高效液相色谱串联质谱在药物分析中的应用
高效液相色谱串联质谱法检测美金刚血浆浓度
高效液相色谱串联质谱法检测美金刚血浆浓度目的：建立高效液相色谱串联质谱法测定人体血浆中美金刚的浓度。
为内标，方法：采用Triple Quad-4500的液质联用技术系统，以美金刚-d3血浆经乙腈蛋白沉淀后，采取Agilent EC-C18 2.7μm 50x4.6mm色谱柱分离，以多反应检测模式（MRM）进行检测。
结果：美金刚的线性范围为0.6ng/mL~225ng/mL，提取回收率和内标平均提取回收率分别为96.31%～98.08%和106.70%，批内和批间准确度精密度均＜15%。
结论：该方法简便、快速、灵敏，重现性好，适应于美金刚人体内血药浓度的测定及其药代动力学和生物等效性研究。
关键词：美金刚、高效液相色谱串联质谱法、含量测定盐酸美金刚是FDA批准的第1个用于治疗中、重度阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的药物，主要通过调节脑内谷氨酸水平发挥作用。
临床研究表明,盐酸美金刚是一种安全、有效，且较有市场前景的药物。
本文建立HPLC-MS/MS法测定人血浆中美金刚的浓度，采用乙腈蛋白沉淀法，简单，快速，稳定，可同时满足临床药代动力学及生物等效性研究中大批量样品分析的要求。
1.仪器与对照品美国应用生物系统公司Triple Quad-4500三重四极杆质谱仪，配ESI（电喷雾离子源），日本岛津UPLC-30A超高效液相系统。
美金刚来源：USP，批号：R044E0；美金刚-d来源：TLC，批号：1221-081A6。
31.方法2.1液相色谱-质谱条件液相条件：色谱柱为Agilent EC-C18 2.7μm 50x4.6mm，流动相乙腈-0.4%甲酸水溶液（PH=3.20），流速0.6mL/min，进样体积5μL。
质谱条件：ESI（电喷雾离子源），正离子检测，其中离子化电压4500V，干燥器温度500℃，气帘气压力45psi，雾化气压力50psi，涡轮气压力50psi，多反应检测（MRM）方式定量，美金刚180.1→163.1，美金刚-d183.5→166.2。
液相色谱—质谱联用的原理及应用
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质量色谱图
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总离子流图
准分子离子:
指与分子存在简单关系的离子，通过它可 以确定分子量.液质中最常见的准分子离子 峰是[M+H]+ 或[M-H]- .
灵敏度：通常认为电喷雾有利于分析极性大的小 分子和生物大分子及其它分子量大的化合物，而 APCI更适合于分析极性较小的化合物。
多电荷：APCI源不能生成一系列多电荷离子
NanoSpray 离子源
专门设计的 NanoSpray 离子源特别适合于做 微量的生化样品，其流速范围可从 5nL／min 到luL／min。一滴样品就可做数小时的分析。 可在最小的样品消耗量下获得最大灵敏度。灵 敏度可高达fmole。并可直接与微孔HPLC联用。
进样系统 离子源 质量分析器 检测接收器
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真空系统
真空系统
质谱仪的离子源、质量分析器和检测器必须在 高真空状态下工作，以减少本底的干扰，避免 发生不必要的离子-分子反应。所以质谱反应属 于单分子分解反应。利用这个特点，我们用液 质联用的软电离方式可以得到化合物的准分子 离子，从而得到分子量。
电喷雾电离是最软的电离技术，通常只产生分子离 子峰，因此可直接测定混合物，并可测定热不稳定 的极性化合物；其易形成多电荷离子的特性可分析 蛋白质和DNA等生物大分子；通过调节离子源电压 控制离子的碎裂（源内CID）测定化合物结构。
药物研究中HPLC的应用
药物研究中HPLC的应用李伟星;焦玉英【摘要】高效液相色谱法以其高分离效率在越来越多的领域中得到应用.现综述近年来高效液相色谱法在药学研究中的应用与进展.【期刊名称】《黑龙江科技信息》【年(卷),期】2010(000)018【总页数】1页(P9)【关键词】高效液相色谱法;HPLC应用;药物【作者】李伟星;焦玉英【作者单位】哈药集团制药总厂,黑龙江,哈尔滨,150000;哈药集团制药总厂,黑龙江,哈尔滨,150000【正文语种】中文高效液相色谱法以经典的液相色谱为基础，引入气相色谱的理论与实验方法，将流动相改为高压输送，并采用高效固定相及在线检测等手段，发展而成的分析、分离方法。
