微生物学法检测面包虾的相关致病菌
117.2 速冻调制食品
产品质量监督抽查实施规范CCGF 117.2—2010速冻调制食品2011-02-10 发布 2011-03-01实施国家质量监督检验检疫总局速冻调制食品产品质量监督抽查实施规范1范围本规范适用于速冻调制食品产品质量国家监督抽查，针对特殊情况的专项国家监督抽查、县级以上地方质量技术监督部门组织的地方监督抽查可参照执行。
本规范内容包括产品分类、术语和定义、企业规模划分、检验依据、抽样、检验要求、判定原则及异议处理复检及附则。
注：针对特殊情况的专项国家监督抽查是指应急工作需要而进行的或者由于某种特殊情况（或原因）仅需要对部分项目进行抽样检验的专项监督抽查。
2 产品分类2.1 产品分类及代码产品分类及代码见表1。
表1 产品分类及代码2.2 产品种类速冻调制食品根据加工方式可分为生制品(产品冻结前未经加热或轻度加热尚未至熟的产品)和熟制品(产品冻结前经加热充分至熟的产品),包括花色米面制品、裹面制品、鱼糜制品、乳化肉制品菜肴制品、烧烤（烟熏）制品、火锅汤料制品、汤羹制品八类。
3 术语和定义下列术语和定义适用于本规范。
3.1速冻:使产品迅速通过最大冰结晶区域，当平均温度达到－18℃时，冻结加工方告完成的冻结方法。
3.2 主料：加工食品时使用量较大的一种或多种物料。
3.3速冻调制食品:指以农产品、畜禽产品、水产品等为主要原料，并配以辅料、食品添加剂等，经调味制作加工，采用速冻工艺，在低温状态下（产品中心温度在-18℃以下）贮藏、运输和销售的包装产品。
3.3.1 花色米面制品：指以粮食或粮食制品与农产品、畜禽产品、水产品等为主料，配以植物蛋白、淀粉、调味料等辅料，经加热、调制、冷却后，快速冻结且有合适包装，在低温状态下贮存、销售的食品。
此类包含各种花色的饭类、面类、饼类、粥类、米粉等产品。
3.3.2 裹面制品：指以农产品、畜禽产品、水产品等为主料，经加工制作，或配以调味料等辅料，成型后覆以裹面材料（裹面材料系指面粉、淀粉、脱脂奶粉、蛋等加水混合调制的裹面浆或面包屑的总称），或经油炸、冷却后，快速冻结且有合适包装，在低温状态下贮存、销售的食品。
食品微生物学知到章节答案智慧树2023年黑龙江八一农垦大学
食品微生物学知到章节测试答案智慧树2023年最新黑龙江八一农垦大学第一章测试1.自然发生说的理论认为：（）参考答案:微生物来自无生命的物质2.路易•巴斯德对微生物学的贡献在于他：（）参考答案:否定了自然发生说理论，号召人们关注微生物在日常生活中的重要性3.巴斯德为了否定“自生学”，他在前人工作的基础上，进行了许多试验，其中一个著名的实验无可辩驳地证实了空气中确定含有微生物，它们引起有机质的腐败。
这个实验是：（）参考答案:曲颈瓶试验4.微生物的生物学特性是：（）(1)个体微小、结构简单(2)吸收多，转化快(3)生长旺盛，繁殖快(4)适应性强，易变异参考答案:12345.发现青霉素的科学家是：（）参考答案:Fleming第二章测试1.细菌的繁殖主要靠（）参考答案:二分分裂2.细菌的革兰氏染色的正确程序是（）参考答案:结晶紫→碘液→95%乙醇→番红3.革兰氏阴性细菌细胞壁中的特有成分是（）参考答案:脂多糖4.最主要的产芽胞细菌是（）参考答案:革兰氏阳性杆菌5.细菌的芽胞只能由杆菌产生，细菌一旦形成芽胞后，不具有运动和繁殖的能力。
（）参考答案:错第三章测试1.在酵母菌细胞壁的4种成分中，赋予其机械强度的主要成分是（）。
参考答案:葡聚糖2.适合所有微生物的特殊特征是（）。
参考答案:只有用显微创才能观案到3.预计在（）的土场中能发现真菌。
参考答案:酸性4.在真核微生物，例如（）中常常找不到细胞核。
参考答案:真菌菌丝的顶端细胞5.啤酒醇母菌的生活史属于（）。
参考答案:单双倍体型6.毛霉(Mucor) 的无性繁殖产生（）。
参考答案:内生的孢囊孢子7.下列孢子中属于霉菌有性孢子的是（）。
参考答案:担孢子8.分生孢子头呈扫帚状的霉菌是（）。
参考答案:曲霉9.核糖体是细胞蛋白质合成工厂，原核微生物核糖体沉降系数是70S，真核微生物细胞质中的核糖体沉降系数是80S。
（）参考答案:对10.孢子因为是繁殖细胞，因此没有营养细胞抗热。
