H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗的构建及其遗传稳定性与免疫效力

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表达2.3.2.1d分支H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸭瘟病毒的构建和评价

表达2.3.2.1d分支H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸭瘟病毒的构建和评价

中国预防兽医学报Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine第42卷第12期2020年12月V ol.42No.12Dec.2020doi :10.3969/j.issn.1008-0589.202003016表达2.3.2.1d 分支H5亚型禽流感病毒HA 基因重组鸭瘟病毒的构建和评价王波,赵玉博,胡玉珍,丁蕾蕾,陈普成,焦晨晨,姜永萍,陈化兰,柳金雄*(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150069)摘要:为研究H5亚型禽流感病毒(AIV )HA 基因重组鸭瘟病毒(DEV )载体活疫苗,本研究利用DEV 疫苗株多片段体外拯救系统,将我国H5亚型AIV 2.3.2.1d 分支代表病毒CK/LN/SD007株的血凝素(HA )基因插入DEV 基因组中,构建了重组DEV ,对其进行PCR 、间接免疫荧光实验、western blot 和传至15代后的遗传稳定性试验。

结果显示,构建了一株表达CK/LN/SD007株HA 基因的重组DEV ,并且HA 基因能够在重组病毒中正确表达并稳定遗传,命名为rDEV H5-12;将rDEV H5-12和亲本病毒DEV 疫苗株接种鸡胚成纤维细胞(CEF )后,收集96h 内不同时间点的病毒样品,检测TCID 50并绘制生长曲线。

结果显示,rDEV H5-12在CEF 中的生长曲线和亲本病毒DEV 疫苗株无显著差异;rDEV H5-12以105TCID 50免疫SPF 鸭2周后,进行DEV 和AIV 攻毒保护试验。

结果显示,rDEV H5-12一次免疫SPF 鸭后2周即能诱导对DEV 强毒和AIV (CK/LN/SD007)攻击的完全保护,即免疫组SPF 鸭在观察期内无排毒,无死亡,对照组SPF 鸭在观察期内全部排毒,而且死亡;rDEV H5-12以105TCID 50免疫SPF 鸭2次后,每周采集血清进行血凝抑制(HI )抗体效价检测。

江西省大力推广畜禽清洁生产

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蛋鸡场常用疫苗的作用与用途、用法与用量、休药期及有关规定

蛋鸡场常用疫苗的作用与用途、用法与用量、休药期及有关规定
用于预防雏鸡传染性法氏囊病
颈背部皮下注射。18~20周龄鸡1.2ml/只
休药期28d
2℃~8℃保存,有效期为6个月
21
鸡传染性支气管炎疫苗
鸡传染性支气管炎活疫苗(H120株)
滴鼻或饮水接种。用于初生雏鸡的首免,不同品种鸡均可使用,至1~2 月龄时,须用H52 疫苗
21
鸡传染性支气管炎疫苗
鸡传染性支气管炎活疫苗(H120株)
9
鸡新城疫活疫苗(CS2株)
用于预防鸡新城疫,专供已经鸡新城疫低毒力活疫苗接种过的鸡使用,免疫期为1年
按瓶签注明的羽份,用灭菌生理盐水或其他适宜的稀释液稀释,皮下或胸部肌肉注射1ml(应在在产蛋前或休产期进行接种)
①本疫苗系用中等毒力株制成,专供已经鸡新城疫低毒力活疫苗接种过的1月龄以上的鸡使用,不得用于初生雏鸡。②(-15)℃以下保存,有效期为75株)
用于预防鸡传染性法氏囊病
用于14日龄鸡饮水接种。将1000羽份疫苗稀释于15升饮水中,持续搅拌直至溶解后,用于接种1000只雏鸡。雏鸡可在7日龄时进行接种,但一般情况下应在14日龄时首免,可在4周龄时加强接种
2℃~8℃保存,有效期为36个月
20
鸡传染性法氏囊病活疫苗(CJ-801-BKF株)
①疫苗稀释后应放冷暗处,限4h内用完。②饮水接种时,忌用金属容器,饮水前应停止2h~4h。③用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理
23
鸡传染性支气管炎活疫苗(W93株)
用于预防嗜肾性鸡传染性支气管炎病毒感染。接种后5日产生免疫力,一次接种的免疫期为3个月,两次接种的免疫期为5个月
按瓶签注明羽份,用生理盐水稀释,每1000羽份加生理盐水30~50 ml,每只鸡滴鼻0.03~0.05 m1,饮水接种或在发病初期(越早越好)紧急接种时,接种量应加倍。饮水接种时,饮水量视鸡龄大小、品种、季节而定,5~10日龄5~10 m1;20~30日龄10~20 m1;成鸡,20~30 ml。炎热季节的饮水量应适当增加

