实验二十三 对乙酰氨基酚在家兔体内药物动力学研究
课程名称生物药剂学与药物动力学实验.
课程名称：生物药剂学与药物动力学实验英文名称：the Experiment of Biopharmaceutics and Pharmacokinetics课程性质：专业实验课程代码：50505515面向专业：药学专业实验讲义名称：现代药学实验教程编写单位：四川大学华西药学院编写日期：2005年 7月主编：吴勇、成丽一、课程时学分实验总学时：32学时实验总学分：1.5学分二、实验的地位、作用和目的实验课是生物药剂学与药物动力学课程中必不可少的重要的实践环节，通过实验，使课堂中讲授的重要理论和概念得到验证、巩固和充实，并适当地扩大知识面，加深学生对课堂教学内容的理解，掌握生物药剂学与药物动力学实验的设计及数据的处理方法，掌握实验方法在医药学相关领域的应用，掌握专业实验技能，培养学生独立思考和独立工作能力以及科学的工作态度和习惯。
授课对象为药学专业的本科生。
三、实验方式与基本要求1．由指导教师讲清实验的基本原理、要求、实验目的，注意事项及主要设备的操作方法；2．实验小组人数为5～6人，每个实验时间为6～8学时，由学生独立操作完成实验。
3．学生完成规定的实验内容后，所记录的现象和数据、使用的仪器和负责的清洁工作，经指导教师检查，符合要求，方可离开实验室。
4．教学实验除验证课堂理论外，并要求掌握相关实验仪器的工作原理和使用方法。
四、实验报告1.实验报告应包括：实验目的、实验内容、实验原始记录、结果、结论、讨论等部分的内容；2.每个实验的实验报告应于实验结束后第三天，交实验指导老师处批改；3.实验结束时，实验报告中的原始记录应由指导教师检查并签字。
五、考核与报告1．实验完成后，由学生将实验过程、原理、目的及实验结果整理成报告。
2．指导教师对每个实验报告进行批改、评分。
六、设备仪器及试剂配置每组学生配置下列主要仪器：1 电子分析天平1台2 溶出测定仪1台3 紫外分光光度计1台4 高速离心机1台5 恒温水槽1台6 超声仪1台7 漩涡混和器1台8 高校液相色谱仪1台9 恒流输送泵1台10 玻璃仪器略。
对乙酰氨基酚在大鼠体内药动学研究
对乙酰氨基酚在大鼠体内药动学研究蒙光义;王柳萍;严明;许盈;杨斌【期刊名称】《广西医学》【年(卷),期】2010(032)002【摘要】目的应用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定大鼠血浆中对乙酰氨基酚浓度,研究单剂量口服不同剂量对乙酰氨基酚片在大鼠体内的药代动力学.方法 3组SD大鼠分别按体重单剂量口服对乙酰氨基酚片300 mg/kg、600 mg/kg、1 200 mg/kg后,采用RP-HPLC测定血浆中药物的浓度,绘制血药浓度-时间曲线,计算其药代动力学参数.结果 3个剂量组的对乙酰氨基酚药-时曲线均符合口服吸收的一级动力学二室模型,主要药代动力学参数:Tmax分别为(0.78±0.17)h、(1.07±0.12)h、(1.19±0.12)h;Cmax分别为(158.99±26.08)μg/ml、(226.26±20.38)μg/ml、(402.95±86.46)μg/ml;T1/2kα分别为(0.24±0.09)h、(0.39±0.11)h、(0.43±0.14)h;T1/2ke分别为(3.78±0.33)h、(3.66±0.32)h、(4.33±0.47)h;AUC0→24分别为(718.71±143.03)μg·h-1·ml-1、(1578.53±246.76)μg·h-1·ml-1、(3 734.67±665.58)μg·h-1·ml-1;AUC0→∞分别为(757.16±155.29)μg·h-1·ml-1、(1 594.61±247.11)μg·h-1·ml-1、(3847.99±692.03)μg·h-1·ml-1.