土壤微生物量测定方法
土壤微生物量测定方法
土壤微生物量测定方法一、土壤微生物生物量碳（氯仿熏蒸－K2SO4提取-碳分析仪器法）1、试剂（1）去乙醇氯仿制备：在通风橱中，将分析纯氯仿与蒸馏水按1 ? 2（v : v）加入分液漏斗中，充分摇动1 min，慢慢放出底层氯仿于烧杯中，如此洗涤3次。
得到的无乙醇氯仿中加入无水氯化钙，以除去氯仿中的水分。
纯化后的氯仿置于试剂瓶中，在低温（4℃）、黑暗状态下保存。
（2）氢氧化钠溶液[c（NaOH）= 1 mol L-1]：通常分析纯固体氢氧化钠中含有碳酸钠，与酸作用时生成二氧化碳，从而影响滴定终点判断和测定的准确度。
配制时应先除去碳酸钠，根据碳酸钠不溶于浓碱，可先将氢氧化钠配成50%（w : v）的浓氧溶液，密闭放置3～4 d。
待碳酸钠沉降后，取56 ml 50%氢氧化钠上清液（约19 mol L-1），用新煮沸冷却的除去二氧化碳的蒸馏水释稀到1 L，即为浓度1 mol L-1 NaOH溶液，用橡皮塞密闭保存。
（3）硫酸钾提取剂[c（K2SO4）= mol L-1]：取1742.5 g分析纯硫酸钾，用研钵磨成粉末状，倒于25 L塑料桶中，加蒸馏水至20 L，盖紧螺旋盖置于摇床（150 r min-1）上溶解24 h 即可。
（4）六偏磷酸钠溶液[ρ（Na）= 5 g 100 ml-1，pH ]：称取50.0 g分析纯六偏磷酸钠溶于800 ml高纯度去离子水中，用分析纯浓磷酸调节至pH ，用高纯度去离子水定容至1 L。
要注意的是六偏磷酸钠溶解速度很慢应提前配制；由于其易粘于烧杯底部，若加热常因受热不均使烧杯破裂。
)（5）过硫酸钾溶液[ρ（K2S2O8）= 2 g 100 ml-1]：称取20.0 g分析纯过硫酸钾，溶于高纯度去离子水中，定容至1 L。
值得注意过硫酸钾溶液易被氧化，应避光存放且最多使用7 d。
（6）磷酸溶液[ρ（H3PO4）= 21 g 100 ml-1]：量取37 ml 分析纯浓磷酸（85%），慢慢加入到188 ml高纯度去离子水中即可。
氯仿熏蒸浸提法测定土壤微生物碳氮
氯仿熏蒸浸提法测定土壤微生物碳氮
采用氯仿熏蒸0.5 mol/L K2SO4浸提法测定土壤微生物量碳、氮。
首先将土样在25℃下密封培养7d 左右，然后称取预处理土样6 份放入烧杯中，将 3 份其置于底部有少量Na OH、200 m L 水和去乙醇氯仿的真空干燥器中，抽真空后保持氯仿沸腾3～5 min，然后，将干燥器移置在黑暗条件下25℃熏蒸土壤24 h，再次抽真空完全去除土壤中的氯仿。
将熏蒸好的土壤转移到200 m L 提取瓶中，加入0.5 mol/L K2SO4浸提液（水∶土质量比为4∶1）。
另外3 份做未熏蒸空白试验，每份重复3 次，分别测定浸提液中的有机碳和全氮含量。
其中浸提液中的可溶性有机碳采用总有机碳分析仪（Phoenix 8000，美国）测定，由熏蒸与未熏蒸土样有机碳的差值除以转换系数，计算得到微生物量碳。
浸提液中土壤可溶性全氮采用碱性过硫酸钾氧化法测定，浸提液中无机氮采用流动分析仪测定，土壤可溶性有机氮是可溶性全氮和无机氮的差值。
熏蒸与未熏蒸土样的全氮的差值除以转换系数，计算得到微生物量氮。
微生物量碳、氮的转换系数为0.45。
土壤的有机质、全氮、全磷、有效磷、速效钾、NO3--N、NH4+-N、pH 值采用常规的土壤农化分析方法测定。
土壤微生物量碳测定方法(精编文档).doc
【最新整理，下载后即可编辑】土壤微生物量碳测定方法及应用土壤微生物量碳（Soil microbial biomass ）不仅对土壤有机质和养分的循环起着主要作用，同时是一个重要活性养分库，直接调控着土壤养分（如氮、磷和硫等）的保持和释放及其植物有效性。
