电针对脑缺血再灌注大鼠缺血区皮质神经细胞凋亡和NFκB表达的影响
电针对局灶性脑缺血大鼠皮质神经细胞铁死亡的影响
电针对局灶性脑缺血大鼠皮质神经细胞铁死亡的影响上官豪;徐维;陈剑豪;黄炼红;葛舒颖;陈可爱;苏清平;张爱香【期刊名称】《现代中西医结合杂志》【年(卷),期】2022(31)17【摘要】目的观察电针曲池、足三里穴对局灶性脑缺血大鼠皮质神经细胞线粒体结构、铁死亡的影响。
方法将36只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组及电针组,每组12只。
模型组及电针组大鼠采用线栓法构建左侧大脑中动脉闭塞脑缺血损伤模型,假手术组不插线栓。
术后对电针组大鼠患侧曲池、足三里穴进行电针,对假手术组、模型组大鼠抓取固定,均30 min/次,1次/d,干预7 d。
术后2 h和干预7 d后对各组大鼠进行mNSS评分评估神经功能缺损情况;干预7 d后处死各组大鼠,取脑组织,TTC染色观察脑梗死体积,透射电镜观察皮质神经细胞超微结构。
结果干预7 d后,电针组大鼠mNSS评分明显低于模型组(P<0.05)。
TTC染色显示电针组脑梗死体积明显低于模型组(P<0.05)。
透射电镜显示模型组大鼠缺血侧皮质神经细胞线粒体损伤严重,形态结构萎缩,线粒体膜密度增加,嵴明显减少或消失,呈典型铁死亡特征表现;电针组大鼠缺血侧皮质神经细胞线粒体呈轻度损伤,形态结构趋于正常,膜密度减小,嵴数目增加。
结论电针曲池、足三里穴可明显改善局灶性脑缺血大鼠神经功能,缩小脑梗死灶,机制可能与抑制神经细胞铁死亡有关。
【总页数】5页(P2365-2368)【作者】上官豪;徐维;陈剑豪;黄炼红;葛舒颖;陈可爱;苏清平;张爱香【作者单位】福建省立医院;福建医科大学附属第一医院【正文语种】中文【中图分类】R-332【相关文献】1.电针对局灶性脑缺血大鼠缺血区脑组织神经细胞凋亡及神经生长因子影响的研究2.电针任督脉对局灶性脑缺血大鼠神经功能和神经细胞凋亡的影响3.电针对局灶性脑缺血大鼠半暗带神经细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、c-Fos蛋白表达的影响4.电针对局灶性脑缺血大鼠神经细胞凋亡及神经生长因子的影响5.电针对局灶脑缺血/再灌注模型大鼠大脑缺血皮质区P2X7R与NLRP3炎性小体表达的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
电针对脑缺血大鼠血管生成素及其受体表达的影响
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ Ｏｂ ｊ ｃｔ ｅ ｉ ｖ ｅ ：Ｔ ｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｗ ｈ ｅ ｈｅ ｔ ｒ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ － ａ ｃ ｕ ｐ ｕ ｎ ｃ ｔ ｕ ｒ ｅ Ｃ Ｓ ｌ ｌ ｉ ｍ ｐ ｍｖ ｅ ｎ ｅ ｕ ｒ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｆ ｕ ｎ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｕ ｐ—
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中 图分 类 号 ： Ｒ ７ ４ ３ ， Ｒ ４ ９ ３
文献标识码 ： Ａ
文章编号 ： １ ０ ０ １ — １ ２ ４ ２ （ ２ ０ ０ ７ ） 一 １ ０ — ０ ８ ７ ７ — ０ ４
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电针对脑缺血再灌注大鼠模型血清中TNF-α含量的影响
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参考 文献
【】 国 家药 典委 员会 ． １ 中国 药典 ｉ］ ｓ． ． 京 ： 二部 北 中国 医药科 技 出版 社
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电针对脑缺血／再灌注模型大鼠双侧脑区IL－1β、ICAM－1表达的影响
电针对脑缺血／再灌注模型大鼠双侧脑区IL－1β、ICAM－1表达的影响宋映周;孙琳琳;任暎贞;张旭辉;许明敏;于淼;郭郁;图娅【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2015(000)003【摘要】Objective To explore the variation trends of interleukin-1β( IL-1β) and intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) in both normal and affected sides of brain tissues in rats with ischemia-reperfusion injury and the therapeutic action of electroacupuncture.Methods The cerebral ischemia-reperfusion model was established with suture embolization