徒手切片制作方法(借鉴材料)
徒手切片技术
植物病理徒手制片技术徒手制片的方法有整体封藏法、徒手切片法、组织透明制片法和涂抹制片法等多种。
限于时间本实验实践最为常用的整体封藏法和徒手切片法两种。
(一)整体封藏法对于生长在植物病部表面或培基上的菌丝体、分生孢子、分生孢子梗和其他孢子器官以及线虫等，可直接择取少许封藏在适当的浮载剂中，在显微镜下观察，根据材料的特点和观察的目的可采用不同的方法封藏制片。
常用方法的概括为挑、刮、拨、撕四种。
1挑：对于在植物受病部位或基质表面生长繁茂的霉状病原体(如霜霉菌)粉状病原体(如锈菌、白粉菌)以及培养基上的许多培养菌，可用尖细的解剖针等直接挑取封埋制片，挑取病原体的量，在保证选材典型的前提下，越少越好，以免互相重叠，分辨不清。
2刮：对病部病原体稀少，或用放大镜也难辩认霉层的病害标本，可采用两侧具刀的三角刮针(或可用刀片代替)刮取病原物制片。
刮的方法是，用刮针的一刃，蘸浮载剂少许，在病部顺同一个方向刮取2—3次，将刮得的病原体蘸在载玻片的浮载剂中封片镜检。
浮载剂在保证浮载质量的前提下要尽量少，否则少量的病原体在大滴的浮载剂中极易分散漂流，在显微镜下难以寻找。
3拨：对于产生在植物表皮下或半埋生于基物内的病原体孢子器官。
如子囊壳、分生孢子器、闭囊壳等，可将病原体连同寄主组织一同拨下，放入浮载剂中，用两支解剖针，一支稳定材料，另一支拨出植物组织，使病原体外露制片。
4撕：对于寄生在植物表皮细胞上的病原真菌，也可以将此有病原物的表皮撕下来制片镜检，这种方法不仅能看到病原物形态，而且可以观察病原物与寄主的解剖学关系。
用刀片割破叶背表皮再用小镊子轻轻撕下，放在浮载剂中制片镜检白粉病菌分生孢子梗、分生孢子和吸器形态。
(二)徒手切片法欲观察受病组织病变，病菌侵入和寄主体内扩展过程，以及埋生在基物内真菌子实体的形态结构等，都需将有关材料切成薄片，进行镜检，徒手切片是最常用的简便易行的方法，不需要特殊的设备，而且节省时间，切成的片子不仅可作临时观察，也可进一步制成永久性玻片标本。
徒手切片制作方法
、目的要求徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。
所需的仪器用具简单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。
但是徒手制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时，也不能制成连续切片，这些均为不足之处。
二、材料、用品1、用品显微镜、剃头刀（或刀片）、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。
1%番红水溶液（或50%酒精溶液），0.5%固绿95%酒精溶液，70%、85%、95%酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。
三、方法与步骤1、选材所用材料不宜太软或太硬。
一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。
质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成宽约5〜6毫米，长1〜1.5 厘米的小块，夹在夹持物（如胡萝卜根或马铃薯块茎等）中进行切片。
使用夹持物时，先将夹持物的中央切成两半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷成筒状再切。
2、切片（1 ）盛清洁的水于培养皿中。
然后用左手的拇指及食指、中指夹住材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外2〜3毫米，材料的切面必须保持水平方向。
(2) 右手执刀(剃头刀或刀片)，平放在左手食指之上，刀口向内，自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。
(3) 拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损伤材料或切得不平。
(4) 切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立即削平。