高效液相色谱法作为一种高效、快速的分离、分析技术，以其灵敏度高、选择性好，可分析微量组成甚至痕量样品等特点，成为医药分析领域应用最广、发展最快的现代分析技术之一,HPLC具有同时分离、分析的功能，对于体内药物分析、体内内源性物质的分析及成分复杂的中药分析尤为重要，HPLC的分离功能还广泛用于药物的纯化和制备、药物合成各步反应的监控和临床治疗药物的监测。
在药物分析领域，无论是合成药还是微生物发酵生产的药物或天然药物，也无论是原料药还是生物样品中的药物，高效液相色谱法都成为分离、鉴定和含量测定的首选手段。
近年来，高效液相色谱法在药物研究中发挥着越来越重要的作用。
就高效液相色谱法在药物研究中的应用和进展综述如下。
高效液相色谱法在药学研究中的应用1 质量控制以美国药典为例1975年首次收载HPLC作为法定分析方法时只有6个项目，第20版收载了80项，第21版增至418项，第20版增至2000项，如今HPLC已成为反映世界各国药典水平先进性的指标之一，1998年至2005年，发表在药物分析杂志上的有关色谱的论文已超过60%，其中HPLC的使用占80%以上，可见HPLC在现代药物研究中的地位。
有人用HPLC一次性测定了维生素K1、维生素D3、维生素A棕榈酸酯、维生素E醋酸酯等5种成分的含量，使用2种或2种以上的检测器串联可以测定水溶性维生素的含量，电化学检测器能选择性地测定具有氧化还原性能的维生素和叶酸。
(完整版)液相色谱-质谱(LC-MS)联用的原理及应用ppt课件
? 其中ESI，APCI，APPI统称大气压电离 (API)
实验室现有的离子源:
? ESI电喷雾电离源 ? APCI大气压化学电离源
电喷雾（ESI）的特点
? 通常小分子得到[M+H]+ ]+,[M+Na]+ 或[M-H]-单电荷 离子，生物大分子产生多电荷离子，由于质谱仪测 定质 / 荷比，因此质量范围只有几千质量数的质谱 仪可测定质量数十几万的生物大分子。
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2.0质量色谱图3.0
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准分子离子:
? 指与分子存在简单关系的离子，通过它可 以确定分子量 .液质中最常见的准分子离子 峰是[M+H]+ 或[M-H]- .
电喷雾与大气压化学电离的比较
? 电离机理：电喷雾采用离子蒸发，而 APCI电离是 高压放电发生了质子转移而生成 [M＋H]+或[M-H]离子。
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同位素离子
? 由元素的重同位素构成的离子称为同位素离子 . ? 各种元素的同位素 ,基本上按照其在自然界的
? 不同类型有机物有不同的裂解方式 ? 相同类型有机物有相同的裂解方式 ,只是质量
高效液相色谱串联质谱法测定当归芍药散提取物和含药血清中3种活性成分含量
高效液相色谱串联质谱法测定当归芍药散提取物和含药血清中3种活性成分含量宋祯彦1，何攀2，李富周1，贺春香1，余婧萍1，成绍武11.中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室，湖南中医药大学，湖南长沙 410208；2.中南粮油食品科学研究院有限公司，湖南粮食集团有限责任公司，湖南长沙 410005摘要：目的 建立测定当归芍药散提取物和含药血清中3种活性成分含量的高效液相色谱串联质谱方法。
方法 药物提取物样品经甲醇-水（1∶1，V/V）溶液溶解、离心、净化后过0.45 μm滤膜，血清样品适当稀释、过膜后用高效液相色谱串联质谱法测定。
色谱柱为Agilent Poroshell 120 EC-C18（100 mm×2.1 mm，2.7 μm），茯苓酸流动相为乙腈-0.5 mmol/L乙酸铵水溶液（9∶1，V/V），阿魏酸和芍药苷以乙腈-5 mmol/L乙酸铵水溶液为流动相梯度洗脱，流速0.4 mL/min，柱温35 ℃，进样量5 μL，采用电喷雾离子源，负离子模式，干燥气温度350 ℃，干燥气流速12 L/min，检测方式为多反应监测。
结果 当归芍药散中阿魏酸、芍药苷和茯苓酸分别在0.1～20.0 μg/mL、1～100 μg/mL、0.1～20.0 μg/mL范围内线性关系良好，加样回收率高，重复性好。
当归芍药散提取物中阿魏酸、芍药苷和茯苓酸含量分别为（127.6±14.9）μg/g、（6081.8±468.0）μg/g和（14.7±0.75）μg/g，当归芍药散含药血清中阿魏酸和芍药苷含量分别为（0.026±0.004）μg/g和（0.61±0.07）μg/g。
结论 本研究建立的方法样品处理简单，方法特异性强，精确度高，重复性偏差小，回收率高，可用于当归芍药散提取物和含药血清中活性成分的质量控制。
