大鼠肝脏移植模型制作

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大鼠肝脏撞击伤动物模型的制备及评价

健康ＳＤ大鼠４２只，随机
分为３组（ｎ＝１）４。通过增加了Ｔ型二次打击头的改良型生物撞击机，轻、、３种质量的钢球分别撞用中重击１大鼠，制出３组损伤程度不同的大鼠肝脏钝性撞击伤模型，组复即轻度致伤组、中度致伤组、度致伤重
Ｅｓａｌｓｅｎｄｅａｕａｉｎｏｉｅｒｕａｍｏｅｎｒｔｔｂｉｈｍｎｔａｖｌｔｏｆａｌｒｔａｍｄｌｉａｓｖ
ＬｎＴＵＭｉｇ，ＡＮＧＬ－ｎ，１Ｎｕｚｏ，ｔ１ｉｕＴＡＦ — ｕｅ．ｊｈａ
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６・０
创伤外科杂志２１００年第１２卷第１期
ＪＴａｍｕｇ２１，ｏ．２Ｎ．ｒａＳｒ，００Ｖ１１，ｏ１ｕ
文章编号：１０４３（００００６００９— ２７２１）１— ００— ４
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论著・
大鼠肝脏撞击伤动物模型的制备及评价
（ｅｅｌｕｇｒＣｎｒｆＬＧｎｒｏｐｔｆｈｎｄｒｙＣｅｇｕ６０８，ｈｎ）ＧｎｒｒｅｅｔＡ，ｅｅａＨｓｉｌｅｇｕＡｍ，ｈｎｄ１０３ＣｉａＳｙｅｏＰｌａｏＣａ
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改良大鼠腹腔内心脏移植模型80例复制体会

ｔａｎｐｌｒｓａｎｔａｔｉｍｏｄｉｒａｔｏｎｅｌｎＳ．ＭｅｔｄＳｈｏＥｉｈｔＷｉｔａｒｇｙＳｒａｔＳｗｅｅｒＵｓａｓｄｎｏｅｄｏｒｓｗｌ８Ｓｒｔｗｒｓｌｃｅａｓｅｐｉｎｔｔｓｕｄｃｌｍｎｔｅａｎｅｆａｃｔｈｉｅ０ＤａｓｅｅｅｅｔｄｒｃｉｅＳｏｔｙｅｌｉｍｕｅｏｌｒｃｏｎａｃｉｙｒｓａｅｉａｄｍｉｌａｖｔｏｆＤａ．ＴｅｏｔｉａｃｎｔｒｅｙｎｔｅＳｒｔＳｈａｒＣｓｅａｔｒａｄｈｒｉｈｇｔ
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大鼠器官移植系列手术及其研究(摘要)

大鼠器官移植系列手术及其研究(摘要)
夏穗生;陈忠华;陈金芝
【期刊名称】《医学研究杂志》
【年(卷),期】1989(000)003
【摘要】随着移植医学的发展,许多国家的移植中心均趋向于利用大鼠各种器官移植模型进行实验研究,大鼠带血管器官移植模型的创制及其在实验研究中体现出的很多优越性,使其成为实际工作中很多研究项目能否开展的关键。

本研究课题以创制系列大鼠器官移植动物模型为目的,主要研究探讨手术方式。

经过296次手木移植实验及87次对照实验,先后成功的创立了大鼠原位肝移植、大鼠带血管肾上腺移植、大鼠异位心移植和大鼠带肺叶异位心移植等常用的系列模型。

(一)原位肝移植实验中基本手术操作训练及各种不同方式的比较共做88次,定型术式40次。

其中A组22次,供肝胆管直接引入十二指肠。

胆道并发症较高。

3只直接死于胆汁性腹膜炎,4只胆
【总页数】1页(P23-23)
【作者】夏穗生;陈忠华;陈金芝
【作者单位】同济医科大学器官移植研究所;同济医科大学器官移植研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R
【相关文献】
1.器官移植手术室人力资源调配新模式的建立及临床实践研究 [J], 刘凤;陈思媛;杨丽娜;白晓霞;刘彬
2.大鼠器官移植的手术配合 [J], 袁博;宫德正;吴云红;朱亮;邹原;关莉莉;吴琼;高颖
3.大鼠器官移植的手术配合 [J], 袁博;宫德正;吴云红;朱亮;邹原;关莉莉;吴琼;高颖
4.器官移植患者围手术期心理状况研究进展 [J], 余建英;黄亚林;卓瑜;翁莉;黄垒
5.氦-氖激光、免疫抑制剂抗大鼠器官移植排斥反应的研究 [J], 赵玉军;王云鹤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠原代肝细胞的标记和移植方法

