黄连指纹图谱研究进展

１ ７ Ｉ， 动相 为 Ｃ ３ — 。（５： ５ 含 ２ ｍ ｌＬＣ 。ＯＮ ， ． Ⅲ１ 流 ） ＨＣ Ｈ０ ２ ７ ， ０ｎ ｏ ／ ＨＣ Ｏ Ｈ） Ｎ ｌ
药根碱 、非洲防 己碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱 。
氨 水调 ｐ Ｈ为 １ ， ０ 流速为 ０４ ｍ ／ ｉ， ． Ｌ ｍ ｎ 检测波长 ３０ Ｆ ， ５ ｌ 温度 ｍ ２ ５℃， 分析 时间 ３ｍ ｎ 主成分 分析表 明， ｉ 。 色谱峰 ５ 表 小檗碱 、 、 巴马汀 、黄连碱 、小檗碱为黄连 的 ５ 种标志性组分 。在用化学 统计学方法 比较不 同产地黄连 ５种生物碱含 量后， 该研究认为 重 庆石柱黄连 的质量较其他产地的黄连质量好 。 １ ２ ３ 谱效研究 ．． Ｗ ｉＪ ｎ Ｋ ｎ ｅ — ｕ ｏ ｇ等 Ｉ Ｌ —Ａ 。 Ｊ Ｃ Ｐ Ｄ建立黄连 用 Ｐ 指纹图谱， 分离得到 １ １个色谱指纹峰， 并用微量热法研究黄连 对 大肠杆 菌的抗菌活性 。 黄连 指纹 图谱峰与抗菌活性之间 的关 系用典型相 关法分析 （Ｃ ） 究。色谱条件 为：Ｃ 柱 （０ ｍ Ｘ ＣＡ研 ５ ｍ ２ １ｌ， ． ） 流动相 为 ＣｔＮ ｔ０ ２ ７ ， 中含 ２ ｍ ｌＬ ． ／／１ ７ ， ｌ ／ ／ ｔＣ — （５： ５ 其 ￣ ｔ ５ｍ ｏ ／
条件 、生长年限对黄连 中小檗碱 、巴马汀和药根碱 的含量影响 较大， 而种植密度 的影响不 显著 ；不 同产地 的黄连 中这 ３种生
物 碱 的含 量 差 别 较 大 ； ３种 生物 碱 在 用 不 同炮 制 方 法 制 备 的 这 黄 连 中 的含 量 差 别 不 明 显 。霍 氏 也 用 相 似 的方 法 建 立 了黄 连
术 。因其 具有 高效 、快速 、灵敏、重复性好 、应用范围广 等特 点， 目前 已成为常用控制中药质量的有 效方 法。其得到的色谱 图包 含丰富 的信 息， 除特 征性成分外， 还可表 征其他组分 的一 些信 息。Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ因可与多种检测器和光谱仪 联用， 其应 用前景非 常广 阔。 研 究， 很多学者 以不同色谱条件建立了相应 的指纹图谱。其色 谱柱 均为反相色谱柱 Ｃ 多 以磷酸 盐缓冲液 与乙腈为溶剂体 系洗脱， 区别在于梯度选 择条件、检测器 、检测 波长、流速 、 柱温等有异， 从而导致分析时 间不 同， 图谱也存在一定 的差异 。 乐 氏 等 用 反 相 高 效 液 相 色 谱 一 极 管 阵 列 检 测 器 二 （Ｐ Ｈ Ｌ — Ａ ） Ｒ － Ｐ Ｃ Ｄ Ｄ 法建立 了雅连 的指 纹图谱， 所用条 件为磷酸缓 速变 为 ０ ６ｍ ／ ｉ， Ｄ ． Ｌ ｍ ｎ Ｓ Ｓ为 １ ｍ ｌＬ ＨＰ ５ ｍ ｏ ／ ， 。 调节 ｐ Ｏ Ｈ为 ４ ０ ．。 １ １ ２ 二维高效液相 色谱法 ．． 一维 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ受固定波长的限制， 导致 中药中很 多组分 的吸收峰可能未被检 出， 而利用高效液相 色 谱二级 阵列管检测器 （Ｐ Ｃ Ｄ Ｄ 和数字 图像识别技术 为基 ＨＬ／Ａ） 础 建立的二维高效液相色 谱 （Ｄ Ｈ Ｌ ） ２ — Ｐ Ｃ 指纹图谱可得到所有波 的特征峰， 也可对组分进行 定量 分析。Ｈ ｎ ｉ ｈ ｉ等 把 ｏｇＬｎＺａ ２ — Ｐ Ｃ Ｄ Ｄ法用于不 同黄连样 品的质量分析 中， ＤＨ Ｌ ／Ａ 建立 了黄连 二 维指纹 图谱， 同时利 用灰度 图像 的密度， 对小檗碱 、药根碱 、 巴马汀 ３个成分进行定量分析 。结果表明， 聚类分析结果与样 品真 实情况 一致 ， 其组分浓度与灰度 图像密度之间的相关系数 大 于 ０９ ９ ．９ 。