近40年来，土壤微生物生物量的研究已成为土壤学研究热点之一。
由于土壤微生物的碳含量通常是恒定的，因此采用土壤微生物碳(Microbial biomass carbon, Bc)来表示土壤微生物生物量的大小。
测定土壤微生物碳的主要方法为熏蒸培养法（Fumigation-incubation, FI ）和熏蒸提取法（Fumigation-extraction, FE ）。
熏蒸提取法（FE 法）由于熏蒸培养法测定土壤微生物量碳不仅需要较长的时间而且不适合于强酸性土壤、加入新鲜有机底物的土壤以及水田土壤。
Voroney (1983)发现熏蒸土壤用0.5mol ·L -1K 2SO 4提取液提取的碳量与生物微生物量有很好的相关性。
Vance 等(1987)建立了熏蒸提取法测定土壤微生物碳的基本方法：该方法用0.5mol ·L -1K 2SO 4提取剂（水土比1：4）直接提取熏蒸和不熏蒸土壤，提取液中有机碳含量用重铬酸钾氧化法测定；以熏蒸与不熏蒸土壤提取的有机碳增加量除以转换系数K EC (取值0.38)来计算土壤微生物碳。
Wu 等（1990）通过采用熏蒸培养法和熏蒸提取法比较研究，建立了熏蒸提取——碳自动一起法测定土壤微生物碳。
该方法大幅度提高提取液中有机碳的测定速度和测定结果的准确度。
林启美等（1999）对熏蒸提取-重铬酸钾氧化法中提取液的水土比以及氧化剂进行了改进，以提高该方法的测定结果的重复性和准确性。
对于熏蒸提取法测定土壤微生物生物碳的转换系数K EC 的取值，有很多研究进行了大量的研究。
测定K EC 值的实验方法有：直接法（加入培养微生物、用14C 底物标记土壤微生物）和间接法（与熏蒸培养法、显微镜观测法、ATP 法及底物诱导呼吸法比较）。
土壤微生物数量测定方法整理
土壤微生物的别离鉴定及数量测定（一）培养基的制备Ⅰ测定微生物总量培养基：1. 细菌培养基〔牛肉膏蛋白胨琼脂培养基〕牛肉膏Beefextract5.0g蛋白胨Peptone10.0gNaCI5.0g蒸馏水H201000m1琼脂15～20gPH7.2~7.4制备步骤：⑴ 在100 mL小烧杯中称取牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，加50 mL蒸馏水，置电炉搅拌加热至牛肉膏，蛋白胨完全溶解.⑵ 向小铝锅中参加500 mL蒸馏水，将溶解的牛肉膏，蛋白胨倒入铝锅中并用自来水洗2～3次.参加5.0gNaC1，在电炉上边加热边搅拌.⑶ 参加洗净的琼脂条，继续搅拌，加热至琼脂完全熔化，补足水量至1000 mL.⑷用NaOH或HC1调至pH7.0. 用酸度计或用玻棒沾少许液体用精细pH试纸测定其pH值，并用10％NaOH 调至所需pH值，必要时用滤纸或脱脂棉过滤。
一般比要求的pH高出0.2，因为高压蒸汽灭菌后，pH常降低。
⑸根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶。
注意分装时防止培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。
如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。
，塞好棉塞，装入小铁丝筐，然后用旧报纸将棉塞局部包好. 标签说明培养基的名称、配制日期等。
⑹ 高压蒸汽灭菌，用0.1Mpa〔15lb/in2〕121℃灭菌〔15-20〕30min.2.放线菌培养基〔改进高氏1号琼脂培养基〕可溶性淀粉20gKNO3 1gK2HPO40.5gMgSO4• 7H2O 0.5gNaCl 0.5g原0.05gFeSO4• 7H2O 0.01gpH 7.2-7.4制备步骤：. .jz.（1）计算根据配方计算各种药品所需要的量，然后再分别称量。
