AFG实验室切片制作流程与案例分析-PPT精品文档
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切片流程和注意事项
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1. 准备样品：将组织样品固定在福尔马林中。
脱水并清除组织中的水分，使其变为蜡块状。
冰冻切片制作及质量控制课件
冰冻切片制作及质量控制课件
contents
目录
• 冰冻切片制作概述 • 冰冻切片制作技术 • 冰冻切片质量控制 • 冰冻切片常见问题及解决方法 • 实际操作和案例分析
01
冰冻切片制作概述
冰冻切片定义和应用
定义
冰冻切片是一种在低温环境下对 组织进行快速冷冻并切成薄片的 技术。
应用
冰冻切片广泛应用于病理学、生 物学、医学研究等领域，用于观 察和分析组织细胞的形态、结构 和化学成分。
冰冻切片制作中的关键点和注意事项
• 切片厚度：控制切片的厚度，以获得清晰的图像和准确的 分析结果。
冰冻切片制作中的关键点和注意事项
01
注意事项
02
03
04
1. 安全操作：在使用冷冻剂 和切片机时，要注意安全操作 ，避免接触皮肤和吸入有害气
体。
2. 温度控制：在整个制作过 程中，要严格控制温度，确保 组织的冷冻状态和切片的质量
04
冰冻切片常见问题及解决方法
冰冻切片制作中的常见问题
冰晶形成
冰晶的形成是冰冻切片制作过程中最常见的问题之一。冰 晶会导致组织结构的破坏和细胞的变形，从而影响切片的 质量和准确性。
水分残留
在冰冻切片制作过程中，如果组织中的水分未能充分去除 ，会导致切片时出现水雾、水滴或水渍，进一步影响观察 和分析。
通过以上质量控制措施，可以确保冰冻 切片制作过程的准确性和可重复性，为 后续实验研究提供可靠的依据。
杂质与污染：观察切片中是否有杂质、 气泡或污染物，确保切片的纯净度。
细胞形态：评估细胞形态是否清晰可辨 ，核质比例是否正常，有无明显的细胞 变形或损伤。
染色效果：检查切片染色是否均匀，色 彩鲜艳，背景清晰，无过度染色或脱色 现象。
contents
目录
• 冰冻切片制作概述 • 冰冻切片制作技术 • 冰冻切片质量控制 • 冰冻切片常见问题及解决方法 • 实际操作和案例分析
01
冰冻切片制作概述
冰冻切片定义和应用
定义
冰冻切片是一种在低温环境下对 组织进行快速冷冻并切成薄片的 技术。
应用
冰冻切片广泛应用于病理学、生 物学、医学研究等领域，用于观 察和分析组织细胞的形态、结构 和化学成分。
冰冻切片制作中的关键点和注意事项
• 切片厚度：控制切片的厚度，以获得清晰的图像和准确的 分析结果。
冰冻切片制作中的关键点和注意事项
01
注意事项
02
03
04
1. 安全操作：在使用冷冻剂 和切片机时，要注意安全操作 ，避免接触皮肤和吸入有害气
体。
2. 温度控制：在整个制作过 程中，要严格控制温度，确保 组织的冷冻状态和切片的质量
04
冰冻切片常见问题及解决方法
冰冻切片制作中的常见问题
冰晶形成
冰晶的形成是冰冻切片制作过程中最常见的问题之一。冰 晶会导致组织结构的破坏和细胞的变形，从而影响切片的 质量和准确性。
水分残留
在冰冻切片制作过程中，如果组织中的水分未能充分去除 ，会导致切片时出现水雾、水滴或水渍，进一步影响观察 和分析。
通过以上质量控制措施，可以确保冰冻 切片制作过程的准确性和可重复性，为 后续实验研究提供可靠的依据。
杂质与污染：观察切片中是否有杂质、 气泡或污染物，确保切片的纯净度。
细胞形态：评估细胞形态是否清晰可辨 ，核质比例是否正常，有无明显的细胞 变形或损伤。
染色效果：检查切片染色是否均匀，色 彩鲜艳，背景清晰，无过度染色或脱色 现象。
《切片技术》PPT课件
•micrometer (µm )= 10-6 meter
•nanometer (nm) = 10-9 meter
精选ppt
4
组织学的研究技术
• 显微镜技术: 光镜：light microscopic, LM 电镜：electronic microscopic, EM
–透射电镜（transmission electron microscope, TEM）：观察细胞内部结构
– 勿挤压组织块
– 保持组织原有形态、保持组织清洁
精选ppt
17
• 固定
为了阻止组织细胞的死亡后变化，防止自溶与腐败，保持组 织内细胞原有的形态结构，切取组织块后应立即进入固定液， 常用的固定方法有：
– 小块组织固定法：标本：固定液为1：4～20；最常用的方法，但组织 块不易过大过厚，最好置入冰箱冷藏室内固定，冷藏固定时间适当延 长，特别是组织化学实验用的材料，冷藏固定效果会更好。
精选ppt
22
Embedding 包埋
精选ppt
23
切片机
石蜡切片机
精选ppt
24
冰冻切片机
How does a microtome work?