(5) 刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿润、润滑。
(6) 切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察;等切到相当数量后;再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。
如想短期保存，可用水或甘油封藏。
如希望长期保存所切的材料，则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本。
3、固定挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有70%酒精的染色皿中进行固定。
玉米茎秆徒手切片制作方法
玉米茎秆徒手切片制作
材料：玉米植株开花期地上第三茎节
仪器：光学显微镜
方法：
（1）固定材料：取材料材料固定于由无水乙醇与冰醋酸组成的固定液（无水乙醇:冰醋酸=3:1）中固定10h，后转移于70%乙醇保存。
（2）材料洗涤：将材料依次在梯度乙醇溶液（70%、50%、30%、10%）中洗涤各1h，后在清水中洗涤材料2-3h。
（3）切片：用双面刀片徒手切茎秆横截面，制茎秆新鲜切片约20μm厚，放于清水中，在显微镜下观察，选择细胞结构完整、厚度均匀的切片进行试验。
（4）染色：用1%番红液染色30min，后将材料置于清水中洗涤，然后将材料置于固绿中染色30s，后将材料在清水中洗涤。
注意：蕃红染料最好用配制半年以上的溶液
（5）观察和分析：将切片置于载玻片中央赶上盖玻片，在光学显微镜下观察茎秆解剖结构，比较茎秆表皮厚壁细胞厚度及维管束差异。
徒手制作叶片横切的临时切片
徒手制作叶片横切的临时切片步骤一：准备工作1.需要的材料包括：新鲜的叶片、刀片、毛细管、显微镜片、盖玻片、甘油或蒸馏水、显微镜。
2.将所有实验器材清洗干净，尤其是显微镜片和盖玻片，以确保无尘和污染。
步骤二：取样1.选择一个新鲜、健康的叶片，尽可能避免受伤或变色的叶片。
2.使用剪刀或手指轻轻取下一片叶片。
小心不要太用力，以免造成叶片组织损伤。
步骤三：固定样品1.将取下的叶片放入甘油或蒸馏水中，以保持叶片的湿润并避免组织干燥或变形。
2.如果使用甘油，将叶片放入甘油中浸泡2-3分钟，以提高透明度。
如果使用蒸馏水，则直接将叶片放入蒸馏水中。
步骤四：切片1.将刀片用火烤热，然后用镊子夹住刀片，用酒精擦拭刀片，以确保刀片的清洁和无菌。
2.将叶片取出，用镊子夹住叶片的边缘，将叶片在刀片上水平切割约1-2毫米的厚度。
要保持手稳定，尽量用均匀的力度进行切割。
3.将切下的叶片放入显微镜片上，轻轻按压叶片，使其展平并在显微镜片上固定。
步骤五：加盖玻片1.用镊子夹住盖玻片，将玻片垂直放在显微镜片上，轻轻地从一侧放下，以避免形成气泡和切片变形。
2.缓慢而均匀地按压盖玻片，使其与显微镜片上的切片充分接触，同时确保没有空气被困在切片下。
步骤六：观察和分析1.将装有切片的显微镜片放到显微镜的载物台上。
2.将显微镜调整到适当的倍数，并使用聚焦轮来调整切片的清晰度。
3.通过目镜观察并记录切片中的形态、结构和细胞组织特征。
最后，完成实验后，要小心处理显微镜片和盖玻片，清洗并保存好实验器材，以便下次使用。
总结：徒手制作叶片横切的临时切片是一种简便快速的实验技术，既可以用于学术研究，也可以用于教学实验。
通过这种方法，可以观察到叶片的细胞结构、细胞器和组织特征，有助于对植物的生理功能和结构的理解。
但需要注意的是，这种制作方法适用于较为便捷和简单的实验，对于一些复杂和特殊的研究，可能需要更加专业的切片设备和技术。
42.3徒手切片法制作植物临时装片
一、材料准备
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二、徒手切片
用左手大拇指、食指和中指捏住材料，拇指略低于中指，使材 料突出于手指之上，以免刀口损伤手指。右手平稳地拿住刀片，将 刀片平放在左手的食指第一指节的皮肤上，与材料切面平行，然后 以均匀的力量，自左前方向右后方拉，注意要用臂力而不是腕力。