（2）称量准确称量各种成分。
（3）溶化配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入少许沸水中，在火上加热，边搅拌边依次逐一溶化其他成分，溶化后，补足水分到1000ml，调PH〔可不调〕。
生物量碳氮测定方法(熏蒸提取法)
一、土壤微生物生物量碳测定方法（熏蒸提取－碳自动仪器法）1、试剂配制去乙醇氯仿制备：普通氯仿试剂一般含有少量乙醇作为稳定剂，使用前需除去。
将氯仿试剂按1 : 2（v : v）的比例与去离子水或蒸馏水一起放入分液漏斗中，充分摇动1min，慢慢放出底层氯仿于烧杯中，如此洗涤3次。
得到的无乙醇氯仿加入无水氯化钙，以除去氯仿中的水分。
纯化后的氯仿置于暗色试剂瓶中，在低温（4℃）、黑暗状态下保存（Williamss等，1995）。
注意氯仿具有致癌作用，必须在通风橱中进行操作。
硫酸钾提取剂[c（K2SO4）= 0.5mol L-1]：87.12分析纯硫酸钾，溶于1L去离子水。
六偏磷酸钠溶液[ρ( NaPO3)6 = 5g 100ml-1，pH2.0]：50.0g分析纯六偏磷酸钠缓慢加入盛有800ml 去离子水的烧杯中（注意：六偏磷酸钠溶解速度很慢，且易粘于烧杯底部结块，加热易使烧杯破裂），缓慢加热（或置于超声波水浴器中）至完全溶化，用分析纯浓磷酸调节至pH2.0，冷却后定容至1L。
过硫酸钾溶液[ρ（K2S2O8）= 2g 100ml-1]：20.0g分析纯过硫酸钾溶于去离子水，定容至1L，避光存放，使用期最多为7d。
磷酸溶液[ρ（H3PO4）= 21 g 100ml-1]：37ml 85%分析纯浓磷酸（H3PO4，ρ= 1.70g ml-1）与188ml 去离子水混合。
邻苯二甲酸氢钾标准溶液[ρ（C6H4CO2HCO2K）= 1000mg C L-1]：2.1254g分析纯邻苯二甲酸氢钾（称量前105℃烘2～3h），溶于去离子水，定容至1L。
2、仪器设备土壤筛（孔经2mm）、真空干燥器（直径22cm）、水泵抽真空装置（图6–1）或无油真空泵、pH–自动滴定仪、塑料桶（带螺旋盖可密封，体积50L）、可密封螺纹广口塑料瓶（容积1.1L）、高温真空绝缘酯（MIST–3）、烧杯（25、50、80ml）。
碳–自动分析仪（Phoenix 8000）、容量瓶（100ml）、样品瓶（40ml）。
土壤微生物测定取样方法
土壤微生物测定取样方法
确定土壤微生物的测定取样方法需要考虑以下几个步骤：
1. 确定取样点：根据研究目的和土壤类型选择取样点。
通常应选择代表性地带土壤、若干个深度（如0-10厘米，10-20厘米，20-30厘米等）的土壤样品。
2. 准备工具：取样时需要准备洁净的工具和容器，如无菌铲子、无菌采样袋或无菌容器等，以避免样品受到外界微生物的污染。
3. 取样方法：将土壤取样器或无菌铲子插入土壤中，以尽量保持样品的代表性。
每次采样之前都应彻底清洗工具，以防止交叉污染。
4. 样品处理：将采样的土壤样品放入无菌容器中，并尽快送至实验室进行分析。
如果不能立即送达实验室，样品应存储在低温环境中，以减缓微生物代谢。
在实验室中，测定土壤微生物的方法可以包括土壤微生物生物量、多样性和功能等方面的分析。
需要注意的是，不同类型的土壤微生物所需的取样方法和处理方式可能有所不同，具体的步骤和要求应根据具体研究的需求和方法的要求进行调整。
土壤微生物量的测定方法