结论所建立RP-HPLC法能够准确地测定对乙酰氨基酚血药浓度,能满足药代动力学的研究需求;低剂量组和中剂量组的药代动力学过程基本相似,但高剂量组则与上述两组则有所不同,这可能与其剂量过高有关.【总页数】5页(P133-137)【作者】蒙光义;王柳萍;严明;许盈;杨斌【作者单位】广西医科大学药学院,南宁市,530021;广西中医学院药学院,南宁市,530001;广西医科大学第一附属医院,南宁市,530021;广西医科大学药学院,南宁市,530021;广西医科大学药学院,南宁市,530021【正文语种】中文【中图分类】R971.1【相关文献】1.雷公藤甲素在正常大鼠和佐剂性关节炎模型大鼠体内的药动学研究 [J], 陈凯丽;易剑峰;翟文静;孙兰;孙文2.吴茱萸碱脂质体在大鼠体内的药动学及小鼠体内的组织分布研究 [J], 邢玉桂3.对乙酰氨基酚家兔体内药动学研究 [J], 关皎;王丹;郝乘仪;朱鹤云;张秀荣4.对乙酰氨基酚家兔体内药动学研究 [J], 关皎;王丹;郝乘仪;朱鹤云;张秀荣5.利格列汀凝胶的大鼠体内药动学研究 [J], 肖学成;邢天嫣;曹国胜;卢山;向兰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
生物药剂学与药代动力学实验实验二家兔头孢呋辛酯头孢呋辛钠单次给药药代动力学研究给药与样本采集20170516
实验原理
➢ 实验动物的选择原则 一般采用成年和健康的动物。常用动物有小鼠、大鼠、兔 、豚鼠、犬、小型猪和猴等。动物选择的一般原则如下 ：
1. 首选动物：在考虑与人体药代动力学性质相关性的前提 下，尽可能选择与毒理学和药效学研究相同的动物。
2. 尽量在动物清醒状态下进行试验，最好从同一动物多次 采样获取药代动力学参数。
实验操作
（2）头孢呋辛钠注射液 12.5 mg/mL头孢呋辛钠注射液：取注射用头孢呋辛钠粉 针1瓶（1.5 g/瓶），用120 mL生理盐水溶解并全部转移至 烧杯中，按25 mg/kg体重（即2 mL/kg，注射液体积（mL ）/动物体重（kg））量取药液。该浓度药液适用于25 mg/kg剂量组注射给药。
实验原理
➢ 给药途径与给药剂量的选择原则
所用的给药途径和方式，应尽可能与临床用药一致，也要 兼顾药效学研究和毒理研究的给药途径。 动物体内药代动力学研究应设置至少三个剂量组，不同物 种之间可根据体表面积或药物暴露量进行剂量换算。
成人临床推荐剂量500 mg/日
家兔给药剂量=500*0.07/1.5=23 mg/kg
箱中，勿丢弃于垃圾桶； 11. 实验结束处死兔子。
实验操作
灌胃给药
①将免置于固定箱内； ②另一只手开口器插入兔口，而后 翻转几下，使兔舌伸直并固定之； ③另一人将导尿管从开口器中央孔 插入口内，再慢慢插入食管和胃， 深15 ~18 cm。插管时感觉顺利， 动物不挣扎也无呼吸困难出现，表 示导尿管在胃内，为慎重起见，将 导尿管外端插入水中，如有气泡吹 出，表示已误入气管内，应拔出重 插，如未见气泡出现即证实在胃内； ④将药液注入。
实验原理
3. 创新性药物应选用两种或两种以上的动物，其中一种为 啮齿类动物；另一种为非啮齿类动物（如犬、小型猪或猴 等）。其他药物，可选用一种动物，建议首选非啮齿类动 物。在动物选择上，建议采用体外模型比较动物与人代谢 的种属差异性，包括代谢反应类型的差异和代谢产物种类 及量的差异。通过比较，选取与人代谢性质相近的动物进 行非临床药代评价；同时尽可能明确药物代谢的研究对象 （如：原形药物、原形药物与代谢产物、或几个代谢产物 同时作为药代动力学研究观察的对象）。 4.经口给药不宜选用兔等食草类动物。本实验仍选择家兔 作为实验动物的原因是：温顺、体型较大便于操作。