大鼠原代肝细胞的标记和移植方法杨军英;王建设;刘慧兵;李涛;刘芳【摘要】The optimum concentration of CM-DiI incubated with primary hepatocyte of rat , optimum transplant volume and route of labeled primary hepatocyte are studied . The rat hepatocytes are isolated and purified by collagenase and density gradient centrifugation , and labeled with different concentration of CM-DiI , and then transplanted on rat which are previously suffered 2/3 partial hepatectomy 0 h by liver portal vein and tail vein , respectively . The livers are removed after transplanting hepatocyte 36 h , frozen section and paraffin section are prepared and analyzed by immunohistochemistry and fluorescence observation , respectively . The results show that hepatocyte can be labeled to 95% after incubating with CM-DiI 4 μmol・mL - 1 for 5 min , labeled hepatocytes which are observed on frozen section transplanted by 0.8 mL per keilogram remnant liver weight are more than that of 0.2 ,0.4 and 0.6 mL (P < 0.01) , and labeled hepatocytes transplanted by liver portal vein aremore than that of tail vein ( P < 0.01 ) . Hepatocytes incubated with CM-DiI 4 μmol・mL - 1 for 5 min can be labeled to 95% , and 0.8 mL labeled hepatocytes per keilogram remnant liver weight transplanted by liver portal vein can get preferable label and transplantation efficiency .%探讨CM-DiI 标记大鼠原代肝细胞的最佳浓度、细胞的移植量和移植途径．采用原位胶原酶灌注和密度梯度离心法分离、纯化大鼠肝细胞，用不同浓度 CM-DiI 进行标记，筛选出 CM-DiI 的最佳标记浓度，分别从门静脉、尾静脉移植到2/3肝切除0 h大鼠，对细胞移植36 h 后的肝组织石蜡切片和冰冻切片分别进行免疫组织化学分析和荧光观察．结果显示，4μmol・mL -1浓度的CM-DiI 和肝细胞孵育5 min ，细胞标记率高达95％．每克大鼠残肝移植0.8 mL的细胞悬液（107个・mL -1）和0.2，0.4，0.6 mL 移植后检测到的标记细胞数目相比有显著性差异（P＜0.01），经肝门静脉移植后可以检测到的标记细胞数比尾静脉多（P＜0.01）．CM-DiI 标记大鼠原代肝细胞的最佳浓度为4μmol・mL -1，标记细胞的最佳移植量为每克大鼠残肝移植0.8 mL 的细胞悬液（107个・mL -1）、最佳移植途径为经肝门静脉移植．【期刊名称】《西北师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2014(000)004【总页数】5页(P79-83)【关键词】大鼠;原代肝细胞;细胞移植;标记率;移植途径【作者】杨军英;王建设;刘慧兵;李涛;刘芳【作者单位】河南师范大学体育学院，河南新乡 453007; 河南师范大学省部共建细胞分化调控重点实验室，河南新乡 453007;河南师范大学体育学院，河南新乡 453007;河南师范大学省部共建细胞分化调控重点实验室，河南新乡 453007;河南师范大学省部共建细胞分化调控重点实验室，河南新乡 453007;河南师范大学省部共建细胞分化调控重点实验室，河南新乡 453007【正文语种】中文【中图分类】Q2-33细胞治疗在修复肝损伤、促进肝再生、改善肝功能的作用已经在体外研究和动物实验中得到越来越多令人欣喜的结果，但其作用机制、临床疗效还需要深入研究[1,2].目前，大多研究采用间充质干细胞、IPS细胞等诱导成 hepotocyte-like cell 治疗肝脏疾病[3,4]，但其在体内是否可以维持内环境稳定，不会诱发肿瘤需要长期试验来证实.肝脏具有极强的再生能力.当受到急性损伤时，残余肝脏细胞能够迅速增生恢复至原肝重，维持正常的肝脏生理功能[5].因此，肝细胞是肝脏的主要结构和功能细胞，也是肝损伤修复的第一道屏障[6]，是肝脏疾病治疗的重要细胞[7,8].本研究采用大鼠2/3肝切除模型，用荧光染料CM-DiI标记，对再生肝细胞的体外标记、移植途径和体内分布进行检测，为肝细胞的细胞治疗和体内分化研究提供实验基础.1 材料与方法1.1 实验动物及模型制备成年健康 SD 大鼠由河南师范大学实验动物中心提供.体重(220±20)g，饲养温度(21±2)℃，相对湿度60%±10%，光照时间12 h(8：00～20：00)，自由饮水、摄食.大鼠用乙醚麻醉、酒精消毒后，按文献[9]方法切除大鼠的肝脏左叶和中叶，制备2/3肝切除大鼠模型.