in the right middle cerebral artery.The rats were randomly divided into control group, model group and electroacupunture group.Each group was then divided into six subgroups by the time after operation (12 h,24 h,48 h,72 h,96 h,144 h), ten rats in each subgroup. Frozen sections of brain tissues were prepared and the expression of IL-1βand ICAM-1 in brain tissues of both sides were detec-ted by immunohistochemistry.Results The expressions of IL-1βand ICAM-1 showed typical bimodal pattern in both affected is-chemic region and contralateral normal region.In the model group, the peaks of IL-1βin the cerebral ischemic region were at 12 h and 48 h, while in the contralateral normal region the peaks were at 12 h and 144 h, the expression of IL-1βin the ischemic region was significantly higher than that in the contralateral normal region at 48 h (P<0.05), andlower at 96 h and 144 h (P <0.05).In the electroacupuncture group, the expressions of IL-1βin the ipsilateral region were significantly lower than that in the contralateral region at 24 h, 48 h and 144 h (P<0.05).In the model group, the peaks of ICAM-1 in the cerebral ischemic regions were at 24 h and 72 h, while in the contralateral normal regions the peaks were at 24 h and 144 h.In the electroacupunc-ture group, the expressions of ICAM-1 in the ischemic regions were significantly lower than that in the contralateral normal re-gions at all the 12 h, 24 h, 48 h, 72 h and 144 h (P<0.05).Conclusions Our findings suggest that electroacupuncture may inhibit the inflammation of ischemia/reperfusion brain tissue through reducing the expression of IL-1βand ICAM-1 to relieve the cerebral ischemia-reperfusion injury.%目的：探讨脑缺血／再灌注损伤大鼠大脑健、患侧白介素－1β（ IL－1β）和细胞间粘附分子－1（ ICAM－1）的变化趋势及电针对二者的影响。
百会、足三里穴电针预处理对脑缺血再灌注大鼠脑、肠炎性因子的影响
2021年第31卷第6期/RM ·基础研究·百会、足三里穴电针预处理对脑缺血/再灌注大鼠脑、肠炎性因子的影响张继瑶1，唐强2，朱路文2*1黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨150040；2黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江哈尔滨150001*通信作者：朱路文，E-mail：********************收稿日期：2021-04-16；接受日期：2021-08-10基金项目：国家自然科学基金项目（82174477）；黑龙江中医药大学杰出培育基金项目（2019JC03）DOI：10.3724/SP.J.1329.2021.06005开放科学（资源服务）标识码（OSID）：摘要目的目的：：观察百会、足三里穴电针预处理对脑缺血/再灌注大鼠脑、肠血清白细胞介素（IL）-17A、IL-10表达的影响，探讨电针预处理的脑-肠保护作用。
方法方法：：选择36只雄性Sprague-Dawley大鼠，采用随机数字表法分为假手术组（S-con组）、模型组（M-con组）和电针组（EP组），每组12只。