关键词：高效液相色谱串联质谱法；阿魏酸；芍药苷；茯苓酸；当归芍药散；含药血清中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2021)01-0092-08DOI：10.19879/ki.1005-5304.202005099 开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Content Determination of Three Active Components in Danggui Shaoyao Powder Extractsand Its Drug-containing Serum by HPLC-MS/MSSONG Zhenyan1, HE Pan2, LI Fuzhou1, HE Chunxiang1, YU Jingping1, CHENG Shaowu11. Key Laboratory of Hunan Province for Integrated Traditional Chinese and Western Medicine on Prevention andTreatment of Cardio-cerebral Diseases, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, China;2. Research Institute of Zhongnan Grain and Oil Foods, Hunan Grain Group Co., Ltd, Changsha 410005, ChinaAbstract:Objective To establish a method for the determination of three active components in Danggui Shaoyao Powder extracts and its drug-containing serum by HPLC-MS/MS. Methods The extract samples were dissolved in methanol-water (1:1, V/V) solution, centrifuged and purified, and then passed through a 0.45 μm filter membrane. Serum samples were appropriately diluted, passed through the membrane and determined by HPLC-MS/MS. The column was Agilent Poroshell 120 EC-C18 (100 mm × 2.1 mm, 2.7 μm). The mobile phase of porcine acid was acetonitrile- 0.5 mmol/L ammonium acetate aqueous solution (9:1, V/V), and the mobile phase of ferulic acid and paeoniflorin was acetonitrile- 5 mmol/L ammonium acetate aqueous solution (gradient elution). The flow rate was 0.4 mL/min; the column temperature was 35 ℃; the injection volume was 5 μL. Electrospray ion source and negative ion mode were used; drying gas temperature was 350 ℃; drying gas flow rate was 12 L/min; detection method was multiple reaction monitoring. Results The linear relationship of ferulic acid, paeoniflorin and基金项目：国家自然科学基金（81774129、82004184）；湖南省自然科学基金面上项目（2018JJ2296）；湖南省自然科学基金青年基金（2019JJ50441）；湖南省高校创新平台开放基金项目（19K065）；湖南省教育厅科学研究项目（18B246）；湖南创新型省份建设专项（2019RS1064）通讯作者：成绍武，E-mail：****************.cnpachymic acid in Danggui Shaoyao Powder was good in the range of 0.1–20.0 μg/mL, 1–100 μg/mL, and 0.1– 20.0 μg/mL, respectively. The