两种检测罗氏沼虾诺达病毒方法的比较
25nm 的病毒颗粒可确定为病毒感染。（2）病毒核酸鉴定： 取待检虾苗，提取病毒核酸后电泳，看是否存在诺达病毒 典型核酸。（3）酶联免疫吸附试验测定法（TAS-ELISA）［7］： 利用抗原抗体的相互作用，检测虾苗是否携带病毒。（4） RT-PCR 法：提取待检虾苗中的病毒核酸，采用聚合酶链 式反应扩增病毒核酸进行检测，灵敏度较高。
本文采用了酶联免疫吸附试验测定法和 RT-PCR 法 检测罗氏沼虾诺达病毒，通过检测结果对两种检测方法 进行比较。
1 材料与方法
1.1 罗氏沼虾样品 罗氏沼虾虾苗于 2008 年 4 月～8 月 采集自广东省肇庆市，挑取典型白浊症状虾苗 40 尾，规格 2～4cm，－20℃保存。 1.2 试剂 兔抗病毒血清、鼠抗诺达单克隆抗体、引物、 标准阳性样品、标准阴性样品均由浙江省淡水水产研究 所鱼病研究室钱冬教授惠赠。辣根过氧化酶标记羊抗鼠 抗体、RT-PCR 试剂盒、Trizol RNA 抽提试剂购自宝生物 工程（大连）有限公司。
罗氏沼虾（Macrobrachium Rosenbergii）又名马来西亚 大虾，属节肢动物门，甲壳纲，十足目，长臂虾科，虾科属， 原产东南亚［1］。罗氏沼虾白浊病主要危害育苗期间的虾 苗，虾苗淡化后放养到池塘 3～5 周内较易发生，其发病率 一般为 30%～70%，虾苗感染后死亡率高达 90%，给我国 罗虾养殖业造成巨大的经济损失［2］。
Copyright©博看网 . All Right报，Anhui Agri.Sci.Bull.2014，20（08）
冲 液（PBST，pH7.4）；酶 标 二 抗 ：羊 抗 兔 IgG 的 羊 IgG- 5min，弃上清保留沉淀，干燥。然后加入 20μLDEPC 处理
Jian Hejun et al. （Zhaoqing Aquatic Technologies Popularizing Center，Zhaoqing 526060，China） Abstract:Three antibodies sandwich ELISA，reverse transcriptase polymerase chain reaction were used re⁃ spectively to detect the Nodavirus from the muscle of 20 Macrobrachium Rosenbergii collected from Zhaoq⁃ ing City，Guangdong Province，which have typical symptoms of white meat disease. The positive rate tested from these two methods was the same: 95%. The results of the comparison showed that both methods are effective on laboratory detection of Macrobrachium Rosenbergii Nodavirus. Key words:Macrobrachium Rosenbergii；Nodavirus；Three antibody sandwich ELISA；Reverse transcriptase polymerase chain reaction
食品工厂环境致病菌监控方案要点解析
食品工厂环境致病菌监控方案要点解析随着人民生活水平的日益提高，人们对食品的质量和安全要求也越来越高。
因此，食品工厂在生产过程中必须加强环境监控，尽可能地保障消费者的健康和安全。
一、食品工厂环境致病菌的种类及特点1、大肠杆菌：多数是肠道的正常细菌，但其中也有一些是病原性的。
这种细菌是属于肠道致病菌中比较常见的一种，可以通过饮食中的食物、水和人与人之间的接触传播。
2、金黄色葡萄球菌：这种菌可以生长于人体和动物的皮肤和黏膜，也可以从鲜奶制品、蛋类、肉制品、海鲜等食品中分离出来。
这种菌的生成毒素较易，暴露时间一长便会产生中毒性病状。
