血清总蛋白质的测定方法
总蛋白检测标准操作规程
利用Westgard多规则质控方法（12s,13s,22s,R4s,41s,10x)判断是否失控。
10.参考区间
65-85g/L
11.检验结果的解释
仪器加样针、比色杯、管路等未清洗干净时可能对试验结果产生影响。
反应曲线异常时需进行确认，干扰物质超出限度时需进行确认。
高度溶血可导致结果偏高。
14.参考文献
14.1《全国临床检验操作规程》
14.2《试剂使用说明书》
14.3《校准品使用说明书》
14.4《临床生物化学检验质量管理与操作规程》
当发生以下情况时建议重新校准：变更试剂批号;质控值发生显著偏移;生化分析仪进行了较大维护。
9.质量控制程序
9.1质控品来源
BACKMAN质控品，上海市临检中心提供
9.2质控品浓度
低/中/高三个浓度
9.3储存条件
复溶后于-20℃冷冻保存可稳定1个月。
9.4使用方法
每日做标本之前从冰箱中取出复温至室温，轻轻颠倒混匀数次。每个浓度质控品取5-6滴加入日立杯中上机检测。每日标本量超过150加做一次质控。
试剂
硫酸铜
3.0g/L
酒石酸钾钠
9.0g/L
氢氧化钠
0.6mol/L
碘化钾
5.0g/L
不同批次的试剂不推荐混合使用
7.4储存条件有效期
试剂在2-8℃保存可稳定1年，试剂开瓶后于2-8℃可稳定1个月。
7.5参数设置
主波长
546nm
辅助波长
700nm
反应方法
终点法
反应方向
向上
反应温度
37℃
试剂
250ul
5.3注意事项
推荐选用血清，因为血浆含纤维蛋白，故肝素抗凝血浆的TP值一般比血清高。标本应避免溶血、脂血、黄疸。
实验一血清蛋白质测定(范玉平)
【试剂与器材】
1．6 mol/L NaOH溶液 2．双缩脲试剂 3．双缩脲空白试剂 4．60～70g/L蛋白质标准液 5．仪器 分光光度计。
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【试剂与器材】
大试管
1ml吸管 5ml吸管 洗耳球
4支 ３支
2支 １只
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操作步骤
1.取试管4支，标明测定管（U）、标准管 （S）、标本空白管（B）、试剂空白管（ RB）。
【注意事项】
4. 实验证明，BCG不但与白蛋白呈色，而且与血 清中多种蛋白质成分呈色，其中以α1-球蛋白、 运铁蛋白、结合珠蛋白更为显著，其反应速度较 白蛋白稍慢。由于在30s内呈色对白蛋白特异， 故BCG与血清混合后，在30s读取吸光度，可明 显减少非特异性呈色反应。为了减少本法基质效 应的影响，最好用参考血清作标准。
【方法学评价】
1.本法操作简便、快速，胆红素和一般脂血对测定 无明显干扰。
【方法学评价】
2.血红蛋白和BCG产生与白蛋白相等的颜色强度， 血红蛋白在1g/L以下无明显干扰，2g/L使吸光度 增高3.2%，3g/L使吸光度增高7.4%，4g/L使吸 光度增高7.7%，5g/L使吸光度增高8.8%，所以 溶血标本不宜做BCG法白蛋白测定。
二 物理法：
又可分为紫外吸收法、折射法和重量法 等。除紫外吸收法外，其他方法现已很少 使用或被淘汰。
三 蛋白质与染料结合的方法
是比较灵敏而特异的一类方法。用的较多的染料有丽春红 、考马斯亮蓝G250和邻苯三酚红钼。丽春红蛋白结合法 测得的结果与凯氏定氮法相符，并且显色后在室温可稳 定24小时；考马斯亮蓝G250结合蛋白法灵敏度高，特异 性强，操作简便，广泛用于尿蛋白，脑脊液蛋白及各种 微量蛋白的检测，但该方法测定蛋白浓度的线性范围不 宽，与白、球蛋白反应的灵敏度不同，反应强度亦受温 度的影响，且比色杯吸附色素而干扰测定，不能用于自 动化分析仪，因此该法的应用受到了一定的限制；邻苯 三酚红钼络合显色法克服了考马斯亮蓝G250结合蛋白法 的上述缺点，且具有简便、稳定等优点，可用于自动化 分析仪。
总蛋白定量测定-原理-方法