S-con组按大脑中动脉阻塞（MCAO/R）模型制备方法操作，但不阻断脑血流和再灌注；M-con组进行MCAO/R模型制备，120min 后拔线恢复脑血流灌注；EP组选取大鼠百会穴、患侧足三里穴进行电针预处理，最后1次电针干预24h后进行MCAO/R模型制备，120min后拔线恢复脑血流灌注。
于术前1d，再灌注12h，再灌注1、3、7d采用抓力测定仪对前肢抓握力量进行测定；再灌注7d采用ELISA法测定血清IL-17A、IL-10的含量；采用Western blot法检测缺血侧皮层和结肠组织中IL-17A、IL-10蛋白的表达；采用免疫组化法测定缺血侧皮层、结肠组织内IL-17A、IL-10的平均光密度（AOD）值；采用HE染色观察缺血侧皮层病理损伤程度。
结果结果：：①前肢抓握力量：再灌注12h，再灌注1、3、7d，与S-con组比较，M-con组前肢抓握力量均明显降低（P＜0.05）；与M-con组比较，EP组前肢抓握力量均明显升高（P＜0.05）。
电针对脑缺血再灌注大鼠缺血区P53蛋白表达影响
调免毓麟汤中剂量组 ： 大鼠睾丸曲细精管管壁分层结构
良好 ， 精子 、 精原细胞数 目基本正常 ， 发育 尚可。间质细胞数 目管壁分 层结构
病理 性免疫 反应 ［ 。甘草调和诸 药 ， ５ ］ 并有调节免疫功 能的作 用。全方共奏 肾肝 同治 、 补泻兼施 之功 ， 从而起 到纠正免疫
基本正常。
调免毓麟 汤是我们长期临床总结出来 的经验方 ， 中熟 方 地、 巴戟天相伍 ， 阴一 阳， 一 共奏 补益 肾气 之功 。有研 究显
示［， ４ 补肾药对 免疫造 成 的睾 丸损伤 具有 修复作 用 。蒲公 ］ 英、 败酱草清热解毒 ， 利湿散结 ； 丹参 、 川牛膝活血化瘀 引药 下行 。现代药理实验表 明 ， 清热解 毒 、 活血化瘀 药可 以抑制
细胞凋亡在缺血性脑损伤 中的作 用 已经成 为 目前研 究
的热点 ， ５ 目前公认最常见的促凋亡基 因。本实验 通过 Ｐ ３是
显色试剂 （ 北京 中山生物科技有限公司） ４ ； 多聚甲醛（ 武汉 天源生物科技有 限公 司） 。ＨＰＡＳＩ ０ Ｉ －Ｏ ０计算 机高清晰彩色 图像分析仪 （ 中科技大学 同济医学院千屏影像公 司生产） 华 ；
石蜡切片机 （ ｅ ａＲ ２ １ ， 国） 恒温培养仪（ Ｙ Ｌ ｉ Ｍ ０ ５德 ｃ ｝ Ｐ ＤＨ ４， ０上海跃进 医疗器械厂） 。
１ ２ 动 物 及 分 组 造 模 ．
观察 电针对大 鼠皮质神经元 Ｐ ３ ５ 核反应 阳性细胞数的变化 ，
研究 电针抗缺血性再灌注脑组织损伤 的机制 。
丸组织的病理损 害均有不 同程度 的修复 ， 且调免毓麟 汤 中、 高剂量组较之 醋酸强的松组 的修复作用更好。
醋酸强的松组 ； 大鼠睾丸曲细精管轻度萎缩 ， 、 精子 精原细 胞数目轻度减少， 发育尚可。间质水肿 ， 间质细胞空泡变性。 调免毓麟 汤低剂量组 ： 鼠睾丸 曲细精管轻度 萎缩 ， 大 精 子、 精原细胞数 目基本 正常。间质轻度水 肿 ， 间质细胞 数 目
《电针神庭、百会对脑缺血再灌注大鼠认知功能障碍的机制研究》
《电针神庭、百会对脑缺血再灌注大鼠认知功能障碍的机制研究》一、引言脑缺血是一种常见的神经系统疾病，而认知功能障碍是其常见的后遗症之一。
尽管现代医学已经取得了许多进展，但脑缺血后认知功能障碍的治疗仍然是一个挑战。
近年来，电针作为一种非药物治疗方法，在神经康复领域得到了广泛的应用。
本研究旨在探讨电针神庭、百会穴位对脑缺血再灌注大鼠认知功能障碍的机制，以期为临床治疗提供理论依据。
二、材料与方法1. 实验动物与分组实验选用健康成年SD大鼠，随机分为假手术组、模型组、电针组和对照组。
2. 脑缺血再灌注模型制备采用线栓法制备脑缺血再灌注模型。
3. 电针治疗电针组在脑缺血再灌注后进行电针神庭、百会穴位治疗。
4. 认知功能评估采用行为学实验评估大鼠的认知功能。
5. 样本采集与检测在实验过程中，采集大鼠的血液、脑组织等样本，进行相关指标的检测。
三、实验结果1. 认知功能评估结果电针组大鼠在认知功能评估中的表现明显优于模型组。
2. 血液和脑组织检测结果电针治疗后，大鼠血液和脑组织中相关指标发生明显变化，表明电针治疗可能通过调节神经递质、炎症因子等途径改善认知功能障碍。
3. 电针作用机制探讨通过观察电针治疗前后神经元结构、突触传递等变化，发现电针可能通过促进神经元修复、改善突触传递等机制改善认知功能。
四、讨论本研究表明，电针神庭、百会穴位对脑缺血再灌注大鼠认知功能障碍具有显著的改善作用。
这可能与电针治疗能够调节神经递质、炎症因子等有关，从而促进神经元修复、改善突触传递。
此外，电针治疗还可能通过调节血液循环、降低氧化应激等途径改善脑缺血后的病理生理变化，进而改善认知功能。
在今后的研究中，我们可以进一步探讨电针治疗的具体作用机制，以及其在不同类型认知功能障碍中的应用。
五、结论本研究通过实验证实了电针神庭、百会穴位对脑缺血再灌注大鼠认知功能障碍的改善作用，并初步探讨了其作用机制。
这为临床应用电针治疗脑缺血后认知功能障碍提供了理论依据。
电针任督脉对局灶性脑缺血大鼠神经功能和神经细胞凋亡的影响
（ 广 州 中医药 大学 附属 深 圳 市 中医院 ， 广 东 深圳 ５ １ ８ ０ ３ ３ ）
中 图分 类 号 ： Ｒ ２ ４ ５ ． ９ ＋ ７ 文献标志码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ４ — ７ ４ ５ Ｘ（ ２ ０ １ ４ ） ０ １ — ０ ０ ４ ８ — ０ ３
