珊瑚状猴头菌多糖对大鼠肝抗氧化及代谢调节_唐鹏
平贝母多糖对D-半乳糖诱导衰老模型小鼠的抗氧化作用
平贝母多糖对D-半乳糖诱导衰老模型小鼠的抗氧化作用刘春红;金钟斗;韩宝瑞【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2011(032)023【摘要】为了探讨平贝母多糖对D-半乳糖诱导衰老模型小鼠的体内抗氧化作用,采用颈背皮下注射D-半乳糖（500mg/（kg.d））建立亚急性衰老小鼠模型,通过对各组小鼠一般体征、脏器指数、血清或肝组织抗氧化酶活性及脑组织单胺氧化酶（MAO）活力的比较分析,全面评价平贝母多糖FUP-1的抗氧化衰老作用。
结果表明：与模型组相比平贝母多糖FUP-1能显著降低D-半乳糖诱导衰老小鼠肝脏组织中丙二醛（MDA）含量（P〈0.05）,提高肝组织中总抗氧化能力（T-AOC）、显著提高肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和血清超氧化物歧化酶（SOD）活性（P〈0.05）,同时降低脑组织中MAO活力。
提示平贝母多糖FUP-1具有一定的延缓衰老作用,其作用可能与其提高抗氧化酶活性和抗脂质过氧化有关。
【总页数】4页(P285-288)【作者】刘春红;金钟斗;韩宝瑞【作者单位】长春大学特殊教育学院,吉林长春130022;东方大学院大学校,韩国首尔136823;吉林农业大学发展学院,吉林长春130600【正文语种】中文【中图分类】TS201.21【相关文献】1.参景固本方对D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠的抗氧化作用 [J], 周丽雅;李欣;柴晶美;杨阿龙2.金银花水煎剂对D-半乳糖致衰老模型小鼠的抗氧化作用 [J], 张莹莹;王银环;史亚;甘力;程东庆3.姬松茸多糖对D-半乳糖诱导的衰老模型小鼠的抗衰老作用及其Keap1/Nrf2/ARE信号转导途径机制 [J], 段懿涵; 盛瑜; 徐健; 卢学春; 杜培革; 安丽萍4.不同植物油脂对D-半乳糖衰老模型小鼠的抗氧化作用 [J], 杨晓君;商雪珂;买迪娜木·阿布力米提;海荣;丁泽人5.地黄饮子加减方对D-半乳糖致衰老模型小鼠抗氧化作用的影响 [J], 谢芳;谢宁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
红芪多糖对非酒精性脂肪肝大鼠脂代谢及硬脂酰辅酶A去饱和酶1基因表达的影响
红芪多糖对非酒精性脂肪肝大鼠脂代谢及硬脂酰辅酶A去饱和酶1基因表达的影响尚红霞;孙蔚明;程卫东;段永强;孙晓芬【期刊名称】《中国中医药信息杂志》【年(卷),期】2014(000)007【摘要】目的：观察红芪多糖对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠脂代谢及调控基因硬脂酰辅酶 A 去饱和酶1(SCD-1)表达的影响,探讨其对NAFLD的干预效应。
方法受试动物按随机数字表法分为空白组和实验组,实验组采用高脂饲料喂养8周造模,随机分为模型组、阳性对照组、红芪多糖组,药物干预8周后分别检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平及三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)含量,采用半定量PCR检测肝脏SCD-1基因表达。
结果与空白组比较,模型组大鼠血清ALT、AST和LDL-c、TC、TG升高(P＜0.05,P＜0.01),HDL-c降低(P＜0.01)；SCD-1基因表达降低(P＜0.01)；与模型组比较,红芪多糖组血清ALT、AST降低(P＜0.01),LDL-c、TC、TG降低(P＜0.05,P＜0.01),HDL-c升高(P＜0.01)；肝组织SCD-1基因表达升高(P＜0.01)。
结论红芪多糖具有调节NAFLD大鼠脂代谢紊乱和促进调控基因SCD-1表达的作用。
【总页数】3页(P47-49)【作者】尚红霞;孙蔚明;程卫东;段永强;孙晓芬【作者单位】甘肃中医学院，甘肃兰州 730020;兰州大学基础医学院中西医结合研究所，甘肃兰州 730020; 兰州大学第一医院，甘肃兰州 730020;兰州大学基础医学院中西医结合研究所，甘肃兰州 730020; 南方医科大学中医药学院，广东广州 510515;甘肃中医学院，甘肃兰州 730020; 兰州大学基础医学院中西医结合研究所，甘肃兰州 730020;兰州大学基础医学院中西医结合研究所，甘肃兰州730020【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.槲皮素对非酒精性脂肪肝模型大鼠硬脂酰辅酶A去饱和酶1和肝X受体α表达的影响 [J], 张超;李昌平;聂娇2.瘦素对大鼠肝星状细胞硬脂酰辅酶A去饱和酶-1基因表达的影响 [J], 闫爽;刘思颖;封泉;崔新河3.果糖和胰岛素对鹅胚原代肝细胞硬脂酰辅酶 A去饱和酶1基因表达量的影响 [J], 张宜辉;张蕊;张军;王洪荣;龚道清4.硬脂酰辅酶A去饱和酶-1基因表达及其与鸭肉质和血清生化指标的相关性分析[J], 张依裕;李万贵5.维生素D受体对小鼠睾丸组织硬脂酰辅酶A去饱和酶1基因表达的影响 [J], 左甜甜;刘欢;王令;路宏朝;王珊珊;张涛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
玉木耳子实体多糖抗氧化、抗炎症和保肝作用分析
玉木耳子实体多糖抗氧化、抗炎症和保肝作用分析酒精性肝损伤引起的肝病(Alcoholic liver disease,ALD)已成为仅次于病毒肝炎的第二大肝病,对于ALD的发病机制及其防治日益引起关注。
而长期服用临床药物会产生抗药性和一定毒副作用,因此寻找天然有效保肝药物具有重要意义。
玉木耳(Auricularia cornea var.Li.),属担子菌门(Basidiomycota),伞菌纲(Agaricomycetes),木耳目(Auriculariales),木耳科(Auriculariaceae),木耳属(Auricularia),是毛木耳(A.cornea Ehrenb.)的白色变异菌株。
本课题以玉木耳多糖(A.cornea polysaccharides,APS)和酶提玉木耳多糖(Enzymatic-extractable APS,EAPS)为研究材料,分析了两种多糖的单糖组成和体外抗氧化能力,检测了酒精诱导的急性肝损伤小鼠模型的体内抗氧化、抗炎症和保肝活性。
主要结果如下:(1)气相色谱(Gas chromatograph,GC)分析结果显示,APS含有岩藻糖(Fucose,Fuc)、阿拉伯糖(Arabinose,Ara)、木糖(Xylose,Xyl)、甘露糖(Mannose,Man)、半乳糖(Galactose,Gal)和葡萄糖(Glucose,Glu),其质量分数为9.98%、1.55%、32.7%、11.97%、7.65%和36.15%,摩尔比为5.9:1.0:21.1:6.4:2.3:53.7。
EAPS含有岩藻糖、核糖(Ribose,Rib)、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,其质量分数为7.51%、0.78%、20.53%、7.64%、9.33%和54.21%,摩尔比为8.8:1.0:26.4:8.2:10.0:58.1。
傅立叶红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)分析结果表明,两种多糖均含有多糖的特征吸收峰,且具有α构型的糖苷键。