3、沙门氏菌：这种菌主要存在于哺乳动物的肠道内，由于存在卫生不良或食品加工环节中存在交叉污染等原因，导致沙门氏菌被带入了食品中。
1、抽样抽样是监控环境致病菌的主要手段之一，管理员要根据生产设备和工作人员等具体情况制定抽样计划，定期进行集中监测。
2、检测检测既可以通过样品的生物学特性进行判断，也可以通过化学手段进行检测。
其中，在样品的异味发现后，应及时进行检测。
3、消除污染要完全消除污染，需要彻底清洗、消毒、杀菌等操作。
对于已经成为污染源的设备、物品等，需要及时消除或更换。
4、加强管理管理方面一定要力求细致。
例如，食品生产过程中工作人员应当配备工作服、手套等消毒防护用具，并定期进行监测。
生产设备也要定期进行维护和消毒，这些都是保障环境卫生的关键。
三、结语总之，食品工厂要想保障产品的安全及质量，必须加强环境监控，并按照监控方案强化污染消除、管理等操作，降低环境致病菌对产品的影响及危害。
同时，也希望各个监管机构加强对食品生产过程、企业及环境卫生等方面的监督检查，为食品安全提供更好的保障。
水产品中致病微生物的快速检测方法
致病微生物可通过水产食品对人产生危害， 表 现 为 胃 肠 炎 、腹 泻 、发 烧 、呕 吐 、败 血 症 、痢 疾 等 主要症状。这些微生物所引起的食源性疾病是影 响食品安全的主要因素之一。目前对水产及其加 工品的微生物检验主要是针对一般的污染 （ 如大 肠杆菌、菌落总数） 和致病菌（ 如沙门氏菌、副溶血 性弧菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃氏菌等） 。常规的 微生物学检验通常以分离培养、生化试验及血清 学试验来进行判断， 具有操作复杂、手工劳动量
在早期， 利用多重嵌套式 ＰＣＲ（ ＡＢＣ－ ＰＣＲ） 扩 增， 从滤食性软体动物中提取的 ＤＮＡ 片段， 通 过 分析ＰＣＲ 扩增后的限制性片段和 ＤＮＡ 序列对 人 类 粪 便 中 的 隐 胞 子 虫 （ Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ） 和 贾 第虫（ Ｇｉａｒｄｉａ ｄｕｏｄｅｎａｌｉｓ） 进行检测和鉴定。Ｃｏｕｓｏ 等［１３］在 贻 贝 的 ＤＮＡ 中 插 入 隐 胞 子 虫 和 贾 第 虫 的 基因片段， 从而建立目标检测基因， 再利用 ＡＢＣ－ ＰＣＲ 方法检测， 结果表明该法非常适用于贝类中 隐胞子虫和贾第虫的检测。
罗氏沼虾常见疾病有哪些？如何防治？
罗氏沼虾常见疾病有哪些？如何防治？罗氏沼虾常见疾病有哪些？罗氏沼虾抗病力较强，病害较少，常见病害主要有黑斑病、虾苗白浊病、红腿病、黑鳃病等。
如何防治？（1）褐斑病（甲壳溃疡病）〔病症〕病虾体表甲壳有斑点状黑褐色的溃疡，溃疡的中部凹陷，边缘呈白色。
褐斑大小不定，在虾体的各个部位都可发生，在头胸部和腹部前三节的背面发生较多。
呈不对称罗列，有时触角、尾扇和其他附肢都有褐斑和烂断，在断痕处也呈黑褐色。
病状严峻时，甲壳下层组织也受到侵蚀，甲壳破坏引起了渗透压的平衡。
新老甲壳发生粘连，造成蜕皮困难而引起死亡。
引起甲壳溃疡症的细菌并不会深化甲壳以下的组织，但能够增强其他细菌侵入的机会。
此外，外壳还影响虾的美观，造成商品价值的降低。
〔病因〕本病的缘由是几种能产生多种脂酶、蛋白酶和几丁质酶的细菌及藻类作用的结果，可能还陪同继发性的细菌及丝状菌的二次感染。
病虾褐斑上检查到的细菌有内壳氏菌、弧菌、假单胞杆菌、产气单胞杆菌、粘细菌等，这些细菌却具有分解几丁质的本事。
但人工感染实验都没有胜利。
因此，推想引起褐斑的其他缘由，捕捞运送过程中碰伤了虾体表面引起或突然转入水质污染的环境，养分不良等，也会引起亲虾外表皮破坏而发病。
〔流行〕此病分布很广，世界各地都有分布。
病源体为甲壳腐蚀细菌。
在海水、淡水、咸水中普遍存在，是活的或死的甲壳动物细菌区系的正常组成部分，细菌的数量随环境而起变化。
在恶劣的环境中培养的虾快速受到感染，感染率达100%。
在转变环境条件、稀疏放养密度、提升水温，并投喂含有抗生素的优质饲料，部分病情严峻的用福尔马林（70毫克/ 千克）浸洗，结果几乎100%解除病危，经过了几次蜕壳，均恢复健康。
