高效液相色谱法测定决明子中的蒽醌

高效液相色谱法测定决明子中的蒽醌
目的测定决明子中5种蒽醌类成分的含量。

方法采纳高效液相色谱法。

色谱柱：Shim-pack CLC-ODS C18柱；流淌相：甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱；流速：1 ml/min；：440 nm。

结果该方法精确牢靠，重现性好。

结论该方法可以测定决明子中5种蒽醌类成分的含量。

决明子为豆科植物决明Cassia obtusifolia L.或小决明Cassia tora L.的干燥成熟种子。

性味甘、苦、咸、微寒，归肝、大肠经。

具有清肝明目、润肠通便之功效，为临床常用中药［1］。

其主要化学成分为蒽醌类化合物。

本试验采纳HPLC法同时测定了决明子中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量，为决明子中有效物质讨论奠定了基础。

1、仪器与材料
LC-l0ATvp高效液相色谱仪(日本岛津公司)，AEG-45SM电子天平(十万分之一)，大黄素(批号0756?200009)，大黄酚(批号110796?202313)，大黄素甲醚(批号0758?9803)(均购自中国药品生物制品检定所)，决明子(重庆合川GAP种植基地，由重庆市中药讨论院生药室供应并鉴定)，水为重蒸水，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2、方法与结果
2.1 对比品溶液的制备分别精密称取芦荟大黄素0.53 mg，大黄
酸0.58 mg，大黄素0.55 mg，大黄酚0.53 mg，大黄素甲醚0.58 mg，加甲醇超声溶解，分别定容至5 ml，作为对比品溶液。

精密吸
取上述5种对比品溶液各2.0 ml，置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶
解定容至刻度，即得混合对比品溶液，其浓度分别为芦荟大黄素
0.021 2 mg/ml，大黄酸0.023 2 mg/ml，大黄素0.022 mg/ml，大
黄酚0.021 2 mg/ml，大黄素甲醚0.023 2 mg/ml。

2.2 供试品溶液的制备取决明子药材粉末(过4号筛)约1g，精密
称定，置索氏提取器中，加80%乙醇100 ml回流提取至无色，合并
提取液，定容至100 ml，精密吸取25 ml提取液，经减压回收后，
残渣加浓度为1 mol/L盐酸溶液40 ml回流水解3 h，然后用120
ml氯仿分4次回流萃取，30 ml/次，合并氯仿萃取液并加适量蒸馏
水洗至中性，回收氯仿。

残渣甲醇仿溶解并转移至10 ml量瓶中，
加甲醇至刻度，摇匀，即得［2，3］。

2.3 色谱条件色谱柱为Shim-pack CLC-ODS C18(6.0 mm 150 mm，5 um)；流淌相为甲醇－0.1%磷酸水溶液梯度洗脱；流速 1 ml/min；柱温25℃；检测波长440 nm.
2.4 标准曲线的绘制分别精密吸取混合对比品溶液8 ，10，12 ，14 ，16 l进样，测定基线构成之面积称峰面积。

A＝h＝2.507h＝
1.064 Wh/2h峰面积，绘制标准曲线，计算混合对比品中各对比品
的回归方程及线性范围，结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的回归方程分别为：Y = 814521X -20 442，Y = 1 110 506X - 7 296，Y=1431 202X 4 274，Y =1 739 861X - 24 381，Y = 707 106X - 26 453，其线性范围分别为：0.170～0.339，
0.186～0.371，0.176～0.352，0.170～0.339，0.186～0.371 g。

2.5 精密度试验精密吸取混合对比品溶液10 l，进样，测定各峰
峰面积，连续测定5次，求得各峰面积值的相对标准偏差(RSD)分别为：芦荟大黄素0.7%，大黄酸1.8%，大黄素0.6%，大黄酚1.1%，
大黄素甲醚1.4%。

结果表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验
2.6.1 对比品溶液稳定性试验精密吸取混合对比品溶液10 l，进样，分别于0，2，4，8，12，24 h后重复进样，计算各成分峰面
积值的相对标准偏差(RSD)分别为：芦荟大黄素0.9%，大黄酸0.8%，大黄素0.7%，大黄酚1.2%，大黄素甲醚1.3%。

结果表明混合对比
品溶液在24 h 内基本上是稳定的。

2.6.2 供试品溶液稳定性试验精密吸取供试品溶液10 l，进样，
分别于0，2，4，8，12，24 h后重复上述操作，计算各成分峰面
积值的相对标准偏差(RSD)分别为：芦荟大黄素0.6%，大黄酸0.7%，大黄素1.3%，大黄酚0.6%，大黄素甲醚1.7%。

结果表明供试品溶
液在24 h内基本上是稳定的。

2.7 重现性试验精密称取决明子药材5份，照"2.2'项下供试品
溶液的制备方法制备供试液，精密吸取供试品溶液10 l，进样，测
定各成分峰面积值，计算各成分平均含量及RSD值分别为：芦荟大黄素为0.0084%，RSD为0.8%；大黄酸为0.0079%，RSD为1.1%；大黄素为0.0313％，RSD为1.2%；大黄酚为0.1732%，RSD为0.7%；大黄素甲醚为0.0883%，RSD为1.3%。

结果表明，该方法具有较好的重现性。

2.8 加样回收率试验精密称取决明子药材6份，每份约0.5 g，精密称定，分别精密加入大黄酚对比品(50 g/ml)15 ml。

照"2.2'项下供试品溶液的制备方法制备供试液，精密吸取供试品溶液10 l，进样，测定大黄酚的峰面积。

2.9 样品的含量测定取不同批次决明子药材粉末(过4号筛)各约1g，精密称定。

照"2.2'项下供试品溶液的制备方法制备供试液，精密吸取各供试品溶液10 l，按"2.3'项下色谱条件进样。

3、结论
结果测得，决明子药材中含芦荟大黄素平均为0.0081%，大黄酸平均为0.0079%，大黄素平均为0.0306%，大黄酚平均为0.1760%，大黄素甲醚平均为0.0883%。

本文采纳高效液相色谱法同时测定决明子药材中5种蒽醌类成分的含量，方法简便，分别度好，结果牢靠，可用于掌握决明子药材的质量。