土壤微生物量的测定方法：现状和展望何振立(浙江农业大学土化系．3 10029)摘要本文综述了土壤微生物量包括微生物量碳．微生物量氮、微生物量礴和缴生物量硫的测定方法的发展和现状，对现存各种方{击的特点和局限性作了简要的评述，指出了应用这些方法须注意的阀题和今后的研究方向．一、土壤微生物量及其研究意义土壤微生物量指土壤中体积小于5×10 m 的生物总量，但活的植物体如植物根系等不包括在内．它是活的土壤有机质部分．众所周知，土壤生物是植物养料转化．有机碳代谢及污染物降解的驱动力．在土壤肥力和生态系统中具有重要的作用．土壤微生物量作为土壤中植物有效养料的储备库或源，取决于土壤环境条件及养分耗竭状况“”。
70年代中期以来，薰蒸法的出现大大提高了人们对土壤微生物量研究的兴趣．虽然现存的定量测定方法仍有不尽人意之处．但它们在土壤生物与环境的研究中，对人们更好了解土壤微生物一植物一环境相互作用方面已显示出了它的重要作用．二、土壤微生物量的测定(一)平板计数法平板计数法比较原始，但仍不失为最直接的土壤微生物量测定方法．土壤样品加水制成悬液，在显微镜下计数，并测定各类微生物体的大小。
根据一定观察面积上微生物的数目、体积及微生物的比重(一般采用1．18克cm- )计算出每克干土所含的微生物量．或根据微生物体的干物质含量(一般采用25％)及干物质含碳量(通常为47％)，进一步换算成每克土壤微生物体的碳含量．微生物的比重、干物质含量及含碳量等参数一般通过纯培养试验获得．直接计数法技术难度大．计数和体积测量都可能发生较大误差，因此不太适宜用作常规分析．读者若有兴趣．可参阅文献[】、3、4]．(二)成份分析法根据土壤中某种特定的生物代谢成份的含量嘧定土壤微生物量．这种标记成份理论上必须满足下列条件： 1，该成份存在于生物体各部分．其浓度不随时问和其它条件而变定浸提液中的这种标记成份。
目前比较常用的成份分析法是根据测定土壤中ATP含量来估算土壤微生物量．ATP的测定步骤包括破坏微生物的细胞，使其所含的ATP释放出来，并被提取到适当的溶液中。
一种土壤微生物生物量磷的测定方法与流程
一种土壤微生物生物量磷的测定方法与流程土壤微生物生物量磷是评估土壤肥力和生态系统中磷循环的重要指标。
本文将介绍一种测定土壤微生物生物量磷的方法及其操作流程，以期为土壤学研究及相关领域提供参考。
一、测定方法概述土壤微生物生物量磷（Microbial Biomass Phosphorus, MBP）的测定通常采用化学提取法，结合磷的测定手段，来评估土壤中微生物生物量磷的含量。
本文介绍的方法为氯仿熏蒸法，该法能够有效提取土壤微生物生物量磷，并结合紫外分光光度法或其它磷测定方法进行定量分析。
二、测定流程1.土壤样品的采集与预处理（1）在研究区域内选择具有代表性的土壤采样点。
（2）使用不锈钢或玻璃采样器采集表层土壤（0-20cm）。
（3）将采集的土壤样品混合均匀，去除植物残体和石头等杂质。
（4）将土壤样品分成两份，一份用于测定土壤微生物生物量磷，另一份用于测定土壤全磷。
2.氯仿熏蒸（1）将预处理后的土壤样品放入干燥器中。
（2）将干燥器内的氯仿蒸汽浓度调节至5%，熏蒸24小时。
（3）熏蒸过程中，保持干燥器内温度恒定，避免氯仿蒸汽浓度下降。
3.土壤微生物生物量磷的提取（1）熏蒸后的土壤样品取出，立即加入100mL 0.5mol/L NaHCO3溶液。
（2）将提取液在恒温振荡器中振荡1小时，以充分提取土壤微生物生物量磷。
（3）提取液过滤，收集滤液，用于后续磷的测定。
4.土壤全磷的测定（1）将另一份预处理后的土壤样品进行消解。
（2）消解后的样品采用磷的测定方法（如紫外分光光度法）进行全磷含量的测定。
5.土壤微生物生物量磷的计算（1）根据熏蒸前后土壤样品中磷的差值，计算土壤微生物生物量磷的含量。