standard recovery was high and the repeatability was good. The contents of ferulic acid, paeoniflorin and pachymic acid in Danggui Shaoyao Powder extracts were (127.6±14.9)μg/g, (6081.8±468.0)μg/g, and (14.7±0.75)μg/g, respectively. The contents of ferulic acid and paeoniflorin in Danggui Shaoyao Powder- containing serum were (0.026±0.004) μg/g and (0.61±0.07) μg/g, respectively. Conclusion The method established in this study is simple in sample processing, strong in method specificity, high in accuracy, small in repeatability deviation, and high in recovery rate, and can be used for the quality control of the active components in the Danggui Shaoyao Powder extracts and drug-containing serum.Keywords: HPLC-MS/MS; ferulic acid; paeoniflorin; pachymic acid; Danggui Shaoyao Powder; drug-containing serum当归芍药散出自《金匮要略》，全方由当归、芍药、川芎、茯苓、白术和泽泻6味药组成，具有滋补肝肾、活血化瘀、化痰通络功效。
超高效液相色谱-串联质谱法测定动物源食品中的30种兽药残留
超高效液相色谱-串联质谱法测定动物源食品中的30种兽药残留作者：黄正华来源：《现代食品》 2018年第21期摘要：文章首先介绍了实验的设备与试剂、标准溶液的配制、预处理方法、标准工作曲线的配制、仪器条件及定量等内容，随后文章针对实验结果进行了讨论分析，包括优化质谱条件、改善色谱条件、创新预处理方法、考察基质效应、检测实际样品等，希望能给相关人士提供一些参考。
关键词：固相萃取；喹诺酮兽药；青霉素兽药我国在水生物养殖、禽类饲养以及畜牧业生产等过程中会使用各种兽药，其中包括喹诺酮和青霉素等，这些药物的滥用会对人体产生一定的影响，当人体内的药物积累到一定程度后，就会出现耐药性，甚至导致畸形、突变等严重后果[1]。
目前在兽药检测领域中普遍使用的一种方法是超高效液相色谱- 串联质谱法。
1 实验方法1.1 设备与试剂使用的设备包括超高效液相色谱仪Agilent1290，三重四极杆质谱仪6460，高速冷冻离心机、水浴式的氮吹仪、高纯净水仪、超声波振荡器等。
试剂包括甲酸、正己烷、乙腈、甲醇、氯化钠、三氯乙酸、C18 吸附剂。
实验过程中所使用的水均是通过高纯水净化而来。
此外，还包括19 种喹诺酮标准品，恩诺沙星、司帕沙星、双氟沙星、沙拉沙星、环丙沙星、诺氟沙星、萘啶酸、西诺沙星、洛美沙星、培氟沙星、吡哌酸、奥比沙星、依诺沙星、马波沙星、达氟沙星、氟甲喹、恶喹酸、司帕沙星、沙拉沙星等，还有11 种青霉素标准品，如苯氧乙基青霉素、双氯青霉素、邻氯青霉素、甲氧苯青霉素、苯咪青青霉素、苯氧甲基青霉素、苄青霉素、乙氧萘胺青霉素、双氯青霉素、苯唑青霉素、邻氯青霉素、氨苄青霉素、羟氨苄青霉素、苯氧乙基青霉素等。
1.2 标准溶液的配制先将喹诺酮标准品使用10 毫升的甲酸进行溶解后用乙腈作为溶剂。
而青霉素类标准品则以50%乙腈水溶液作为溶剂，然后将30 种标准品配制成500 μg·mL-1 浓度的单标储备液，并避光冷藏保存。
高效液相色谱-串联质谱法检测肉类原料中的药物多残留
肉，菇业MEAT INDUSTRY 2020年第12期总第476期❖由醃妥全与检测❖高效液相色谱-串联质谱法检测肉类原料中的药物多残留沈春华厦门古龙食品有限公司技术中心实验室福建厦门361000摘要建立了高效液相色谱-串联质谱技术，同时检测肉类原料中磺胺类(磺胺二甲囉味、磺胺间二甲氧疇啜、磺胺间甲氧嗨呢、磺胺甲基异噁哇、礦胺囉睫、礦胺二甲异噁哇、磺胺甲氧哒嗪)和喳诺飼类(恩诺沙星)8种药物残留量的方法。
前处理采用1%甲酸-乙睛提取，浓缩后用0.1%甲酸-乙睛定容，正己烷去脂，用高效液相-串联质谱进行定性及定量分析。
所涉8种药物在1~100|xg/L范围内线性良好，相关系数为0.9956~0.9998,方法最低定量限为1jig/kg。