Ｄ ｌ １ ． ９ ９ ｊ ｉ ． ０ — ４ ２ １ ． ５ ０ １ ０ ： ０ ３ ６ ／ ． ｓ １ ５ ５ ０ ． ０ ２ ０ ． ５ Ｓｎ ０ ３
中图分类号：Ｒ ８ ２
文献标 识码 ：Ａ
文章编号：１０ —３４２ １）５０ ０ —４ ０ ５５ ０ （０ ２０ —１９０ １ｍ ／ ｉ ， Ｌ ｍ ｎ 柱温 为室温 。结果共分离得到 ２ Ｏ个指纹峰， ２个共 １ 有 峰， 分析时 间 ２ ｉ 。表 明黄连 经不 同辅料炮制后 ， ０ｍ ｎ 各炮制 品的 Ｈ Ｌ ＰＣ指纹 图谱 上均 出现 了一 些非共有特征 峰， 此差异可 作 为黄连不 同炮制 品鉴别 的依据 。杨 氏 用 Ｈ Ｌ ＰＣ研究 了云南 黄连和 西藏 黄连 的指纹图谱。色谱 条件 与廖 氏等 的相似 ， 流动 相 比例变为 ｃ 。Ｎ ０ ｍ ｏ ／ ＨＰ Ｈ ：５ ｍ ｌＬ Ｋ Ｏ溶液＝４ ６ ， ｃ ０： Ｏ 检测波长 ２８ｎ ， ６ ｍ 柱温 ４ ℃。确定 了 １ ０ １个共有 峰， 对其中 ６个峰进行 了指 认， 分别为小檗碱 、巴马汀 、黄连碱 、药根碱 、非洲防 己 碱 、 兰地 新 （ｒ ｅ ｄ ｃ ｎ ） 结果显示， 格 ｇｏｎｉｉｅ 。 云南黄连和西藏黄连 中均未检测 出表 小檗碱 ； 从指纹图谱角度证实二者是 ２个不 同 的种 ；二者 差异在 于黄连碱和 巴马汀峰面积有 别。基 于 Ｈ Ｌ ＰＣ
测 器法 （Ｐ Ｃ Ｐ Ｄ 对 １ Ｕ Ｌ — Ａ ） ０批 不 同产 地来 源 的黄 连 建 立 了指 纹 图
指纹 图谱， 共得到 ９个共有 峰。 色谱条件为 ｃ １ｏ ｉ ． ｍ （５ ｌ ｍｌ ６ ， ×４ ｍ ５ｌ ） Ｃ。Ｎ Ｈ （．％ Ｄ ） ｉ ，ｌ — ０ １Ｓ Ｓ 溶剂体系梯度洗脱， ａ ｎ ｔ Ｃ ０ 流速 １０ｍ ／ ｉ， ． Ｌ ｍ ｎ
了 ５ 羟 基 小 檗 碱 的 位 置 。结 果 表 明， 同 的栽 培 条 件 中， 荫 一 不 遮
种快速 色谱技术， 也是在 Ｈ Ｌ 的基础上进一步发展 的一种快 ＰＣ 速液相色谱， １ ７Ⅲｌ 用 ． Ｉ微粒填充色谱柱 。Ｊ ｎ ｕ ｈ ｒ 等 ｕｈ ｉＣ ｅ ｔ ”
利 用 Ｕ Ｌ 建 立 黄 连 指 纹 图谱 ， ８ 指 纹 特 征 峰 进 行 定 性 和 定 ＰＣ 对 个 量 分 析 。这 ８个 指 纹 峰分 别 为 木 兰 碱 、 四氢 斯 氏紫 堇 碱 ／ 兰 格
检 测 波 长 ３ ５ ｎ ， 温 ３ ℃， 析 时 间 ６ ｉ 。质 谱 以 Ｅ Ｉ ４ ｍ 柱 Ｏ 分 Ｏｍ ｎ Ｓ
正离子模式监测 。 在对 ９个共有 峰一级和二级质谱 图进行分析
的基 础 上 ， 测 主 要 成 分 的 可 能 结 构 分 别 为 木 兰 碱 、未 知 峰 、 推
谱， 共分离得到 １ 个共有峰。色谱条件为 ｃ 柱 （Ｏ ｍ ． ｉ １ ５ ￣２ １ ｎ 。 ｍ ａ ｒ，
・
１ ０‘ １
Ｃｈｉ ｅｓ Ｊ ｕｒ ａｌ ｆ ｎ ｏｒ ｎ ｅ ｏ ｎ ｏ Ｉ ｆ ｍａｔ ｏ ０ １ Ｃ ｉｎ １ Ｔ Ｍ