总蛋白定量测定/原理/方法1、原理磺基水杨酸为生物碱试剂，能沉淀蛋白质，但对白蛋白的沉淀能力比球蛋白强，加适量硫酸钠后，沉淀白、球蛋白的能力趋于一致，与标准蛋白浊度对比进行定量测定。
2、试剂磺基水杨酸-硫酸钠试剂（SS-S）磺基水杨酸3.0g无水硫酸钠7.0g蒸馏水加至100ml过滤后，储存于棕色瓶中，如显色或混浊则不能用。
3、方法（1）制备标准曲线含蛋白200、400、800、1200、1600mg/L的稀释混合人血清标准系列各0.5ml，加SS-S试剂4.5ml，搜|索整理充分混匀，7～15分钟后，用420nm波长比浊，以吸光度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
（2）样品检测取待测脑脊液标本各0.5ml于两只试管中，其中一只试管加SS-S试剂4.5ml，另一试管加154mmol/L的NaCl溶液4.5ml作为标本空白管。
在与标准曲线相同的条件下比浊，所得得吸光度可从标准曲线上求得蛋白质浓度。
4、注意事项（1）脑脊液如有多量细胞或混浊，应先离心以除去。
如蛋白质浓度过高，应先行用生理盐水稀释后重新测定。
（2）加入SS-S试剂的操作手法和速度、室温及比浊前的放置时间都会影响实验结果。
故操作时应注意控制加入试剂的方式和比浊时间与标准管一致。
应随气温改变，勤作标准曲线。
5、正常参考值腰穿CSF蛋白含量：0.2～0.4g/L池穿CSF蛋白含量：0.1～0.25g/L侧脑室穿刺CSF蛋白含量：0.05～0.15g/L脑脊液蛋白质含量与年龄成正比，儿童含量较低，成人稍高，老年人又比成年人高。
6、临床意义脑脊液蛋白质含量增高，为血脑屏障被破坏的标志。
颇受临床工作者的重视。
蛋白质含量增高常见于下列情况：（1）中枢神经系统炎症。
脑部感染时，脑膜和脉络丛毛细血管通透性增加，蛋白质分子容易透过，首先是白蛋白增高，随后是球蛋白和纤维蛋白增高。
（2）神经根病变。
如急性感染性多发性神经炎（Guillain-Barre综合征），多数病例有蛋白质增高，而细胞数正常或接近正常，即蛋白-细胞分离现象。
血清总蛋白和蛋白检测方法综述
血清总蛋白和蛋白检测方法综述[摘要](1)阐明了双缩脲法是目前国内外检测血清总蛋白和白蛋白最常用的方法；(2)明确检测血清总蛋白和白蛋白的分析性能要求；(3)强调血清总蛋白和白蛋白检测时的标本采集和保存要求。
[关键词]血清总蛋白白蛋白检测方法综述蛋白质在所有生命活动过程中起着极其重要的作用，据估计，迄今为止，人体内大约有50000多种蛋白质，而一个人体细胞内的蛋白质就达3000～5000种。
目前能识别的蛋白质已超过1400种，就连单细胞的细菌蛋白也多达3000多种。
在诸多蛋白中，被用于样品检测和临床辅助诊断率最高的是血清总蛋白和白蛋白，其主要检测标本有：血液、尿液、脑脊髓液、羊水、唾液、胸腔积液、腹腔积液以及粪便等。
1.血清总蛋白(total protein)检测1.1检测总蛋白的主要方法1.1.1双缩脲法(biuret method)利用蛋白质分子中的肽键(一CONH一)能与双缩脲试剂(biuret teagent)中的CU2+结合产生紫色复合物，在波长540nm处检测吸收峰。
双缩脲法是检测血清蛋白的经典方法，经Doumas改良后的双缩脲试剂被美国临床化学协会标准化委员会和美国标准局(National Bureau of standards，即现在的美国标准计量研究所，NST)选用，作为血清蛋白检测标准化实验试剂，试剂在室内保存一年内不影响检测结果。
1.1.2直接光度检测法(direct photometric method)本法利用血清蛋白在一定紫外光波内有特异吸收峰(uv280nm)这一特点检测样品蛋白，此法常用于脑脊髓液蛋白的测定。
1.1.3染料结合法(dye-binding method)检测样品蛋白本法根据某些特殊染料(氨基黑10B和考马斯蓝Coomassic Br illiant blue CBB)能与多肽链中氨基酸残基的质子化基团结合，在460～595nm处有一光吸收峰的特点检测样品蛋白。