决明子提取物对非酒精性脂肪肝大鼠的护肝、拮抗胰岛素抵抗和抗氧化糖基化作用
决明子提取物对非酒精性脂肪肝大鼠的护肝、拮抗胰岛素抵抗和抗氧化糖基化作用李博萍;陈依雨;潘竞锵;赵汝霞;郑琳颖;吕俊华【期刊名称】《环球中医药》【年(卷),期】2015(000)010【摘要】目的：探讨决明子乙醇提取物( semen cassiae extract,SCE)对高脂高糖诱导非酒精性脂肪肝大鼠血糖、血脂、胰岛素抵抗及肝功能和肝细胞脂肪变性病理改变以及氧化应激—糖基化作用。
方法 SD大鼠72只,雌雄各半,随机分成正常对照组(12只)和模型组(60只)。
正常对照组给予普通饲料,饮用蒸馏水；模型组大鼠给予高脂饲料,饮用10%果糖水。
饲养至第6周末,将模型组大鼠随机分为模型对照组(蒸馏水10 mL/kg)、二甲双胍组(0．2 g/kg)、决明子乙醇提取物( SCE)高(2g/kg)、中(1 g/kg)、低(0．5 g/kg)剂量组。
连续灌胃给药4周后,测定大鼠血清超氧化物歧化酶( superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶( glutathione peroxidase,GSH-Px)、一氧化氮合成酶( nitric oxide synthase, NOS )活性,测定血清一氧化氮( nitric monoxide, NO )、丙二醛( malondialdehyde,MDA)、果糖胺( fructosamine, FMN )、晚期糖基化终产物( advanced glycation end products,AGEs)、葡萄糖含量( fasting blood glucose,FBG),血清胰岛素水平( insulin,INS)及胰岛素敏感度( insulin sensitivity index,ISI)。
测定大鼠肝脏组织SOD、NOS活性及NO、MDA含量。
结果与正常对照组相比,模型组大鼠血清GSP-Px、SOD和NOS活性降低,NO、MDA、FMN、AGEs、FBG含量升高,INS水平升高、ISI下降；模型组大鼠肝脏组织中SOD和NOS活性降低,NO和MDA含量明显升高(P<0．01)。
鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳在非酒精性脂肪肝细胞模型中对人肝细胞L-02的益生作用
DOI:10.13995/ki.11-1802/ts.026326引用格式:陈大卫,梁娇娇,程月,等.鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳在非酒精性脂肪肝细胞模型中对人肝细胞L-02的益生作用[J].食品与发酵工业,2021,47(11):61-67.CHEN Dawei,LIANG Jiaojiao,CHENG Yue,et al.Probiotic function of Lac-tobacillus rhamnosus hsryfm 1301fermented milk on human hepatocyte L-02in NAFLD cell model[J].Food and Fermentation Industries,2021,47(11):61-67.鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳在非酒精性脂肪肝细胞模型中对人肝细胞L-02的益生作用陈大卫1,梁娇娇1,程月1,瞿恒贤1,陈春萌1,任晨瑜1,张臣臣1,关成冉1,马文龙1,陈霞1,李启明2,顾瑞霞1∗1(扬州大学食品科学与工程学院江苏省乳品生物技术与安全控制重点实验室,江苏扬州,225127)2(新希望乳业股份有限公司,四川成都,610023)摘㊀要㊀建立由游离脂肪酸(free fat acid ,FFA )诱导的体外人肝细胞L-02非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fat-ty liver disease ,NAFLD )模型,探究益生菌发酵乳在模型中对人肝细胞的益生作用㊂利用FFA (油酸ʒ棕榈酸=2ʒ1,摩尔比)诱导人肝细胞脂肪变性,通过细胞存活率㊁胞内甘油三酯(triglyceride ,TG )和总胆固醇(total choles-terol ,TC )含量㊁培养液中天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase ,AST )和谷丙转氨酶(alanine amin-otransferase ,ALT )含量及细胞凋亡率等指标来评价脂肪变性模型,探讨鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳干预大鼠4周后的血清在模型中对人肝细胞L-02的影响㊂结果表明,当模型中FFA 的浓度为1.5和2mmol /L 时,人肝细胞的存活率显著低于未添加(P <0.05),均低于32%,细胞数量明显减少且形状发生变化;当FFA 浓度为1mmol /L 时,人肝细胞存活率较高,为86.37%,脂滴数量达到最高,此时建立的NAFLD 细胞模型中胞内TG 含量和培养液中AST 含量分别为5.73mmol /L 和113.50U /L ,均显著高于未添加(P <0.05),而胞内TC 含量及培养液中ALT 含量则无显著性差异(P >0.05),且细胞凋亡率差异较小㊂鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳干预大鼠后的血清降低了NAFLD 模型中肝细胞的脂滴数量,胞内TG 含量及大鼠血清细胞培养液中AST 含量均显著低于未干预菌株的对照组大鼠血清(P <0.05),分别为1.95mmol /L 和93.33U /L ;细胞凋亡率较对照组下降了2.96%,正常细胞数量上升了4.50%㊂利用1mmol /L 的FFA 可以建立人肝细胞L-02的NAFLD 模型,鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳干预后的大鼠血清对模型中人肝细胞L-02的脂肪变性具有改善作用㊂关键词㊀鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301;发酵乳;人肝细胞L-02;游离脂肪酸;非酒精性脂肪性肝病第一作者:博士,副教授(顾瑞霞教授为通讯作者,E-mail:guruixia1963@)㊀㊀基金项目:国家自然科学基金青年项目(31701627,31801565);国家自然科学基金面上项目(31972094);江苏省高等学校自然科学研究重大项目(19KJA140004);江苏省高等学校自然科学研究面上项目(17KJB550009); 十三五 国家重点研发计划课题项目(2019YFF0217602);成都市重大科技应用示范项目(2019-YF09-00055-SN)收稿日期:2020-12-01,改回日期:2021-02-04㊀㊀非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver dis-ease,NAFLD)是由非酒精消耗或其他原因引起的肝脏脂质过量,造成肝细胞中脂滴积聚,肝脏呈现肿大的现象,会对人体健康产生较大的影响[1]㊂目前,NAFLD 的药物治疗主要是通过预防肝细胞的氧化㊁减少肝细胞的促炎因子及血脂水平等方式进行[2-3],但其存在一定的副作用[4]㊂通过膳食干预也能有效改善肝脏的脂肪变性和炎症反应,并具有良好的益生作用[5],因此,膳食干预是人们进行辅助治疗NAFLD 