〔预防办法〕首先应勿受外伤；其它，要改善饲养条件，平时细心管理，饲料合理调配，提供足够的附着物与保护所。
改善水质条件，普通不倡导使用药物，但细菌性例外。
〔治疗办法〕①土霉素按0.45克混合1千克饲料投喂，连喂2周。
②用20～30毫克/千克茶粕药浴1天，再利用换水提升水温，增进蜕壳。
罗氏沼虾常见病害防治
罗氏沼虾常见病害防治简介罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii），又称巨型淡水虾或大马河虾，是淡水虾的一种。
它是一种非常重要的经济水产品种类，被广泛养殖于亚洲许多国家。
然而，罗氏沼虾养殖过程中常常受到各种病害的威胁，这些病害对养殖业的发展带来了一定的影响。
本文将介绍罗氏沼虾常见病害的防治措施。
一、白斑病白斑病（white spot disease）是罗氏沼虾养殖中常见的一种疾病，由海洋病原体引起。
它会导致虾体表出现白色斑点，严重者可能导致虾虫死亡。
以下是预防和控制白斑病的措施：1.规范养殖环境：养殖池水质应保持清洁，充分过滤并更新水源，确保水质清澈、透明。
保持水温和盐度适宜，同时避免过度密度养殖。
2.强化饲养管理：提供营养平衡且易消化的饲料，并根据虾的生长阶段合理调整饲料配方和投喂量。
避免过度投喂和过度饲养，以防止虾虫发生应激反应。
3.定期检查和隔离：定期检查虾虫的健康状况，一旦发现有虾虫出现白斑病症状，应及时将其隔离并采取相应的治疗措施，以防止病情的扩散。
4.选择抗病种苗：选用具有较高抗病性的罗氏沼虾种苗进行养殖，通过选择性繁殖和育苗，提高虾体的自身免疫能力。
二、腐烂病腐烂病（necrotizing hepatopancreatitis）是一种常见的致死性疾病，会导致罗氏沼虾的肝胰腺组织坏死，严重影响虾的生长和存活率。
以下是预防和控制腐烂病的措施：1.加强水质管理：保持养殖池水质清洁，适时清理底泥，确保水中的氨氮、硫化物等有害物质的浓度处于可接受范围内。
同时，避免使用过期、变质和污染的饲料。
2.合理调控水温：合理控制养殖水温，避免极端高温或低温环境对虾体健康产生不良影响。
在高温季节，可以考虑使用通风设备和增氧设备来降低水温。
3.健康饲喂：提供充足的营养饲料，并根据虾的生长需求进行合理的饲喂管理。
避免过度饲喂和过度投喂，防止引发虾虫的应激反应。
4.强化生物安全措施：对进入养殖环境的罗氏沼虾种苗进行严格的检疫和隔离，避免带入疾病源。
对虾传染性肌肉坏死病
对虾传染性肌肉坏死病传染性肌肉坏死病，是由传染性肌肉坏死病毒引起凡纳对虾的一种疾病，病虾可出现肌肉坏死、体表烤焦状等病征，最早发现于巴西，目前该病主要在南美流行。
为我国的二类水生动物疫病。
一、病原学为对虾传染性肌肉坏死病毒(Penaeidshrimpinfectiousmyonecrosisvirus，IMNV)，通常称传染性肌肉坏死病毒，属于整体病毒科(Totivirus)中属地位未定成员。
IMNV颗粒直径40纳米，二十面体，无囊膜；病毒基因组为单节段双链RNA病毒(dsRNA)，长度7560bp，有两个开放阅读框，分别编码衣壳蛋白和依赖RNA的RNA聚合酶。
凡纳对虾是IMNV的主要宿主，病毒也人工感染细角对虾和斑节对虾，巴西西北部地区的野生对虾可能是病毒的潜在宿主。
目前病毒仅可通过发病虾获得，未找到对病毒敏感的培养细胞系。
参考阅读：对虾微孢子病二、流行病学最早于2002年在巴西发现，目前该病主要发生于巴西西北部及南美洲，印尼的爪哇岛也有发现，其他国家和地区目前尚无该病的报道。
IMNV主要感染凡纳对虾，病毒可感染成虾、仔虾以及苗种，主要感染60日龄～80日龄的幼虾，通常6克以上的个体较易发病。
IMNV也可通过人工感染方式感染细角对虾和斑节对虾。
巴西西北部地区的野生对虾可携带病毒。
疾病发生的季节较长，水温较高容易发生疾病，最适发病温度30℃左右。
通常情况下，病毒破坏全身肌肉组织，但病程缓慢，死亡率不高，患病养殖种群出现持续性死亡，严重时累计死亡率可高达70％～85％。
2002年巴西养殖对虾暴发该病时造成了重大的损失，2003年～2004年间由该病造成了20000吨养殖虾的损失。
