
(2)取经RNaseA 酶处理过的离心管，按顺序编号后加入500μl 混匀的标本，随后
加入细胞裂解液CL lml，充分混匀后10000rpm 离心1min。
弃去上清，留下细胞
核沉淀。
(3)加入200μ1 缓冲液GS，振荡混匀。
随后加入20μ1 蛋白酶K 溶液，充分混匀。
加缓冲液GB 200μ1，充分混匀后，56℃水浴10min 至溶液变清亮。
取出后，加
无水乙醇200μl，混匀。
(4)上部物质转移到吸附柱内，12000rpm 离心30s。
弃去液体，并将吸附柱CB3 套在收集管上。
(5)加入500 μl 缓冲液GD，12000rpm 离心30s，弃去液体，将吸附柱CB3 放入收集管中。
(6)加入700μl 漂洗液PW，12000rpm 离心30s，弃去液体，将吸附柱CB3 放入收集管中。
(7)加入500μl 漂洗液PW，12000rpm 离心30s，弃去液体。
12000rpm 继续离心2min，弃去液体。
并把吸附柱置于室温数分钟，彻底晾干吸附材料中的漂洗液。
(8)将吸附柱套上一个干净的离心管中。
向吸附膜中间位置悬空滴加80μl 洗脱缓冲液TB，室温放置5min，12000rpm 离心2min。
将溶液收集到离心管中并标号，置于-20℃冰箱中冻存备用。
质粒大量提取试剂盒(离心柱型)操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://Plasmid Maxi Kit质粒大量快速提取试剂盒目录号：PL11试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存10次(PL1101)RNaseA（10mg/ml）－20℃750µl溶液P1 4℃77 ml溶液P2 室温77 ml溶液N3 室温77 ml漂洗液WB 室温25 ml X 2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温20 ml吸附柱DC 室温10个收集管（50ml）室温10个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后（终浓度100μg/ml）置于4℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNase A即可。
2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
快速、方便，从150-300ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.2-1.5mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80 %左右。
3.获得的质粒产量高、超螺旋比例高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
细胞组织基因组DNA提取试剂盒离心柱型
细胞/组织基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）GK4002-50GK4002-100一.试剂盒组成*Proteinase K使用前，每管加入1 ml 无菌水溶解，混匀，分装后-20℃保存。
(a)ACL Solution低温时可能出现结晶，请于37℃温育溶解摇匀后使用，不会影响产率。
(b)首次使用前，必须在AW1溶液瓶中按表示量加入无水乙醇，充分混匀后使用。
每次使用后将瓶盖盖紧，以保持中的AW1乙醇含量。
如果您发现AW1由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入0.6倍体积的无水乙醇。
(c) 首次使用前，必须在AW2瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用。
每次使用后将瓶盖盖紧，以保持AW2中的乙醇含量。
如果您发现AW2由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。
(d) AE Buffer为10 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA pH 8.5。
TE(pH 8.0)或者水（pH>7.0）均可以使用，但是DNA的洗脱效率通常要低20%左右。
二. 制品说明GenClean柱的内装有一层惰性大分子材料，它可以选择性吸附核酸物质，但不吸附蛋白质、多糖和其它非核酸类物质。
通过ACL Solution 裂解释放出基因组DNA，然后通过GenClean柱来吸附基因组DNA，经简单的洗涤步骤除去非特异性结合的杂质, 然后用AE Buffer、TE或者水洗脱。
三．主要用途从各种动物组织、动物细胞以及啮齿类动物(如鼠等)尾巴等材料中小量提取基因组DNA。
四．主要特点1. 适用范围广，适用于各种动物组织材料基因组DNA的抽提。
2. 无须酚和氯仿抽提，无须乙醇沉淀。
3. DNA纯度好，得率高，无蛋白质和RNA污染。
五. 操作步骤：样品预处理：·动物组织：1. 切取5～20mg的动物组织材料，在液氮中将组织研磨成粉末，并转移至1.5ml的离心管中。
血液基因组DNA提取标准操作规程
1目的：规范血液基因组DNA提取的操作。
2适用范围：血液基因组DNA提取。
3职责：技术员4内容/程序：4.1仪器及耗材4.1.1 1.5ml、2ml灭菌离心管4.1.21ml、200ul灭菌枪头4.1.3Karroten TM Mini Column柱4.1.4手动移液器4.1.5金属浴4.1.6高速离心机4.2试剂4.2.1Buffer KB平衡液、Buffer KBL14.2.2Buffer KW4.2.370% 乙醇4.2.4KE4.3提取前准备4.3.1详细阅读该SOP熟悉各步骤，并准备好所有的试剂盒组分及温浴条件4.3.2KBL1在低温时可能产生混浊或沉淀，在37-65℃温浴片刻即可4.3.3Buffer KW第一次使用前请按瓶上标签加入50ml70%乙醇，每次使用后，请立即拧紧盖子4.4操作步骤4.4.1取一Karroten TM Mini Column柱装在一个2ml收集管上（已备）。
加入300ulBuffer KB平衡液至柱子内，室温13000rpm离心1min，使平衡液完全流过柱子。
弃收集管中的滤液，将空柱套回收集管内；注意：柱子不平衡，将导致DNA产率的减少。
4.4.2按200ul全血（适合各种抗凝剂，EDTA较好）加入1000ulKBL1的比例加入KBL1，混匀，静置3min。
如果样品是血清等无细胞体液。
应按比例增加体积。
注意：1）.静止时间超过3min不影响DNA抽提2）.取样最佳体积因物种不同有所差异。
人血以100-300ul为最佳，小鼠以50-100ul为最佳。
且当全血体积小于200ul时，KBL1体积不能小于1000ul 4.4.3将混合液转移至已平衡的吸附柱内，室温13000rpm离心30s，使裂解液完全流过柱子。