本实验均在无菌条件下进行.1.2 仪器和试剂荧光显微镜、冰冻切片机、切片机、低温离心机等.Percoll(Pharmacia公司)，羊抗鼠 ALB 单克隆抗体(Santa公司)，兔抗鼠G6P 单克隆抗体、鼠抗羊 IgG 试剂盒、鼠抗兔 IgG 试剂盒(博士德公司)，碱性磷酸酶标记山羊抗兔二抗、碱性磷酸酶标记兔抗山羊二抗(北京中杉公司)，CellTrackerTM CM-DiI(Invitrogen公司)，Ⅳ 型胶原酶(Collage nase Type Ⅳ，Sigma 公司)，其他化学药品均为分析纯.1.3 肝细胞分离水合氯醛麻醉正常大鼠，腹部用酒精消毒，采用原位胶原酶灌注和密度梯度离心法，参照文献方法[10]，分离获得肝脏细胞悬液.将肝脏细胞悬液和60% Perco11在4℃、200 g密度梯度离心15 min，收集中间层细胞(即肝细胞).台盼蓝染色，镜检细胞形态和活性.当细胞收率≥90%，细胞活性≥96%，红细胞数量≤0.1%时，视为合格样品.1.4 细胞免疫化学分离纯化的肝细胞悬液用4%多聚甲醛固定30 min后涂片，参照细胞免疫化学方法，DAB染色，检测ALB和G6P的表达.1.5 肝细胞标记将分离纯化的肝细胞悬液调整密度至1×106 mL-1，分别用 CM-DiI(二甲基亚砜事先溶解好，浓度为1 mg·mL-1) 1～5 μL·mL-1 5个梯度标记细胞，37 ℃分别孵育2,5,10 和 15 min，随后将细胞置于4 ℃ 下 5 min 以终止反应，用4 ℃预冷的D-PBS溶液50 g洗涤3次，去除残余标记液.取10 μL细胞悬液滴片，荧光显微镜下检测标记率.1.6 细胞移植按每克大鼠残肝移植0.2,0.4,0.6,0.8和1.0 mL的细胞液，以1 mL·min-1的速度，用0.7 mm直径针头的注射器，将标记好的细胞悬液(1×107 mL-1)分别从尾静脉和门静脉移植入2/3肝切除0 h的大鼠.对照组注入等量PBS.1.7 细胞示踪于细胞移植后36 h处死大鼠，摘取肝脏，制备6 μm冰冻切片，荧光显微镜观察移植肝细胞在肝脏内的分布情况；用10%福尔马林溶液固定肝脏，制备石蜡切片.按照免疫组织化学方法，DAB显色，镜检ALB 的表达.1.8 统计学分析数据处理采用 SPSS 15.0 软件，实验结果数值采用t检验.P<0.05即为有统计学意义.2 结果2.1 再生肝细胞的形态学特征通过两步法原位灌流消化获得肝细胞的活性高达95%以上，细胞分散较好，轮廓清晰，大小均一，折光性强，胞质清亮，核大而圆，核仁清晰，有双核细胞.肝细胞纯度较高，G6P和ALB阳性细胞率均在95%以上(图1).2.2 CM-DiI标记细胞的最佳浓度和时间分离纯化的1×106 mL-1的肝细胞和CM-DiI储备液在37 ℃条件孵育.CM-DiI在2～4 μL·mL-1浓度范围内，标记率随浓度增加而升高，4 μL·mL-1浓度时标记率达95%以上.各实验组间差异显著(P<0.01).孵育 5 min标记率和细胞活性最好，随着孵育时间延长,细胞活性降低(图 2,3).图1 原代肝细胞 ALB(A)和G6P(B)的表达(×200)Fig 1 Expression of ALB(A) and G6P(B) in primary hepatocyte(×200)A～E分别为CM-DiI 1，2,3,4，5 μL·mL-1标记的肝细胞(A～E: Hepatocyte labeled by 1,2,3,4,5 μL·mL-1 CM-DiI,respectively)图2 不同浓度CM-DiI标记原代肝细胞(×200)Fig 2 Primary hepatocyte labeled by different concentration CM-DiI(×200)图3 冰冻切片检测到的标记细胞和移植细胞数量的关系Fig 3 The relationship between labeled hepatocyte observed on frozen section and the numbersof transplanted hepatocyte2.3 肝细胞移植的最佳量细胞移植后 36 h，受体动物肝脏的连续冰冻切片结果显示(图4)，移植细胞量少时，在组织切片中基本看不到，可以追踪到的细胞数目随着移植细胞数量的增加而增加.1×107mL-1密度的标记细胞按0.8 mL·g-1残肝移植检测效果最好，和0.2,0.4,0.6和1.0 mL·g-1残肝的细胞移植量相比具有显著性差异(P<0.01)，和1.0 mL·g-1残肝的细胞移植量相比没有显著性差异.2.4 移植途径细胞移植后36 h受体动物肝脏的连续冰冻切片的免疫组化和荧光结果显示(图5)，经肝门静脉和尾静脉两种方式移植，在肝组织内均可检测到移植细胞.相同密度和数量的肝细胞，经肝门静脉移植检测到的标记细胞明显多于尾静脉移植(P<0.01). 图4 冰冻切片检测到的标记细胞和移植途径的关系Fig 4 The relationship between labeled hepatocyte observed by IHC and transplantation route2.5 受体肝的组织学检测细胞移植后36 h受体动物肝脏组织学结果显示(图5)，肝细胞轮廓清晰，胞质均匀，可见部分双核细胞，细胞核呈圆形或椭圆形，个体较大，易于辨别.个别移植细胞在受体肝脏中可以表达ALB.3 讨论目前治疗肝癌或终末期肝病的理想方案是肝移植，但是供肝严重不足和免疫排斥阻碍了其广泛应用.原代肝细胞的移植避免了干细胞和iPSCs细胞的潜在危险，实现了一个供肝用于多个受体，具有费用低，可重复移植、创伤小等优点[11]，既是终末期肝病和肝移植之间的桥梁，又可以作为基因治疗的载体，纠正遗传代谢性肝病的代谢紊乱.A.HE染色；B和D.荧光显微镜下观察到的标记细胞；C.ALB表达.箭头指的是受体肝内表达ALB的移植细胞(A.HE staining；B and beled hepatocyte observed by fluorescence observation microscope;C.Expression ofALB.Arrow indicated transplatated hepatocyte which expressed ALB inreceiver liver).