徒手切片制作方法

一、目的要求
徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法.所需的仪器用具简单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构,必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。

但是徒手制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时,也不能制成连续切片，这些均为不足之处。

二、材料、用品
1、用品
显微镜、剃头刀(或刀片）、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸.1％番红水溶液（或50％酒精溶液),0。

5％固绿95％酒精溶液，70％、85％、95%酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。

三、方法与步骤
1、选材
所用材料不宜太软或太硬.一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、
叶柄等均可使用此法.质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成宽约5～6毫米，长1～1。

5厘米的小块，夹在夹持物（如胡萝卜根或马铃薯块茎等)中进行切片.使用夹持物时，先将夹持物的中央切成两半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷成筒状再切.
2、切片
（1）盛清洁的水于培养皿中.然后用左手的拇指及食指、中指夹住材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外2～3毫米，材料的切面必须保持水平方向.
（2）右手执刀(剃头刀或刀片)，平放在左手食指之上，刀口向内，自左前方向右后方滑行切割,要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。

(3)拉切的速度宜快,一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损伤材料或切得不平。

(4) 切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立即削平。

(5) 刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿润、润滑。

(6)切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察;等切到相当数量后;再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。

如想短期保存，可用水或甘油封藏。

如希望长期保存所切的材料，则还要经过以
下几个步骤做成永久玻片标本。

3、固定
挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有70%酒精的染色皿中进行固定.固定时间为16分钟或更长时间。

4、染色、脱水、透明
（1）用吸水管吸去70%酒精，染以1％番红（50％酒精溶液）约30分钟。

(2）再用吸管吸去番红，换用70%→85％→95％酒精进行冲洗、脱水,每级酒精3～5分钟。

(3）复染色。

吸去酒精，用0.5%固绿(95％酒精溶液）进行复染色，时间为0.5分钟。

（4）冲洗、脱水。

用95％酒精冲洗1次，时间10秒.后移入纯酒精中脱水2～3次，每次3～5分钟。

(5）透明。

吸去纯酒精，放入1/2二甲苯—1/2纯酒精溶液中脱水和透明1次,时间5分钟.
(6）吸去脱水透明液，换以纯二甲苯透明2次,时间5分钟.
5、封片、贴标签
将已透明材料用镊子或解剖针轻挑于清洁的载玻片上，滴上中性树胶，盖上盖玻片进行干燥。

在已封好的切片左边贴上标签，注明材料名称、制作日期和制作者姓名等项，以便查考。

较好的切片，其木质化的细胞壁和细胞核可染成红色,细胞质和纤维素的壁则常被染成绿色，
红绿相衬，有利于观察、分辨植物体的内部结构。

现将徒手切片制片的简要步骤归纳如下：
选材→切片→固定(70%酒精）→1％番红（50％酒精溶液）染色→70%酒精冲洗→脱水（85%酒精、95％酒精）→0.5%固绿(95％酒精溶液）复染色→冲洗(95％酒精1次）→进一步脱水（纯酒精2～3次）→透明(1/2纯酒精十1/2二甲苯及纯二甲苯各二次）→封片(中性树胶)→贴标签。

附：药品的简单配方
(1)1％番红:于蒸馏水或50%酒精100毫升中溶入番红粉末l克，过滤
后使用。

（2）0.5％固绿：95%酒精100毫升中加入固绿粉末0.5克。

徒手切片方法的改进
徒手切片技术运用在植物学实验教学中的历史较为悠久, 在石蜡切片之前, 基本上使用徒手切片。

它的优点在于可以观察新鲜材料组织和细胞的天然色彩, 看到活体细胞结构状态，所以徒手切片运用在植
物学实验教学中比较普遍。

为了克服传统徒手切片技术中的不足, 我们进行了改进，改为皮套加刀片.这种切片方法切片速度快，软硬质材料都可以切, 不需要任何夹物, 既经济适用, 又简单易行。

1 材料用品
双面刀片1 个,直径1～1.5 cm 的乳胶管, 毛笔、培养皿、载玻片、盖玻片、吸水纸，质量分数1％的中性红染液或红墨水，新鲜的植物根、茎、叶、花药和子房等。

2 切法
将直径1～1.5 cm 的乳胶管剪成3。

5 cm 长的一段, 用剪子从中间剖开扣在右手的大拇指上，注意皮套一定要高于拇指，把要切的植物材料, 紧贴在皮套的外侧。

如果是叶可以把它卷紧, 所切的材料不可
过
长，大约2～2。

5 cm 即可.此时用食指与中指和拇指一起把材料捏住, 幼嫩的材料捏时不可用力过猛，以免损坏组织细胞。

右手的拇指和食指捏住双面刀片的一侧, 手腕端平, 把刀片的前端与要切的材料保持垂直相接状态，先切平材料, 然后用腕力向内连续切片, 刀片只要搭住材料就可以垂直切片。

另外还可以用同样的方法将双面刀片的先端与材料搭住、垂直、从右向左推切，如此连续切下去, 然后用毛笔将切得薄而透明的材料刷入培养皿的水中,避免干燥。

3 染色、封片
把载玻片和盖玻片用纱布擦拭干净, 放在实验台上，加上1 滴中性红染液或红墨水, 用毛笔在培养皿中选择薄而透明切片沾到染色液上，用解剖针轻轻拨入染色液中, 大约30 s 后, 吸去染色液，加1 滴清水封片。

为了防止气泡的产生, 用左手拇指与食指拿住盖玻片的两侧, 使盖玻片的基部与滴液先接触, 右手握解剖针挑着盖玻片从左向右徐徐放下盖玻片，使气体从一侧排出，如果有多余的水溢出, 可用吸水纸吸干,再进行下一步的镜下观察.
4 镜检
镜下观察时，对好光源，让视野光线均匀一致, 放上临时切片，从低到高进行观察。

一个好的皮套切片，镜下观察有4 点标准: 材料完
整，薄而透明；镜下结构清晰; 无气泡; 封藏剂合适。

通过染色后的材料, 凡是死细胞均被染成红色，而生活细胞仍然保持活体的自然色彩。