病毒污染水体可水平传播疾病，健康虾残食发病虾时可受到感染。
一般认为水温和盐度可影响疾病的发生，但缺乏明确的实验依据。
三、临床症状发病初期病虾摄食减少或停食，反应迟钝，聚集在池塘角落，体色发白。
病虾腹节发红，尾部肌肉组织呈点状或扩散的坏死，坏死先出现在腹节末梢和尾扇，移去腹节表皮可见白色或不透明的肌肉组织，部分虾还可出现微红色坏死区域；在网捕，喂食等刺激下，坏死症状虾可突然增多，喂食后出现持续死亡，淋巴器官明显增大，约为正常虾的3倍～4倍。
食品中蜡样芽孢杆菌芽孢EMA-qPCR 检测
蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）是 1.2 仪器设备
一种常见的兼性需氧革兰氏阳性致病
ABI 7500FAST 实时荧光 PCR 仪、
菌，极易污染乳制品、米饭、水果制 生物安全柜、超声波细胞破碎仪、显 品等食品 [1]。目前，检测方法主要是传 微镜。
图 3 不同光照时间处理对 EMA-qPCR 结果影响
管黑暗中室温放置 5 min。然后将离心 列， 设 计 引 物 和 探 针（ 南 京 金 斯
管放置冰上，分别强光下ຫໍສະໝຸດ 光 0、1、5、 瑞 生 物 公 司 合 成 ）。 上 游 引 物：
运用到蜡样芽孢杆菌实时荧光PCR检测中， 30 s，12 000 r/min 离心 2 min，取上
提高qPCR检测的准确度，降低假阳性率。 清用细菌 DNA 提取试剂盒提取 DNA。
1 材料和方法
1.4.2 溶菌酶法
1.1 菌种
向收集菌体的离心管加入 500 μL
蜡样芽孢杆菌 CMCC(B)63301。 无菌水，涡旋 30 s，再加入 1 μL 溶菌
统培养法，耗时费力，难以适应现代 1.3 蜡样芽孢杆菌芽孢的制备
食品生产的检验需要。
蜡样芽孢杆菌芽孢形成可以通过
蜡样芽孢杆菌实时荧光 PCR 技术 营养限量进行诱导，在培养基中添加 因具有检测时间短、操作简便等优点 Mn2+ 能提高芽孢的得率及稳定性。孔
得到广泛运用。蜡样芽孢杆菌在食品 雀石绿染色镜检芽孢生成情况。蜡样
酶（100 mg/mL），37 ℃ 水 浴 2 h， 12 000 r/min 离心 2 min，取上清提取 DNA。
1.4.3 煮沸法 在菌体中加入 500 μL 无菌水，涡 旋 30 s，置 95 ℃水浴 5 min，12 000 r/min 离心 2 min，取上清提取 DNA。 1.4.4 超声波破碎法 向 离 心 管 中 加 入 500 μL 的 无 菌 水，涡旋 30 s，放入超声波细胞破碎 仪超声波振荡 20 min（40%，5 s，5 s）， 12 000 r/min 离心 2 min，取上清提取 DNA。 1.5 EMA 使用浓度优化 用 ddH2O 配 制 0.1 mg/mL 的 EMA 溶液，-20 ℃避光保存。取 Mn2+ 营 养 肉 汤 中 30 ℃ 培 养 48 h 的 蜡 样 芽孢杆菌菌液于 80 ℃水浴中处理 20 min，灭活营养体细胞。将 EMA（0.1 mg/mL）分别加入装有 1 mL 上述灭 活 菌 液 的 离 心 管 中， 使 EMA 终 质 量 浓 度 分 别 达 到 0.1、1.0、2.0、5.0、 10.0、20.0 μg/mL，不加 EMA 的菌液 作为对照。充分混匀后，将离心管黑 暗中室温放置约 5 min，让 EMA 与细 菌 DNA 充分结合。然后将离心管放置 冰上，强光下曝光 20 min，以此为模 板采用超声波破碎法提取 DNA。 1.6 EMA 光照时间优化 添加 EMA 到 1.5 中所述灭活菌液 1 mL 离心管中，使每管 EMA 终浓度 达到 2.0μg/mL。充分混匀后，将离心
凝结芽孢杆菌在虾养殖上的应用
凝结芽孢杆菌在虾养殖上的应用文章标题：凝结芽孢杆菌在虾养殖中的广泛应用及其影响一、引言在现代虾养殖业中，凝结芽孢杆菌（Bacillus subtilis）作为一种益生菌在虾塘水质管理、免疫调节和健康养护方面的应用已经被广泛关注和应用。
本文将深入探讨凝结芽孢杆菌在虾养殖上的应用，并分析其对水质改善、免疫增强和疾病防控等方面的影响。