切片时要湿润材料和刀面，使之滑润，且动作要快，一刀切下， 切忌中途停顿或前后作“拉锯”式切割。
一、材料准备
徒手切片一般运用于软硬适度的植物根、茎、叶等材料。 先准备一个盛有清水的培养皿，准备好毛笔，滴管和刀片等用 具和待切的材料。将待切的材料截成2-3cm长的小段便于手持，削 平切面。 若为质地较软而薄的材料，可将其夹在支持物中一同切片。支 持物通常为萝卜、胡萝卜、马铃薯等。先将支持物切成高3~5cm、 长、宽0.5cm的立方体小块，将其中部纵切形成一缝，然后将修整 好的材料夹在其中。
连续多切几片，转移至盛有清水的培养皿中，然后用毛笔将较 薄切片挑取至滴有清水的载玻片上，制成临时装片进行观察。
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二、徒手切片
左手拿材料，右手切片挥臂来自续切片将切片放入盛水的培养皿
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用新鲜材料制作切片的徒手切片法(精)
用新鲜材料制作切片的徒手切片法作徒手切片不需要复杂的设备，只需要一把锋利的剃刀或一片刀片就可以进行，方法简单，而且易于保持细胞的生活状态。
徒手切片法所作的切片通常不经染色或经简易染色后，封藏于水中即可观察。
用剃刀切片，材料不能太大，一般以表面不超过3-5mm2 为宜。
切片最要紧的是平而薄，无需很完整，比如茎的横切面，无需切片整圆形，只需一角就够了。
所有切片前的准备工作，如截取材料、削平切面，都应使用解剖刀或用过的刀片，不可用剃刀，以保持剃刀的锋利。
为了成功地切片，应掌握正确的用刀方法。
一般用左手的大拇指、食指和中指三个手指捏住材料，使材料突出在指尖之上，避免切片时割伤手指；用右手平稳地拿住剃刀，把刀口放在经解剖刀削平的材料平面中间，轻轻地压住它，以均匀的动作，从剃刀刀口下方起，斜着向后拉切。
切时要用臂力而不是腕力，并且不必太用力，否则就不易切薄。
在切的过程中，决不能以剃刀直接挤压材料，或以剃刀来回拉割材料，并且要始终保持材料与剃刀在水平状态，否则会由于切面偏斜而影响观察。
切下的切片应该薄而透明，形状则不要求非常完整，可以用刀不同的部位一次作几个切片，然后用蘸水的毛笔取下切片，置于盛水的培养皿中。
有些较柔嫩的器官，例如幼叶，难以直接拿住进行切片，因而需借助一些维持物，一般用胡萝卜根或土豆块茎作为维持物，把要切的材料夹于其中，进行切片，以利于把握操作。
将切下的薄片放在载玻片上时，要先在玻片中央加一滴水，把材料放到水滴中，然后用镊子夹住盖片，将盖片的一侧先接触到载玻片中央的水滴，然后用镊子顶住盖片的另一侧，慢慢放下，使盖玻片与载玻片之间充满水，如有气泡，要掀起盖片，重新放置。
徒手制作的切片可以直接在光镜下观察，也可以经过简易的染色，以使结构看得更清楚。
常用的染料有：0.1% 亚甲基蓝、0.5-1% 中性红或1% 番红水溶液等。
染色的方法是将切片放在载玻片上后，用吸水纸吸去多余的水分，滴上一滴染料，经过1－2 分钟后，用水冲洗一下，盖上盖玻片，在显微镜下观察。
徒手切片 (2)
徒手切片概述徒手切片是一种基本的厨房技巧，可以用来切割各种食材，如水果、蔬菜、肉类等。
掌握徒手切片技巧可以提高厨艺水平，使切片更加均匀、美观，并提高工作效率。
本文将介绍徒手切片的基本步骤、注意事项以及常见的切片技巧。
基本步骤徒手切片的基本步骤如下：1. 准备食材：选择新鲜的食材，并清洗干净。
2. 切割边缘：将食材的边缘切割平整，去除不均匀或瑕疵的部分。
3. 稳定食材：将食材放在切割板上，并用手掌或手指轻轻按住，以稳定食材。
4. 切割角度：根据需要，选择适当的切割角度。
常见的切割角度有垂直切割和斜切割。
5. 切割动作：使用锋利的刀具，将刀刃对准食材，用轻轻的压力进行切割。
注意保持手指的安全距离，避免意外伤害。
注意事项在进行徒手切片时，需要注意以下事项： - 使用锋利的刀具：使用锋利的刀具可以更加容易地进行切割，同时也能减少意外伤害的风险。
- 保持手指的安全距离：切割时，手指应尽量远离刀刃，以免发生意外伤害。
可以使用手指拇指把食材按住，保持手指与刀刃的距离。
- 注意切割方向：切割方向应根据食材的形状和切割需求来确定。
对于圆形食材如苹果、橙子等，可以采用垂直切割或水平切割。