H5亚型禽流感病毒HA基因杆状病毒载体的构建

H5亚型禽流感病毒HA基因杆状病毒载体的构建

H5亚型禽流感病毒HA基因杆状病毒载体的构建熊蕊;邓国华;黎玉梅;冉多良;陈化兰【期刊名称】《黑龙江畜牧兽医》【年(卷),期】2007()5【摘要】经过PCR反应,以特异性引物扩增了禽流感病毒DK/Zhejiang/11/00(H5N1)去除信号肽的HA基因,克隆到杆状病毒转移载体pFastBac-HTA中,阳性重组质粒转座DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选、PCR鉴定获得阳性克隆,碱裂解法提取阳性质粒,转染sf 9昆虫细胞,获得含H5亚型禽流感病毒HA基因的重组杆状病毒H5HA-Bac HTA。

利用SDS-蛋白酶K方法提取重组病毒DNA,PCR反应证实HA基因片段已重组到杆状病毒基因组中。

以适宜剂量的重组杆状病毒接种sf 9昆虫细胞,待绝大部分细胞产生细胞病变后收获细胞。

细胞裂解产物经间接免疫荧光、SDS-PAGE及Western-Blot试验检测,结果表明:H5亚型禽流感病毒HA基因在重组杆状病毒H5HA-Bac-HTA感染sf 9细胞后获得高效表达,且具有良好的蛋白活性及特异免疫反应原性。

【总页数】3页(P15-17)【关键词】H5;禽流感病毒;HA基因;重组杆状病毒【作者】熊蕊;邓国华;黎玉梅;冉多良;陈化兰【作者单位】中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室;新疆农业大学动物医学学院【正文语种】中文【中图分类】S852.659.5【相关文献】1.H5N1亚型禽流感病毒HA、NA基因在杆状病毒中的重组体的构建 [J], 杨若松;李明义;赵雪丽;张志2.H5N1亚型禽流感病毒HA基因杆状病毒双表达系统的构建及其在小鼠的免疫原性分析 [J], 樊惠英;林文耀;佟铁铸;张杰;叶昱;靳立明;张春雷;廖明3.禽流感病毒H5亚型HA基因在杆状病毒系统中的表达及生物学活性鉴定 [J], 赵双成;常晓飞;田石;柳金雄;陈普成;田国彬;邓国华;姜永萍;陈化兰4.H5亚型禽流感病毒HA基因在重组杆状病毒中的表达及检测 [J], 费东亮;金宁一;马鸣潇;夏志平;鲁会军;金扩世5.H5亚型禽流感病毒HA基因昆虫/杆状病毒系统的表达及对BALB/c小鼠的免疫保护 [J], 孟庆文;刘光亮;于康震;童光志;刘娣;施建忠;陈化兰因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