Microtome Arm
Tissue Block
Tissue
Section
Knife
精选ppt
Microscope Slide
25
切片
…on Cryostat (frozen)
Organisms
Organs
Cells (20u) Nucleus (2 u) Bacteria (0.5 u) Organelles Viruses Macromolecules A... toms
切片ppt课件
B、石蜡切片
• 其优点是组织结构保存良好，在病理和回顾性研究 中有较大的实用价值，能切连续薄片，组织结构清 晰，抗原定位准确。 • 用于免疫组化技术的石蜡切片制备与常规制片略有 不同：
• ①脱水、透明等过程应在4℃下进行，以尽 量减少组织抗原的损失;或常温条件下缩短时 间。
组织学技术及免疫组化课程
山东农业大学
• ②液氮法：
• 将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直 径约2cm），如组织块小可适量加OCT包埋 剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛 有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开 始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液 氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。
• 取出组织冰块立即置入-80℃冰箱贮存备用， 或置入恒冷箱切片机冰冻切片。
• 其基本结构是将切片机置于-30℃C低温密闭 室内，故切片时不受外界温度和环境影响， 可连续切薄片至2-4μ m，完全能满足免疫组 织化学标记要求。一般以10-30μ m为佳。
• 切片时，低温室内温度以-15℃～18℃为宜， 温度过低组织易破碎 • 抗卷板的位置及角度要适当，载玻片附贴组 织切片，切勿上下移动。
• 其方法有二：
①.干冰-丙酮（酒精）法： ②.液氮法
山东农业大学
•
①干冰-丙酮（酒精）法：
• 将150-200ml丙酮（酒精）装入小保温杯内，
逐渐加入干冰，直至饱和呈粘稠状，再加干 冰不再冒泡时，温度可达-70℃，用一小烧杯 （50-100ml）内装异戊烷约50ml，再将烧 杯缓慢置入干冰丙酮（纯酒精）饱和液内， 至异戊烷温度达-70℃时即可使用。 • 将组织（大小为1cm×0.8cm×0.5cm）投入 异戊烷内速冻30-60s后取出，或置恒冷箱内 以备切片， • 或置-80℃低温冰箱内贮存。
实验一 徒手切片的制作
5．保持实验室内整洁，学生采取轮流值日，每次实验完毕，负责整理公用仪器， 将实验台、地面打扫干净，倒清废物缸，检查水、电和门窗是否关闭。
实验分组
每个桌面坐7个人，2或3个人为一小组， 7个人为一大组。
实验报告要求
1、实验前认真预习实验内容，毋须写预习报 告，合理安排好实验时间。 2、实验完成后，根据实验内容写一份真实的 实验报告。下一次实验时以班级为单位上 交上一次的实验报告。 3、请假者，请及时上交实验报告。
选 片
用毛笔挑选透明的薄片，制临时 装片。
临时装片技术
首先将载玻片、盖玻片用纱布拭擦干净，拭擦玻 片动作要轻，手指用力要均匀，否则易拭破。在载玻 片中央，滴加一、二滴清水，然后用毛笔取培养皿中 切好的材料置于载玻片上，将盖玻片轻轻盖上，盖盖 玻片时，用镊子夹起盖玻片，使载玻片一边先放下， 接触一边水，然后再轻轻放平，以免水中产生气泡， 影响观察。如仍有气泡，可用镊子轻轻加压盖玻片， 将气泡赶出。如水分过多，可用滤纸条将水吸干，如 水分不足，可在盖玻片边沿用滴管加水少许。使材料 浸没水中，盖玻片紧贴载玻片，这样装片制成。