血清总蛋白和血清白蛋白的测定1
【注意事项】
• 1.双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是络合铜离 双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是络合铜离 双缩脲试剂中酒石酸钾钠 以维持铜离子在碱性溶液中的溶解性； 子，以维持铜离子在碱性溶液中的溶解性；碘 化钾能防止两价铜离子还原 能防止两价铜离子还原。 化钾能防止两价铜离子还原。 • 2.由于各种血清蛋白质的分子量不同，故其浓 由于各种血清蛋白质的分子量不同， 由于各种血清蛋白质的分子量不同 度不宜用mol/L表示。 表示。 度不宜用 表示 • 3.高脂，黄疸及溶血标本应做血清空白对照来 高脂， 高脂 校正误差。含脂类极多的血清， 校正误差。含脂类极多的血清，加入双缩脲试 剂后会出现混浊，可用乙醚3ml抽提后再进行 剂后会出现混浊，可用乙醚 抽提后再进行 比色。 比色。 • 4.在浓度小于 在浓度小于100g/L时呈良好的线性关系。 时呈良好的线性关系。 在浓度小于 时呈良好的线性关系
实验十一 血清白蛋白的测定 溴甲酚绿法） （溴甲酚绿法）
【实验目的】 实验目的】
• （1）熟悉学啊 白蛋白的测定方法（溴甲 白蛋白的测定方法（ ）熟悉学啊ing白蛋白的测定方法 酚绿法）。 酚绿法）。 • （2）掌握血清白蛋白测定和白蛋白与球蛋 ） 白的含量比（ 白的含量比（A/G）的临床意义。 ）的液； 缓冲液； 缓冲液 甘氨酸； 甘氨酸； 各种硫醇
耗费时间长； 耗费时间长；操作要严 格计时； 格计时； 颜色深浅随不同蛋白质 变化
考马斯亮蓝法 (Bradford法) 法
灵敏度最高 1～5µg ～ µ
快速 5～15分 ～ 分 钟
考马斯亮蓝染料与蛋 白质结合时， 白质结合时，其 λmax由465nm变 由 变 为595nm
【实验试剂】 实验试剂】
• 1.溴甲酚绿（BCG）贮存液 取BCG 419mg，用10ml 溴甲酚绿（ 溴甲酚绿 ） ， 0.1mol/L NaOH溶解，加NaN3 100mg ，定容至 溶解， 定容至1000mL。 溶解 。 贮于棕色瓶备用。如用溴甲酚绿钠盐应称取432mg.加水 贮于棕色瓶备用。如用溴甲酚绿钠盐应称取 加水 溶解。 溶解。 • 2.0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH= 4.2）：分别配制 柠檬酸缓冲液（ ）：分别配制 柠檬酸缓冲液 ）： 0.1mol/L柠檬酸和柠檬酸钠溶液，然后按 柠檬酸和柠檬酸钠溶液， 柠檬酸和柠檬酸钠溶液 然后按12.3：7.7的体 ： 的体 积比例混合。 混合液加入NaN3 100mg。 积比例混合。每1000ml混合液加入 混合液加入 。 • 3.30%聚氧化乙烯月桂醚 聚氧化乙烯月桂醚(Brij-35)溶液 取Brij-35 30g,加 聚氧化乙烯月桂醚 溶液 加 少量水， ℃水浴溶解，加水至100ml（此可用 少量水，60℃水浴溶解，加水至 （此可用Tween20或Tween-80代替 。 代替)。 或 代替 • 4.BCG应用液 BCG贮存液 贮存液250ml，0.1mol/L柠檬酸缓冲液 应用液 贮存液 ， 柠檬酸缓冲液 也可以用Tween-20 8ml或 （pH4.2)750ml,30%Brij-35 8ml(也可以用 也可以用 或 Tween-80 10ml代替）混合而成。 代替） 代替 混合而成。 • 5.标准蛋白溶液（10mg/ml) 称取人白蛋白 标准蛋白溶液（ 称取人白蛋白1.00g，用生 标准蛋白溶液 ， 理盐水
测量蛋白质含量的几种方法以及优缺点
一、染料法
优点：因为它操作简单，反应时间短，染料-蛋白质颜色稳定，抗干扰性强。
缺点：对于那些与标准蛋白氨基酸组成有较大差异的蛋白质，有一定误差，因为不同的蛋白质与染料的结合是不同的，故该法适合测定与标准蛋白质氨基酸组成相近的蛋白质。