ｎ ｅ ｕ ｒ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｆ ｕ ｎ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｃ ｅ ｌ ｌ ｕ ｌ ａ ｒ ａ ｐ ｏ ｐ ｔ ｏ ｓ ｉ ｓ ｉ ｎ ｃ ｅ ｒ ｅ ｂ ｒ ｌ ａ ｉ ｓ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ａ — ｒ ｅ ｐ ｅ ｒ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｒ ａ ｔ ｓ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ：Ｔ ｈ ｅ ＭＣＡＯ ｒ ａ ｔ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｐ ｒ ｅ ｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｗ ｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｒ ｅ ａ ｄ ｅ ｍｂ ｏ ｌ ｉ ｓ ｍ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ．Ｆ ｏ ｌ ｌ ｏ ｗｉ ｎ ｇ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ－ ａ ｃ ｕ ｐ ｕ ｎ ｃ ｔ ｕ ｒ ｅ ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ， ｔ ｈ ｅ ｎ ｅ ｕ ｒ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ｌ ａ ｂ ｅ ｈ ａ ｖ ｉ ｏ ｒ
况， 并 采 用 脱 氧 核 糖 核 苷 酸末 端转 移 酶 介 导 的缺 口末 端 标 记法 （ Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ ） 检测其大脑皮层神经细胞凋亡情况 ，
以及 电 针任 督 脉 对其 的影 响 。 结果 大 鼠造 模 后 ｍＮ Ｓ Ｓ显 著 升 高 ， 且 大 脑皮 层 Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ阳性 细 胞 数 明显 增 多 ： 与 同时期 模 型 组 比较 ， 电针 任 督 脉组 脑 缺 血 再 灌 注 ７ ｄ 、 １ ４ ｄ和 ２ ８ ｄ其 ｍＮ Ｓ Ｓ和 Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ阳性 细胞 数 明显 降 低 。 结 论 电针 任督 脉 可 能 通 过抑 制 脑 缺 血 再灌 注 后 皮 层 神 经 细胞 凋 亡 和 改善 神 经 功 能 缺损 来 改 善 脑 缺 血损 伤 。
电针曲池、足三里穴对缺血再灌注损伤后大鼠室管膜下区神经细胞增
电针曲池、足三里穴对缺血再灌注损伤后大鼠室管膜下区神经细胞增殖的影响发表时间：2016-05-16T09:45:12.590Z 来源：《医药前沿》2016年3月第8期作者：蔡铭煌林云娇王露露吴洁游小芳陈立典[导读] 福建中医药大学康复医学院福建福州 350122）该复合物能摄取大量磷酸基团，并将它们转移到控制细胞周期“调控点”的重要分子上，促进S期基因产物的转录表达。
蔡铭煌林云娇王露露吴洁游小芳陈立典（福建中医药大学康复医学院福建福州 350122）【摘要】目的：探讨电针对缺血再灌注损伤大鼠神经细胞增殖相关因子表达的影响。
方法：将SD大鼠随机分为3组，假手术组、模型组、电针组。
电针曲池、足三里穴干预7天。
采用免疫组化、免疫印记评估大鼠神经细胞增殖情况。
结果：电针7天后促进缺血侧室管膜下区Ki-67阳性细胞数量增加 (P<0.05），Cyclin D1、CDK 4蛋白表达水平升高，而p16表达水平降低（P<0.05）。
结论：电针促进缺血再灌注损伤室管膜下区神经细胞增殖。
【关键词】电针；缺血再灌注损伤；神经细胞增殖【中图分类号】R246 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2016）08-0349-02随着脑内反应性胶质细胞、神经前体细胞/祖细胞与神经干细胞、的发现与深入研究，神经细胞增殖为脑缺血损伤后神经再生修复和脑功能恢复带来新的希望。
细胞周期的有序运转是通过细胞周期的“发动机”即细胞周期蛋白(Cyclins)与细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶（CDKs）复合物来实现的，而另一类蛋白因子—周期素依赖蛋白激酶抑制因子（CKIs）则抑制CDKs的活性，在细胞周期中起负调控作用，引起细胞周期休止。
此外，核蛋白Ki-67作为一个细胞增殖的标记物。
针刺疗法是最具代表性的“非药物”替代与补充治疗手段，被广泛运用于脑血管疾病领域。
因此，本文试图探讨电针对神经细胞增殖相关因子表达的影响。
1.材料与方法1.1 实验动物及分组健康雄性SD大鼠，体重（250～300g），由福建中医药大学动物实验中心提供。
雌激素对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织NF-κB、iNOS表达和细胞凋亡的影响