注意事项
1、在切片前，要不断地用水湿润材料和刀片。 2、夹持物上端要保持表面平整。
3、切片时，双手应该保持活动状态，不要使它们紧靠身
体或实验台。
4、用力不要过猛，不能用刀片挤压材料或来回切割材料。
5、动作要敏捷，材料要一次切下，不要追求切片形状的
完整。速度要快，才能切得又薄又平。
握夹持物和持刀
用左手的拇指和食指捏紧夹有叶片 的夹持物，并使其劈缝与自己本身平行， 拇指要稍低于食指，以免被刀割破。夹 持物上端要略高于手指，但勿过高，以 防切割时夹持物和刀摇动。 右手拿刀将刀片平稳地放在左手食指 上，与材料切面平行。
实验分组
每个桌面坐7个人，2或3个人为一小组， 7个人为一大组。
实验报告要求
1、实验前认真预习实验内容，毋须写预习报 告，合理安排好实验时间。 2、实验完成后，根据实验内容写一份真实的 实验报告。下一次实验时以班级为单位上 交上一次的实验报告。 3、请假者，请及时上交实验报告。
选 片
用毛笔挑选透明的薄片，制临时 装片。
临时装片技术
首先将载玻片、盖玻片用纱布拭擦干净，拭擦玻 片动作要轻，手指用力要均匀，否则易拭破。在载玻 片中央，滴加一、二滴清水，然后用毛笔取培养皿中 切好的材料置于载玻片上，将盖玻片轻轻盖上，盖盖 玻片时，用镊子夹起盖玻片，使载玻片一边先放下， 接触一边水，然后再轻轻放平，以免水中产生气泡， 影响观察。如仍有气泡，可用镊子轻轻加压盖玻片， 将气泡赶出。如水分过多，可用滤纸条将水吸干，如 水分不足，可在盖玻片边沿用滴管加水少许。使材料 浸没水中，盖玻片紧贴载玻片，这样装片制成。
注意事项
1、在切片前，要不断地用水湿润材料和刀片。 2、夹持物上端要保持表面平整。
3、切片时，双手应该保持活动状态，不要使它们紧靠身
体或实验台。
4、用力不要过猛，不能用刀片挤压材料或来回切割材料。
5、动作要敏捷，材料要一次切下，不要追求切片形状的
完整。速度要快，才能切得又薄又平。
握夹持物和持刀
用左手的拇指和食指捏紧夹有叶片 的夹持物，并使其劈缝与自己本身平行， 拇指要稍低于食指，以免被刀割破。夹 持物上端要略高于手指，但勿过高，以 防切割时夹持物和刀摇动。 右手拿刀将刀片平稳地放在左手食指 上，与材料切面平行。
植物学实验三：切片法及根形态PPT课件
（也可以像切芹菜叶柄一样直接切片。）
22
实验记录与报告：
1、制作合格的徒手切片临时装片标本。
2、示范台上植物的根系各为何种根系类型 实验记录与报告
1、制作合格的徒手切片双重染色临时标本。
2、绘双子叶植物根的初生结构简图，并注明各结构部分的名称。
？
3、经过根的切片观察后，你认为该材料是 单
子叶植物还是双子叶植物？
7
滑走切片：
----利用滑走切片机切片；切片不连续、较厚；多 用于木本茎的切片。
一般步骤：
** 取材：选择用于切片的茎，将其切成小段。
** 软化：用软化剂将材料软化。
方法：A、沸水中煮2小时。
B、50%乙醇/甘油（1：1）浸1-2周。
C、A、B结合。
** 切片：用滑走切片机将软化的材料要成薄片。
** 染色：选择合适染色液对切片进行染色。
植物学实验
Botanical Experiment
1
实验三 植物显微标本的基本制作技术
（切片法） ---及根的形态结构观察
2
(一) 植物显微标本的基本制作技术 -----切片法