的重要途径㊂益生菌及其发酵乳制品不仅可以通过调节肠道微生态平衡等来增强机体的抗氧化能力和免疫能力[6-7],还可以通过降低肝细胞的甘油三酯(triglyc-eride,TG)㊁总胆固醇(total cholesterol,TC)含量以及调节脂肪变性和炎症因子水平等来改善机体的NAFLD 症状[8-10]㊂而临床研究也发现,益生菌可以通过改善患者血清中的天门冬氨酸氨基转移酶(as-partate aminotransferase,AST )㊁肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)㊁白细胞介素-6(inter-leukin-6,IL-6)水平及降低脂肪肝指数等来达到辅助治疗NAFLD 的效果[11-14],但具体的作用机制尚不明确㊂目前,NAFLD 的机制研究大多数采用动物和肝癌细胞株HepG2来进行[15],但动物模型造模周期长㊁成本高㊁稳定性较差;同时,肝癌细胞株HepG2与人肝细胞存在较大的差距[16]㊂与之相比,人肝细胞系L-02具有造模周期短㊁个体差异小等优势[17]㊂来源于广西巴马长寿人群的鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳对由高血脂症引起的大鼠肝脏细胞脂肪变性具有良好的改善作用[18],但对于人肝细胞的作用效应和机制尚不明确㊂研究显示,将样品在大鼠体内经过一系列的生物转化,再作用于细胞的研究结果较样品直接添加到细胞中更为准确[19]㊂本文利用油酸和棕榈酸的混合物游离脂肪酸(free fat acid,FFA)建立体外人肝细胞L-02NAFLD模型,探讨鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳干预大鼠后的血清在模型中对脂肪变性的人肝细胞L-02的益生作用,并建立一种更接近于人肝细胞的体外NAFLD细胞变性模型㊂1㊀材料与方法1.1㊀材料与试剂Wistar雄性大鼠,6周龄,体重(200ʃ20)g,扬州大学比较医学中心,动物生产许可证号SCXK(苏) 2017-0007,实验动物使用许可证号SYXK(苏)2017-0044;基础饲料(面粉㊁米粉㊁玉米㊁鼓皮㊁豆料㊁鱼粉及骨粉的质量分数分别为20%㊁10%㊁20%㊁26%㊁20%㊁2%㊁2%),江苏省协同医药生物工程有限责任公司;鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosu s)hsryfm 1301,江苏省乳品生物技术与安全控制重点实验室;人肝细胞株L-02,苏州北纳创联生物技术有限公司㊂胎牛血清,杭州四季青生物有限公司;RPMI-1640培养液,美国Hyclone公司;无脂肪酸牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA),德国Ruibio公司;细胞冻存液㊁胰酶消化液(质量分数为0.25%)㊁RI-PA裂解液,上海碧云天生物技术有限公司;油酸钠(oleic acid,OA)㊁油红O试剂盒㊁AV/PI凋亡试剂盒,生工生物工程(上海)股份有限公司;棕榈酸钠,美国Sigma公司;CCK8(Cell Counting Kit-8)细胞增殖-毒性检测试剂盒,日本同仁公司;甘油三酯(triglyceride, TG)㊁总胆固醇(total cholesterol,TC)㊁天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)㊁丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)试剂盒,美康生物科技股份有限公司㊂1.2㊀仪器与设备HERAcell150CO2培养箱㊁Multiskan Sky1510全波长酶标仪,美国ThermoFisher科技有限公司;IX2-ILL100荧光倒置显微镜,日本Olympus公司;7020全自动生化分析仪,日本日立公司;5804R高速冷冻离心机,德国Eppendorf股份公司;LSRFortessa流式细胞仪,美国BD公司㊂1.3㊀试验方法1.3.1㊀细胞培养将复苏的人肝细胞L-02置于完全培养液中(RP-MI-1640培养液和胎牛血清的体积分数分别为90%和10%),于37ħ,体积分数为5%CO2的培养箱中培养,每24h更换1次培养液,待细胞生长至对数期时(细胞面积>80%),用胰酶消化液消化传代,取5代后的细胞进行后续试验㊂1.3.2㊀NAFLD细胞模型中FFA的添加浓度1.3.2.1㊀不同FFA浓度对细胞存活率的影响取100μL浓度为5ˑ104个/mL的人肝细胞L-02悬液接种于96孔培养板中,在37ħ,体积分数为5%CO2的培养箱中培养24h后弃去培养液;利用含质量分数为1%的BSA完全培养液将5mmol/L FFA 分别稀释至0㊁0.25㊁0.5㊁0.75㊁1㊁1.5和2mmol/L;以未添加FFA为对照组,添加不同浓度的FFA为模型组,每组3个复孔,CO2培养箱培养24h后加入10μL CCK8试剂,37ħ孵育1h后于490nm处测定OD值,按公式(1)计算细胞存活率:细胞存活率/%=模型组OD值对照组OD值ˑ100(1) 1.3.2.2㊀不同FFA浓度对细胞脂滴的影响取1mL浓度为5ˑ105个/mL的人肝细胞L-02悬液接种于6孔培养板中,在37ħ,体积分数为5% CO2的培养箱中培养24h后弃去培养液,以未添加FFA为对照组,添加1.3.2.1小节中不同浓度的FFA 为模型组,每组3个复孔,CO2培养箱培养24h后,釆用油红O染色法观察细胞内脂滴变化情况㊂1.3.3㊀NAFLD细胞模型的评价1.3.3.1㊀细胞内TG㊁TC含量的测定取1mL浓度为5ˑ105个/mL的人肝细胞L-02悬液接种于6孔培养板中,以不添加FFA为对照组,添加最佳浓度的FFA为模型组,每组3个复孔,在37ħ,体积分数为5%CO2的培养箱中培养24h后弃去培养液,胰酶消化液消化3min后,用完全培养液终止消化,1000ˑg离心5min,PBS溶液清洗2遍,每管加入1mL RIPA细胞裂解液,吹打均匀,置于冰上裂解4h后,12000ˑg离心10min取上清液,采用全自动生化分析仪测定上清液中TG和TC 含量㊂1.3.3.2㊀细胞培养液中AST㊁ALT酶活力的测定从1.3.3.1小节培养24h后的6孔培养板中取出细胞上清液,以不添加FFA为对照组,4000ˑg离心5min,测定培养液中AST和ALT的含量㊂1.3.3.3㊀细胞凋亡率的测定取1mL浓度为5ˑ106个/mL的人肝细胞L-02悬液接种于6孔培养板中,在37ħ,体积分数为5% CO2的培养箱中培养24h,对照组加入含1%的BSA 的完全培养液,模型组加入最佳浓度的FFA,每组3个复孔,培养24h后加入500μL胰酶消化液消化3min后,加入完全培养液终止消化,1000ˑg离心5min,去上清液收集细胞;用100μL1ˑbuffer轻轻吹打细胞后,分别加入4μL异硫氰酸荧光素和4μL碘化丙啶,轻轻涡旋混匀,室温避光孵育15min后每管加入400μL1ˑbuffer,混匀,测定细胞凋亡率㊂1.3.4㊀鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳的制备将在MRS液体培养基中活化2代后的鼠李糖乳杆菌hsryfm1301按3%的接种量接种至热处理后质量分数为12%的脱脂乳中,42ħ发酵至活菌数为109 