在3个添加水平下，加标回收率为67.8%-115%,相对标准偏差为1.2%~9.1%。
$匕方法可满足肉类原料中，磺胺类和喳•诺飼类多种药物残留的检测与验证。
关键词液相色谱-串联质谱药物残留肉类检测Detection of drugs residue in meat raw materials by high performance liquidchromatography-tandem mass spectrometry methodSHEN ChunhuaAbstract A high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method was established,and8kinds of drugs residue including sulfonamides(sulfamethazine,sulfadimethoxine, sulfamo nomethoxine,sulfamethoxazole,sulfadiazine,sulfisoxazole and sulfamethoxypyridazine)and quinolones(enrofloxacin)in meat raw materials could be detected simultaneously.1%acidic acetonitrile was adopted to extract in pretreatment.After concentration,the volume was fixed with0.1%formic acid acetonitrile,and the fat was removed with n一Hexane,high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method was used for qualitative and quantitation analysis・The8kinds of drugs involved had good linearity in the range of1~100|xg/L,and the correlation coefficient was0.9956〜0.9998,and the minimum limit of quantitation was1|xg/kg・Under the three addition levels,the recovery of standard addition was67.8%~115%,and the relative standard deviations was1.2%to9.1%.This method could meet the needs of detection and validation of sulfonamides and quinolones residues in meat raw materials.Key words high performance liquid chromatography一tandem mass spectrometry method；drugs residue；meat；detection肉类作为食品加工行业的一大类原料,随着食品安全问题备受社会日益关注的同时，肉类原料是否安全可靠，已引起了国内食品安全监管机构甚至国际食品法典委员会(CAC)的高度重视⑷。
液相色谱_质谱(LC_MS)联用的原理和应用
离子峰称作基峰. 总离子流图；质量色谱图；准分子离子；碎片离子；
多电荷离子；同位素离子
总离子流图:
在选定的质量范围内，所有离子强度的 总和对时间或扫描次数所作的图,也称 TIC图.
高分辨质谱可以由分子量直接计算出化合物的 元素组成从而推出分子式
低分辨质谱利用元素的同位素丰度，例:
(3)峰强度与结构的关系
丰度大反映离子结构稳定 在元素周期表中自上而下，从右至左，杂原子
外层未成键电子越易被电离，容纳正电荷能力 越强，含支链的地方易断，这同有机化学基本 一致，总是在分子最薄弱的地方断裂。
(3) 尽可能判断出分子离子。
(4) 假设和排列可能的结构归属：高质量离子 所显示的，在裂解中失去的中性碎片，如M-1， M-15，M-18，M-20，M-31......意味着失H， CH3，H2O，HF，OCH3......
(5)假设一个分子结构，与已知参考谱图对照， 或取类似的化合物，并作出它的质谱进行对比。
EI(Electron Impact Ionization):电子轰击电离—硬电离。
CI(Chemical Ionization):化学电离—核心是质子转移。
FD(Field Desorption):场解吸—目前基本被FAB取代。