4中药缓释释药技术及设备
4中药缓释释药技术及设备缓控释制剂是药物与缓控释辅料，通过一定的方法制备来达到缓控释作用，4.1中药缓释固体分散技术固体分散技术是将药物高度分散于载体中，形成一种以固体形式存在的分散系统的方法，得到的药物-载体固体分散物称为固体分散体。
以水不溶性聚合物、肠溶性材料、脂质材料为载体制备的固体分散体，不但具有提高生物利用度的作用，而且具有延缓药物释放和延长药效的作用。
水溶性药物及难溶性药物均可用固体分散技术制得缓控释制剂，选择适宜的载体及用量配比，可获得理想的缓控释释药系统。
缓控释固体分散体常用的载体有乙基纤维素、蜡脂、Eudragit等。
常用的制备方法有熔融法、溶解法、熔融-溶解法。
4.1.1熔融法熔融法是将载体加热熔融后，加入药物搅溶，或者将药物与载体混匀后，用水浴或油浴加热至熔融，然后将熔融物在剧烈搅拌下，迅速冷却成固体或直接灌注胶囊后冷却。
本法简单，但不适用于不耐热的载体及药物。
如：炔诺酮固体分散体，即将药物与胆固醇混合加热熔融，熔融物与乳糖混合填入明胶囊，脂质载体降低了药物的溶出速率，从而延缓药物的释放，达到缓释作用。
唐翠[1]等采用熔融法制备对乙酰氨基酚缓释微丸，将药物与固体石蜡、单硬脂酸甘油混合，加热至熔融，剧烈搅拌，冷却，过筛，得到体外具有较理想释药行为的缓释微丸。
[1]唐翠等,熔融法制备对乙酰氨基酚缓释微丸.中国医药工业杂志.2000,31(1):12 尔艳[2]等用熔融高速搅拌法制备氢氯噻嗪缓释微丸, 通过对处方和工艺进行优化和筛选，结果以固体石蜡和单硬脂酸甘油酯为粘合剂，在64℃、700r／min条件下操作，成粒子后再加入少量固体石蜡和钙盐，继续搅拌，降温整粒8min可得圆整的缓释微丸，12小时释药达70%以上,有较好的缓释作用。
[2]尔艳等,熔融高速搅拌法制备氢氯噻嗪缓释微丸.沈阳药科大学学报.2001,18(4):2474.1.2溶解法溶解法又称共沉淀法或共蒸发法，是将药物与载体同时溶于有机溶剂中或药物与载体分别溶于有机溶剂中后混合均匀，然后蒸发除去溶剂或采用喷雾干燥法而得到固体分散体的方法。
酚磺肽(PSP)药代ok
一室模型 一级动力学
血药浓度-时间曲线如图: 血药浓度-时间曲线如图:
【实验动物】 实验动物】
1、2、3均为不正确的抓取方法 （1．可损伤两肾，2．可造成皮下出血，3．可伤两耳） 4、5为正确的抓取方法 颈后部的皮厚可以抓，并用手托住兔体。
家兔台式固定法
【实验步骤】 实验步骤】
取家兔一只， 称重、固定、麻醉（25%乌拉坦， 3.5ml/kg ）。（耳缘静脉慢慢推注，耳尖开始） 仰卧，固定，切开颈部皮肤，暴露颈浅静脉（往下有 分叉），穿线备用 ，插管（管中注满肝素），固定插 管。 vein head cannula Injector heart
PSP在家兔体内血药浓度的测定方法
标准管 血浆 标准液 稀释液 — 0.1 1.9 药前 0.1 — 1.9 测 定 管 5min 10min 15min 0.1 — 1.9 0.1 — 1.9 0.1 — 1.9 25min 0.1 — 1.9
吸液枪是固定的。共3 吸液枪是固定的。共3只。分别用于吸血浆、标准品、稀释液。 以稀释液调零，分别测定6 以稀释液调零，分别测定6个A值： A标准、A药前、A药后5min、A药后10min、A药后15min、A药后25min 药后5min 药后10min 药后15min 药后25min
y = a + bx
计算药代动力学参数
Log Ct ＝ Log C0 － k/2.303 × t 截距：a 斜率：b
y = a + bx
计算药代动力学参数
