春柴胡HPLC法指纹图谱的研究

• 实验研究 •27（P ＜0.05）。

2.2 造模成功后各组的情况：即第22周末，①与干预Ⅲ组相比，干预Ⅰ组大鼠体质量、F P G 、H O M A -I R 、AL T 、T G 、C RP 、L PS 均低于干预Ⅲ组（P ＜0.05），高于NC 组（P ＜0.05）。

②与干预Ⅲ组相比，干预Ⅱ组大鼠体质量、F P G 、H O M A -I R 、AL T 、T G 、C RP 、L PS 有显著下降，差异有统计学意义（P ＜0.05）；高于NC 组（P ＜0.05）。

③与NC 组比较，干预Ⅲ组大鼠体型肥硕，无活动，小便增多，体质量、F P G 、FIN S 、H O M A -I R 、AL T 、T G 、C RP 、L PS 均显著增高（P ＜0.05）。

干预后各组大鼠F P G 、FIN S 、H O ME-I R 的变化。

3 讨 论肥胖和糖尿病是胰岛素抵抗和全身慢性低度炎症性为特征的两种代谢性疾病，L PS 则是参与早期全身炎症级联反应的触发因子。

Cani 等发现，高脂喂养4周的小鼠 L PS 浓度升高了2~3倍，本实验经过高糖高脂喂养，发现大鼠的体质量增加，炎性因子C RP 、L PS 随着喂养时间的延长逐渐增高，这与Cani 的研究一致，说明高脂饮食喂养后的大鼠体内存在着慢性低度炎症。

随着造模时间的延长，于实验第14周成模时，大鼠的C RP 、L PS 、F P G 、FIN S 、H O M A -I R 增高，说明成模的大鼠体内伴发着胰岛素抵抗与慢性低度炎症。

22周时，大鼠的体质量进一步增加，L PS 与胰岛素抵抗程度加重，说明高脂饮食诱发的代谢性内毒素血症，致使的全身性慢性炎症与肥胖、胰岛素抵抗密切相关。

小檗碱是存在于黄连、黄柏等药材中的主要生物碱，临床上长期用于抗肠道细菌感染，现代药理研究发现它还有抗心律失常、扩张冠状血管、降血糖、降血脂、减轻体质量等多种作用。

近年来动物实验及临床疗效观察均证实，小檗碱能安全、有效地降脂、降糖、减轻体质量等。

但其对糖尿病的发生机制尚不明确，本实验的研究结果中，可以得出：经过小檗碱与单纯饮食干预后的大鼠炎症水平下降，胰岛素抵抗程度减轻；小檗碱表现明显；说明小檗碱对代谢性内毒素血症及系统性炎症有保护作用。

E va Tom as 还研究发现，高脂饮食可迅速改变肠道菌群的结构，但当其转变为正常饮食后，肠道菌群的结构则可以完全恢复，表明成年小鼠肠道菌群结构具有高度的弹性，饮食治疗后，肠道菌群结构改善，随着G -的减少体内L PS 减少，因此可以得出，饮食于肥胖、糖尿病等代谢性疾病中起着至关重要的作用。

总之，代谢性内毒素血症引起的慢性低度炎症伴随着肥胖和2型糖尿病等代谢性疾病的发生发展。

本实验研究可以得出：小檗碱作为一种临床上长期抗肠道感染的药物，可通过改善血浆内毒素水平，从而改善胰岛素抵抗。

为2型糖尿病及肥胖的控制、治疗提供新的理论依据和新的治疗途径。

参考文献[1] 艾正琳.黄芩苷、苦参碱、小檗碱对NA SH 大鼠的治疗作用及对L -FA BP 的影响与机制研究[D ].北京:北京协和医学院,2012.春柴胡HPLC法指纹图谱的研究郑 正 汪海宣 苗仁华 蒋 菲（合肥市食品药品检验中心，安徽 合肥 230001）【摘要】目的 建立春柴胡的HP LC 法指纹图谱，为科学评价与有效控制春柴胡的质量提供快捷、有效的方法。