二、凝结芽孢杆菌的特性及作用机制凝结芽孢杆菌是一种革兰氏阳性菌，其在虾养殖中的应用主要体现在以下几个方面：1. 水质改善：凝结芽孢杆菌通过分解有机废物、对抗有害微生物和释放有益代谢产物等方式，改善虾塘水体质量，减少氨氮和硫化氢等有毒物质的积累，提高水质透明度和溶氧含量。
2. 免疫增强：凝结芽孢杆菌可以诱导虾体产生抗菌肽等免疫相关因子，增强虾体的非特异性免疫力，提高抵抗病原微生物的能力。
3. 疾病防控：凝结芽孢杆菌通过竞争环境资源、产生抗菌物质和调节宿主的免疫状态等方式，对抗病原微生物，降低虾体发病率，保障虾养殖业的健康发展。
三、凝结芽孢杆菌在虾养殖中的具体应用1. 添加方式：凝结芽孢杆菌可通过投喂生物制剂、直接喷洒或微生物固体发酵等方式添加到虾塘中。
还可以借助载体材料或生物载体将凝结芽孢杆菌固定在虾塘中，延长其在水体中的存活时间。
2. 适宜环境：凝结芽孢杆菌对水温、盐度和pH值等环境条件的适应范围广，适用于不同季节和不同养殖水体的需求。
3. 定期监测：为了保证凝结芽孢杆菌的应用效果，养殖户需要定期监测虾塘水质和虾体健康状况，根据实际情况调整凝结芽孢杆菌的添加量和频次。
四、凝结芽孢杆菌在虾养殖中的实际效果经过大量实践与研究，凝结芽孢杆菌在虾养殖中取得了良好的应用效果，具体表现在：1. 水质改善效果显著：添加凝结芽孢杆菌后，虾塘水体出现腐败、浑浊现象的减少，水质透明度得到明显提高。
2. 虾体健康状况改善：虾体活力增强、成活率提高、生长速度加快等现象明显，虾苗的成活率和产量都有所提高。
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论文题目：微生物学法检测面包虾的相关致病菌学院：专业年级：学号：姓名：指导教师、职称：年月日Pathogens detection of bread shrimp by microbiological methodSubmitted in partial fulfillment of the requirements for the degree of Bachelor in School of Life Sciences, FAFUCollege:School of Life SciencesSpeciality:BiologyEntrance year:I.D. No.:Candidate:Supervisor: （lecturer）Submitted:目录摘要 (1)1 引言 (2)1.1 面包虾致病菌检测的重要性 (2)1.2 面包虾致病菌检测的作用 (3)1.3 面包虾检测的项目与方法 (3)2 材料与方法 (4)2.1面包虾沙门氏菌的检测 (4)2.1.1 材料 (4)2.1.2 方法 (5)2.1.3 步骤 (5)2.2 面包虾单核细胞增生李斯特氏菌检测 (5)2.2.1 材料 (5)2.2.2 方法 (6)2.2.3 步骤 (6)2.3面包虾的金黄色葡萄球菌的检测 (6)2.3.1 材料 (6)2.3.2 方法 (7)2.3.3 步骤 (7)2.4面包虾的副溶血性弧菌的检测 (7)2.4.1 材料 (7)2.4.2 方法 (8)2.4.3 步骤 (8)3 结果与分析 (8)3.1 沙门氏菌的检测结果 (8)3.1.1 检测结果 (8)3.1.2 结果分析 (9)3.2 单核细胞增生李斯特氏菌的检测结果 (9)3.2.1 检测结果 (9)3.2.2 结果与分析 (10)3.3 金黄色葡萄球菌的检测结果 (10)3.3.1 检测结果 (10)3.3.2 结果分析 (12)3.4 副溶血性弧菌的检测结果 (12)3.4.1 检测结果 (12)3.4.2 结果与分析 (13)4 结论 (14)5 实习心得体会 (14)参考文献 (16)致谢 (18)微生物学法检测面包虾的相关致病菌吴晓慧摘要：随着社会的发展，人们生活水平的提高，水产品也从自然生长发展到人工养殖。
在人们的日常膳食中所占比例也不断提高，其质量安全也显得越发重要。
通过对产品的微生物检测，是保证食品的质量与安全的措施之一。
本文着重介绍了面包虾的不同致病微生物检测的方法。
对沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌的检测进行实验，得出结果，对结果进行讨论与分析。