图5 受体肝组织的组织形态学检测Fig 5 Morphology observation in receiver liver肝细胞移植常采用门静脉肝内移植、尾静脉移植、穿刺脾实质内移植、经肝动脉肝内移植以及腹腔内大小网膜腔内移植或皮下注射等途径[12,13].静脉内输注的细胞会回归到肝脏，是一种简便而又安全的输注途径.部分肝切除后，肝再生被启动，细胞增殖、分化相关的一些生长因子、细胞因子等通过激活细胞信号通路[10]，为移植细胞提供良好的再生环境，可促进移植细胞的存活、驻留、增殖和分化.我们采用部分肝切除模型大鼠作为受体，采取门静脉和尾静脉两种方式植入原代肝细胞，通过荧光追踪，发现相同密度和数量的肝细胞，经肝门静脉移植后可以检测到较多的标记细胞.CM-DiI是一种细胞膜标记染料，水溶性好，标记细胞形态良好，对细胞无毒，稳定长效，其荧光不受醛类固定剂影响，能有效用于体外诱导分化和移植细胞在活体组织中的迁移及分化研究.但CM-DiI标记基本都是用于干细胞研究，对于原代细胞的标记未见报道.研究发现，移植细胞数量级不得超过 107 个，移植量在 0.5～3.0 mL范围内.移植细胞的数量增加1倍，门脉高压引起的右心房压力升高，并发症如呼吸暂停或死亡明显增多[13].本研究中，把分离纯化的肝细胞移植到2/3肝切除大鼠，通过细胞移植后36 h受体动物肝脏的连续冰冻切片和石蜡切片的观察，发现4 μmol·mL-1浓度的CM-DiI和肝细胞孵育5 min，按每克大鼠残肝0.8 mL 的细胞悬液(107个·mL-1)移植，可以达到最好的标记效率和移植效果.把分离纯化的肝细胞移植到再生肝后，细胞散在分布于肝内，细胞结构完整，部分标记细胞嵌入肝板，具有肝细胞形态，极个别移植细胞能够表达ALB，具有肝细胞的功能.肝细胞移植后是否驻留、分化等有待于进一步探讨与研究.参考文献:[1]ANSBORO S，GREISER U，BARRY F，et al.Strategies for improved targeting of therapeutic cells:implications for tissue repair[J].Eur Cell Mater，2012，23：310-318.[2]STREETZ K L.Liver cell transplantation models for experimental clinical research:Prometheus in a different light[J].Dtsch Med Wochenschr，2013，138(16)：852-854.[3]MEIER R P，MÜLLER Y D，MOREL P，et al.Transplantation of mesenchymal stem cells for the treatment of liver diseases，is there enough evidence[J].Stem Cell Res，2013，11(3)：1348-1364.[4]YU Y，FISHER J E，LILLEGARD J B，et al.Cell therapies for liver diseases[J].Liver Transpl，2012，18(1)：9-21.[5]FAUSTO N，CAMPBELL J S，RIEHLE K J.Liver regeneration[J].Hepatology，2006，43(2 suppl 1):45-53.[6]RIEHLE K J，DAN Y Y，CAMPBELL J S，et al.New concepts in liver regeneration[J].J Gastroenterol Hepatol，2011，26：203-212.[7]RODRIGUES D，REVERBEL D A,SILVEIRA T，et al.Freshly isolated hepatocyte transplantation in acetaminophen-induced hepatotoxicity model in rats[J].Arq Gastroenterol，2012，49(4)：291-295.[8]KROHN N，KAPOOR S，ENAMI Y，et al.Hepatocyte transplantation-induced liver inflammation is driven by cytokines-chemokines associated with neutrophils and Kupffer cells[J].Gastroenterology，2009，136(5)：1806-1817.[9]HIGGINS G M,ANDERSON R M.Experimental pathology of theliver:restoration of the liver of the white rat following partial surgicalremoval[J].Arch Pathol，1931，12(2):186-202.[10]徐存拴，章静波.大鼠肝再生的功能基因组学研究：上册[M].北京：高等教育出版社，2009：1-2.[11]PIETROSI G，VIZZINI G B，GRUTTADAURIA S，et al.Clinical applications of hepatocyte transplantation [J].World J Gastroenterol，2009，15(17)：2074-2077.[12]冯渊，李德卫，杨均均.经大鼠脾动脉行肝细胞移植建立动物模型[J].复旦大学学报:医学版，2012，39(6)：653-657.[13]向贤宏，陈伟，陈柳琴，等.不同途径肝细胞移植对肝硬化大鼠模型肝脏血流灌注的影响[J].中山大学学报:医学科学版，2012,33(3)：357-360.。