消除速度常数(k)= 2.303× 消除速度常数(k)= -2.303×b; 起始血药浓度(C = 起始血药浓度(C0)= 10a; 半衰期(t 半衰期(t1/2)=0.693/k; 表观分布容积(Vd)=D 表观分布容积(Vd)=D0/C0 (D0为给药剂量, C0为起始血药浓度); 为给药剂量, 为起始血药浓度); 清除率(CL)=Vd× 清除率(CL)=Vd×k
家兔麻醉实验实验报告
一、实验目的1. 了解家兔麻醉的基本原理和方法。
2. 掌握家兔麻醉过程中麻醉药物的选用、给药途径及注意事项。
3. 观察家兔在麻醉过程中的生理变化，为临床麻醉提供参考。
二、实验原理家兔麻醉实验是通过使用麻醉药物，使家兔暂时失去意识和痛觉，便于进行手术操作或观察生理变化。
实验中常用的麻醉药物有吸入性麻醉剂、静脉麻醉剂和局部麻醉剂等。
本实验主要采用静脉注射的方式给予家兔麻醉药物。
三、实验材料与器材1. 实验材料：家兔一只，25%氨基甲酸乙酯（乌拉坦）溶液，生理盐水，注射器，手术器械等。
2. 实验器材：手术台，手术显微镜，心电图仪，血压计，呼吸机，体温计等。
四、实验步骤1. 麻醉前准备：将家兔放入安静、舒适的环境中，观察其基本情况，如活动能力、呼吸、心率等。
然后将家兔固定在手术台上，准备手术器械和麻醉药物。
2. 麻醉药物选择：本实验采用25%氨基甲酸乙酯（乌拉坦）溶液作为麻醉药物。
3. 给药途径：通过耳缘静脉注射给药。
首先用酒精棉球消毒家兔耳缘静脉，然后用注射器抽取25%氨基甲酸乙酯溶液，缓慢注射，剂量为1g/kg体重。
4. 麻醉观察：注射麻醉药物后，密切观察家兔的生理变化，如呼吸、心率、瞳孔、肌肉松弛等。
当家兔出现呼吸减慢、心率减慢、瞳孔缩小、肌肉松弛等麻醉现象时，说明麻醉成功。
5. 麻醉深度监测：使用心电图仪和血压计监测家兔的心率和血压，了解麻醉深度。
在麻醉过程中，根据家兔的生理变化调整麻醉药物剂量。
6. 麻醉维持：在实验过程中，根据家兔的生理变化，适当追加麻醉药物，维持麻醉状态。
7. 实验结束：实验结束后，停止给药，待家兔逐渐清醒。
五、实验结果与分析1. 家兔在注射25%氨基甲酸乙酯溶液后，呼吸减慢、心率减慢、瞳孔缩小、肌肉松弛，表明麻醉药物已发挥作用。
2. 麻醉过程中，家兔的心率和血压有所下降，但随着麻醉深度的增加，心率、血压逐渐恢复。
3. 实验过程中，家兔的生理变化符合麻醉药物的作用规律。
六、实验总结1. 本实验成功实现了家兔的麻醉，为临床麻醉提供了参考。
实验二传出神经药物对家兔血压、心率的影响
实验二传出神经药物对家兔血压、心率的影响【实验目的】1、观察传出神经药物对血压、心率的影响。
2、掌握各药作用原理及其临床意义。
【实验原理】对家兔麻醉手术后记录其血压、心率，通过观察比较给药前后、不同药物之间及药物单用与序贯应用多种药物之间这三项指标的变化，说明各药对家兔血压、心率的影响及其作用原理【材料和方法】一、实验动物：家兔(2—2.5kg)二、实验器材和药品：BL-410生物实验系统、压力换能器1个、心电图导联线1套、哺乳动物手术器械1套、动脉导管1个、动脉夹1个、头皮针1个、烧杯2个、铁支架1台、双凹夹4个、气管导管1个、螺旋夹1个、10ml注射器1支、兔腿绳5根、丝线、纱布块、搪瓷碗1个。
20%氨基甲酸乙酯、1000u/ml肝素、生理盐水、0.1%盐酸肾上腺素、0.1%重酒石酸去甲肾上腺素、0.5%酚妥拉明、0.01%硫酸异丙肾上腺素溶液、0.1%普萘洛尔溶液、0.01%氯化乙酰胆碱、1%硫酸阿托品。
三、方法与步骤：(一)动物手术：称体重，从一侧耳缘静脉插入头皮针，并固定。
用20%氨基甲酸乙酯3-5ml/kg静脉注射麻醉，固定于解剖台上，剪去颈部毛，于颈部正中切开皮肤。
分离一侧颈总动脉，行颈总动脉插管术。
(二)仪器连接：动脉插管与压力换能器连接以记录血压。
连接心电图导联线以记录心电图。