CFU/mL,进行活菌计数,4ħ贮藏备用㊂1.3.5㊀大鼠血清的制备试验期间保持动物房通风㊁透光,室温为(23ʃ1)ħ,湿度为(50ʃ5)%,22只Wistar雄性大鼠用基础饲料正常饲喂1周后,按各组间平均体重无显著差异分为对照组和益生菌干预组,每组11只㊂干预组喂食基础饲料,并按1mL/100g的量灌胃鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳,对照组喂食基础饲料及等量的质量分数为0.9%的生理盐水,每天上午灌胃1次,记录每天的进食量及每周的体重,以便调整灌胃量㊂4周后眼球取血,4ħ孵育30min,3500ˑg离心20min,合并同组大鼠血清,56ħ灭活30min除去血清中的杂抗体等物质,并利用0.22μm滤孔过滤除菌,避免细胞受到污染[17,20],-80ħ保存备用㊂所有实验程序严格按照‘实验动物的护理和使用指南“进行㊂1.3.6㊀鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳干预后的大鼠血清对模型中细胞的益生作用利用RPMI-1640培养液分别将对照组和干预组的大鼠血清稀释至10%[17],然后取1mL加至细胞模型中,每组3个复孔,于37ħ,体积分数为5% CO2的培养箱中培养24h,PBS溶液清洗2遍;观察各组细胞内脂滴的变化,并测定细胞中TG㊁TC含量㊁细胞凋亡率以及血清细胞培养液中AST和ALT的含量㊂1.4㊀数据处理与分析数据均采用Sigmaplot10.0㊁SPSS21.0软件进行统计和分析,结果以均值ʃ标准差(MeanʃSD)表示,以单因素方差分析进行显著性检验,P<0.05表示差异具有统计学意义㊂2㊀结果与分析2.1㊀NAFLD细胞模型中FFA的添加浓度通过测定模型中人肝细胞L-02的存活率及观察细胞内脂滴变化情况来确定模型中FFA的最佳添加浓度,结果如表1和图1所示㊂表1㊀不同浓度的FFA对细胞存活率的影响(n=3)Table1㊀Effect of different concentration of FFAon the survival rate of cellsFFA浓度/(mmol㊃L-1)OD值细胞存活率/% 0(对照组) 1.04ʃ0.01a100.00ʃ0.00a 0.250.98ʃ0.02b94.34ʃ1.58b 0.500.97ʃ0.02b92.88ʃ1.92b0.750.94ʃ0.01c88.78ʃ1.31c1.000.90ʃ0.01d86.37ʃ0.49c1.500.33ʃ0.01e31.98ʃ0.54d2.000.20ʃ0.00f19.48ʃ0.02e ㊀㊀注:不同字母表示具有显著性差异(P<0.05)(下同)a-0mmol/L(对照组);b-0.25mmol/L;c-0.5mmol/L;d-0.75mmol/L;e-1mmol/L;f-1.5mmol/L;g-2mmol/L图1㊀不同浓度的FFA对细胞脂滴的影响(ˑ400)Fig.1㊀The effect of different concentration of FFAon the lipid droplets in cells由表1可知,当模型中FFA的浓度分别为0.25㊁0.50和0.75mmol/L时,人肝细胞L-02的存活率较高,均大于88.78%;而随着FFA浓度的不断增加,细胞的存活率随之下降,当FFA浓度大于1mmol/L 时,细胞的存活率显著下降(P<0.05),由1mmol/L时的86.37%分别下降至1.5mmol/L时的31.98%和2mmol/L时的19.48%㊂由图1可知,人肝细胞L-02经油红O染色后,未添加FFA的细胞边缘清晰,核膜完整,细胞内未见红色脂滴;而随着FFA浓度的增加,细胞内脂滴数量呈逐渐增多,且体积呈逐渐增大的趋势㊂当FFA浓度大于1mmol/L时,肉眼可见的细胞数量大幅度减少,细胞形状发生变化,表明当添加的FFA超过一定浓度时,会严重损伤细胞;但当浓度低于1mmol/L时,脂肪变性不充分,脂滴数量较少;当FFA浓度为1mmol/L时,细胞脂肪变性充分,脂滴数量较多,结合细胞存活率的试验结果,选取1mmol/L作为模型中FFA的最佳添加浓度㊂2.2㊀NAFLD细胞模型由表2可知,添加了1mmol/L FFA的模型组人肝细胞L-02培养24h后,细胞内TG含量为5.73 mmol/L,显著高于对照组(P<0.05);同时,培养液中AST含量为113.50U/L,显著高于对照组的73.67U/L(P<0.05),表明1mmol/L的FFA造成了细胞的脂肪变性,与NAFLD大鼠模型特征较为一致[21]㊂表2㊀脂肪变性细胞内TG㊁TC及细胞培养液中AST和ALT的含量(n=3)Table2㊀Content of TG,TC in the steatosis cells and AST,ALT content in the cell culture medium指标TG 含量/(mmol㊃L-1)TC含量/(mmol㊃L-1)AST含量/(U㊃L-1)ALT含量/(U㊃L-1)对照组 2.31ʃ0.15a0.04ʃ0.01a73.67ʃ5.69a5.23ʃ0.58a 模型组 5.73ʃ0.08b0.05ʃ0.01a113.50ʃ8.02b5.44ʃ0.58a由图2可知,对照组人肝细胞L-02的早期凋亡率为1.82%,晚期凋亡率为1.79%,占总体细胞的3.61%;而模型组细胞早期凋亡率为1.88%,晚期凋亡率为2.14%,占总体细胞的4.02%,两组之间的细胞凋亡率差异较小,表明1mmol/L的FFA对细胞未造成严重损伤,与机体单纯性脂肪变性特征相符[22]㊂2.3㊀鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳干预后的大鼠血清对模型中细胞的益生作用2.3.1㊀大鼠血清对细胞脂滴的影响以未干预菌株发酵乳的大鼠血清作为对照组,研究鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳干预后的大鼠血清对NAFLD模型中人肝细胞L-02脂滴的影响,结果如图3所示㊂a-对照组;b-模型组图2㊀脂肪变性对细胞凋亡率的影响Fig.2㊀Effect of steatosis on the apoptosis rate of cellsa-对照组;b-益生菌干预组图3㊀大鼠血清对细胞脂滴的影响(ˑ400) Fig.3㊀Effect of rats serum on the lipid droplets in cells由图3可知,对照组大鼠血清作用脂肪变性的人肝细胞L-0224h后,细胞边缘较为明显,核膜完整,胞内出现红色脂滴且体积较大,出现脂肪变性现象;与对照组相比,干预组大鼠血清作用的细胞内胞浆丰富,胞内红色脂滴数量较少㊁体积较小,表明鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳干预的大鼠血清能有效改善细胞的脂肪变性㊂2.3.2㊀大鼠血清对细胞TG、TC含量及血清培养液中AST和ALT含量的影响鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳干预后的大鼠血清对模型中人肝细胞L-02胞内TG㊁TC含量的影响及血清培养液中AST和ALT的含量见图4和图5㊂由图4可知,干预组的大鼠血清作用于人肝细胞L-02后,细胞内TG 含量为1.95mmol /L,显著低于对照组的2.88mmol /L(P <0.05);TC 含量稍低于对照组,但无显著性差异(P >0.05)㊂图4㊀大鼠血清对细胞TG 和TC 含量的影响(n=3)Fig.4㊀The effect of rats serum on the content of TG and TC in cells图5㊀大鼠血清细胞培养液中AST 和ALT 的含量(n =3)Fig.5㊀The content of AST and ALT in the cell culture mediumof rats serum由图5可知,对照组的人肝细胞L-02培养液中AST 