肝硬化和肝癌动物模型构建实验

肝硬化动物造模实验一、原理CCl4是使用最早、应用最广泛的诱导肝硬化动物模型的化学药品。

CCl4经肝微粒体细胞色素P450激活生成三氯化碳（CCl3），后者攻击肝细胞膜结构上的磷脂，引起脂质过氧化，破坏细胞的模型结构；CCl3还与细胞内蛋白质形成共价键，损害线粒体，使还原性辅酶A（NADH）与三磷酸腺苷（ATP）在肝内生成减少，脂肪酸氧化受到抑制，影响三羧酸循环，致使肝细胞“窒息”死亡；内质网、线粒体、高尔基体甚至细胞膜的变形和破坏，导致蛋白合成、能量代谢和脂质氧化障碍，三酰甘油和脂肪酸在肝细胞内蓄积，出现脂肪变性，肝细胞坏死并发生纤维化。

高浓度CCl4主要累及中枢神经系统，低浓度反复应用则损害肝和肾，肝脏损害-修复-损害最终形成肝硬化。

采用CCl4诱导肝硬化模型，通常选用30%-60%浓度作为致模溶液，以大鼠作为造模对象，通过皮下或腹腔注射、灌胃、蒸汽吸入或拌于食物中喂养等各种方法输入动物体内。

二、模型特点模型制作观察过程中，模型动物精神萎靡，食欲不振，嗜睡，易激怒，时见相互间撕咬和攻击，体重先减轻后增加。

腹建注射30%CCl4溶液的动物在造模7周时，其血清丙氨酸转氨酶（ALT）、总蛋白（TP）、球蛋白（GLO）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）和肝组织TC、TG、L-羟脯氨酸（HPA）含量明显上升，血清白蛋白（ALB）含量和白蛋白/球蛋白比例（A/G）显著下降，光镜下全部模型动物肝组织出现纤维化，大部分形成假小叶；电镜下模型动物肝细胞超微结构明显异常，肝细胞呈不同程度的肿胀，部分肝细胞膜破裂，内质网扩张断裂，常见大片脂质空区，线粒体基质电子密度增大，脊消失，肝窦中多见中性粒细胞。

皮下注射40%、50%、60%CCl4溶液连续42-66 d，动物成活率为46%-77%，肝硬化模型成功率为72%-100%。

成模动物正常肝组织被破坏、由广泛增生的纤维组织将原来的肝小叶分割包绕成大小不等的圆形状，形成假小叶。

豚鼠至大鼠异种肝移植手术操作要点及体会

豚鼠至大鼠异种肝移植手术操作要点及体会翟振国;牛坚;刘斌;魏鑫【摘要】目的建立稳定的豚鼠至大鼠的异种肝移植模型.方法在传统"二袖套"法基础上进行改良,并分预实验和正式试验两组进行手术时间和手术成功率的比较.结果实验通过改良型二袖套法进行肝移植手术80对,预实验手术25对,成功率68%,正式手术35对,成功率89%,显著高于预实验(P<0.05),而手术时间明显低于预实验(P<0.05).结论改进的异种肝移植术操作简便,随着手术者经验的提高可明显提高手术成功率,可作为异种肝移植实验可靠的动物模型制作.%Objective To establish a stable rat model of liver xenotransplantation. Methods By improving the traditional“two-cuff” metbod of liver transplantation,the animals were divided into preliminary and formal groups,to compare the duration and success rate of operation.Results Eighty pairs of animals were operated by the improved method.The preliminary group was 25 pairs,in whom the success rate was 68％. The formal group was 35 pairs, in whom the success rate was 89％.The success rate of formal group was obviously higher than that of the preliminary group,but the operating duration was significantly shorter than that of the preliminary group.Conclusion The improved method of liver transplantation is easy to operate and can obviously improve the success rate with improved surgical experience. This method can be used to establish the stable rat model of liver xenotransplantation.【期刊名称】《肝胆胰外科杂志》【年(卷),期】2011(023)003【总页数】3页(P244-246)【关键词】异种肝移植;豚鼠;大鼠;二袖套法【作者】翟振国;牛坚;刘斌;魏鑫【作者单位】徐州医学院附属医院,普外科,江苏,徐州,221000;徐州医学院附属医院,普外科,江苏,徐州,221000;徐州医学院附属医院,普外科,江苏,徐州,221000;徐州医学院附属医院,普外科,江苏,徐州,221000【正文语种】中文【中图分类】R657.3自1963年Starzl实施世界上第一例人体肝移植以来，肝移植已成为治疗终末期肝病以及肝癌的有效手段。