二、双缩脲(Biuret)法测定蛋白质含量
优点：较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。
缺点：灵敏度差。
因此双缩脲法常用于快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。
三、酚试剂法测定血清蛋白质含量
（改良Lowry法）
优点：方法简便，灵敏度高，能够测定2～100μg的微量蛋白质。
其方法凯氏定氮法操作简便，其灵敏度比双缩脲法高100倍左右。
因此经常被用于科研与临床检验。
四、紫外吸收法
优点：灵敏度高，仪器设备简单，操作简便。
缺点：准确度不高，有的检测不可用，有限制。
五、凯氏定氮法（Kjeldahl determination）优点：可用于所有食品的蛋白质分析中，操作相对简单费用低。
结果
准确、改进后可以用于微量蛋白质的测定。
缺点：最终测定的是总有机氮而不是蛋白质氮。
精确度低于双缩脲法、试剂有腐蚀性。
六、F olin－酚试剂法（Folin-phenol
Reagent Method ）
优点：灵敏度高，方便简单。
缺点：费时较长，精确控制操作时间
七、考马斯亮蓝法（Coomassie
brilliant blue staining ）
优点：灵敏度高，测定快速，应用广泛，只需一种试剂，用时间短。
缺点：有较大的偏差，而且去污剂等很多试剂对其有干扰。
蛋白质含量的测定方法及原理
蛋白质含量的测定方法及原理一、紫外吸收法。
紫外吸收法是一种常用的蛋白质含量测定方法，其原理是根据蛋白质在280nm波长处的特征吸收峰来进行测定。
在实验中，首先将待测样品溶解于适量的缓冲液中，然后使用紫外可见分光光度计测定样品在280nm处的吸光值，通过标准曲线的对照，可以计算出样品中蛋白质的含量。
二、比色法。
比色法是另一种常用的蛋白质含量测定方法，其原理是利用蛋白质与某些特定试剂发生化学反应后产生显色物质，通过测定显色物质的吸光值来计算样品中蛋白质的含量。
常用的试剂包括布拉德福试剂、伯杰试剂等，不同试剂适用于不同类型的蛋白质测定。
三、BCA法。
BCA法是一种基于铜离子与蛋白质中的蛋白质酰基发生还原反应的测定方法。
其原理是将待测样品与BCA试剂混合后在60℃条件下反应，然后使用分光光度计测定产生的显色物质的吸光值，通过标准曲线计算出样品中蛋白质的含量。
四、Lowry法。
Lowry法是一种以菁蓝G与蛋白质发生化学反应产生显色物质的测定方法。
其原理是将待测样品与碱液、菁蓝G和还原剂混合后在室温下反应，然后使用分光光度计测定产生的显色物质的吸光值，通过标准曲线计算出样品中蛋白质的含量。
五、总蛋白法。
总蛋白法是一种直接测定样品中总蛋白含量的方法，其原理是将待测样品与总蛋白试剂混合后在室温下反应，然后使用分光光度计测定产生的显色物质的吸光值，通过标准曲线计算出样品中蛋白质的含量。
总结，蛋白质含量的测定方法及原理有多种，每种方法都有其适用的样品类型和测定条件，研究人员可以根据自己的实验需要选择合适的方法进行蛋白质含量的测定工作。
希望本文所介绍的内容能为相关领域的研究工作提供一定的参考价值。
中国药典中测蛋白质的方法
中国药典中测蛋白质的方法在生物医药领域，蛋白质的测定是实验室常规检测的重要项目之一。
中国药典中收录了多种测蛋白质的方法，主要包括总蛋白质检测法、尿化学分析法和电泳法。
本文将详细介绍这三种方法的应用范围、实验原理、实验步骤及注意事项。
1. 总蛋白质检测法总蛋白质检测法是一种常用的实验室方法，可用于检测生物样品中总蛋白质的含量。
该方法基于双缩脲反应原理，通过测定反应后溶液的颜色变化，计算出样品中总蛋白质的浓度。
总蛋白质检测法具有操作简便、反应灵敏、重复性好等优点，适用于生物医药领域中的蛋白质含量测定。
实验步骤：(1) 准备试剂：包括双缩脲试剂A液和B液，分别储存于棕色瓶中。
(2) 制备样品：将待测样品用生理盐水或去离子水稀释至适当浓度。