雌激素对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织NF-κB、iNOS表达和细胞凋亡的影响李军;娄季宇;杨霄鹏【期刊名称】《中国实用神经疾病杂志》【年(卷),期】2009(012)018【摘要】目的研究雌激素对大鼠局灶性脑缺血再灌注(I/R)损伤后NF-κB、iNOS 蛋白和细胞凋亡变化的影响.方法采用线栓法复制局灶性脑I/R模型.应用免疫组化检测NF-κB、iNOS蛋白表达;利用原位缺口末端标记法(TUNEL )研究凋亡细胞的变化.结果与对照组大鼠相比,雌激素组脑缺血再灌注后NF-κB、iNOS表达明显减弱(P<0.01);凋亡细胞显著减少(P<0.01).结论雌激素能抑制脑I/R后NF-κB、iNOS表达,减少细胞凋亡,这可能是其脑保护作用的机制之一.【总页数】2页(P15-16)【作者】李军;娄季宇;杨霄鹏【作者单位】河南南阳市中心医院干部病房神经内科,南阳,473000;郑州大学二附院神经内科,郑州,450014;郑州大学二附院神经内科,郑州,450014【正文语种】中文【中图分类】R-332【相关文献】1.亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后HSP70 、TNF-α、NF-κB表达及损伤神经细胞凋亡的影响 [J], 吴国祥;李涛;李承晏;李晓清2.雌激素对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织NF-KB表达和细胞凋亡的影响 [J], 李军;娄季宇;张磊3.重组人粒细胞集落刺激因子对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织NF-κB和iNOS表达的影响 [J], 董小雪;马静萍4.芍药苷预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织细胞凋亡及 CHOP 蛋白表达的影响 [J], 毛森林;马翊竑;张海东;齐军;李峰5.局部脑缺血再灌注损伤对大鼠脑组织TLR4和NF-κB表达影响 [J], 徐翔; 杨陈丽; 赵宝华; 陈晶因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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电针对脑缺血再灌注大鼠缺血区皮质神经细胞凋亡和NF-κB表达的影响
作者：丁德光,李昊,孙国杰,王亚文,宋爱群
【摘要】 目的 通过观察电针对脑缺血再灌注大鼠缺血区皮质神经细胞凋亡和NF-κB蛋白表达的影响,研究电针对缺血性脑损伤的保护机制。方法 采用大脑中动脉线栓法制作模型,电针大鼠的水沟、内关,运用TUNEL法观察各组大鼠皮质神经细胞凋亡,免疫组化法观察各组大鼠缺血区皮质NF-κB蛋白表达。结果 电针组缺血皮质中神经细胞凋亡和NF-κB蛋白表达与模型组相比均降低。结论 电针通过抑制NF-κB蛋白表达减少神经细胞凋亡来对抗缺血再灌注脑组织神经损伤。
【关键词】 脑缺血再灌注；电针；NF-κB；大鼠 Abstract：Objective To observe the effect of electroacupuncture (EA) on the expression of NF-κB in cerebral ischemia area of cerebral ischemia-reperfusion rats and the neuron apoptosis in cortex by EA on shuigou and neiguan (left) point, and study the protective effect and its mechanism of EA on the cerebral ischemia. Method Cerebral ischemia reperfusion model was established by occlusion of the middle cerebral artery for 30 min and then removal, then EA shuigou and neiguan left points of experimental rats. Neuronal apoptosis in cortex was observed by the terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL), NF- κB protein in the ischemia cortex was detected by immunohistochemistry. Result The neuronal apoptosis and the expression of NF-κB protein in the ischemia cortex was deteded of ischemia side of EA treatment groups were lower comparing with model group. Conclusion EA can lighten the neurons injury after cerebral ischemia-reperfusion by decreasing the expression of NF-κB protein and the neuronal apoptosis in the ischemia cortex.