(三)观察指标：收缩压、舒张压、脉压、心率(四)记录方法：1．将压力换能器连接在颈总动脉插管上，输入1通道，以直接测压法测量动脉血压。
2．2通道记录标准II导联心电图(ECG II)。
注意接地。
(五)观察项目：1、记录给药前血压、心电图。
2、按顺序经耳缘静脉注射给药,并记录每次给药后上述二项指标,待血压恢复至给药前的水平后再给下一个药物。
(1)0.01%乙酰胆碱溶液 0.1ml/kg缓慢注射。
(2)1%硫酸阿托品溶液 0.1-0.2ml/kg。
(3)5分钟后，再重复(1)。
(4)0.01%肾上腺素溶液 0.1ml/kg。
药代动力学实验：实验一 家兔血浆中头孢呋辛分析方法的建立
注意事项
➢ 注意有机溶剂的安全使用。 ➢ 注意对EP管进行编号，避免不同浓度的样品混
淆。 ➢ 操作过程中，注意枪头的更换，避免样品之间
的污染。 ➢ 高效液相色谱仪的使用：详见教材 ➢ 需注意标准曲线的作图规范性。
血浆样本预处理
（1）待测样本（标准曲线和质控血浆样本）涡旋10 s， 加入甲醇300 μL，涡旋1min，静置3 min。
（2）12000 rpm离心5 min，取上清液200 μL常温真空 干燥1~2小时。
（3）待溶剂挥干后，加入100 μL甲醇水溶液（水：甲 醇 = 8：2）溶解，涡旋1min，12000 rpm离心5 min。
水=1:1）溶解，得浓度为1.5 mg/mL的储备液，放4℃冰 箱储存。取对乙酰氨基酚储备液100 μL，加入溶液900 μL（甲醇：水=1:1），得浓度为150 μg/mL的内标液。
标准曲线血浆样本制备
➢ 按下表取不同体积头孢呋辛储备液于EP管中，用稀释液溶液（甲 醇：水=1：1）进行梯度稀释，制备一系列不同浓度的标准工作液 （5000 μL）。
➢ 本次实验主要考察线性和准确度
实验操作
• 一、溶液配制 • 1、头孢呋辛标准储备液： • 精密称取头孢呋辛10 mg，加入溶液10 mL（甲醇：水
=1:1）溶解，得头孢呋辛浓度为1.0 mg/mL的储备液，放 4℃冰箱储存。
• 2、内标物标准液： • 精密称取对乙酰氨基酚15 mg，加入溶液10 mL（甲醇：
（4）取上清液60 μL至有内称管的进样瓶（需检查内称 管底部是否有气泡，否则底部有气泡影响进样，有 气泡需甩一下），进样20 μL。
色谱条件
流动相：0.05M磷酸二氢钾：甲醇梯度洗脱， 设置如下：
药代动力学参数的测定
教案（实验课用）磺胺肽在兔体内的药代动力学参数测定1.实验原理：多数药物在体内按一级动力学的规律消除，静脉注射给药后，测定不同时间的血浆药物浓度，并以血浆药物浓度的对数值为纵坐标，时间为横坐标，其时量关系常呈直线。
该直线的方程式为：t kC C t 303.2lg lg 0-=血药浓度的半衰期(t 1/2)： k t 693.02/1=(以h 或min 计)2.实验方法：1.家兔1只，称重，充分拨去耳缘静脉处被毛，剪去家兔左胸及剑突下被毛。
2.试管4只，按1、2、3、4的顺序编号，并各加入10%三氯醋酸3.5ml 。
3.用0.5%肝素钠溶液润湿注射器和长针头的内腔后，心脏穿刺取血2ml ，1号管(对照管)和2号管(标准管)各推入1ml ，摇匀静置。
4.由耳缘静脉缓慢注射10%水杨酸钠溶液2ml/kg 。
5.静注水杨酸钠后的0～10min 和30～60min 期间，从心脏或其他血管各取血1ml ，分别置于3号管(给药管1)和4号管(给药管2)，摇匀静置，记录取血的准确时间。
6.在2号管内加入0.02%水杨酸钠1ml ，其他3支管各加入蒸馏水1ml ，摇匀静置。
7.对4只管进行离心5min ，转速2500r/min ，然后从每一个管精确吸取上清液3ml ，分别置于另一组有相对应编号的试管中，每管各加入10%三氯化铁0.5ml ，摇匀后可显色。