肝细胞移植治疗肝硬化合并小肝综合征大鼠模型的效果观察贾磊

Ｕ／Ｌ、（１５０．５ ± １４．８）Ｕ／Ｌ（Ｆ＝１３．８１６，Ｐ＝０．００１），ＡＳＴ平均值分别为（１０８．７ ± １０．８）Ｕ／Ｌ、（１４２．０ ± １４．１）Ｕ／Ｌ、（１６１．０ ± ２１．２）Ｕ／Ｌ
（Ｆ＝１７．２２０，Ｐ＜０．００１），Ａｌｂ平均值分别为（２９．１ ± ０．６）ｇ／Ｌ、（２８．０ ± ０．２）ｇ／Ｌ、（２７．０ ± ０．２）ｇ／Ｌ（Ｆ＝１５．６２９，Ｐ＝０．００１）。术后７２ｈ
摘要：目的方法观察肝细胞移植对大鼠肝硬化合并小肝综合征的治疗效果。对４０只雄性ＳＤ大鼠用四氯化碳皮下注射加
乙醇饮用建立肝硬化大鼠模型。从肝硬化大鼠模型中随机抽取３０只，分为Ａ组（术前３ｄ进行肝细胞移植）、Ｂ组பைடு நூலகம் 手术时行肝细
胞移植）、Ｃ组（不进行肝细胞移植处理），每组１０只，进行７０％肝脏切除，术后观察各组大鼠生存率、不同时点血生化以及肝脏ＨＥ
３６６６，Ｐ＝０．０４７），Ａｌｂ平均值分别为（２５．６ ± ０．５）ｇ／Ｌ、（２４．８ ± ０．６）ｇ／Ｌ、（２３．４ ± ０．４）ｇ／Ｌ（Ｆ＝２６．５７７，Ｐ＜０．００１），Ａ组的恢复情
况均有好于Ｂ、Ｃ两组的趋势，但差异不全有统计学意义。至术后２４０ｈ３组ＡＬＴ平均值分别为（９７．８ ± １０．０）Ｕ／Ｌ、（１２８．２ ± ２０．７）
收基作通ｄｏｉ稿金者信：１日项简作０．期目介者３９：：：：６２贵贾李９０／１阳磊海ｊ９．市ｉ（洋ｓ－１ｓ科１ｎ，９１．电８技１４－０子局－０２１９信）大；－，修箱健男５２回：康，５２主６日６基．９治２金期００５医２资２：０２７师助．０９０２３，项５０９主．＠－目０要１０ｑ（８２ｑ筑从．－ｃ科事１ｏｍ７合肝。。同胆［胰２０脾１９］疾９病－１的－临２号床）与基础研究。

大鼠长间隔连续部分肝切除-肝再生模型的建立

大鼠长间隔连续部分肝切除一肝再生模型的建立
丁隆，东生，刘路艳，杨宇，杨婷，荆宏生
佳木斯１４０）５０２（佳木斯大学附属第一医院普外二科，黑龙江
【摘要】目的：建立大鼠长间隔连续部分肝切除一肝再生模型。方法：所有大鼠分为ＡＢ两组，、Ａ组大鼠称其体重后处死，取其肝脏并
态，肝叶较饱满，颜色鲜红，质地较韧。应用ＳＳ３０软件，ＰＳ１．采用ｔ检验，Ｐ＞００，．５差异不显著。无统计学意义。结论：为研究多次再生后的新
生肝组织的功能是否恢复到正常肝功能范围内及肝脏的再生是结构性再生还是功能性再生建立模型。
【关键词】肝再生；ｌｏ系统；间隔连Ｇｓｎｉｓ长续肝切除
ｏｖｒｔｅｇｔｗｇｔ（ｆｅｉｈ／ｅｈ．０—７—１ —２ｄＲｔｏｒｕｒｅｅｔｄｒｔｖｒｅｔａｅａｌｅｍｄ—ｌｂ，ｇｔｏｒｌｇｉｔｖｕｃｓｉｉｌｗｅｗｉ４１）ａｓｆｇｏｐａｅｒｓｅｅａｅｆｌｒｌｏ，ｉｏｅｆｈｂｆｎｅａｓｃｅｓｅＢｉｆｌｔｂｉｌｏｏｎｒｌｅｖ
称肝湿重，计算肝湿重／体重。Ｂ（一 —１ — １）组Ｏ７４２ｄ长间隔连续切除大鼠肝左外叶、中叶、右叶，ｌ２天后称其体重后处死，取其肝脏并称肝湿重，计算肝湿重／体重。应用ＳＳ．软件，ＰＳ１０３采用ｔ检验。００Ｐ＜．５为差别有统计学意义。结果：组大鼠２天后肝脏再生明显，Ｂｌ失去原肝形