（2）土壤微生物生物量磷的含量= 熏蒸后土壤样品中磷的浓度- 熏蒸前土壤样品中磷的浓度。
三、注意事项1.在操作过程中，避免氯仿蒸汽对人体造成危害，应在通风柜中进行。
2.提取液的选择和浓度应根据土壤类型进行调整。
3.消解过程中，注意温度控制，避免样品损失。
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土壤微生物量测定方法一、土壤微生物生物量碳(氯仿熏蒸－K2SO4提取—碳分析仪器法）1、试剂(1）去乙醇氯仿制备：在通风橱中，将分析纯氯仿与蒸馏水按1 2（v : v)加入分液漏斗中，充分摇动1 min，慢慢放出底层氯仿于烧杯中，如此洗涤3次。
得到的无乙醇氯仿中加入无水氯化钙，以除去氯仿中的水分.纯化后的氯仿置于试剂瓶中，在低温（4℃）、黑暗状态下保存。
（2）氢氧化钠溶液[c（NaOH）= 1 mol L—1］：通常分析纯固体氢氧化钠中含有碳酸钠，与酸作用时生成二氧化碳,从而影响滴定终点判断和测定的准确度。
配制时应先除去碳酸钠，根据碳酸钠不溶于浓碱,可先将氢氧化钠配成50%（w : v）的浓氧溶液，密闭放置3～4 d.待碳酸钠沉降后，取56 ml 50％氢氧化钠上清液（约19 mol L—1)，用新煮沸冷却的除去二氧化碳的蒸馏水释稀到1 L，即为浓度1 mol L-1 NaOH溶液，用橡皮塞密闭保存。
（3)硫酸钾提取剂[c（K2SO4）= 0。
5 mol L-1]：取1742.5 g分析纯硫酸钾,用研钵磨成粉末状，倒于25 L塑料桶中，加蒸馏水至20 L,盖紧螺旋盖置于摇床（150 r min-1）上溶解24 h 即可。
(4）六偏磷酸钠溶液［ρ（Na）= 5 g 100 ml—1，pH 2.0］：称取50。
0 g分析纯六偏磷酸钠溶于800 ml高纯度去离子水中，用分析纯浓磷酸调节至pH 2。
0，用高纯度去离子水定容至1 L.要注意的是六偏磷酸钠溶解速度很慢应提前配制;由于其易粘于烧杯底部，若加热常因受热不均使烧杯破裂。
（5)过硫酸钾溶液［ρ（K2S2O8）= 2 g 100 ml-1]：称取20。
0 g分析纯过硫酸钾，溶于高纯度去离子水中，定容至1 L。
值得注意过硫酸钾溶液易被氧化，应避光存放且最多使用7 d。
（6）磷酸溶液[ρ（H3PO4）= 21 g 100 ml-1]：量取37 ml 分析纯浓磷酸(85%），慢慢加入到188 ml高纯度去离子水中即可。
（7）邻苯二甲酸氢钾标准溶液[ρ(）= 1000 mg C L-1］）：取2。
1254 g经105℃烘2～3 h 的分析纯邻苯二甲酸氢钾，溶于高纯度去离子水，定容至1 L.2、仪器设备碳–自动分析仪（Phoenix 8000）、容量瓶(100 ml）、振荡器(300 r min-1)、可调加液器（50 ml）、可调移液器（5 ml）、烧杯（盛滤液用）(50～100 ml）、聚乙烯提取瓶（100,150 ml)，聚乙烯塑料桶（20 L，带螺旋盖），三角瓶(150 ml）、其它常规仪器。
3、操作步骤（1)土样前处理新鲜土壤应立即处理或保存于4℃冰箱中,测定前先仔细除去土样中可见植物残体（如根、茎和叶)及土壤动物(如蚯蚓等),过筛（孔径< 2 mm），彻底混匀。
如果土壤过湿，应在室内适当风干,以手感湿润疏松但不结块为宜（约为饱和持水量的40%）。
如果土壤过于干燥,用蒸馏水调节至饱和持水量的40％。
将土壤置于密封的大塑料桶内在25℃条件下预培养7~15 d，桶内有适量水以保持相对湿度为100％，并在桶内放一小杯1 mol L—1 NaOH溶液以吸收土壤呼吸产生的CO2。