方法 采用HP LC 法测定10批不同产地春柴胡样品。

色谱条件：MER K C 18（250 mm ×4.6 mm ，5 μm ），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85），流速1.0 m L/m in ，检测波长256 n m ，柱温为35 ℃。

结果 本研究建立的分析方法有良好的重复性，操作简便、快速，结果客观、准确。

结论 能较全面的反映出春柴胡中所含成分的种类和数量，能更好的表明其的内在质量，可作为其产品质量控制的有效手段。

【关键词】春柴胡；指纹图谱；HP LC中图分类号：R282.710.3 文献标识码：B 文章编号：1671-8194（2017）23-0027-02春柴胡为伞形科（U mb elli f e r ae ）植物狭叶柴胡B upleu r u m s corzo ne r i fo liu m Willd ．的干燥带根全草。

主产于江苏大部分地区和安徽东部一带，由于春季采收，故习称“春柴胡”。

为我国传统中药，苦、微寒，具有和解表里，退热疏肝、升举阳气等功效[1-3]。

其主要化学活性成分为皂苷类、黄酮类、挥发油类等成分。

目前，春柴胡的质量控制标准较少，仅有《江苏省中药材标准1989年版》和《安徽省中药饮片炮制规范2005年版》分别对春柴胡药材及饮片质量标准进行控制，且只有外观形状等项目，较难客观的控制其质量。

中药材中含有多种化学组分，其多数成分含量相对于主要活性成分较低，且药理作用不是非常明确。

为了开发利用其资源，完善其质量标准，更好的对春柴胡的质量进行控制，采用中药指纹图谱的方法来对市场上不同产地的春柴胡进行研究；建立HP LC 法指纹图谱测定条件并进行一系列方法学考察，对春柴胡中各主要成分的指纹图谱进行综合评价，建立春柴胡在一定处理和分析条件下的对照指纹图谱，为春柴胡的质量控制研究开辟一个新思路。

1 仪器与试药1.1 仪器：T he rmof ishe r U3000高效液相色谱仪，D A D 检测器；IKA 研磨粉碎机，Fishe r 超声波清洗器；电子天平（METT L ER ，X P 205）。

所有计量仪器和量具均经检定和校正。

1.2 试剂与试药：芸香苷对照品（中国食品药品检定研究院；批号：100080-201408；含量：92.8%）；乙腈为色谱纯，重蒸水。

10批药材来源见表1。

以上药材经合肥市食品药品检验中心刘业飞主任中药师鉴定均为正品。

1.3 指纹图谱相似度计算软件：国家药典委员会开发的中药色谱指纹图谱相似度评价系统（版本号2012.130723）。

2 方法与结果2.1 色谱条件：参照相关文献[4]，摸索春柴胡色谱条件，确定测定色谱柱为T he rmo C 18（4.6 mm ×250 mm ，5 μm ）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）；流速：1.000 m L/m in ，柱温：35℃，进样量：5 μL 。

28• 实验研究 •测定波长：经研究发现，在波长为256 n m 下，春柴胡药材中的芸香苷和其他一些化学组分均能较好的响应，芸香苷成分是此条件下响应最大的物质，且各峰分离度和峰形均良好，理论板数高，因此确定256 n m 为春柴胡药材指纹图谱的检测波长，见图1、图2。

根据与标准物质对照，可指认春柴胡药材指纹图谱中的主要色谱峰；其中色谱图中保留时间约为17 m in 峰为芸香苷，其他峰为在该指纹图谱测定条件下所测得的能够明确反映春柴胡药材的主要成分。