(3) 加样：取适量样品加入到试管中，加入双缩脲试剂A液2mL，摇匀。
(4) 孵育：将试管置于37℃水浴中孵育15分钟。
(5) 加试剂B：取出试管，加入双缩脲试剂B液4滴，摇匀。
(6) 测定吸光度：用紫外可见分光光度计在540nm波长处测定吸光度值。
(7) 计算：根据标准曲线或回归方程计算样品中总蛋白质的浓度。
注意事项：(1) 双缩脲试剂应储存于棕色瓶中，防止见光分解。
(2) 实验过程中应保持温度适宜，以利于反应进行。
(3) 注意吸光度的测量范围，避免超出仪器的测量范围而导致误差。
2. 尿化学分析法尿化学分析法是一种用于检测尿液中蛋白质的方法。
该方法通过测定尿液在特定波长下的吸光度值，来判断尿液中蛋白质的含量。
尿化学分析法具有操作简便、快速、灵敏度高等优点，适用于临床诊断及生物医药研究中的蛋白质含量测定。
实验步骤：(1) 收集尿液：采集受试者的尿液样本。
(2) 加样：将试纸浸入尿液中，轻轻搅拌数次后取出。
(3) 读数：将试纸放置在尿液干化学分析仪中，读取吸光度值及相关指标。
如果仪器具有半自动或全自动功能，可以直接打印出结果。
(4) 结果判断：根据试纸上的颜色变化及仪器测得的吸光度值，判断尿液中蛋白质的含量是否正常。
双缩脲法总蛋白测定
生物化学与分子生物学实验教学中心
2013年秋季学期
小牛血清（1：10）
蛋白标准液（1：10） 0.9%NaCl 双缩脲试剂
0.5 4.0
0.5 4.0
0.5
4.0
各管混匀，置37℃20min，在波长540nm处比色， 以空白管调零，测各管吸光度。
生物化学与分子生物学实验教学中心
血清总蛋白测定数据处理表
测定次数 管号
1 S U 2 3
平均吸光度
生物化学与分子生物学实验教学中心
双缩脲试剂:硫酸酮、酒石酸钾钠、碘化钾 双缩脲空白试剂 蛋白质标准液（70g/L） 蒸馏水
器材：试管、烧杯、容量瓶、加样枪、刻度吸管、玻璃棒 设备：1100分光光度计、电子天平、水浴锅
生物化学与分子生物学实验教学中心
操作步骤
取3支试管，做好标记，按下表操作：
加入物（ml） B (空白） S 标准） U（待测）
1～20mg
灵敏度低
Lowry法 （Folin酚法） 紫 外 分光光度法 考马斯亮蓝法 （Bradford）
20～250ug
干扰物质多、操作 要求严格计时 灵敏度低、干扰物 较多 不同蛋白质与染料 结合力不一致，对 比色杯有吸附作用
50～100mg
快速简便、无损样品 灵敏、简便、快速，干 扰因素较少
计算
AU 血清总蛋白（g/L ） 蛋白质标准液浓度（g/L ） AS
生物化学与分子生物学实验教学中心
参考范围
正常成人60～80g/L 长久卧床者约低3～5g/L 60岁以上约低2g/L 新生儿总蛋白浓度较低，随后逐月缓慢上升，大约1年后 达成人水平。
生物化学与分子生物学实验教学中心
干扰物质多操作要求严格计时适用于测定单一蛋白质及测定蛋白质含量较少的标本如脑脊液分光光度法50100mg快速简便无损样品灵敏度低干扰物较多常用于较纯的酶和免疫球蛋白测定考马斯亮蓝法bradford15ug灵敏简便快速干扰因素较少不同蛋白质与染料结合力不一致对比色杯有吸附作用常用于需求更高呈色灵敏度的蛋白电化学比浊法简便不需特殊仪器影响浊度大小因素多如加试剂手法反应温度等一般用于测定尿液脑脊液等蛋白质含量较低的样品生物化学与分子生物学实验教学中心原理1生双缩脲反应生成紫红色络合物
血清蛋白含量实验报告
一、实验目的1. 了解血清蛋白的生理功能及临床意义；2. 掌握双缩脲试剂法测定血清蛋白含量的原理和方法；3. 学会使用分光光度计进行定量分析；4. 培养实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理血清蛋白是血液中的一种重要成分，主要包括白蛋白、球蛋白和纤维蛋白等。
白蛋白具有维持血浆渗透压、运输物质、调节pH等作用；球蛋白主要参与免疫反应；纤维蛋白则参与血液凝固过程。