经过预培养的土壤应立即分析。
如需保留，应放置于4℃的冷藏箱中，下次使用前需要在上述条件下至少培养24 h。
这些过程是为了消除土壤水分限制对微生物的影响，以及植物残体对测定的干扰.土壤饱和持水量按Shaw（1958）的方法测定:在圆型漏斗下端装一带夹子的橡皮管，漏斗内塞玻璃纤维。
取50 g土壤于漏斗中，夹紧橡皮管，加入50 ml水保持30 min。
然后打开夹子，测定30 min内流出的水量.加入的水量减去流出的水量，再加上原来土壤中含有的水量,即为该土壤的饱和持水量，以烘干土壤质量百分数表示.（2）熏蒸称取经前处理后相当于20。
0 g烘干基重的新鲜土壤（25.0g）3份于50 ml烧杯中。
将烧杯放入真空干燥器中，同时放入盛有去乙醇氯仿（约2/3烧杯)的烧杯2~3个,烧杯内放入少量经浓硫酸处理洗涤后烘干的瓷片(0.5 mm大小,防瀑沸），干燥器底部加入少量水以保持湿度。
用土壤熏蒸抽真空装置抽真空，在–0.07 MPa真空度下使氯仿剧烈沸腾3～5 min。
关闭真空干燥器阀门，移置25℃黑暗条件下熏蒸24 h。
将熏蒸过的土壤转移到另一个干净的真空干燥器中，反复抽真空(–0.07 MPa）6次,每次3 min，彻底除去土壤中的氯仿，直到无氯仿味为止。
否则,残留在土壤中的氯仿将影响分析结果。
熏蒸的同时，另称取等量的土壤3份，置于另一干燥器中，除不加入去乙醇氯仿进行熏蒸外,其他操作与熏蒸土壤一样，作为“对照”土壤。
(3）提取将熏蒸土壤无损地转移到125 ml聚乙烯提取瓶中，加入80 ml 0.5 mol L—1K2SO4，土水比为1 ：4(w ：v),振荡（25℃，300 r min—1）浸提30 min,用中速定量滤纸过滤于125 ml 塑料瓶中。
在熏蒸开始的同时,另称取等量的3份不熏蒸土壤于125 ml聚乙烯提取瓶中,加入80 ml 0.5 mol L—1K2SO4同上浸提。
同时做3个不加土壤的试剂空白.浸提液应立即分析，或在–18℃下保存。
要注意的是低温（–18℃）下保存的土壤浸提液解冻后会出现一些白色沉淀,据推测为CaSO4和K2SO4，对浸提液中有机碳测定没有影响，可不必除去这些白色沉淀(Brookes等，1985)，但解冻后也应立即测定，且在取样前应将浸提液彻底混匀。
(4)测定取10 ml土壤提取液于40 ml样品瓶中(注意解冻的浸提液在取样前应彻底混匀),加入10 ml六偏磷酸钠溶液（pH 2。
0）,使提取液中的沉淀（CaSO4和K2SO4)全部溶解.采用Phoenix 8000碳–自动分析仪测定样液中的有机碳含量。
先采用2 mm细管向样液中通入高纯度氮气5~10 min，先除去溶解在样液中的部分CO2，样液再进入无机碳排除管进一步排除残留的CO2.再进入紫外氧化室，在过硫酸钾溶液和磷酸溶液作用下样液中的有机碳全部氧化为CO2，产生的CO2经纯化后再通过红外检测器测定。
详细操作步骤参见仪器使用说明。
标准碳工作曲线：分别吸取0、2.0、4.0、6。
0、8。
0、10.0 ml浓度为1000 mg C L—1邻苯二甲酸氢钾标准溶液于100 ml容量瓶中,用高纯度去离子水定容.即得到0、20、40、60、80、100 mg C L—1系列标准碳溶液。
分别吸取上述不同浓度度的标准碳溶液10 ml于40 ml 样品瓶中，按上述相同方法测定。
（5）结果计算：土壤微生物量碳:B C = E C / k EC式中：E C = 熏蒸土壤提取的有机碳–不熏蒸土壤提取的有机碳k EC为转换系数，取值0.45。
二、土壤微生物生物量氮（氯仿熏蒸－K2SO4提取—流动注射氮分析仪器法）1、试剂（1）去乙醇氯仿制备：同上(2)硫酸钾提取剂[c（K2SO4）= 0.5 mol L-1]：同上(3）硫酸铬钾还原剂：称取50。