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大鼠肝脏移植模型制作
大鼠原位肝移植是研究器官保存、肝脏缺血再灌注损伤、免疫抑制剂、移植排斥反应以及免疫耐受机理等方面常用的动物模型。

最初由Lee在1973年报道，经过许多学者的改进，其手术基本稳定，根据肝上下腔静脉吻合方式，大鼠原位肝移植可分为“二袖套法”和“三袖套法”，下面简单的将大鼠肝脏移植的模型制作介绍一下。

一、手术器械
显微外科手术器械包，手术显微镜1台，自制S拉钩（用橡皮筋一端带弯成S形大头针）4个，眼科剪1把，其它外科器械若干及纱布、棉球、棉片和橡皮条等。

二、供、受者大鼠的选择
根据不同的研究目的选择不同的动物品系，在同种移植模型中，一般采用两种纯系健康大鼠，如Lewis大鼠，Brown Norway 大鼠（BN），DA大鼠等，国内应用Wistar，SD大鼠也比较多。

如果是异种移植可以选用豚鼠－大鼠，仓鼠－大鼠等不同品系的动物。

三、术前准备
供、受者术前禁食14h，自由饮水，采用乙醚吸入麻醉麻醉的方法，提高手术的安全性，受者术前肌肉注射阿托品0.03mg，防治分泌物阻塞呼吸道。

四、供者手术
麻醉成功后，经阴茎背静脉注射50U/ml肝素稀释液3.0ml，使供者全身肝素化。

十字切口入腹，经腹主动脉穿刺灌洗供肝；灌洗前，剪开膈肌，阻断腹主动脉，离断胸腔段肝上下腔静脉，灌洗至流出液澄清为止，约需灌洗液20～30ml。

游离肝下下腔静脉，分离结扎离断右肾静脉和右肾上腺静脉，自肠系膜上静脉置管，缓慢注入20ml含肝素的林格氏液，于右肾静脉下方离断肝下下腔静脉，剪开胆总管前壁，近肝端插入外径1.0mm，长4.0mm 的聚乙烯管约2.0mm（可用硬膜外导管制成），结扎固定后远肝端离断之，分离结扎离断肝固有动脉；游离门静脉，结扎离断其分支幽门静脉、脾静脉，于脾静脉下方离断门静脉，锐性分离肝周韧带，结扎左膈下静脉，绕肝上下腔静脉环切膈肌及其腱膜，保留2.0mm
边缘，取下供肝置于4℃林格氏液中保存。

五、血管套管的准备
供肝置4℃冰浴中，作血管套管放置。

（一）二袖套法，肝下下腔静脉和门静脉分别选用外径2.8mm和1.8mm左右的聚乙烯管，门静脉可利用脾静脉汇合处作一喇叭口，用微血管镊穿过自制袖套管管腔，夹住门静脉端后外翻于套管壁，5-0丝线在袖套管烙痕内结扎，外翻固定。

用丝线结扎胆囊颈部，剪除残余胆囊。

（二）三袖套法，肝上下腔静脉选用外径5.0mm，内径3.8mm的聚乙烯管，体长2.0mm，柄长10.mm，体部中央刻有浅槽，袖套前，剪好肝上下腔静脉胸腔开口处，使肝上下腔静脉腔口扩大，自套管口完整穿出，外翻，3-0丝线双重结扎固定，剪除残余膈肌。

六、受者手术
（一）二袖套法供肝植入：腹部正中切口上至剑突，左右侧腹壁各做2根牵引线将腹壁牵
开，将肝下腔隙内小肠推向左下方，以湿纱布覆盖，在右肾静脉上缘平面游离肝下下腔静脉，带牵引线，结扎、切断右肾上腺静脉，游离肝周韧带，结扎左膈静脉，充分游离肝上下腔静脉，带牵引线，结扎切断左肝至食管血管，游离胆总管，在分叉处切断，将远端胆总管翻向下方，游离结扎切断肝固有动脉，在幽门静脉水平上方游离门静脉，依次贴肝用微血管夹阻断门静脉及肝下下腔静脉，在门静脉分叉处穿刺，注入常温生理盐水2～3ml，驱除肝脏内
血液，用小satinsky钳阻断肝上下腔静脉，近肝切断肝上下腔静脉、门静脉和肝下下腔静脉，移出原肝。

将供肝从4℃的冰浴中取出，原位放入肝脏腔隙内，将供肝左侧8-0血管
缝线与受者肝上下腔静脉左侧角缝合，结扎，连续缝合腔静脉后壁，至右侧角时与供肝右侧牵引线打结，再作腔静脉前壁连续缝合至左侧角，生理盐水冲洗血管腔排出气泡，与线尾打结，完成肝上下腔静脉缝合。