双缩脲试剂法是一种常用的蛋白质定量方法，其原理是蛋白质分子中含有大量的肽键，在碱性条件下能与Cu2+发生双缩脲反应，生成紫红色络合物。
该络合物在特定波长（如540nm）下的吸光度与蛋白质含量成正比。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：血清样本、双缩脲试剂A液、双缩脲试剂B液、蒸馏水、分光光度计、移液器、试管等。
2. 实验仪器：分光光度计、恒温水浴锅、移液器、试管等。
四、实验方法1. 准备工作：将血清样本、双缩脲试剂A液、双缩脲试剂B液等实验材料准备好，将分光光度计预热至室温。
2. 标准曲线绘制：取不同浓度的蛋白质标准液，按照实验步骤进行测定，以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：取血清样本，按照实验步骤进行测定，根据标准曲线计算样品中蛋白质含量。
4. 数据处理：将实验数据进行分析，得出结论。
五、实验步骤1. 准备工作：将血清样本、双缩脲试剂A液、双缩脲试剂B液等实验材料准备好，将分光光度计预热至室温。
2. 标准曲线绘制：a. 取6支试管，分别加入不同浓度的蛋白质标准液，用蒸馏水定容至1ml；b. 每支试管加入1ml双缩脲试剂A液，混匀；c. 加入2ml双缩脲试剂B液，混匀；d. 在540nm波长下，用分光光度计测定吸光度；e. 以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：a. 取血清样本，按照上述步骤进行测定；b. 根据标准曲线计算样品中蛋白质含量。
4. 数据处理：将实验数据进行分析，得出结论。
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血清总蛋白质的测定方法
1、凯氏定氮法仍然是建立各个具体方法时采用的参考标准方法。
2、双缩脲比色法是目前首先推荐的蛋白质定量方法。
方法操作简便，虽然双缩脲试剂有大同不异。
其中酒石酸钾纳可以稳定在碱性溶液中的铜离子，含有碘化物作为抗氧化剂。
双缩脲反应生成的复合物其吸收峰为540nm。
可采用公认的标准牛血清白蛋白作为标准品，经精确称量，必要时用凯氏定氮法标定。
各地质控中心提供的混合标准血清可作为第二参考，血清用量100μl，在10-120g/L浓度范围内呈良好线性关系，批内CV值<2%，其它常用的方法还有：
3、基于蛋白分子中含有酪氨酸和色氨酸而使用的酚试剂比色法由于各种蛋白质分子中上述两种氨基酸的组成比例不同，特别是白蛋白含色氨酸为0.2%，而γ-球蛋白中含量达2%-3%，导致较大的差异。
Lo wry的改良法在酚试剂中加入Cu2++，集中原法和双缩脲反应两者的作用，使呈色灵敏度提高。
其中75%的呈色依赖于Cu2++。
反应产物最佳吸收峰在650-750nm，方法灵敏度为双缩脲方法的100倍左右。
有利于检测较微量的蛋白质。
但试剂反应仍易受多种化合物的干扰。
4、采用280nm和215/225紫外吸收值，计算蛋白质含量280nm 是由于蛋白质分子中存在芳香族氨基酸所致。
方法的特异性和准确性受蛋白分子中该种氨基酸的含量比例影响甚大。
尿酸和肝红素在280 nm附近有干扰。
紫外区200-225nm是肽健的强吸收峰。
在此区域其吸收值为280nm的10-30倍，将血清稀释1000-2000倍可以消除干扰物质的影响。
5、采用沉淀反应进行散射比浊法用磺柳酸、三氯醋酸等配方，此方法甚为简便，不需特殊仪器，技术关键在于：①选择最佳试剂浓度及温度；②混匀技术；③选用的标准；④待测标本中的蛋白浓度。
6、染料结合法蛋白质可与某些染料特异结合，如氨基黑（amino black）与考马亮蓝（comassive brilliant blue ）。
这一性质除了可以用于电泳后的蛋白质区带染色，亦可用于总蛋白质的定量。
缺点是多种蛋白质与染料的结合力不一致。
考马亮蓝在与蛋白质结合后的吸收峰从465nm移向595nm，这一性质可用分光光度法来定量检测。