FAB(Fast Atom Bombardment):快原子轰击—或者铯离子 (LSIMS,液体二次离子质谱 ) 。
不同类型有机物有不同的裂解方式 相同类型有机物有相同的裂解方式,只是质量
数的差异
需要经验记忆。
超高效液相色谱-串联质谱法同时测定露酒中伐地那非、西地那非和他达拉非含量
超高效液相色谱-串联质谱法同时测定露酒中伐地那非、西地那非和他达拉非含量张书文;王锟;韩圣谦【摘要】Samples were extracted by methanol, vardenafil, sildenafiland tadalafil in liqueur were determined by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry at the same time. With mobile phase of methanol-0.1% for-mic acid solution, the mass spectrometry was operated in the positive ion mode of multiple reaction monitoring.The linear range of vardenafil, sildenafil and tadalafil was 5-1 000μg/L, the detection limit was 0.001 mg/kg, and correlat ion co-efficient was more than 0.999. The average recoveries of vardenafil, sildenafil and tadalafil were 91.0%-96.0%, 92.0%-96.0% and 89.5%-92.4%, respectively, and the relative standard deviation(RSD) was less than 2%(n=6). The method is simple, rapid, high efficiency and yield, which is suitable for determination of vardenafil, sildenafil and tadalafil in liqueur.%以甲醇提取样品,采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定露酒中西地那非、伐地那非和他达拉非.以甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相,质谱采用电喷雾ESI+扫描模式,通过多反应监测模式进行定性及定量分析.伐地那非、西地那非和他达拉非的线性范围均为5~1 000μg/L,检出限均为0.001 mg/kg,线性相关系数均大于0.999.实际样品中伐地那非、西地那非、他达拉非的加标回收率分别为91.0%~96.0%,92.0%~96.0%, 89.5%~92.4%.测定结果的相对标准偏差均小于2%(n=6).该方法操作简单、快捷,精密度、回收率高,适用于露酒中伐地那非、西地那非和他达拉非的含量分析.【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2016(025)001【总页数】3页(P44-46)【关键词】露酒;液相色谱串联质谱法;伐地那非;西地那非;他达拉非【作者】张书文;王锟;韩圣谦【作者单位】烟台市产品质量监督检验所,烟台市质量认证咨询中心,山东烟台264003;烟台市产品质量监督检验所,烟台市质量认证咨询中心,山东烟台 264003;烟台市产品质量监督检验所,烟台市质量认证咨询中心,山东烟台 264003【正文语种】中文【中图分类】O657.7作为治疗男性性功能障碍的处方药物，伐地那非、西地那非和他达拉非严禁在食品和保健食品中添加。
药物检验分析中应用超高效液相色谱法的研究
张朋翠 1 李述溪 21.青岛黄海制药有限责任公司山东青岛2660002.浙江普利药业有限公司浙江杭州310000摘要：本文主要目的就是对超高效液相色谱法（UPLC，Ultra Performance Liquid Chromatography）在药物检验中的应用效果进行分析。
采用的方法就是，选择利福平、吡嗪酰胺与异烟肼样品，以高效液相色谱法（HPLC，High Performance Liquid Chromatography）方法为对照组，以UPLC为研究组，对比相应检验的方法。
发现，相比于HPLC方法的分析时间，UPLC方法的分析时间更短，而检验结果的差异具有统计学意义。
最终确定，借助UPLC方法能够充分提高检验效率。