H5亚型禽流感病毒实时荧光RT-PCR方法的建立与应用

H5亚型禽流感病毒实时荧光RT-PCR方法的建立与应用

H5亚型禽流感病毒实时荧光RT-PCR方法的建立与应用蒋文明;李阳;程善菊;刘华雷【摘要】H5亚型禽流感病毒HA序列差异越来越大.为更准确地检测H5亚型禽流感病毒,对GenBank中发表的H5亚型禽流感病毒HA序列以及本实验室保存病毒序列进行比对,同时设计1对引物和1条探针,建立了H5亚型禽流感病毒实时RT-PCR方法,并对该方法的反应体系和反应参数进行了优化.以本实验室分离测序确定的30份H5亚型禽流感病毒RNA为模板,将该方法与两种商品化H5亚型禽流感病毒检测试剂盒进行比对,发现该方法与两种商品化试剂盒的检出率分别为100%、98%、98%.敏感性试验显示,该方法可以检测出0.1 fg的RNA模板,灵敏度比两种商品化试剂盒均提高了10倍.结果表明,该方法具有更高的特异性和敏感性,可用于H5亚型高致病性禽流感的早期诊断.【期刊名称】《中国动物检疫》【年(卷),期】2019(036)003【总页数】5页(P87-91)【关键词】H5亚型;禽流感;实时RT-PCR;敏感性;特异性【作者】蒋文明;李阳;程善菊;刘华雷【作者单位】中国动物卫生与流行病学中心,国家禽流感专业实验室,山东青岛266032;中国动物卫生与流行病学中心,国家禽流感专业实验室,山东青岛266032;中国动物卫生与流行病学中心,国家禽流感专业实验室,山东青岛266032;中国动物卫生与流行病学中心,国家禽流感专业实验室,山东青岛266032【正文语种】中文【中图分类】S852.651996年,我国首次从广东省鹅体内分离到H5N1亚型高致病性禽流感病毒(Highly pathogenic avian influenza virus,HPAIV)[1]。

从2003年末开始,H5N1亚型禽流感疫情在东南亚多个国家的家禽中暴发,包括越南、泰国、韩国、日本、柬埔寨和印度尼西亚。

2004—2015年,我国多个省份暴发H5N1亚型高致病性禽流感疫情,导致超过2 000万只禽类被扑杀,给养禽业造成巨大经济损失。

鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗喉痘二联疫苗在养鸡生产中的使用

鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗喉痘二联疫苗在养鸡生产中的使用

鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗(喉痘二联疫苗)在实际养鸡生产中的使用鸡传染性喉气管炎是由传染性喉气管炎病毒感染引起的一种急性、接触性上部呼吸道传染病。

发病特征表现为:伸脖张口、呼吸困难、咳嗽、怪叫、甩头,严重病鸡咳出有血样粘条状渗出物;剖检可见:喉部及气管粘膜水肿、出血、糜烂,个别病例发病后期炎性渗出物形成干酪样结痂,附着于喉部或气管中上部;传喉一般冬春季易发(流行区域全年皆有发病),发病急、传播快、死亡率高,发病率大多在20%-30%,病死率10%左右;蛋鸡和肉鸡各日龄段均可感染发病,尤以蛋鸡开产前后易感,导致蛋鸡产蛋性能下降、体重减轻及对其他呼吸道疾病更易感,若引发继发感染或混感其他传染性疾病,死亡可高达50%-60%,给养鸡生产造成巨大经济损失。

防控:疫苗接种仍是目前最有效的防控措施。

当前可选择的疫苗主要有两种:鸡传染性喉气管炎活疫苗(俗称:喉气弱毒苗)和鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗(俗称:喉痘二联苗)喉气弱毒苗通常进行点眼免疫,使用方便,但同时该疫苗存在明显的副反应。

一是免疫过后表现有不同程度的应激反应,如:呼噜、流泪、采食下降等类似自然发病症状,严重的甚至出现死亡增加,混感鸡群反应更为严重,致使病程延长;另一方面表现为:免疫鸡群的慢性带毒与排毒散毒问题,导致潜在而持续的病毒感染,疫苗毒株毒力返强,污染环境,引发生物安全隐患,增加免疫鸡场及周边养殖区域免疫压力。

针对这些问题现状,唯一的解决办法是使用更为安全可靠的疫苗。

理想的疫苗应该具有以下的特点: 1、使用方便, 最好能通过疫苗株或病毒株的自然感染途径实施免疫; 2、安全性好, 不会因为免疫接种造成病毒扩散或者形成新型的病毒; 3、没有毒、副作用, 不会因为疫苗免疫而造成鸡群的应激反应, 影响免疫鸡群的生长发育; 4、快速诱发免疫反应, 避免因为免疫反应延迟而造成鸡群疾病的暴发; 5、免疫持续期长, 减轻反复免疫带来的工作负担。

Clade2.3.2.1c H5N1亚型禽流感疫苗候选株的构建

Clade2.3.2.1c H5N1亚型禽流感疫苗候选株的构建刘开拓;高如一;孙文强;李娟;刘东;胡娇;顾敏;王晓泉;刘晓文;刘秀梵【期刊名称】《中国家禽》【年(卷),期】2017(39)4【摘要】近年来clade2.3.2.1c中的H5N1亚型禽流感病毒的抗原性发生了很大变化,Re-6疫苗并不能对其提供有效保护。