的含量为118.67U /L,干预组的血清细胞培养液中AST 的含量为93.33U /L,显著低于对照组(P <0.05);而ALT 的含量分别为5.59U /L 和5.83U /L,无显著性差异(P >0.05);表明鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳可通过降低细胞内TG 和AST 转氨酶的含量来减轻NAFLD 对细胞的损伤㊂2.3.3㊀大鼠血清对细胞凋亡率的影响鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳干预后的大鼠血清对人肝细胞L-02凋亡率的影响如图6所示㊂a-对照组;b-益生菌干预组图6㊀大鼠血清对细胞凋亡率的影响Fig.6㊀The effect of rats serum on the apoptosis rate of cells由图6可知,对照组中人肝细胞L-02的早期凋亡率为1.42%,晚期凋亡率为5.04%,正常细胞数量为91.2%;经干预组的大鼠血清作用后,人肝细胞L-02的早期凋亡率为0.89%,晚期凋亡率为2.61%,正常细胞数量高达95.7%㊂与对照组相比,干预组的细胞凋亡率相对下调了2.96%,正常细胞数量相对上调了4.5%,说明鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳干预的大鼠血清能够降低人肝细胞L-02的凋亡率,缓解细胞损伤,对NAFLD 具有较好的改善作用㊂3㊀讨论由于人与动物之间生物代谢表达和活性不同[23],使得在动物试验中肝细胞脂肪变性的稳定性较差[14],因此建立一种理想的体外模拟人肝细胞的NAFLD 模型尤为重要㊂棕榈酸是饮食和血清中最丰富的游离脂肪酸,容易引发肝脏的脂肪变性[24-25],而油酸毒性较小,能够抵消棕榈酸对肝细胞的毒性[26],并具有增强棕榈酸酯化和稳定脂滴的能力[27]㊂因此,试验采用油酸和棕榈酸混合的FFA 建立人肝细胞L-02脂肪变性模型㊂当1mmol /L 的FFA 作用于人肝细胞L-02时,对细胞的存活率影响较小,同时还使得细胞内脂滴数量达到最大值,并显著增加了模型中细胞TG 含量及培养液中AST 含量(P <0.05),且细胞的凋亡率与对照组无显著性差异(P >0.05),符合NAFLD的特征指标[21]㊂表明成功建立的NAFLD 细胞模型,具有造模周期短㊁稳定性好等优势[28]㊂鼠李糖乳杆菌可以通过调节肠道微生物来改善机体的NAFLD症状[29]㊂鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳能够通过调节与脂质代谢相关的肠道微生物来改善大鼠血清的脂质代谢[18],而本文的研究还发现,鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳干预后的大鼠血清不仅可以显著降低细胞TG含量,还可以显著降低细胞培养液中AST的含量(P<0.05);CAUSSY 等[30]的研究发现,血清中来自肠道微生物的代谢产物在改善NAFLD症状过程中发挥着重要作用;而双歧杆菌㊁乳杆菌等益生菌可以通过调节机体血清中的脂质㊁转氨酶㊁炎症因子及抗氧化物质等代谢产物来降低NAFLD对机体的损伤[11-13,31]㊂因此,鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳可能是通过调节肠道微生物来改善机体血清中脂质㊁转氨酶等代谢产物,进而发挥其对NAFLD人肝细胞L-02的益生作用㊂益生菌还能通过调节SIRT-1/PGC-1α/SREBP-1㊁Nrf-2/HO-1和PPAR-α等与血脂㊁抗氧化物质及胆汁酸代谢途径相关基因的表达来减轻机体的NAFLD 症状[8,32-33]㊂因此,后续将从肠道微生物-血清的代谢产物及其代谢通路等方面入手,进一步阐明鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳干预的大鼠血清在NAFLD模型中对人肝细胞L-02的益生作用机制㊂参考文献[1]㊀DAY C,SAKSENA S.Non-alcoholic steatohepatitis:Definitions andpathogenesis[J].Journal of Gastroenterology&Hepatology,2003, 17:S377-S384.[2]㊀NOBILI V,ALISI A,MOSCAET A,et al.The antioxidant effects ofhydroxytyrosol and vitamin E on pediatric nonalcoholic fatty liver disease,in a clinical trial:A new treatment?[J].Antioxidants& Redox 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Free fatty acids(mol ratio,oleic acidʒpalmitic acid=2ʒ1)were used to induce human hepatocytes steatosis,and the model was evalua-ted by the survival rate of cells,the content of total triglyceride(TG),total cholesterol(TC)and lipid droplets in cells,the content of aspartate aminotransferase(AST)and alanine aminotransferase(ALT)in the culture medium of L-02cells,and the apoptosis rate of cells.The effect of rats serum,which was obtained after intervention by fermented milk of L.rhamnosu s hsryfm1301for4weeks,on the L-02cells in the model was discussed.The results showed that the survival rate of L-02cells were all lower than32%when the con-centration of FFA was1.5mmol/L and2mmol/L in the model,which were significantly lower than that without FFA(P<0.05),and the number of L-02cells was reduced obviously and the shape changed.While the survival rate of L-02cells was86.37%when the con-centration was1mmol/L,and the number of lipid droplets was the highest,and the content of TG in the L-02cells and the content of AST in the cell culture medium were significantly higher than that of the control group(P<0.05),which were5.73mmol/L