Key words：cerebral ischemia-reperfusion；electroacupuncture；NF-κB；rat
NF-κB(nuclear factor-kappa B)是一种核转录因子,具有传递细胞核内外信息的功能,在免疫应激反应、炎症和细胞凋亡等方面具有重要的作用,中枢神经系统发生某些病理改变时,可表现特异的活化。既往的研究证实,NF-κB参与了脑缺血再灌注损伤的过程[1],并在缺血性损伤导致的神经细胞凋亡中起着重要的作用[2]。本实验即是通过观察模型组及治疗组大鼠神经细胞凋亡和皮质神经细胞NF-κB核反应阳性细胞数的变化,来研究电针抗脑缺血再灌注大鼠脑组织损伤的机制。 1 材料和方法 1.1 主要试剂及仪器 原位细胞凋亡检测TUNEL试剂盒、兔抗大鼠NF-κB-P65单克隆抗体、羊抗兔SABC试剂盒、DAB显色试剂,北京中山生物科技有限公司产品；4%多聚甲醛,武汉天源生物科技有限公司产品。HPIAS-1000计算机高清晰彩色图像分析仪,华中科技大学同济医学院千屏影像公司生产；石蜡切片机,Leica RM 2015,德国产；恒温培养仪(PYX-DHS-40,上海跃进医疗器械厂)。
1.2 动物分组及模型制备 健康成年清洁级SD大鼠,雌雄各半,共84只(华中科技大学同济医学院实验动物中心提供),体重180～220 g。随机分为空白对照组6只,假手术组、模型组、电针组各18只(每组分为手术后12、24、72 h共3时段,每时段6只),另24只备用。模型采用Zea-longa方法并稍加改进[3],栓线插入途径：颈外动脉→颈总动脉→颈内动脉→大脑中动脉(均为右侧),深度约17 mm,30 min后,抽取栓线再灌注,在手术结束麻醉清醒后,观察神经症状,按照Bedcrson神经缺损体征评分标准[4],选择符合一级以上者为实验观察对象。 1.3 针刺治疗及模型处理 空白对照组：不作任何处理,直接取标本。模型组：造模成功后按要求喂养。电针组：于造模麻醉清醒后电针治疗1次,其中12 h组于取材前再电针治疗1次,24、72 h组每12 h电针治疗1次。按照文献[5]方法取水沟、内关,水沟与左侧内关接上海产G6805治疗仪,连续波,频率2 Hz,强度约为1.5 mA,右侧内关留针,时间持续30 min。假手术组：除不插入线栓外,其余手术步骤同模型组。于造模完毕后12、24、72 h分别取材。
1.4 标本的采集和制备 各组大鼠按照上述造模方法进行相应处理后以0.9%水合氯醛足量麻醉,先后以30 ℃生理盐水和4%多聚甲醛灌注后,断头取脑,在视交叉前后约2 mm将脑冠状切开,留取中间部分,置于4 ℃ 4%多聚甲醛固定液(不超过24 h)；将固定后的脑组织石蜡包埋,石蜡切片机连续冠状切片,片厚4 μm,每隔10张切1张,在温水中充分展开,贴片。每分组织取6张备用。
1.5 原位细胞凋亡检测 ①切片脱蜡至水。②将波片置入抗原修复盒内,加0.1 mol/L pH为7的枸橼酸缓冲液,使用750 W(高)微波辐射1 min,加入重蒸水冷却后将玻片移到PBS(20～25 ℃)缓冲液中。③将玻片浸入0.1 mol/L TBS,室温30 min后PBS洗。④将适量TUNEL反应混合物加在切片上,湿盒内37 ℃孵育60 min后PBS洗。⑤0.3% H2O2室温10 min,重复第③道工序。⑥加入适量的POD转换剂,湿盒,37 ℃孵育30 min后PBS洗。⑦DAB显色。⑧酒精脱水、二甲苯透明、中性树脂封片。 1.6 NF-κB-P65免疫组化染色