关键词：药物检验；UPLC；研究分析前言：UPLC主要是基于HPLC发展而来的技术。
检测效率非常突出，并增加了色谱峰容量、灵敏度以及分析通量等优势，同时在液相实验中得到广泛应用。
基于社会快速发展以及民众生活水平提升过程中，民众在药物、食品质量等方面要求不断提升，相关分离解析技术得到快速更新与发展。
UPLC能够快速检测样品中各种组分，便捷地处理样品，进行自动化检测，具有广泛应用范围，可以快速分离，为药品监测以及食品质量安全等方面提供良好检测方法[1]。
1方法与资料1.1资料样品选择常州制药公司生产的利福平、成都锦华公司生产的吡嗪酰胺、沈阳红旗公司生产的异烟肼，结合相关检验方法设计研究组与对照组，同时比较两组资料，P＞0.05差异没有统计学意义。
1.2方法对照组选择HPLC方法开展检测工作，具体操作如下：选择10g利福平、10g吡嗪酰胺、10g异烟肼，将样品磨成粉末，将适量粉末装入500ml量瓶中，在溶解、稀释以及过滤等操作之后，在200—400mm紫外波长条件进行扫描（在210mm波长进行测定，选择Waters Sunfire C18色谱柱，规格为：5um，250×4.6mm；以乙腈-0.075mol/L磷酸二氢钾溶液（5:5）为流动相，取样品溶液（20ul），注入HPLC中，并记录色谱图[2]。
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高效液相色谱串联质谱在药物分析中的
应用
摘要：高效液相色谱是利用物质的理化特性，让其在固定相和流动相之间相
互作用，从而达到分离和分析的目的，具有简便、灵敏、快速、重复性好、准确
等特点，被广泛应用在各个领域。
本文综述了高效液相色谱串联质谱在药物有关
物质分析中的应用和重要作用。
关键词：高效液相色谱；高效液相色谱串联质谱；药物分析
1.引言
俄国植物学家茨维特早在1906年研究叶绿素的分离时发现了色谱法，时至
今日，色谱法有了巨大的进步，比如常用的有气相色谱法（GC）、高效液相色谱
法（HPLC），高效液相色谱又可以分为正相和反相液相色谱、离子交换液相色谱、体积排阻液相色谱等等。
高效液相色谱具有操作简便、分析速度快、重复性好等
优点，常用的检测器有紫外检测器（UV）、二极管阵列检测器（DAD）、荧光检
测器（FLD）、质谱检测器（MS）、飞行时间质谱检测器（Q-TOF）等，其中质谱
检测器和和飞行时间质谱检测器具有高灵敏度、高分辨率的特点。
在制药领域中，高效液相色谱法得到了广泛的应用[1]。
在化学药品的分析中，由于成分含量低，检测较困难，高效液相色谱则很好的解决了这个问题；在中药
的分析中，由于其成分复杂，含量不高，且相似物多，给分析检测带来了一定难度，运用高效液相色谱法则突破了这个限制；在生物制药中，高效液相色谱法，
尤其是液质联用技术对药物的分析、质量控制等方面发挥着重要的作用，如用
Qda质谱检测器（Waters公司）检测单抗中N糖[2],对单克隆抗体质控方法的建立[3]等。
此外高效液相色谱法对于在职业病的发现方面也提供了很好的助力[4]。
2.高效液相色谱串联质谱的特点和在药物分析中的应用
早在1921年就诞生了第一台质谱仪，到现在有了将近百年的发展，在质谱技术发展初期，主要是对物质中的同位素进行测定，随着色谱质谱联用技术的不断发展，其应用领域不断扩大，在生物学、医药等领域都有着很好的应用，成为了必不可少的分析技术手段之一。
高效液相色谱仪与质谱仪之间由离子源进行了连接，现在使用最为普遍的是大气压电离，分为大气压电喷雾电离（ESI）和大气压化学电离（APCI）两种电离模式的离子源，大气压电喷雾电离（ESI）适用于极性强、分子量大的有机物质，易形成多电荷离子，故可测大分子；大气压化学电离（APCI）适用于极性弱、分子量较小的物质，主要产生单电荷离子，限于质量检测器质量分析范围，一般测试分析分子量在1000以下的有机物质。
高效液相色谱串联质谱技术把高效液相色谱的高分离特点和质谱的高分辨率特点相结合，形成了具有高分离度、高分辨能力、应用范围广和专属性强等特点的分离分析技术。
在制药领域，高效液相色谱串联质谱技术发挥了非常重要的作用，在药物的原料药、中间体、生产和储存过程中都可能产生杂质，同时在药物的降解过程中（如：热不稳定、光照、氧化等作用下）也会产生杂质。
根据ICH 指导原则，杂质含量≥0.1%或1.0mg的情况，需要鉴别杂质的物质结构；在2020版《中国药典》中也规定到：新药研制部门对在合成、纯化和贮存中实际存在的杂质和潜在的杂质，应采用有效的分离分析方法进行检测。
对于表观含量在0.1%及其以上的杂质以及表观含量在0.1%以下的具强烈生物作用的杂质或毒性杂质，予以定性或确证其结构。
对在稳定性试验中出现的降解产物，也应按上述要求进行研究。
新药质量标准中的杂质检查项目应包括经研究和稳定性考察检出的，并在批量生产中出现的杂质和降解产物，并包括相应的限度，结构已知和未知的这类杂质属于特定杂质。