8.在分光光度计520nm 波长下，以1号管为对照校零，然后测定其余各管的光密度值。
9.由标准管的光密度值（Y ）和浓度（X ）求比值K ，即K=X/Y ，再根据X=KY ，由Y1（0～10 min 给药管光密度值）和Y2（30～60min 给药管光密度值）求得X1和X2，然后代入公式求出t 1/2。
3.实验注意事项：1)本实验系定量比较，故每次抽取血样或试液的容量必须准确。
2)顺利地采集足够量的血液是保证实验成功的关键，应具备娴熟的取血技术。
3)如从家兔耳缘静脉取血，可使用二甲苯涂擦皮肤，充分扩张家兔耳血管4.实验 【实验结果】1.将测定数据及计算数据填入下表：试管号 光密度(Y)K 值 实测浓度(ug/ml)1号(对照管) 2号(标准管)3号(0～10min 给药管)4号(30～60min 给药管)2.根据公式计算t 1/2：2/1t=()t X X ∆-21lg lg 301.0式中X 1和X 2分别为两次的血药浓度值，△t 为两次取血的间隔时间。
肾衰药动学
一级动力学
药物在体内消除过程的一种方式。血浆中 药物的消除在单位时间内按一定百分量的恒定 速度逐渐下降。当血浆中药物浓度高时，单位 时间内消除的药量就多，当血浆浓度下降后， 药物消除速度也按比例下降。
家兔称重, 麻醉（30%乌拉坦 3.5mL/kg；麻醉速度；动物反应） 分离颈浅静脉（分离一侧颈浅静脉2-3cm，钝性分离，玻璃分针，留线备用 ）
A0 :用药剂量(mg); C0:初始浓度(x=0, y值求反对数，mg/L) C0=10a
➢总清除率Cl = Vdke （L.kg-1.min-1）
思考题
常用的肾衰动物模型有哪些，制作原理是什么？ 该实验设计有何不足之处？ 正常与肾衰家兔对PSP排泄有何区别？ 简述药代动力学参数Ke、t1/2、Vd、Cl的概念及意义。 如何求出表观分布容积Vd，如何理解其实际意义？
分离双侧肾动脉（将兔沿腹白线剖开，找到两侧肾动脉，留线备用）
右侧肾动脉结扎，左侧肾动脉夹闭（对照组4-5组仅留线备用，不结扎、不夹闭）
实
验
40分钟后，松开夹闭侧肾动脉，取血 1mL（空白）
步
耳缘静脉给药（0.6%脉取血 1mL（5，10，15，25min）
离心3500r/min，10min（离心完毕勿振摇） 取上清0.2ml，加稀释液3mL，混匀
比色（560nm）
全班分5组: 2组肾动脉分离不结扎(空白组) 3组结扎(对照组)
注意事项
兔颈部视野打开，血管尽量与肌肉等组织分开 血液应全身肝素化防止凝血 记下实际的取血时间，用于计算 血液沿管壁缓慢流入试管（防溶血），轻轻摇匀（防凝血） 试管作好标记，以免前后次序搞错
数据处理及参数计算
(1)PSP血浆浓度计算：
平均吸收系数(K)值=0.048 PSP血浆浓度（mg/L） =A/K*16*0.354
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101
实验二十三 对乙酰氨基酚在家兔体内药物动力学研究
一、 实验目的
１．通过实验初步掌握兔体内血药浓度测定方法。
２．掌握血药浓度法计算药物动力学参数的方法。
二、 实验指导
血管外给药一般属于一级吸收和一级消除，一级吸收药物动力学参数的求算，可以采用计算机拟合的方法求得。
当药物符合单室模型时，药物的表观一级消除速度常数K 和一级吸收速度常数K a 可以用残数法求得。
一级吸收药物血药浓度的经时过程可用下式表示：
C=
)
(K Ka V KaFXo
−（e -Kt —e -Kat ） （1） 当K a >>K ，t →∞时，则e -Kat →0，
（4）式变为： C=
)(K Ka V KaFXo
− e -Kt （2） （2）式对数形式为： logC=log
)(K Ka V KaFXo −—303
.2Kt