①石蜡切片常规脱蜡、入水。②流水及 3% H2O2水各冲洗30 s,0.01 mol/L PBS冲洗5 min×3次；滴加1滴4% BSA,湿盒中37 ℃孵育10 min。③滴加1滴一抗,湿盒中37 ℃孵育120 min, PBS冲洗5 min×3次。④滴加一滴标记有NF-κB 的二抗,湿盒中37 ℃孵育120 min,PBS冲洗5 min×3次。⑤滴加1滴SABC,湿盒中37 ℃孵育40 min,PBS冲洗5 min×3次。⑥加DAB显色剂5 min；苏木素复染。⑦盐酸酒精分色、酒精上行脱水、二甲苯透明、封片。
1.7 图像分析 采用HPIAS-1000计算机高清晰彩色图像分析仪,在400高倍镜视野下,对实验各组片缺血皮质区随机取10个非重叠的视野进行观 察。神经细胞凋亡率：记阳性细胞数(镜下观察呈棕黄色的圆形或卵圆形致密块状)和阴性细胞数,并计算凋亡细胞百分率[凋亡细胞百分率＝阳性细胞数/(阳性细胞数＋阴性细胞数)]；NF- κB-P65阳性细胞数：以核染色阳性的单个神经细胞为1个阳性标记(镜下观察细胞核染成棕黄色或有棕黄色颗粒沉积),各组片NF-κB-P65反应阳性的神经细胞记数(单位：个/摄取视野)。
1.8 统计学方法 所有数据以x±s表示,所有数据输入计算机,以SPSS13.0软件统计包处理。
2 结果 (见表1、表2)表1 各组大鼠大脑皮质凋亡神经细胞阳性率(平均凋亡率)比较(略)注：与假手术组比较,▲P<0.01；与模型组比较,☆P<0.05,☆☆P<0.01(下同)。表2 各组大鼠皮质NF-κB核反应阳性细胞数比较(略)
3 讨论 细胞凋亡(apoptosis)是在生理或病理条件下的一种主动死亡方式,是受细胞内基因及细胞外一些因子调控的生物学过程。在生理条件下它可调节机体发育,维持机体内环境的稳定；同时它参与各种病理过程,如自身免疫性疾病、脑缺血再灌注损伤及衰老过程等。1990 年Shigeno等[7]报道了在短暂性脑缺血后使用蛋白合成阻滞剂亚环己酮能抑制迟发性神经细胞死亡的发生,首先提出了缺血性神经细胞坏死与凋亡有关。目前已证实在缺血性损伤中有细胞凋亡的存在,尤其在再灌注损伤中起重要作用,抑制细胞凋亡可以减轻脑缺血损伤的程度。 许多研究表明,在缺血状态下,大脑神经元、胶质细胞和脑血管内皮细胞中的NF-κB被激活,而NF-κB的激活可促使粘附分子、细胞因子的表达。Irving等[8]观察了大鼠永久性局灶性脑缺血后不同时间点NF-κB的活性。在大脑中动脉闭塞(MCAO)3 h后,通过免疫组化和Western印迹法检测到NF-κB的核转位,同时应用EMSA检测到NF-κB结合活性升高。高氏等[1]运用原位杂交法检测大鼠脑缺血再灌注后皮质及纹状体NF-κB-P65 mRNA的表达于缺血再灌注后2 h～3 d明显升高。本研究显示,脑缺血再灌注12 h组可见较多的神经凋亡细胞,24、72 h后缺血侧大鼠皮质中均可见大量凋亡细胞,而NF-κB蛋白表达与神经凋亡细胞时间变化规律基本相同,说明了脑缺血再灌注损伤后的神经细胞凋亡与NF-κB-P65蛋白表达有密切关系。
本研究结果显示,模型组大鼠缺血后脑组织皮层神经元NF-