Ｍ ２ １ Ｖｏ１ １ Ｎ ５ ａｙ ０ ２ ９ ｏ．
．
果分别为 ：５ 羟基小檗碱、非洲防 己碱、药根碱、表 小檗碱 、 一 黄连碱 、巴马汀和小檗碱 。这是首次用此法从指纹 图谱 中指认
中药指纹 图谱具有整体性和模糊性的特点， 已成 为国际公 认 的控制 中成药、天然药物质量最有效的方法。以指纹图谱为 基础 ， 可用 中药 的谱 效关系来指导相应 的药效和药 理研究 。 为实现 中药质量标准现代化， 中药指纹 图谱研 究及建立相应 的 指纹谱 图数据库就成为一项迫切的任 务。 黄连为毛莨科植物黄连 Ｃｐ ｉ ｈ ｎ ｎ ｉ ｒ ｎ ｈ 的干 ｏ ｔｓ ｃ ｉ ｅｓ ｓ Ｆ ａ ｃ ． 燥根茎， 味苦 ， 其 性寒， 归心 、脾 、胃、肝、胆 、大肠经， 具有清 热燥湿 、泄火解毒、抗癌等功 效；主要化学成分为异喹啉 生物 碱， 其中小檗碱含量最高， ８ 。随着对黄 连相 关研 究工作的 约 ％ 开展， 对黄连指纹图谱研 究工作也不断更新。笔者现 按照指纹 图谱研 究方法 的不 同， 其相关研究进展 综述如下， 对 以期 为黄
为 ：Ｃ ３ ：５ ｍ ｌ Ｌ Ｋ ｚ 液 （。 ｐ ． ） ０： ０ ＨＣ Ｎ ０ ｍ ｏ ／ ＨＰ 溶 Ｏ ＨＰ 调 ｎ ３０ ＝５ ５ ０
１ １ ３ 高效 液相 色谱一 ． ． 质谱联用 技术 在 建立的指纹 图谱 基
础 上， 为进一步对 各指纹峰进行 定性分析， 又建立 了 Ｈ Ｌ — Ｓ Ｐ Ｃ Ｍ 法 。盛 氏等 采用高效液相色谱 紫外检测器 （Ｐ Ｃ Ｕ ） Ｈ Ｌ — Ｖ 方法建 立 了黄连药材指纹 图谱， 同时用 Ｈ Ｌ — Ｓ联用 技术对 ７个主要 ＰＣＭ 色谱 峰进行 定性 分析 ， 比较不 同栽培条件、不 同产地和不 同 并 炮制 方法制备 的黄 连药材 中小檗 碱 、巴马汀和药根碱含量 差 异 。Ｈ Ｌ — Ｖ色谱条件为：Ｃ （５ ｍ ． ＰＣＵ 。 １０ｍ ×４ ６咖， Ｊ ， ５ ｕ ） 流动相 ｎ Ａ为 Ｈ０Ｃ 。 —ＨＣ （Ｏ： ５： ５ ， ２一 ＨＯ Ｃ ￣Ｎ Ｉ ４ ４ ） 流动相 Ｂ为 Ｃ ３Ｎ缓冲液 Ｈ Ｈ Ｃ （０ｍ ｏ ／ ＨＡ ：５ ｍ ｌ ＬＳ Ｓ和 ２ Ｈ ｃ的水溶 液＝４ ６ ） ５ ｍ ｌＬＮ Ｃ ｏ ／ Ｄ ｍ ％Ａ ０： ０
梯 度 洗 脱 ， 测波 长 ２ ５ｎ ， 速 ０ ８ｍ ／ ｉ， 温 ３ ℃ 。质 检 ６ ｍ 流 ． Ｌｍ ｎ 柱 Ｏ
等度洗脱， 内含 Ｓ Ｓ １ ． ｍ ｌＬ 检测波长 为 ３ ５ ｎ ， Ｄ ２ ５ ｍ ｏ ／ ， ４ ｍ 流速为
谱 以电喷雾 （Ｓ ） Ｅ Ｉ 正离子模式监测 。对 ７个主要色谱峰定性结
连进一步质量控制和药效研究提供帮助 。
１ 色谱法 １ １ 高效液相 色谱 法 ．
具有分 离、高效 、重复性好、灵敏 的特点， ０ ０ ２ １ 年版 《 中华人
民共和 国药 典》（ 以下简称 “ 中国药典》 黄连及其饮片中生 《 ”） 物碱含量测定方法 由 ２ ０ ０ ５年版 《 中国药典》中的 Ｔ Ｃ Ｌ Ｓ改为
高效液相色谱法 （Ｐ Ｃ 及高效液相色谱一 Ｈ Ｌ） 与质谱联用技术 Ｒ — Ｐ Ｃ 由小檗碱为单一测定指标变为 以小檗碱 、巴马汀、黄 ＰＨＬ， （Ｐ Ｃ Ｍ ） Ｈ Ｌ — ｓ 指纹 图谱 是 ２ Ｏ世纪 ６ ０年代开始的一项现代 分析技 连碱 、表 小檗碱 为测 定指标 。色谱条件 与廖 氏等 的相似， 仅流