(二) 植物根的形态结构
3
新鲜材料：
1、直根系植株（示范） 2、须根系植株（示范） 3、一种植物的种子萌发根 4、芹菜叶柄 5、一种植物的根
14
根的结构：
• 双子叶植物根的初生结构 • 双子叶植物根的次生结构 • 单子叶植物根的结构 • 侧根的形成 • 根瘤与菌根
15
表皮
外皮层 皮层 内皮层 中柱鞘 初生韧皮部 初生木质部 薄壁细胞
双子叶植物初生16根
1、周皮；2、次生韧皮部；3、形成层；4、次生木质部；
5、初生木质部；6、髓
22
实验记录与报告：
1、制作合格的徒手切片临时装片标本。
2、示范台上植物的根系各为何种根系类型 实验记录与报告
1、制作合格的徒手切片双重染色临时标本。
2、绘双子叶植物根的初生结构简图，并注明各结构部分的名称。
？
3、经过根的切片观察后，你认为该材料是 单
子叶植物还是双子叶植物？
7
滑走切片：
----利用滑走切片机切片；切片不连续、较厚；多 用于木本茎的切片。
一般步骤：
** 取材：选择用于切片的茎，将其切成小段。
** 软化：用软化剂将材料软化。
方法：A、沸水中煮2小时。
B、50%乙醇/甘油（1：1）浸1-2周。
C、A、B结合。
** 切片：用滑走切片机将软化的材料要成薄片。
** 染色：选择合适染色液对切片进行染色。
植物学实验
Botanical Experiment
1
实验三 植物显微标本的基本制作技术
（切片法） ---及根的形态结构观察
2
(一) 植物显微标本的基本制作技术 -----切片法
(二) 植物根的形态结构
3
新鲜材料：
1、直根系植株（示范） 2、须根系植株（示范） 3、一种植物的种子萌发根 4、芹菜叶柄 5、一种植物的根
14
根的结构：
• 双子叶植物根的初生结构 • 双子叶植物根的次生结构 • 单子叶植物根的结构 • 侧根的形成 • 根瘤与菌根
15
表皮
外皮层 皮层 内皮层 中柱鞘 初生韧皮部 初生木质部 薄壁细胞
双子叶植物初生16根
1、周皮；2、次生韧皮部；3、形成层；4、次生木质部；
5、初生木质部；6、髓
实验二 徒手切片与临时装片的制作24页PPT
13、遵守纪律的风气的培养，只有领 导者本 身在这 方面以 身作则 才能收 到成效 。—— 马卡连 柯 14、劳动者的组织性、纪律性、坚毅 精神以 及同全 世界劳 动者的 团结一 致，是 取得最 后胜利 的保证 。—— 列宁 摘自名言网
15、机会是不守纪律的。——ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ果
1、最灵繁的人也看不见自己的背脊。——非洲 2、最困难的事情就是认识自己。——希腊 3、有勇气承担命运这才是英雄好汉。——黑塞 4、与肝胆人共事，无字句处读书。——周恩来 5、阅读使人充实，会谈使人敏捷，写作使人精确。——培根
实验二 徒手切片与临时装片 的制作
11、战争满足了，或曾经满足过人的 好斗的 本能， 但它同 时还满 足了人 对掠夺 ，破坏 以及残 酷的纪 律和专 制力的 欲望。 ——查·埃利奥 特 12、不应把纪律仅仅看成教育的手段 。纪律 是教育 过程的 结果， 首先是 学生集 体表现 在一切 生活领 域—— 生产、 日常生 活、学 校、文 化等领 域中努 力的结 果。— —马卡 连柯(名 言网)
15、机会是不守纪律的。——ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ果