为对该分支毒株进行有效防控,研究以A/Puerto Rico/8/34(H1N1,PR8)毒株为内部基因供体,以clade2.3.2.1c的H5N1亚型毒株A/chicken/Jiangsu/YB7/2015(YB7)的HA和NA基因作外部供体,并删除YB7株HA中裂解位点处的多个碱性氨基酸,通过反向遗传方法成功拯救出1株重组病毒r YB7。

r YB7株病毒在鸡胚和MDCK细胞上均有较好的繁殖性能,对SPF鸡胚和鸡均无致病性。

本实验室在对毒株抗原性研究的基础上研发的疫苗候选株为防控变异的clade2.3.2.1c的禽流感病毒提供了良好的疫苗备选。

【总页数】5页(P17-21)【作者】刘开拓;高如一;孙文强;李娟;刘东;胡娇;顾敏;王晓泉;刘晓文;刘秀梵【作者单位】扬州大学兽医学院动物传染病实验室;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;江苏省人畜共患病重点实验室【正文语种】中文【中图分类】S855.3【相关文献】1.第2.3.2.1分支H5亚型禽流感变异株候选疫苗株的构建及免疫效力试验2.7.2分支H5N1亚型禽流感病毒反向遗传疫苗候选株的构建3.Clade2.2 H5N1亚型禽流感重组灭活疫苗株的构建及其对小鼠免疫效力的评价4.H5N1亚型禽流感病毒A/Anhui/2/2005活候选疫苗株的构建及其对鸡致病性的研究5.鸭源H5N1亚型禽流感疫苗候选株的构建因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对高致病力禽流感病毒攻击的免疫保护

H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对高致病力禽流感病毒攻击的免疫保护姜永萍;张洪波;李呈军;步志高;于康震;陈化兰【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2005(36)11【摘要】对H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5的免疫效果进行了研究.pCAGGoptiHA5分别以100和10μg剂量一次或两次免疫3周龄SPF鸡,首次免疫后4周以同样剂量和途径进行第二次免疫,一次免疫后4周、两次免疫后2周分别用100LD50的HPAIV A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3、5、7天采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、NT 抗体以及AGP抗体的动态变化.结果,100μg pCAGGoptiHA5一次免疫、100μg pCAGGoptiHA5两次免疫以及10 μg pCAGGoptiHA5两次免疫均可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),10μg剂量pCAGGoptiHA5一次免疫可对免疫鸡形成100%的保护(不发病、不致死),结果表明,pCAGGoptiHA5作为疫苗效果良好、成本低廉,有望成为预防H5亚型高致病力禽流感的高效、安全新型基因工程疫苗.【总页数】5页(P1178-1182)【作者】姜永萍;张洪波;李呈军;步志高;于康震;陈化兰【作者单位】中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,哈尔滨,150001;农业部畜牧兽医总站,北京,100026;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,哈尔滨,150001【正文语种】中文【中图分类】S858.32.5+2【相关文献】1.H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对鸭免疫保护效力的研究 [J], 李俊平;赵双成;常晓飞;柳金雄;曾显营;卫星辉;李福基;姜永萍;陈化兰2.H5亚型禽流感病毒A/Duck/Anhui/1/2006(Clade 2.3)密码子优化HA基因DNA疫苗的免疫保护效力研究 [J], 王国俊;熊杰;李俊平;曾显营;田国彬;李雁冰;施建忠;姜永萍;陈化兰3.水禽用H5亚型禽流感灭活疫苗对高致病性禽流感病毒流行毒株的免疫保护效果研究 [J], 吴涛;毛娅卿;王嘉;王哲;蒋桃珍4.Clade 2.3.2e H5亚型禽流感DNA疫苗的免疫保护效力研究 [J], 潘俊慧;梁真洁;陈普成;唐猛;曾显营;柳金雄;邓国华;姜永萍;陈化兰5.H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对商品蛋鸡的免疫保护效果 [J], 姜永萍;张洪波;张平静;赵有淑;王全英;邓国华;陈化兰因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对商品蛋鸡的免疫保护效果