对于长条形食材如胡萝卜、黄瓜等，可以选择斜切割。
- 切割均匀：切割时应尽量保持均匀的切割厚度，以保证食材的外观和口感。
- 控制力度：切割时要控制好用力的程度，不要用过大的力量，以免食材被切得太厚或过度破坏。
常见切片技巧除了基本的切片步骤和注意事项外，还有一些常见的切片技巧可以提高切片的效果和表现力。
以下是一些常见的切片技巧： - 拇指支撑法：可以使用拇指将食材按住，并保持手指与刀刃之间的安全距离，以更好地掌握切割的角度和力度。
- 平行切割：将食材切割成平行的薄片，可以用于制作蔬菜沙拉、水果拼盘等。
- 花切：将食材切割成像花朵一样的形状，可以用于装饰菜肴或水果摆盘。
- 千层切割：将食材切割成多层的薄片，可以用于制作千层面、千层酥等菜肴。
植物徒手切片法
植物徒手切片法植物徒手切片法是一种基于人工操作的植物组织切片技术，在植物科学领域中被广泛应用。
与机械切片法和冷冻切片法相比，植物徒手切片法具有操作简便、花费低廉、得到的切片形态更完整等优点。
下面将详细阐述植物徒手切片法的具体操作流程及其在各个领域中的应用。
一、操作流程植物徒手切片法主要是通过手工操作来制备植物组织切片，其步骤如下：1、准备植物材料首先应选择质地较软的植物组织，如果肉、嫩叶、茎尖等部位。
在制备切片前，需要将植物材料沿着纵向切开成薄片，并在切片表面涂上几滴液体切片液，使切片更易于切割。
2、切片将植物材料置于平板上，使用手工刀片沿着组织指定的方向进行切割，制备出薄片。
为使切片均匀，则需细心、耐心地调整刀片角度和切割力度，避免损伤植物组织。
3、染色和封片经过切片制备后，需要进行染色和封片处理，以保证切片的结构完整和细胞形态的清晰显示。
不同的组织染色方法不同，一般采用常见的克罗姆酸盐染色或吉姆萨染色。
然后用封片剂将切片封装，保证切片在显微镜下不受光线干扰。
二、应用领域在植物科学领域中，植物徒手切片法得到了广泛的应用。
以下为其在各个领域中具体的应用。
1、生理学和解剖学研究植物徒手切片法可以用于研究植物组织器官的内部结构和功能，进而揭示植物生理生态的内在机理。
该方法也被广泛应用于植物生长发育、光合作用及植物对环境适应性等方面的研究。
2、细胞学研究植物徒手切片法也可用于分析植物细胞的形态和功能，进一步研究细胞在不同生理生态条件下的变化。
例如，在植物育种中，利用植物徒手切片法可以对遗传育种材料进行细胞形态学评价，从而为植物品种改良提供理论和技术支持。
3、药物和化学物质筛选研究植物徒手切片法可应用于筛选具有抗氧化、抗肿瘤、复含、抗病毒等生物活性物质的植物成分。
通过对植物样品进行切片、染色、显微镜观测等步骤，可以对植物中所含物质的活性和生理效应等进行初步研究。
4、教学与科普植物徒手切片法是学生学习植物科学的基础实验，在学校的植物科学教学中经常用到。
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一、目的要求
徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。
所需的仪器用具简单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。
但是徒手制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时，也不能制成连续切片，这些均为不足之处。
二、材料、用品
1、用品
显微镜、剃头刀（或刀片）、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。
1%番红水溶液（或50%酒精溶液），0.5%固绿95%酒精溶液，70%、85%、95%酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。
三、方法与步骤
1、选材
所用材料不宜太软或太硬。
一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。
质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成宽约5～6毫米，长1～1.5厘米的小块，夹在夹持物(如胡萝卜根或马铃薯块茎等)中进行切片。
使用夹持物时，先将夹持物的中央切成两