2.2 参照物溶液的制备：研究发现，春柴胡药材中含有芸香苷，具有较高的含量且成分比较稳定，芸香苷在该色谱系统条件下响应较高，所以选择芸香苷作为参照物。

精密称取芸香苷对照品制成0.25 mg /m L 的参照物溶液。

见图3。

2.3 供试品溶液的制备：参照中国药典2015年版一部柴胡药材标准[1]，确定春柴胡的主要成分提取方法为：取春柴胡药材，研磨粉碎，过40目筛，取粉末约0.25 g ，精密称定，置100 m L 量瓶中，加甲醇70 m L ，浸泡2 h ，超声处理30 m in ，放冷，加甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45 μm 的滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.4 精密度试验：取春柴胡药材（产地：句容），照2.3项下方法制备样品，依法测定记录色谱图，用第一次进样所得色谱图中芸香苷峰等5个成分峰作为校正峰，计算6份色谱图的相似度，其结果均不小于0.987，均达到中药色谱指纹图谱的相似度评价标准（≥0.950），结果本方法精密度良好。

2.5 重复性试验：取春柴胡药材（产地：句容），照2.3项下方法制备样品6份，依次测定记录色谱图，用第一份样品的色谱图中芸香苷峰等5个成分峰作为校正峰，计算5份样品色谱图的相似度，结果均不小于0.999，均达到中药色谱指纹图谱的相似度评价标准（≥0.950），结果本方法重复性良好。

2.6 稳定性试验：取春柴胡药材（产地：句容），照2.3项下方法制备样品，放置0、2、4、8、12、24 h 后进样，记录色谱图，用0 h 进样的色谱图中芸香苷峰等5个成分峰作为校正峰，用软件计算6份色谱图的相似度，结果均不小于0.994，均达到中药色谱指纹图谱的相似度评价标准（≥0.950），表明该方法制备所得样品溶液在12 h 内稳定。

2.7 春柴胡药材主要成分对照指纹图谱生成：按2.3项下方法制备样品溶液，对10批不同产地春柴胡药材的测定，记录色谱图，生成叠加液相色图谱（图4），以产地为句容样品色图谱作为参照图谱模板，导出c d f 色谱文件，时间窗设置为0.1，以芸香苷峰等5个成分峰作为校正峰，用导入指纹图谱相似度计算软件，以这10批样品色谱图为基础生成一个对照指纹图谱，此图谱即为对照指纹图谱。

2.8 10批不同产地的春柴胡药材指纹图谱相似度计算：计算相似度，获得结果显示各指纹图谱的相似度均＞0.994。

见图5。

3 结果与讨论3.1 目前，中药材及饮片的鉴别、分类和质量评定的采用的方法一般是经验鉴别、显微鉴别等表观分析，缺乏从统计分析数据中获得统一的评价依据。

中药色谱指纹图谱相似度软件计算方法使得数据处理过程方便、快速，能较全面的反映出春柴胡中所含成分的类别和含量，能更好的表明其的内在质量可作为其产品质量控制的有效依据。

3.2 本方法简单操作方便，实验表明，各地产的春柴胡真品质量差异较小，在指纹图谱中反映相似度比较高，但我们仅仅初步研究了甲醇提取物的指纹图谱，不能系统的反应药品质量，只能对春柴胡的初步质量控制。

3.3 研究中发现春柴胡和柴胡的指纹图谱相似程度差异较大，所以入药时春柴胡是不是能和柴胡混用还待进一步研究探讨。

参考文献[1] 中华人民共和国药典委员会.中国药典2015年版一部[M ].北京:化学化工出版社,2015:158-159.[2] 中国医学科学院.中药志[M ].北京:人民卫生出版社,1959:366-374.[3] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志(第27卷)[M ].北京:科学出版社,1979:51.[4] 韦英杰,王茉,宁青,等.HP LC 法同时测定柴胡与春柴胡中皂苷类及黄酮类成分的含量[J ].药物分析杂志,2011,31(5):879-883.表1 春柴胡产地序号12345678910药材品种春柴胡春柴胡春柴胡春柴胡春柴胡春柴胡春柴胡春柴胡春柴胡春柴胡产地句容内蒙古河北陕西青海渭南山西长治宝鸡临汾图1春柴胡药材样品色谱图图2芸香苷参照物色谱图图5 10批春柴胡药材指纹图谱图4 春柴胡药材对照指纹图谱图3 10批春柴胡批叠加HP LC 色谱图。