并把实验所运用的检测方法与国内外的其他方法相比较，对企业提出建议。
关键词：面包虾微生物检测沙门氏菌单核细胞增生李斯特氏菌金黄色葡萄球菌副溶血性弧菌1 引言1.1面包虾致病菌检测的重要性食品安全关系到广大人民群众的身体健康和生命安全，关系到经济健康发展和社会稳定，关系到政府和国家的形象。
食品安全已成为衡量人民生活质量、社会管理水平和国家法制建设的一个重要方面。
随着生活水平的提高，人们对食品的安全要求越来越高，而一些食品的安全问题也越来越引起人们的关注，成为现阶段我国亟待解决的问题[1]。
根据问题的重要性来排列，目前我国存在的主要食品安全问题依次为：微生物引起的食源性疾病、农药残留、兽药残留、重金属、天然毒素、有机污染等引起的化学性污染；以及非法使用食品添加剂。
而大部分食源性疾病是由致病微生物引起的。
沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌都是常见的致病微生物[2]。
沙门氏菌(Salmonella)可以引起：①肠热型(伤寒、副伤寒)，开始出现发热不适、全身疼痛，此后患者出现持续高热、相对脉缓、肝脾肿大，外周白细胞下降、皮肤出现玫瑰疹。
严重肠局部坏死和溃疡，有出血、穿孔等并发症。
②急性胃肠炎型(食物中毒)，潜伏期12～24小时，突然恶心、呕吐、腹痛、腹泻、发热，如果细菌已产生毒素，可引起中枢神经系统症状，出现体温升高、痉挛等；重者有寒战，惊厥，抽搐与昏迷，病程3～7天，预后良好。
③类霍乱型，类伤寒型，类感冒型，败血症型[3]。
单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)[4]是一种人畜共患食源性致病菌，可使人畜患脑膜炎、心肌炎、败血症、早产等疾病，危害较大。
对孕妇、婴儿、老年人级免疫力低下者更容易发生。
金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。
副溶血性弧菌（Vibrio parahemolyticus），进食含有该菌的食物可致食物中毒，临床上以急性起病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状。
FAO/WHO于2002年公布了沙门菌病在一些主要国家的年发生率，即每10万人中每年发生的病人数：澳大利亚为38、德国为120、日本为73、荷兰为16、美国为14[5]。
沙门菌的危害程度可见一斑。
因此，对以上各类病原微生物的检测非常重要。
而微生物学检验，是用细菌学的方法来检查水产品的质量、水产品加工过程的卫生措施情况和水产品保藏方法是否有效[5]，这对保证食品安全来说是至关重要的一个环节。
1.2 面包虾致病菌检测的作用在面包虾的安全检测上，目前对面包虾的微生物检测作用主要是[6]：严格控制原辅料的质量，保证食品的质量与安全；掌握生产过程情况和产品决定工艺条件的依据；控制产品质量，把好出口关；进行经济核算的依据；进行科学研究工作的手段。
以此来保证半成品和种产品的卫生符合产品标准，保证消费者的权益。
保证食品的卫生质量即安全，避免食物中毒的发生。
另外，通过微生物的检测结果，我们可以监测生产过程中是否存在严重偏差（如半成品受到污染），以便及时纠正和召回产品；二是积累数据并定期分析，并根据分析结果来监测生产过程、工艺、产品质量等是否出现波动、偏差和漂移，以便纠正和调整（回顾性验证）[5]。
如大肠菌群被检出，表明食品被粪便直接或间接污染，食品就有可能污染了致病菌。
金黄色葡萄球菌被检出表明食物被人或动物接触过。
就目前状况看，除肉类食品在屠宰中被粪便污染造成沙门氏菌污染、蛋从粪便污染、奶源由于乳房炎污染外，大都与人手接触有关。
人手上有时就有大肠杆菌、沙门氏菌和志贺氏菌。
副溶血性弧菌是由海产品污染的。
如果微生物学检验中出现不合格的情况时，就要查看相关的生产环节。
因此对生产也是有指导意义的。
1.3面包虾检测的项目与方法在面包虾的生产中，其检测项目包括[7]：微生物检测中一般污染（菌落总数，大肠杆菌）和致病菌（单核细胞增生李斯特氏菌，霍乱弧菌，副溶血性弧菌，沙门氏菌，金黄色葡萄球菌等），常规微生物检验以分离培养、生化试验、血清学试验来进行判定。
