研究生仪器分析实验

实验6-1紫外可见分光光度法检测柔红霉素

一、实验目的

1、学习UV2550的操作。

2、了解紫外可见分光光度法测定药物的基本原理。

二、实验原理

紫外可见吸收光谱是分子价电子能级跃迁产生的，是有机化合物结构确定的辅助工具。有机化合物的紫外可见吸收光谱，反映的是结构中生色团和助色团的特性，不完全反映整个分子特性。

三、仪器和试剂

1、一定浓度的柔红霉素溶液（由实验室配制）。

2、UV2550（岛津）紫外可见光谱仪。

四、实验步骤

1、开机

⑴打开计算机，打印机；

⑵打开主机开关，双击软件图标UVProbe，点击“连接”与仪器联机，仪器开始自检，通过后按“确定”。

2、液体样品测量

2.1 光谱扫描

⑴选择“窗口”-“spectrum”，打开光谱模块；

⑵选择编辑-method，设定测定波长范围，扫描速度（高），采样间隔（1.0），扫描方式（自动/单个），测定方式（吸光度/透过率/反射率）；

⑶样品池和空白池均放上3.0ml缓冲液，点击光度计按键条中的“baseline”，启动基线校正操作，点击确定。

注：在开始基线校正之前，确认样品或参比光束无任何障碍物，且样品室中没有样品。

(4) 测量样品光谱

(a) 样品池架中放入DNR溶液，点击仪器条中的“开始”，启动扫描；

(b) 扫描完成后，在弹出的新数据集对话框中输入样品名，点击确定；

(c) 保存数据：选择文件>另存为，在对话框顶部的保存位置中选择适当的路径，输入文件名，保存类型中选择Spc，点击保存.

2.2 光度测定

⑴选择“窗口”-“photometric”，打开光度模块；

⑵选择method，设定合适的wavelength，如350nm，点击next；将选定的

wavelength选入，点击next，next，next，方法设定保存路径，保存。

⑶样品池和空白池均放上 3.0ml缓冲液，点击光度计按键条中的“cell blank”，校正背景。

注：在开始基线校正之前，确认样品或参比光束无任何障碍物，且样品室中没有样品。

(4) 标准曲线法

(a) 样品池架中放入某标准品溶液，在standard table里输入sample ID，如01，sample concentration，即样品浓度，点击下面“read standard”，此刻会在选择的波长”WL350”下出现吸光度值。将一系列标准品依次测定。

(b) 样品池中放入未知浓度的样品溶液，在sample table里输入sample ID，点击下面“read sample”，此刻会在选择的波长”WL350”下出现吸光度值以及浓度栏出现样品浓度。

4、关机

先点击“断开”，然后再关仪器主机，最后关电脑。

五、数据处理

1、如何判断每个光谱图中各峰的归属？

2、如何从光谱的变化来判断发生相互作用？

实验6-2 纳米TiO2粉末的固体紫外表征

一、实验目的

1、学习UV2550测量固体紫外的操作。

2、了解紫外可见分光光度法对固体粉末进行表征的基本原理。

二、实验原理

由于固体表面很粗糙，生产漫反射，所以用积分球收集反射光进行测量。使用积分球，各个方向的反射光，经过多次反射，最后几乎都能进入检测器。

积分球可用来检测微弱透光或完全不透光的样品的光谱。分析对象为：具有平面的固体例如纸张、布、印刷品、陶瓷器以及玻璃等的色泽；粉末样品，例如化学药品、化妆品、粘土以及颜料等的色泽；柔软物质，例如奶油、果酱、化妆品以及染料等的色泽。

三、仪器和试剂

1、纳米TiO2粉末、稀土掺杂的纳米TiO2粉末（由化学系老师提供）；

2、UV2550紫外可见光谱仪（岛津），积分球附件。

四、实验步骤

1、开机

(1) 拆下仪器中的溶液检测装置，装上积分球，并连接好电缆，样品侧和空白侧均放上BaSO4片；

(2)打开计算机，打印机，打开主机开关，双击软件图标UVProbe，点击“连接”与仪器联机，仪器开始自检，通过后按“确定”。

2、操作

⑴选择“窗口”-“光谱”，打开光谱模块；

⑵选择编辑-方法，设定测定波长范围，扫描速度（高），采样间隔（1.0），扫描方式（自动/单个），测定方式（吸光度/透过率/反射率）；

⑶点击光度计按键条中的“基线”，启动基线校正。

3、测量光谱

(1) 将样品放入空盒中，并压紧成薄片；

(2) 样品侧放入样品，点击仪器条中的“开始”，启动扫描；

(3) 扫描完成后，在弹出的新数据集对话框中输入样品名，点击确定；

(4) 保存数据：选择文件>另存为，在对话框顶部的保存位置中选择适当的路径，输入文件名，保存类型中选择Spc，点击保存。

4、关机

先点击“断开”，关仪器主机，再关电脑，最后拆下积分球部件，换上溶液检测装置。

五、数据处理

(1) 分析TiO2在什么波段有吸收，峰值在什么位置?

(2) 分析稀土离子掺杂对TiO2峰的影响。

实验6-3荧光法测定柔红霉素

一、实验目的

1、学习RF5301荧光光度仪的操作方法；

2、了解激发光谱和发射光谱的扫描方法，以及如何确定最大发射波长和激发波长；

三、试剂与仪器

1、RF5301荧光光度仪（日本岛津）；

2、葛根素溶液由实验室配制。

四、操作步骤

1、开机：

打开计算机，打开仪器电源开关（拨向标“I”的方向），把Xe 灯拨至ON位置，点亮氙灯，双击桌面上的RF-530XPC图标，仪器自检后，进入操作界面。

2、激发和发射光谱扫描

(1) 点击Configure→Parameters，进入Spectrum Parameters设置；

(2) 发射光谱曲线扫描：选择Emission，输入合适的参数后，点击OK，接着点击Start 进行扫描，找到最大发射波长Em max；

(3) 激发光谱曲线扫描：同样在Spectrum Parameters设置界面上，选择Excitation，在EM Wavelength处输入（2）找到的Em max，再输入合适的参数后，点击OK，接着点击Start 进行扫描，找到最大激发波长Ex max；

(4) 数据保存和转换，点击File→save，保存文件到适当位置，点File→Data Translation→A SCⅢ进行数据格式转换。

3、葛根素的测定

(1) 在比色皿中加入3 ml PBS缓冲溶液，用微量注射器加入一定体积的葛根素溶液。在室温下，将其置于RF-5301PC荧光分光光度计中，在最大激发波长下，激发和发射光谱狭缝宽度都为5.0 nm，在290～500nm波长范围内对样品进行发射光谱扫描，记录荧光光谱；

（2）不断增加柔红霉素的体积，记录相应的荧光光谱。

4、关机

（1）点击File→Channel→Erase Channel 退出通道

（2）关闭软件

（3）关闭Xe灯，冷却30min

（4）关闭主机电源

五、数据处理