在美国药典的正文中规定：列为特定杂质的杂质，其控制限度不高于美国药典的限度。
此外，根据FDA指南中的“药物中的杂质”，杂质的含量小于0.1%时，一般不必进行鉴定，然而，对于那些可能有异常作用的、杂质浓度小于0.1%也可以产生毒性或药理作用的潜在杂质也应当进行鉴定。
药物中的杂质大多数具有潜在的生物活性，有的与药品相互作用，能影响药物安全性及效能，甚至产生毒性作用。
通过高效液相色谱的高分离特点，可以把药物中的杂质进行分离分析，特别是一些微量杂质，再通过质谱仪把分离出来的物质进行单级或多级的碎片化处理，获得相对应的碎片化离子信息，就可以鉴别、推导出杂
质的结构，获得物质信息，对药物的安全使用提供了很好的依据，在药物的纯化
和工艺改进过程中起到了至关重要的作用。
刘永福[5]基于高效液相色谱串联质谱，建立了一种简单有效的血浆多肽提取方法，通过液质联用技术的多反应监测法成
功实现了目标多肽和蛋白质定量测定，优化了血浆内源性多肽提取方法，该方法
可以推广到复杂样品中的多肽和蛋白质的定量分析。
3.高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用仪的特点和在药物分析中的应
用
高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱（HPLC-Q/TOF）是液质联用技术中很有
代表性的技术之一，是由四级杆（Q）和飞行时间质谱（TOF）串联组成的质谱，
飞行时间质谱分析系统的工作原理是离子受到加速电压的作用离开离子源后，在
一个无场趋于内飞行直至抵达检测器，各种质荷比的离子接受相同动能，由于它
们的质量各不相同，因而速度有差异，较轻的离子具有较高的速度，而较重的离
子速度较慢，所以达到检测器的时间也就不尽相同，达到了高分辨的效果。
四级
杆-飞行时间质谱仪主要是由离子源、四级杆、碰撞池、检测器、飞行管等部件
组成，目前常用的离子源为大气压电喷雾离子源（ESI）。
HPLC-Q/TOF不仅有高
效液相色谱的高分离度，还有四级杆的高选择性和飞行时间质谱的高分辨率的特点，能准确的检测到物质的精确分子量，且检测的分子量范围大、扫描速度快等，由于能提供精确质量数，所以可建立精确质量数据库，包括化合物的名称、分子式、精确分子量及保留时间等信息，通过检测得到的精确分子质量数与数据库进
行匹配，可以获得化合物的化学式，使化合物的鉴定更加准确；即使在没有对照
品的情况下，也能通过数据库检索快速准确地进行定性检测。
基于HPLC-Q/TOF技术的特点和其优越性，已被广泛应用于医学中的临床医学、医药、生物制药中多肽和糖类的检测等众多领域中。
杨帆[6]运用液质联用技
术分析了成年SD大鼠血液-脑脊液屏障( 即脉络丛组织)中的多肽组，共鉴定到163个多肽(P<0.001)，为SD大鼠脉络丛组织的生理功能研究及组织多肽组学的
研究方法提供了有价值的科学资料。
3.讨论与展望
目前市场上占有率比较高的仪器主要包括安捷伦（Agilent）、赛默飞世尔（Thermo Fisher Scientific）、沃特世（Waters）等供应商。
而且随着近些年来科技的高速发展，尤其是设备智能化的快速发展，仪器的软件升级越来越往简便化、智能化的方向发展，同时设备的硬件也越来越精密，使得仪器性能不断的提高，以满足越来越复杂的分离分析需求。
因其分离速度快、进样量小、样品前处理简单、分离度高、溶剂消耗少、分辨率高等优势，成为了药物的分析工作中必不可少的技术手段之一，为药物的纯化、工艺改进、杂质的发现和鉴定提供了重要的数据支撑，在药物质量控制体系建立的过程中发挥了非常重要的作用。
参考文献
[1]雷胜勇，宋丽明，蒋庆峰，液质联用技术在药物的有关物质分析中的应用，现代仪器，2011,17(4):9-13.
[2]王文波，于传飞，张峰，超高效液相色谱串联Ｑｄａ质谱法检测单抗Ｎ糖的研究，中国药学杂质，2018,53(3):223-227.
[3]张峰，于传飞，王文波，人源化抗血管内皮生长因子单克隆抗体质控方法的建立，中国药学杂质，2016,51(13):1101-1106.
[4]刘婕，梅勇，王娅男，高效液相色谱法测定尿中甲基马尿酸的规范化研究，中国卫生检验杂志，2013,23(3)：547-550.
[5]刘永福，贾小芳，腾珍林等，液质联用多反应监测法定量目标多肽或蛋白质，中国生物化学与分子生物学报，2012，28(1):86-92.
[6]杨帆，敬海明，张拓等，MALDI-TOF/TOF和LC-MS/MS液质联用分析大鼠脑脉络丛的多肽组，中国生物化学与分子生物学报，2010，26(7):659-671.
作者简介：
方杰明（1988—），男，汉族，浙江省衢州市，研究生，单位：南昌大学，研究方向：生物制药技术。