保留柱，弃去收集管中的过滤液，将柱重新放入收集管；注意：如混合液体积过大，可分数次上柱，每次上样量不要超过700ul。
4.4.4加入700ul Buffer KW，室温13000rpm离心30s，弃去收集管中的过滤液，保留柱。
PH0210 细菌基因组DNA提取试剂盒实验操作手册
保存
本试剂盒在室温（25℃左右）干燥条件下，可保存 1 年；更长时间的保存可置于 2–8℃。2–8℃保存条件下，若溶液产生沉 淀，应在使用前置于 37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。蛋白酶 K、溶菌酶和 RNaseA 收到后-20℃保存。
试剂组分
Component 缓冲液 GA 缓冲液 GB 去蛋白液 GD(浓缩液) 漂洗液 GW(浓缩液) 洗脱缓冲液 EB 蛋白酶 K（20mg/ml） 溶菌酶（5mg/ml） RNase A（10mg/ml） 吸附柱 CG 收集管（2 ml） 说明书 50T 15 ml 15 ml 18 ml 25 ml 15 ml 1 ml 1ml 1ml 50 个 50 个 1份 100T 30 ml 30 ml 36ml 25 ml 15ml 2×1 ml 2×1 ml 1 ml 100 个 100 个 1份 Storage 室温 室温 室温 室温 室温 -20℃ -20℃ -20℃ 室温 室温 ——
DNA 浓度及纯度检测： 基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫
外分光光度计检测浓度与纯度。 可配制 0.8-1.0％琼脂糖凝胶， 使用λ/HindIII 判断基因组的大小， 完整的基因组大小应在 23kb 以上。使用分光光度计检测时， OD260/OD280 比值应为 1.7–1.9 之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗 脱，比值可能偏低，但并不表明 DNA 纯度不高。
操作步骤： 如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 1. 取细菌培养液 1–2 ml，10,000 g 离心 1 分钟，尽量吸净上清；向细菌沉淀中加入 180μl EB，旋涡混匀后加入 18μl 溶
微量临床样品基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
微量临床样品基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN25目录编号包装单位DN2501 50次适用范围：适合于从微量血液、法医材料、干血点、药签等微量样品中分离纯化基因组DNA。
试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次裂解液ML 室温11 ml结合液CB 室温15 ml抑制物去除液IR 室温25 ml漂洗液WB 室温15ml第一次使用前按说明加指定量乙醇Poly Carrier -20℃200 μl洗脱缓冲液EB 室温10 ml蛋白酶K粉（可选）20mg/ml-20℃20 mg吸附柱AC和收集管室温50套本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果储存事项：1.结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入1毫升灭菌水溶解。
因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分装冻存，－20℃保存。
3.避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
仔细阅读注意事项4。
4.产品介绍：本试剂盒采用特制的进口DNA吸附柱和独特的缓冲液系统，特别适合于从微量血液、法医材料、干血点、药签、口香糖、尿液等微量样品中分离纯化基因组DNA。
各种来源样品裂解消化处理后DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了Poly Carrier可以从体系中轻松捕获微量核酸），再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组DNA 从硅基质膜上洗脱。
纯化后的DNA无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR分析。
产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.节省时间，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。
3.配备了Poly Carrier用于充分收集特别微量DNA。
小量血液基因组DNA直接提取试剂盒离心柱型
小量血液基因组DNA直接提取试剂盒（离心柱型）GK4001-50 50 PrepsGK4001-100 100 PrepsGK4001-200 200 Preps一. 试剂盒组成Components GK4001-5050 PrepsGK104001-100100 PrepsGK4001-200200 PrepsGenClean Column 2.0-ml Collection TubeProteinase K(a)Boiled RNase ALysis SolutionAW1 Solution(b)AW2 Solution(c)AE Buffer(d)TE-50(f)Protocol50501.2 ml250 μl15 ml15.5ml12ml10 ml15ml11001002X1.2 ml500 μl30ml31 ml12ml20 ml15ml12002004X1.2ml2X500μl60ml62 ml24ml40 ml25m1(a)收到Proteinase K，分装-20℃保存。
(b)首次使用前，必须在AW1溶液瓶中按表示量加入无水乙醇，充分混匀后使用。
每次使用后将瓶盖盖紧，以保持中的AW1乙醇含量。
如果您发现AW1由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入0.6倍体积的无水乙醇。
(c) 首次使用前，必须在AW2瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用。
每次使用后将瓶盖盖紧，以保持AW2中的乙醇含量。
如果您发现AW2由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。
(d) AE Buffer为10 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA pH 8.5。
TE(pH 8.0)或者水（pH>7.0）均可以使用，但是DNA的洗脱效率通常要低20%左右。
(f) 本试剂盒中的TE-50是10 mM Tris-HCl， 50 mM EDTA pH 8.0。