生物化学实验项目

实验项目一蛋白质等电点测定

【实验目的】

1．验证蛋白质的两性电离和等电点。

2．掌握测定酪蛋白等电点的原理和方法

【实验用品】

器材：试管、试管架、刻度吸管（0.5 ml、1ml、5 ml）、吸耳球、记

号笔。

试剂：

1．0.01mol/L乙酸

2．0.1mol/L乙酸

3．1mol/L乙酸

4．5g/L酪蛋白乙酸钠溶液称取纯酪蛋白0.25g，加入蒸馏水20 ml

及1.0mol/LNaOH5ml，混合，至酪蛋白完全容易。然后加入1.0mol/L乙酸

5 ml，移入50 ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。

【实验原理】

蛋白质分子中既含有酸性基团（如—COOH），又含有碱性基团（如—、胍基等）是两性化合物。这些基团在不同的PH值溶液中可发生酸式NH

2

电离或碱式电离。蛋白质在水溶液中的带电情况，不仅取决于本身的结构，还取决于溶液的PH值。调节溶液的PH值，可使蛋白质带有不同的电荷。

【实验方法】

取干净试管5支，编号后，按下表操作

试剂 1 2 3 4 5

蒸馏水 1.6 — 3.0 1.5 3.38 0.01mol/乙酸ml——— 2.5 0.62 0.1mol/L乙酸ml— 4.0 1.0 ——

1.0mol/L乙酸ml

2.4 ————

5g/L酪蛋白

乙酸钠溶液ml 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 溶液PH值 3.2 4.1 4.7 5.3 5.3 沉淀结果

立即混合各管，静置10分钟，观察各管沉淀情况，结果用“-，+，++，+++”表示，并记录于表中。

【思考分析】

酪蛋白质的等电点是多少

实验报告

【操作要求及考核标准】

实验项目二温度、pH对酶促反应的影响

【实验目的】

通过观察不同的温度、pH条件下，唾液淀粉酶对淀粉的作用，了解温度、pH对酶促反应的影响。

【实验原理】

唾液淀粉酶可催化淀粉水解，生成分子大小不同的糊精、麦芽糖和少量葡萄糖。由于在不同的温度、PH条件下，淀粉酶的活性不同，使淀粉水解的程度也不一样，因而遇碘后会产生不同的颜色，根据颜色的不同，可判断淀粉水解的程度，从而了解温度、PH对酶活性的影响。

淀粉淀粉酶糊精淀粉酶麦芽+葡萄糖

加碘液（呈蓝色）（呈紫色）（呈黄色，为碘本身颜色）【实验用品】

试剂：1、1%淀粉溶液取可溶性淀粉1g，加5mI蒸馏水调至糊状，再加蒸馏水80mI，加热使其溶解，然后加水至100mI.

2、稀碘溶液取碘2g ，碘化钾4g，溶于1000mI蒸馏水中，置棕色瓶中贮存。

3、缓冲液

（1）pH3.0缓冲液：取0.2mo/L磷酸氢二钠溶液205mI，0.1mo/L柠檬酸溶液795mI，混合后即得。

（2）pH8.0缓冲液：取0.2mo/L磷酸氢二钠溶液772mI，0.1mo/L柠檬酸溶液228mI，混合后即得。

（3）pH8.0缓冲液：取0.2mo/L磷酸氢二钠溶液972mI,0.1mo/L柠檬酸溶液28mI，混合后即得。

器材：10mm×100mm试管、试管架、蜡笔、恒温水浴、沸水浴、冰浴。

【实验方法】

稀释唾液制备：用自来水漱口以清除口腔内的食物残渣。再含一口蒸馏水，作咀嚼运动，2分钟后吐入小烧杯中，然后用滤纸过滤后备用。温度对

10分钟后，在各管中加入稀释碘溶液1滴，观察各管颜色变化。

1.pH对酶促反应的影响取3支试管编号，按下表操作。

10分钟后，在各试管中加入稀碘液1滴，观察各试管颜色变化。

【注意事项】

注意不同人在不同的时间所釆集的唾液中唾液淀粉酶活性不同，而使结果有所差异，若想得到满意的结果，应事先确定稀释倍数。

【思考题】

说明温度、pH对酶促反应的影响？

实验报告

【操作要求及考核标准】

实验项目三Vc 含量测定

【实验目的】

1.学习定量测定维生素C的原理和方法；

2.掌握滴定法的基本操作过程；

3.了解并掌握青椒中维生素C的含量测定。

【实验用品】

试剂：1、2%草酸.

2、2,6-二氯酚靛酚.

材料：4g青椒、三角瓶.

【实验原理】

Vc是人类营养中最重要的维生素之一。它分布广，绿色组织和水果含量更为丰富，V c有强的还原性，碱性条件加热并有氧化剂存在时Vc易被氧化破坏。中性和酸性条件下，Vc能将2,6-二氯酚靛酚还原成无色的还原型2,6-二氯酚靛酚，同时Vc被氧化成脱氢Vc，因此可用2,6-二氯酚靛酚测样品中的V c含量。V c全部被氧化后，稍多加一点染料，使溶液呈淡粉红色，即为终点。如无其它干扰，则消耗的染料与样品中Vc含量成正比。

【实验方法】

1.Vc的提取：4g青椒（加5ml2%草酸，研磨成匀浆）→转入50ml容量瓶（残渣用2%草酸提取2—3次）→并入50ml容量瓶（加2%草酸35ml）→用1%草酸定容到刻度→过滤或离心→滤液（清液）备用。

2.空白滴定：取20ml空白液（加35 ml2%草酸，用1%草酸定容到50 ml）用2,6-二氯酚靛酚滴定。

3.标准液滴定，取标准Vc液20ml2—3份，置三角瓶中，用2 .6-二氯酚靛酚滴定。

4.样液滴定，取样液20ml各2份，置于三角瓶中，进行滴定。

【注意事项】

1.终点的判定：2,6-二氯酚靛酚（兰）滴至样液（标准液）呈淡粉红

色，并保持15—30秒不褪色，即这终点。

2.2,6-二氯酚靛酚的体积一般在1—4ml之间，Vc含量高时，可稀释

或减少用量。

3.滴定要迅速，不超过2分钟