1、最灵繁的人也看不见自己的背脊。——非洲 2、最困难的事情就是认识自己。——希腊 3、有勇气承担命运这才是英雄好汉。——黑塞 4、与肝胆人共事，无字句处读书。——周恩来 5、阅读使人充实，会谈使人敏捷，写作使人精确。——培根
实验二 徒手切片与临时装片 的制作
11、战争满足了，或曾经满足过人的 好斗的 本能， 但它同 时还满 足了人 对掠夺 ，破坏 以及残 酷的纪 律和专 制力的 欲望。 ——查·埃利奥 特 12、不应把纪律仅仅看成教育的手段 。纪律 是教育 过程的 结果， 首先是 学生集 体表现 在一切 生活领 域—— 生产、 日常生 活、学 校、文 化等领 域中努 力的结 果。— —马卡 连柯(名 言网)
焊点切片分析通用课件
05
切片分析在焊点可靠性 评估中的应用
在疲劳寿命评估中的应用
疲劳寿命评估
焊点切片分析可以揭示焊点在疲 劳载荷下的微观结构和性能退化
，从而评估其疲劳寿命。
微观结构观察
通过切片分析，可以观察焊点的 微观结构，如金属间化合物、空 洞、裂纹等，这些结构特征对焊
点的疲劳寿命有重要影响。
退化机制研究
切片分析可以揭示焊点疲劳退化 的机制，包括裂纹萌生、扩展和 断裂的过程，有助于优化焊点的
避开关键部位
在确定切片位置时，应避免对焊点的 关键部位进行切割，以免影响分析结 果。
切片过程中的注意事项
保持切片刀锋利
切削过程中要经常使用砂轮磨刀 ，确保切片平整。
固定夹持待切焊点
在切削过程中，应使用夹持工具牢 固固定焊点，防止切削力导致焊点 移位。
注意安全
操作过程中要佩戴防护眼镜和手套 ，防止切削飞溅和刀具意外伤人。
切片后的观察与测量
观察焊点截面
通过显微镜观察切片的截 面，了解焊点的结构、成 分和连接情况。
测量焊点尺寸
使用测量工具对焊点的尺 寸进行测量，如焊点的宽 度、厚度和高度等。
观察缺陷
检查焊点是否存在空洞、 裂纹等缺陷，并记录缺陷 的位置和大小。
切片分析结果记录
记录焊点信息
提供改进建议
将切片分析过程中获取的焊点信息， 如尺寸、成分、连接情况等详细记录 下来。
适用于各种应用领域，如汽车 、电子、航空航天等。
02
切片分析前的准备
切片工具的选择
01
02
03
切片刀
选择锋利的切片刀，确保 切面平整，无毛刺。
砂轮
用于磨刀，保持切片刀锋 利。
第二节石蜡切片制作精品PPT资料
❖ 4%多聚甲醛-磷酸盐缓冲液：4g多聚甲醛+100ml磷酸盐缓冲 液（适用于免疫组化学技术）。
不同浓度梯度酒精配制
梯度酒精的作用： 将组织中的水分经过梯度酒精的作用，置换出 来，以达到组织脱水的目的。
配制：例如70%的酒精配制，70ml（100%纯 酒精）+30ml蒸馏水混匀即可。
石蜡切片所需的实验器材
❖染色液的配制 2．增加浸蜡时间，重新包埋；
切片完毕，应及时用氯仿将切片机的有关部分擦净。 树胶封片 4．用正丁醇、叔丁醇和二氧六环等进行脱水和透明； 切片之前必须修整好蜡块，并且固定在木块之上，再将四周多余的残蜡用刀片削去，否则不易于切片和展片。 3．刀口上留有一层石蜡； 3．刀口锋利不一，局部产生差异；
❖ 注意：熔蜡及浸蜡温度保持在65℃左右。 ❖ 经过浸蜡之后的组织，前必须修整好蜡块，并且固定在木块 之上，再将四周多余的残蜡用刀片削去，否 则不易于切片和展片。
❖ 切片使用旋转切片机时，应固定好木块；调 整好切片刀与蜡块的距离与角度，一般刀的 倾斜度为4-6度；根据切片的厚度不同调节厚
❖ 仪器：石蜡切片机、恒温蜡箱、载玻片、盖 玻片、镊子、手术刀。
❖ 材料：小鼠的组织（小鼠肝脏）。
❖ 试剂：乙醚、无水乙醇、甲醛、冰醋酸、苦 味酸、、锇酸、正丁醇、二甲苯、石蜡、甘 油、中性树胶。
第一步：取材