H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对商品蛋鸡的免疫保护效果姜永萍;张洪波;张平静;赵有淑;王全英;邓国华;陈化兰【期刊名称】《中国兽医学报》【年(卷),期】2007(27)1【摘要】将密码子及表达载体优化的H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5以50μg和10μg剂量单次或加强免疫5周龄海兰褐蛋鸡。

单次免疫后3周及加强免疫后2周,用100LD50高致病力禽流感病毒A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[Gs/GD/1/96(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,并分别于攻毒后3、5、7d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、AGP抗体的动态变化。

结果表明,pCAGGoptiHA5以10μg加强免疫后,可以诱导商品蛋鸡产生较高水平的HI抗体,并可保护免疫蛋鸡不发生高致病性禽流感病毒攻击后的死亡。

【总页数】4页(P62-65)【关键词】禽流感;DNA疫苗;商品蛋鸡;免疫保护【作者】姜永萍;张洪波;张平静;赵有淑;王全英;邓国华;陈化兰【作者单位】中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.HA基因密码子及表达载体优化的H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果比较[J], 姜永萍;张洪波;李呈军;步志高;邓国华;于康震;陈化兰2.H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对高致病力禽流感病毒攻击的免疫保护 [J], 姜永萍;张洪波;李呈军;步志高;于康震;陈化兰3.H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对鸭免疫保护效力的研究 [J], 李俊平;赵双成;常晓飞;柳金雄;曾显营;卫星辉;李福基;姜永萍;陈化兰4.重组禽流感病毒H5+H7亚型三价灭活疫苗(H5N1Re-11株、Re-12株+H7N9Re-2)对蛋鸡免疫效果抗体监测以及安全性试验评估 [J], 杨起贺; 杨浩; 高鹏; 荣富龙; 李叔伟5.重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗对商品蛋鸡免疫程序优化 [J], 王申锋;钱明珠;谢军强;王德刚;朱红标;胡梅;化军因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

禽流感病毒H5亚型主要保护性抗原在禽痘病毒中的高效表达

禽流感病毒H5亚型主要保护性抗原在禽痘病毒中的高效表达陈素娟;孙蕾;石火英;彭大新;刘秀梵【期刊名称】《中国兽医学报》【年(卷),期】2007()2【摘要】将H5亚型禽流感病毒血凝素HA基因克隆入插入载体p11S中获得重组转移质粒p11SH5A,通过酶切鉴定获得了预期的转移质粒p11SH5A,将质粒p11SH5A和野生禽痘病毒(wtFPV)共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过蓝白斑筛选纯化得到重组病毒rFPV-11SH5A。

以间接免疫荧光法证实,HA基因得到了表达。

将该重组病毒rFPV-11SH5A以105PFU/只免疫7日龄SPF鸡,于7、10、14、18、21d分别采血分离血清检测HI抗体,于免疫21d后用105ELD50的野生病毒进行肌肉注射观察疫苗保护率。

结果表明,该疫苗能提供100%的保护。

【总页数】3页(P200-202)【关键词】H5亚型禽流感病毒;血凝素HA基因;重组鸡痘病毒;免疫效力【作者】陈素娟;孙蕾;石火英;彭大新;刘秀梵【作者单位】扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.表达H5亚型禽流感病毒HA基因和鸡IL-18基因重组禽痘病毒的构建 [J], 陈红英;黄青云;崔保安;李新生;管倩2.表达H5亚型禽流感病毒HA蛋白的重组禽痘病毒的构建 [J], 焦同路;陈化兰;王靖飞;赵双成;王世达;常晓飞;田石;柳金雄;李雁冰;姜永萍3.表达H5亚型禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶双基因重组禽痘病毒的构建 [J], 乔传玲;于康震;贾永清;刘明;孟庆文;田国彬;唐秀英4.共表达H5和H9亚型禽流行性感冒病毒血凝素基因的重组禽痘病毒及其免疫效力 [J], 陈素娟;石火英;孙蕾;刘秀梵5.H5N1亚型禽流感病毒NA基因在重组禽痘病毒中的表达及其产物的免疫原性[J], 王全英;乔传玲;张洪波;吴运谱;田国彬;陈化兰因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

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