0 g分析纯硫酸铬钾[KGr(SO4)2］，溶于200 ml分析纯浓硫酸，用蒸馏水稀释到1 L。
（4）硫酸铜溶液［c（CuSO4)= 0。
19 mol L—1]：称取30。
324 g分析纯硫酸铜（CuSO4）溶于蒸馏水并定容至1 L。
(5)氢氧化钠溶液[c(NaOH）= 10 mol L-1］：称取400 g分析纯氢氧化钠溶于蒸馏水并定容至1 L。
（6)氢氧化钠溶液[c(NaOH）= 4 mol L-1]：称取160 g分析纯氢氧化钠溶于双蒸水并定容至1 L，使用前用真空抽滤瓶（膜孔径0。
45µm）过滤。
(7）氢氧化钠溶液[c(NaOH)= 0。
01 mol L-1］：取2.5 ml 4 mol L—1 NaOH用去离子水稀释至1 L。
（8）硼酸溶液（ρ（H3BO4）= 2 g 100 ml-1)：称取20.0 g分析纯硼酸（H3BO4）溶于蒸馏水定容至1 L。
（9）硫酸溶液[c(H2SO4）= 0.05 mol L—1]：取28。
8 ml分析纯浓硫酸（H2SO4,ρ= 1.84 g ml-1）用蒸馏水稀释到1 L，此溶液H2SO4浓度为0.5 mol L—1,将该溶液稀释10倍即可得到0。
05 mol L—1硫酸溶液。
再用0。
1 mol L—1标准硼砂溶液标定其准确浓度。
（10）标准硼砂溶液［c（Na2B4O7⋅10H2O）= 0。
1 mol L—1]：先将分析纯硼砂（Na2B4O7 ⋅10H2O）在55℃蒸馏水中重结晶，过滤后得到的结晶放入装有食糖和氯化钠饱和溶液烧杯的干燥器中(相对湿度70%）干燥。
准确称取经重结晶和干燥的硼砂38。
13672 g，溶解于蒸馏水并定容至1 L.（11）指示剂贮存液:称取1。
0 g氨混合指示剂溶解于10 ml 0。
01 mol L—1 NaOH和10 ml 95%乙醇混合液中，用去离子水定容至200 ml。
该贮存液可存放1个月。
（12）指示剂溶液：取10 ml指示剂贮存液用去离子水稀释并定容至500 ml，用真空抽滤瓶(膜孔径0.45 µm)过滤。
注意:此溶液应使用前一天配制,最多可使用1周。
(13)标准氯化铵贮存液[ρ(NH4Cl）= 1000 µg N ml-1］：称取经105℃烘2~3小时的分析纯氯化铵3。
8190 g溶于去离子水中并定容至1 L。
此贮存液可稳定保存数月.(14）标准氯化铵溶液［ρ(NH4Cl)= 50 µg N ml—1]:取10 ml 1000 µg N ml—1氯化铵用去离子水稀释至200 ml。
此溶液最多保存7 d。
2、仪器设备流动注射氮分析仪（FIAStar 5000,丹麦福斯公司）、真空抽滤瓶(膜孔径0.45µm)、容量瓶(100 ml）、其他仪器设备同上。
3、操作步骤（1）土壤前处理、熏蒸、提取同上。
（2)提取液中硝态氮还原：吸取15。
0 ml熏蒸与不熏蒸土壤0.5 mol L—1 K2SO4浸提液于250 ml消化管中，加入10 ml硫酸铬钾还原剂和300 mg锌粉，至少放置2 h后再消化。
研究结果表明熏蒸与不熏蒸土壤提取液中硝态氮含量差异很小,在测定土壤MB-N时，可以不包括硝态氮，即省略提取液中硝态氮还原过程。
（3）消化：方法Ⅰ:吸取10.0 ml熏蒸与不熏蒸土壤0。
5 mol L-1 K2SO4浸提液（或经还原反应后的浸提液)于250 ml消化管中，加入0。
2 ml 0。
19 mol L—1 CuSO4溶液、5 ml分析纯浓硫酸、及少量防瀑沸的颗粒物（如经浓硫酸处理并洗涤后烘干的瓷片,0。
5 cm大小），混合液消化变清后再回流3 h。