❖ 一般根据观察目的选取动物 或人体组织，取材要迅速，
组织块不宜太大，一般 为组织学观察，取黄豆 大小为宜。取材要用锋利
第二节石蜡切片 制作
简介：
❖ 石蜡切片是教学与研究工作中广泛运用的一 种实验技术，特别对于细胞学、组织学、胚 胎学、病理学，更是一种必备的研究方法。 对于不同的显微镜具体的制作切片的技术也 是不同的！
不同浓度梯度酒精配制
梯度酒精的作用： 将组织中的水分经过梯度酒精的作用，置换出 来，以达到组织脱水的目的。
配制：例如70%的酒精配制，70ml（100%纯 酒精）+30ml蒸馏水混匀即可。
石蜡切片所需的实验器材
❖染色液的配制 2．增加浸蜡时间，重新包埋；
切片完毕，应及时用氯仿将切片机的有关部分擦净。 树胶封片 4．用正丁醇、叔丁醇和二氧六环等进行脱水和透明； 切片之前必须修整好蜡块，并且固定在木块之上，再将四周多余的残蜡用刀片削去，否则不易于切片和展片。 3．刀口上留有一层石蜡； 3．刀口锋利不一，局部产生差异；
❖ 注意：熔蜡及浸蜡温度保持在65℃左右。 ❖ 经过浸蜡之后的组织，前必须修整好蜡块，并且固定在木块 之上，再将四周多余的残蜡用刀片削去，否 则不易于切片和展片。
❖ 切片使用旋转切片机时，应固定好木块；调 整好切片刀与蜡块的距离与角度，一般刀的 倾斜度为4-6度；根据切片的厚度不同调节厚
❖ 仪器：石蜡切片机、恒温蜡箱、载玻片、盖 玻片、镊子、手术刀。
❖ 材料：小鼠的组织（小鼠肝脏）。
❖ 试剂：乙醚、无水乙醇、甲醛、冰醋酸、苦 味酸、、锇酸、正丁醇、二甲苯、石蜡、甘 油、中性树胶。
第一步：取材
❖ 一般根据观察目的选取动物 或人体组织，取材要迅速，
组织块不宜太大，一般 为组织学观察，取黄豆 大小为宜。取材要用锋利
第二节石蜡切片 制作
简介：
❖ 石蜡切片是教学与研究工作中广泛运用的一 种实验技术，特别对于细胞学、组织学、胚 胎学、病理学，更是一种必备的研究方法。 对于不同的显微镜具体的制作切片的技术也 是不同的！
生物样品超薄切片技术ppt课件
染色 4.聚合
循序渐进提高温度，促进聚合
↓
37 ℃(12h)→45℃(12h)→60℃(24h)
五、超薄切片
取材
制刀→修块→切片→展片→捞片 1.切片刀： 钻石刀、玻璃刀
↓
固定 制作玻璃刀：
1～2mm
↓
25/38mm
脱水
4~6.5mm
↓ 2.修块： 除去样品周边的包埋介质和不感兴趣部位，保留
包埋
有用信息便于切割，提供尽可能大的有效观察面。
染色
材料固定后、脱水前，整块用50%乙醇醋酸铀饱和溶液，
↓
4℃染色2~12小时，常规切片镜检。
4.示踪性染色 多用于免疫电镜技术和(酶)细胞化学技术
取材 (1)概念：用各种大小的离子、分子等颗粒作为示踪物， ↓ 显示细胞间的连接部位与方式，研究细胞的通透屏障，测 固定 量通透孔道的大小，追踪组织液的生理通路。
制作流程：包括六大步，40多次操作
取材→固定→脱水→包埋→切片→染色→ 镜检
2.取材方法： 注意部位和方向性。
取材 ➢ 动物材料的获取：
↓
急性处死或麻醉后，在1～2分钟解剖出所需材料，切成
固定
标准块立即投入固定液，低温(0～4℃)保存；特殊难
↓
取的材料必须原位固定或灌流固定，再取材投入固定液。
包埋 常用包埋剂：非水溶性(Epon812)和水溶性包埋剂。
↓ 切片
包埋剂 Epon812或618
边脱水边包埋
固化剂 DDSA（十二烷基琥珀酸酐） 调节塑性而
↓
MNA（六甲酸酐）
改变切割性能
染色
增塑剂 DBP（邻苯二甲酸二丁脂）
↓
催化剂 DMP-30
用于618