经门静脉袖套管注入常温生理盐水2ml，排出供肝内冷灌注液，微血管夹夹闭供肝肝下下腔静脉，将阻断受者门静脉的微血管夹下移至幽门静脉水平，排出门静脉内血液及血块，冲洗血管腔，迅速插入供者门静脉袖套管，在袖套管凹槽内用5-0丝线结扎，移去门静脉微血管夹及肝上下腔静脉satinsky钳，供肝恢复血流，结束无肝期，供肝胆管内有胆汁流出，将受者肝下下腔静脉微血管夹下移至右肾静脉上缘，去除下腔静脉内的血液及血凝块，肝素生理盐水冲洗后立即插入供肝肝下腔静脉下腔静脉袖套管，5-0丝线结扎固定。

将胆总管支架管插入受者胆总管管腔内，5-0丝线结扎，大网膜覆盖
固定，腹腔内注入含青霉素20万u的温生理盐水2ml，关腹。

术后予以复温，完全清醒
后自由进糖水，术后第一天自由进食。

（二）三袖套法供肝植入：与二袖套法肝移植的区别在于肝上下腔静脉采用袖套法吻合将受
者的原肝移出以后，在肝上下腔静脉后方放置0号和3-0丝线各一根，供肝植入原位，供肝的肝上下腔静脉套管插入受者的肝上下腔静脉，环绕袖套凹槽用0号丝线结扎固定，如不可靠加扎一道3-0线，即可完成肝上下腔静脉的套管吻合，其余肝下下腔静脉、门静脉
和胆总管的吻合方法与二袖套法相同。

七、注意事项
1.减少游离肝脏时的机械损伤
在整个供者和受者肝脏游离过程中，自肝下下腔静脉起，依次按逆时针方向操作，尽量避免对肝脏的反复翻动而造成的机械损伤。

尤其在游离心脏停搏供者的肝脏时显得更为重要。

研究发现，在供肝游离过程中的手术操作本身，将会影响Kuppffer细胞的状态，而该细胞在原发性移植物无功能中扮演重要角色。

2.血管的游离
在大鼠肝移植过程中，需要游离的多支供、受者的血管，不仅要防止血管壁损伤所造成的不可逆大出血，而且对于血管周围的筋膜和结缔组织要尽可能剥离干净，以防止在静脉壁外翻完成血管套管时，因残余组织造成对门静脉或肝下下腔静脉的狭窄。

3.缓慢均匀的灌洗
采用经腹主动脉灌洗，这样灌洗液不仅可以经肝动脉入肝，而且经肠系膜上、下动脉和肠系膜上、下静脉后，在经门静脉入肝，从而起到双重灌洗的作用。

供者手术初时理顺肠段，可以防止肠系膜血管的扭曲，在灌洗过程中需要不断的向供肝校注4℃的林格氏液，以保证肝脏内外温度的一致。

同时用棉签轻柔的点拨供肝，以使肝叶血管畅通。

有效的灌洗并不在于灌洗总量的加大，缓慢均匀的灌洗是获取色泽均匀，质地柔软的高质量供肝的重要保障。

4.提高血管吻合质量
在肝上下腔静脉的吻合过程中，防止镊子用力钳夹血管壁而造成血管内膜的损伤，保持适当的针距，保证无张力缝合，并且不宜将缝线收的过紧，防止血管狭窄。

肝上下腔静脉缝合结束以后，不必再次检查吻合口，以防吻合口撕裂。

受者的门静脉和肝下下腔静脉与供肝相应的血管套管连接时，要防止扭曲和成角。

5.缩短无肝期时间
虽然Kamada提出大鼠肝移植中无肝期26min以内尚是安全的，将无肝期和肝下下腔静
脉阻断时间分别控制在18min和20min以内是完全可能的。

这是提高手术存活率，防止
术后并发症的发生。

随着门静脉淤血时间的延长，再灌注后肠道内菌群移位而使内毒素骤升，
由此将激活肝脏Kupffer细胞，大量TNF-α的表达和级联引发的各类细胞粘附分子等诸
多炎症介质将会对供肝以及受者的肺脏产生严重的损伤。

肝下下腔静脉血流的尽早恢复，有利于全身血流动力学恢复稳定，保证重要脏器的有效灌注。

术后肺部感染的发生往往与较长时间的血管阻断有关。

6.控制感染
改善手术条件和饲养环境，并应用抗生素，预防感染。

7.防止胆道梗阻
选用胆总管插管的口径应略大于胆总管的内径，防止钳夹变形，长度不宜超过5mm，防止
胆总管滑入肝内胆管。

此外，插管连接前的冲洗、防止供、受者胆总管连接时的扭曲，减少插管对胆总管内壁的损伤，都有利于减少术后胆道梗阻的发生。