and113.50U/L respectively.The apoptosis rate of L-02cells,the content of TC in the L-02cells and the content of ALT in the cell culture medium had no significant difference(P>0.05).The number of lipid droplets in the L-02cells was reduced,and the content of TG in the L-02cells and the content of AST in the cell culture medium were significantly decreased by the serum of rats that were administered by the fermen-ted milk of L.rhamnosus hsryfm1301when compared with the serum of rats that were not administered(P<0.05),which were1.95 mmol/L and93.33U/L respectively.And the apoptosis rate was decreased by2.96%,the number of normal cells was increased by 4.5%.The NAFLD model of human hepatocyte L-02in vitro can be established by1mmol/L FFA.The human hepatocyte L-02in NAFLD model can be improved by the serum of rats that were intervened by the fermented milk of L.rhamnosus hsryfm1301.Key words㊀Lactobacillus rhamnosus hsryfm1301;fermented milk;human hepatocyte L-02;free fatty acids;nonalcoholic fatty liver disease。
红芪多糖对非酒精性脂肪肝大鼠脂代谢及硬脂酰辅酶A去饱和酶1基因表达的影响
红芪多糖对非酒精性脂肪肝大鼠脂代谢及硬脂酰辅酶A去饱和酶1基因表达的影响尚红霞;孙蔚明;程卫东;段永强;孙晓芬【摘要】Objective To investigate the effects of hedysarum polybotys saccharide (HPS) on lipid metabolism and the expression of stearoyl-CoA desaturase-1(SCD-1) gene in rats with non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). To discuss the interfering effects of HPS on NAFLD. Methods The SD rats were randomly divided into the blank control group and the experiment group. Rats in the experiment group were fed with lipid rich food for 8 weeks to establish model and were randomly divided into model group, drug positive group and HPS group. After 8 weeks of drug intervention, the level of ALT, AST, TC, TG, HDL-c and LDL-c were measured with automatic chemistry analyzer, and expression of SCD-1 gene was measured by semi-quantitative polymerase chainreaction.Results Compared with blank control group, serum ALT, AST and TC, TG, LDL-c of model group were higher (P<0.05,P<0.01), the level of HDL-c of model group and the expression of SCD-1 gene were lower(P<0.01). Compared with model group, HPS was useful to decrease serum ALT, AST, LDL-c, TC and TG (P<0.05,P<0.01), and increase the level of HDL-c (P<0.01) and the expression of SCD-1 gene (P<0.01).ConclusionHPS had a positive effect on regulating lipid metabolic disturbance of NAFLD rats and promoting the expression of regulatory gene SCD-1.%目的：观察红芪多糖对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠脂代谢及调控基因硬脂酰辅酶 A 去饱和酶1(SCD-1)表达的影响,探讨其对NAFLD的干预效应。
有氧运动对高糖高脂膳食大鼠腓肠肌Nrf2-SOD的影响
有氧运动对高糖高脂膳食大鼠腓肠肌Ｎｒｆ２ ＳＯＤ的影响刘玉倩１，２，张 静３，高丽娜３，王海涛１，２△（１．岭南师范学院体育科学学院，２．运动与健康研究所，广东湛江５２４０４８；３．河北师范大学体育学院，河北石家庄０５００２４）【摘要】 目的：探讨有氧运动预防大鼠胰岛素抵抗中Ｎｒｆ２及ＳＯＤ的变化。
方法：２４只１２月龄ＳＤ大鼠随机分为对照组（Ｃ）、高糖高脂ＩＲ组（ＩＲ）和高糖高脂ＩＲ并运动组（ＩＲＥ）。
ＩＲＥ进行递增负荷跑台运动，运动６周。
检测腓肠肌Ｔ ＳＯＤ、ＣＡＴ、ＭＤＡ、ＧＳＨ／ＧＳＳＧ，ＥＬＩＳＡ法检测腓肠肌８ ＯＨｄＧ含量，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测腓肠肌Ｎｒｆ２和ＧＬＵＴ４表达。
结果：①ＩＲＥ组ＨＯＭＡ ＩＲ明显低于ＩＲ组（Ｐ＜０．０５）；ＩＲＥ组肌糖原明显高于ＩＲ组（Ｐ＜０．０１）；②ＩＲＥ组Ｔ ＳＯＤ和ＣＡＴ、ＧＳＨ／ＧＳＳＧ明显高于ＩＲ组（Ｐ＜０．０１）；ＩＲＥ组８ ＯＨｄＧ和ＭＤＡ明显低于ＩＲ组（Ｐ＜０．０１）；③ＩＲＥ组腓肠肌Ｎｒｆ２和ＧＬＵＴ４明显高于ＩＲ组（Ｐ＜０．０１）。
结论：有氧运动可激活大鼠腓肠肌Ｎｒｆ２ ＳＯＤ通路，提高抗氧化酶活性和糖摄取能力，预防ＩＲ发生。