(3)
以logC 对t 作图得二项指数曲线，其末端为一直线，其斜率为-
303
.2Kt
可求得K 值见图1
式（2）减去式（1）得外推线上血药浓度与实际血药浓度之差的浓度（Cr ）与时间的关系。
C r =)
(K Ka V KaFXo −e -Kat
（4）
式（4）两边取对数得残数线
logC r =log
)(K Ka V KaFXo −—303
.2Kat
(5)
102
以logCr 对t 作图可得直线（见图1 Ⅱ线）
，其直线斜率为-303
.2Ka。
可求得k a
值。
对乙酰氨基酚是一种常用的解热镇痛药，口服后在人体内吸收迅速。
对乙酰氨基酚的剂型有：片剂、胶囊剂、糖浆剂、栓剂等。
为了
了解对乙酰氨基酚在体内的经时过程给家兔肌肉注射、静脉注射、口服给药对乙酰氨基酚，测定血药浓度，并计算药物动力学参数。
血药浓度测定方法测定原理（方法B ）
对乙酰氨基酚水解生成对氨基苯酚。
对氨
基苯酚在次溴酸钠的存在下，能与苯酚产生反应，生成靛蓝染料。
靛蓝染料在波长620nm 处有最大吸收。
为了排除血浆中蛋白的干扰，测定血药浓度时，首先应加入适量20%的三氯醋酸沉淀蛋白。
三、 实验内容与操作
（一）、实验设计
1．肌肉注射
（1）先准备10支离心试管，洗净，并经100unit/ml 肝素溶液（配法为肝素注射
Ⅰ 303.2K
−
logC
Ⅱ 303
.2Ka −
t
图1 残数法求K 及Ka
CH 3-C-N-O H -OH+H 2O HCl 3COOH+H 2N--OH H 2N--OH NaBrO O N-OH O N-OH+H-O N--OH +H 2O -N O O N O -O -
剂一支溶于250ml生理盐水中）处理，烤干（105℃），标上号码备用。
（2）注射液的配制：称取对乙酰氨基酚0.5g，置小烧杯中，加50%丙二醇水溶液5ml，加热，使溶解，得对乙酰氨基酚溶液，浓度为100mg/ml，备用。
（3）空白（无药）血样的制备：将家兔耳缘静脉处毛除掉，涂擦酒精，用红外灯烤2min，将耳静脉纵向切开，用肝素化试管采血，在刀口处敷以棉球，用夹子夹住止血。
（4）给药及取血方法取体重3kg左右健康家兔，按100mg/kg剂量于家兔后肢肌肉注射对乙酰氨基酚溶液，给药后于10、20、30、60、90、120、150、180、210、240、300、360min时采血约2-3ml，置于肝素化的离心试管中。
立即精密量取全血400μl.然后按（A法）标准曲线项下测定血药浓度。
其余全血离心10min（3500r/min），精密取血浆500μl至一编号的洁净干燥小试管中，然后按（B法）标准曲线项下测定血药浓度。
(5) 实验注意事项
家兔肌肉注射选用6号或7号针头；对乙酰氨基酚在50%丙二醇中加热可溶解，放冷可析出沉淀，给药时取刚放冷的溶液（沉淀尚未析出）。
为防止在注射过程中药物析出，针头及注射器也要在水中预热；实验期间家兔自由进食和饮水。
（二）血药浓度测定方法
A法
1．标准曲线的制备
精密称取对乙酰氨基酚精品10mg，置100ml容量瓶中，以蒸馏水溶解并稀释至刻度，使成100μg/ml的标准溶液，分别吸取0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，加蒸馏水使成10ml，然后各加家兔血400μl混匀，各加0.06mol/L氢氧化钡溶液3.5ml，摇匀，放置4分钟，再各加2%硫酸锌溶液3.5ml、蒸馏水到10ml，用一层滤纸过滤，取续滤液，用分光光度计在245nm处测定吸收度，用空白全血作空白对照。
（空白对照液的配制：取空白全血400μl，加蒸馏水1ml，以下操作同标准曲线的制备。
）数据按直线回归，得到回归方程式。
2．样品的测定