也有理化检测项目为氯霉素、呋喃唑酮、磺胺类、孔雀石绿、砷、汞[8]等，依据产品出口的不同国家有不同标准。
近年来，由于养殖环境污染，养殖鱼虾贝类受到污染已成为世界许多地方的问题。
常规的培养法无法检测到处于这种状态的细菌，造成漏检，从而形成危害，因此寻找一种准确快速的检测方法非常重要。
病原微生物快速检测方法包括分子生物学技术、免疫学技术、代谢技术、纸片法、细菌直接计数法、噬菌体鉴定技术、全自动微生物分析系统等。
和传统方法比较，更快、更方便、更灵敏。
其中，ELISA（酶联免疫吸附试验）[9]检测微生物的优点受到人们越来越多的关注。
主要用于检测水产品中微生物、水产动物致病微生物检测等，ELISA在水产微生物检测中的应用在国内刚起步。
预测微生物技术在湿润的蛋白质食品（鱼虾、乳制品、红肉和家禽）中应用比较广泛[10]。
这是借助计算机微生物数据库，在确定相关温度、pH、水分活度、防腐剂等环境因素下，应用预测微生物的数字模型，快速对重要微生物的生长、存活和死亡进行预测，应用栅栏技术，确保水产品生产、运输、储存等过程中的安全和稳定。
因此，在常规的微生物学检验为基础，结合酶联免疫法或预测微生物技术等其他先进技术进行产品的综合检测，是未来进行面包虾病原微生物检测的主流方向。
目前国内大多在采用微生物学检测方法。
2 材料与方法2.1面包虾沙门氏菌的检测2.1.1 材料（1）样品待检测的面包虾。
（2）试剂缓冲蛋白胨水（BPW）、四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、亚硫酸铋（BS）琼脂、沙门氏菌属显色培养基。
（所用试剂均用北京陆桥公司的产品，按其使用方法进行配制）。
（3）仪器和设备量0.0001 g）、灭菌锥形瓶（500 ml、250 ml）、灭菌移液管（1ml、10 ml）、灭菌培养皿（直径90 mm）、灭菌试管、灭菌手术剪和镊子。
2.1.2方法通过培养基中的微生物培养，观察有无沙门氏菌的存在。
2.1.3 步骤（1）前增菌[11]：面包虾在2 ℃-5 ℃解冻，不超过18 h。
无菌操作，称取25 g样品，用手术剪剪碎，放入盛有225 mlBPW的无菌杯中，混匀。
无菌操作将样品转至500 ml锥形瓶中，于36 ℃±1 ℃培养8 h-18 h。
（2）増菌：轻轻摇动培养过的样品混合物，移液管移取1 ml，转种于10 mlTTB内，在42 ℃±1 ℃培养18 h-24 h。
同时，另移取1 ml，转种于SC内，在36 ℃±1 ℃培养18 h-24 h。
（3）分离：分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个沙门氏菌属显色培养基平板。
于36 ℃±1 ℃培养18 h-24 h（沙门氏菌属显色培养基平板）或40 h-48 h （BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落。
（4）鉴定：自BS琼脂平板上挑取黑色有金属光泽、棕色至绿色和沙门氏菌属显色培养基上挑取圆形、光滑突起的（浅）红紫色的可疑菌落，进行生化鉴定。
2.2面包虾单核细胞增生李斯特氏菌检测2.2.1材料（1）样品待检测的面包虾。
（2）试剂李氏增菌肉汤LB（LB1，LB2）、李斯特氏菌显色培养基、生化鉴定试剂盒。
（所用试剂均用北京陆桥公司的产品，按其使用方法进行配制）（3）仪器和设备量0.0001 g）、无菌锥形瓶（500 ml、250 ml）、无菌培养皿（直径90 mm）、无菌试管、无菌手术剪和镊子。
2.2.2 方法通过培养基中的微生物培养，观察有无单核细胞增生李斯特氏菌的存在。
2.2.3步骤（1）増菌[12]：面包虾在2 ℃-5 ℃解冻，不超过18 h。
无菌操作，称取25 g样品，用手术剪剪碎，加入到含有225 ml LB1前增菌液的无菌杯中，混匀。
于30 ℃±1 ℃培养24 h ，移取0.1 ml ，转种于10 ml LB2增菌液内，于30 ℃±1 ℃培养18 h-24 h 。