【关键词】 核因子Ｅ２相关因子２；有氧运动；腓肠肌；胰岛素抵抗；大鼠【中图分类号】Ｇ８０４．５ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１０００ ６８３４（２０２０）０５ ４８１ ００５【ＤＯＩ】１０．１２０４７／ｊ．ｃｊａｐ．６００４．２０２０．１０２ＥｆｆｅｃｔｓｏｆａｅｒｏｂｉｃｅｘｅｒｃｉｓｅｏｎＮｒｆ２ ＳＯＤｐａｔｈｗａｙｉｎｔｈｅｇａｓｔｒｏｃｎｅｍｉｕｓｏｆｒａｔｓｗｉｔｈｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅａｎｄｈｉｇｈ ｆａｔｄｉｅｔＬＩＵＹｕ ｑｉａｎ１，２，ＺＨＡＮＧＪｉｎｇ３，ＧＡＯＬｉ ｎａ３，ＷＡＮＧＨａｉ ｔａｏ１，２△（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＳｐｏｒｔａｎｄＥｘｅｒｃｉｓｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＬｉｎｇｎａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈａｎｊｉａｎｇ５２４０４８；２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＥｘｅｒｃｉｓｅａｎｄＨｅａｌｔｈ，ＬｉｎｇｎａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈａｎｊｉａｎｇ５２４０４８；３．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈｙｓｉｃａｌＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＨｅｂｅｉＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ０５００２４，Ｃｈｉｎａ）【ＡＢＳＴＲＡＣＴ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｏｆｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｅｒｙｔｈｒｏｉｄ２ ｒｅｌａｔｅｄｆａｃｔｏｒ２（Ｎｒｆ２）ａｎｄｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ（ＳＯＤ）ｉｎｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎｏｆｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｓｋｅｌｅｔａｌｍｕｓｃｌｅｏｆｒａｔｓｂｙａｅｒｏｂｉｃｅｘｅｒｃｉｓｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｗｅｎｔｙ ｆｏｕｒ１２ ｍｏｎｔｈｏｌｄＳｐｒａ ｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｃｏｎｔｒｏｌ（Ｃ），ｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｍｏｄｅｌ（ＩＲ）ａｎｄｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｍｏｄｅｌａｎｄｅｘｅｒ ｃｉｓｅ（ＩＲＥ）ｇｒｏｕｐｓ．ＩＲｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅａｎｄｈｉｇｈ ｆａｔｄｉｅｔ．ＲａｔｓｏｆＩＲＥｒｅｃｅｉｖｅｄｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｌｏａｄｒｕｎｎｉｎｇｏｎｔｈｅｔｒｅａｄ ｍｉｌｌｆｏｒ６Ｗ．Ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｏｔａｌｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ（Ｔ ＳＯＤ），ｃａｔａｌａｓｅ（ＣＡＴ），Ｍａｌｏｎａｌｄｅｈｙｄｅ（ＭＤＡ）ａｎｄｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ／Ｌ ｇｌｕ ｔａｔｈｉｏｎｅｏｘｉｄｉｚｅｄ（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ）ｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｋｉｔｓ．Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆ８ ｈｙｄｒｏｘｙ ２ｄｅｏｘｙｇｕａｎｏｓｉｎｅ（８ ＯＨｄＧ）ｗａｓｍｅａｓ ｕｒｅｄｂｙＥＬＩＳＡＫｉｔｓ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＮｒｆ２ａｎｄＧｌｕｃｏｓｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ４（ＧＬＵＴ４）ｉｎｇａｓｔｒｏｃｎｅｍｉｕｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：①ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＩＲ，ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＨＯＭＡ ＩＲｗａｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｉｎＩＲＥ（Ｐ＜０．０５），ｗｈｉｌｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｍｕｓｃｌｅｇｌｙｃｏｇｅｎｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎＩＲＥ（Ｐ＜０．０１）．②ＴｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＴ ＳＯＤ，ＣＡＴ，ａｎｄＧＳＨ／ＧＳＳＧｉｎＩＲＥｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｏｓｅｉｎＩＲ（Ｐ＜０．０１）．ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＩＲ，ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆ８ ＯＨｄＧａｎｄＭＤＡｉｎＩＲＥｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０１）．③ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＮｒｆ２ａｎｄＧＬＵＴ４ｉｎｇａｓｔｒｏｃｎｅｍｉｕｓｏｆＩＲＥｒａｔｓｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎＩＲ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅＮｒｆ２ｐａｔｈ ｗａｙｗａｓａｃｔｉｖａｔｅｄｉｎｇａｓｔｒｏｃｎｅｍｉｕｓｏｆｒａｔｓａｆｔｅｒａｅｒｏｂｉｃｅｘｅｒｃｉｓｅ，ｗｈｉｃｈｐｒｏｍｏｔｅｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｅｎｚｙｍｅｓ，ａｎｄｐｒｅｖｅｎｔｅｄＩＲｉｎｄｕｃｅｄｂｙｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅａｎｄｈｉｇｈ ｆａｔｄｉｅｔ．【ＫＥＹＷＯＲＤＳ】 Ｎｒｆ２； ａｅｒｏｂｉｃｅｘｅｒｃｉｓｅ； ｇａｓｔｒｏｃｎｅｍｉｕｓ； ｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ； ｒａｔ 【基金项目】河北省高等学校自然科学重点项目（ＺＤ２０１７０４８）；岭南师范学院人才专项（ＺＬ２００８，ＺＬ２００９）【收稿日期】２０２０ ０１ ０８【修回日期】２０２０ ０７ ０９ △【通讯作者】Ｔｅｌ：１７８７５１９１０３７；Ｅ ｍａｉｌ：ｈａｉｔａｏｙｑ＠１２６．ｃｏｍ 胰岛素抵抗（ｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＩＲ）是指组织对胰岛素的敏感性下降，从而代偿性地引起胰岛素分泌增加。