将采取的血样吸取400μl，加蒸馏水1ml，以下操作同标准曲线的制备，根据标准曲线的回归方程计算血样中药物的浓度。
B法
1．试剂的配制
（1）20%三氯醋酸溶液：称取三氯醋酸20g，加蒸馏水溶解，并稀释至100ml，
103
即得。
（2）4mol/L盐酸溶液：取33.2ml浓盐酸，加蒸馏水稀释至100ml，即得。
（3）40%氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠40g，加蒸馏水溶解，并稀释至100ml，即得。
（4）0.2mol/L氢氧化钠溶液：称取8g氢氧化钠，溶解于蒸馏水中，并稀释至1000ml，即得。
（5）1%酚溶液：吸取1ml液化酚（含量99%以上）溶解于蒸馏水中，稀释至100ml，即得。
（临用前新鲜配制）
（6）0.5mol/L碳酸钠-溴溶液：称取106g无水硫酸钠。
溶解于蒸馏水中，添加15ml饱和溴水溶液混合均匀，并稀释至100ml，即得。
（临用前新鲜配制）（7）饱和溴水溶液：取适量液态溴，加入蒸馏水中，振摇溶解，放置至少24h 后再使用。
（8）显色剂：取0.2mol/L氢氧化钠溶液80ml，加1%酚溶液10ml。
振摇混匀后，加入碳酸钠-溴溶液100ml，混匀，即得。
2．血药标准曲线的制备
（1）标准贮备液：精密称取105℃干燥至恒重的对乙酰氨基酚1g（按含量计算称取）。
用热蒸馏水溶解于250ml容量瓶中，冷至室温后稀释至刻度，置冰箱保存备用（4000μg/ml）。
（2）标准溶液的配制：分别精密吸取上述4000μg/ml的浓贮备液1.25、2.5、3.75、5.0、6.25ml于100ml量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，得50、100、150、200、250μg/ml的标准溶液。
（3）空白（无药）血浆的制备：按空白（无药）血样的制备方法采血约9ml。
然后将刀口贴上棉球，用夹子夹住。
离心得上清液血浆约4.5ml，制备标准曲线用3ml。
剩下放置冰箱供测样品用。
（4）准曲线的制备：取干燥洁净5ml刻度离心管6支，标上管号。
精密吸取各种浓度的标准液0.5ml。
按下表1程序操作，于分光光度计在波长620nm处以无药空白血浆按同法作对照，测定吸收度。
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表1 血药标准曲线制备表
3 样品的测定
将采取的血样吸取500μl，以下的操作按表2程序操作，根据标准曲线的回归方程计算血中药物的浓度。
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表2家兔静脉注射对乙酰氨基酚血药浓度测定表
注：其他各时间操作与试剂用量与10min均相同。
四、实验结果与讨论
1．将血药标准曲线数据列表，并求出回归方程。
同时画图，并用电子计算机核对。
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表3 血药浓度—吸收度数据表
血药浓度（μg/ml）50 100 150 200 250 吸收度A
回归方程
2．肌肉注射血药浓度数据处理
表4 肌肉注射血药浓度数据表
时间（min）0 10 20 30 60 90 120150********* 300 360 吸收度
浓度
(μg/ml)
五、思考题
1．做好本实验的关键是什么？操作中应注意什么问题？
2．如果所求结果不理想，可能的原因是什么？怎样改进？
3．本实验设计是否合理？是否符合交叉设计原理？正确的实验设计应怎样安
排？
4．相对生物利用度应怎样进行实验设计？
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