LC-MSMS鉴定木兰花碱在大鼠体内外主要代谢产物
LC-MS/MS鉴定木兰花碱在大鼠体内外主要代谢产物魏桂杰'，薛宝娟\王宏雅'，张婷^郑伟、赵欣'张玉杰1‘1. 北京中医药大学中药学院，北京1024882. 中国医学科学院北京协和医学院药用植物研宄所，北京丨00193摘要：目的研宄木兰花碱在大鼠体内外的主要代谢产物及代谢途径。
方法SD大鼠ig木兰花碱（50m g/k g),收集0〜24 h尿液和粪便，0〜 6 h胆汁以及1、2、4、6、8 h血浆；体外代谢采用肝微粒体温孵系统和肠菌培养液。
利用LC-MS/MS 对生物样品中的原型药及代谢产物进行鉴定。
米用Agilent TC-C18色谱柱（150 mmX4.6 mm， 5 (im),以乙腊-0.1%甲酸水 溶液为流动相梯度洗脱，体积流量1.0 mL/min，柱温30 °C。
质谱采用电喷雾电离源（E S I),正离子采集模式；扫描范围m/z 100〜1000。
根据药物体内代谢规则，结合木兰花碱的色谱保留时间和多级质谱碎片离子特征，推测其代谢产物的结构。
结果给药后生物样品中共鉴定出12个代谢产物，其中I相代谢产物8个，II相代谢产物4个。
主要的代谢途径为羟基化、去甲基化、脱氢作用、酮基化、葡萄糖化、葡萄糖醛酸化及硫酸酯化。
结论木兰花碱在体内可发生I相和II相代谢，肠道菌群 和肝药酶可催化木兰花碱发生I相代谢转化，II相代谢存在于肠道以外部位，最有可能的部位是肝脏。
关键词：木兰花碱；代谢物；体内外代谢：肝微粒体；肠道菌群；代谢途径中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：1674-6376 (2021) (M-0031-07D O I：10.7501/j.issn.l674-6376.2021.01.005Identification of major metabolites of magnoflorine in vivo and in vitro of rats by LC-MS /MSWEI Guijie1,XUE Baojuan1,WANG Hongya1,ZHANG Ting',ZHENG Wei',ZHAO Xin2,ZHANG Yujie'1. School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 102488, China2. Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences, Peking Union Medical College Beijing100193, ChinaAbstract: Objective To study the main metabolites and metabolic pathway of magnoflorine in vitro and in vivo.Methods SD rats were given magnolithine by single gavage at a dose of 50 mg/kg. Urine and feces form 0 h to 24 h, bile form 0 h to 6 h, and plasma samples at 1,2, 4, 6, and 8h after administration were collected. In vitro metabolism was incubated with rat liver microsome and intestinal flora. The metabolites were analyzed and identified by the high-resolution HPLC-MS/MS technique. Chromatographic separation was achieved on Agilent TC-C18 chromatograph column (150 mm x 4.6 mm, 5 fim). The mobile phase consisted of 0.1% formic acid - acetonitrile with a flow rate of 1.0 mL/min, and the column temperature was 30 0C. The mass spectra were obtained in positive ion modes with electrospray ionization (ESI), the scanning range was m/z100 — 1000. The structures of metabolites were elucidated by the metabolic rules of drugs in vivo,and combined with the chromatographic retention time of magnoflorine and the characteristics of fragment ions of MS. Results A total of 12 metabolites were identified in each sample, including 8 phase I metabolites and 4 phase II metabolites. The pathways to these metabolites were hydroxylation, demethylation, dehydrogenation, ketoylation, gluconylation, glucuronide conjugation, and sulfation. Conclusion Magnoflorine could produce metabolic reaction of phase I and phase II in rat. Intestinal flora and liver drug enzymes could catalyze the phase I metabolism of magnoflorine, and phase II metabolism exists outside the intestine, and the most likely site is the liver.Key words: magnoflorine; metabolites; in vivo and in vitro metabolism; liver microsomes; intestinal flora; metabolic pathways *收稿日期：2020-03-03基金项目：国家自然科学基金项目（81673680)第一作者：魏桂杰（1995—女，在读硕士生，从事中药代谢动力学研究。