半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷成筒状再切。
2、切片
（1）盛清洁的水于培养皿中。
然后用左手的拇指及食指、中指夹住材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外2～3毫米，材料的切面必须保持水平方向。
（2）右手执刀(剃头刀或刀片)，平放在左手食指之上，刀口向内，自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。
(3)拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损伤材料或切得不平。
(4) 切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立即削平。
(5) 刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿润、润滑。
(6)切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察;等切到相当数量后;再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。
如想短期保存，可用水或甘油封藏。
如希望长期保存所切的材料，则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本。
3、固定
挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有70%酒精的染色皿中进行固
定。
固定时间为16分钟或更长时间。
4、染色、脱水、透明
（1）用吸水管吸去70%酒精，染以1%番红（50%酒精溶液）约30分钟。
（2）再用吸管吸去番红，换用70%→85%→95%酒精进行冲洗、脱水，每级酒精3～5分钟。
（3）复染色。
吸去酒精，用0.5%固绿(95%酒精溶液)进行复染色，时间为0.5分钟。
（4）冲洗、脱水。
用95%酒精冲洗1次，时间10秒。
后移入纯酒精中脱水2～3次，每次3～5分钟。
（5）透明。
吸去纯酒精，放入1/2二甲苯—1/2纯酒精溶液中脱水和透明1次，时间5分钟。
（6）吸去脱水透明液，换以纯二甲苯透明2次，时间5分钟。
5、封片、贴标签
将已透明材料用镊子或解剖针轻挑于清洁的载玻片上，滴上中性树胶，盖上盖玻片进行干燥。
在已封好的切片左边贴上标签，注明材料名称、制作日期和制作者姓名等项，以便查考。
较好的切片，其木质化的细胞壁和细胞核可染成红色，细胞质和纤维素的壁则常被染成绿色，
红绿相衬，有利于观察、分辨植物体的内部结构。
现将徒手切片制片的简要步骤归纳如下:
选材→切片→固定(70%酒精)→1%番红(50%酒精溶液)染色→70%酒精冲洗→脱水（85%酒精、95%酒精）→0.5%固绿(95%酒精溶液)复染色→冲洗(95%酒精1次)→进一步脱水(纯酒精2～3次)→透明(1/2纯酒精十1/2二甲苯及纯二甲苯各二次)→封片(中性树胶)→贴标签。
附：药品的简单配方
（1）1%番红：于蒸馏水或50%酒精100毫升中溶入番红粉末l克，过滤后使用。
（2）0.5%固绿：95%酒精100毫升中加入固绿粉末0.5克。
徒手切片方法的改进
徒手切片技术运用在植物学实验教学中的历史较为悠久, 在石蜡切片之前, 基本上使用徒手切片。
它的优点在于可以观察新鲜材料组织和细胞的天然色彩, 看到活体细胞结构状态, 所以徒手切片运用在植物学实验教学中比较普遍。
为了克服传统徒手切片技术中的不足, 我们进行了改进, 改为皮套加刀片。
这种切片方法切片速度快, 软硬质材料都可以切, 不需要任何夹物, 既经济适用, 又简单易行。
1 材料用品
双面刀片1 个,直径1～1.5 cm 的乳胶管, 毛笔、培养皿、载玻片、盖玻片、吸水纸, 质量分数1%的中性红染液或红墨水,新鲜的植物根、茎、叶、花药和子房等。
2 切法
将直径1～1.5 cm 的乳胶管剪成3.5 cm 长的一段, 用剪子从中间剖开扣在右手的大拇指上, 注意皮套一定要高于拇指, 把要切的植物材料, 紧贴在皮套的外侧。
如果是叶可以把它卷紧, 所切的材料不可过长, 大约2~2.5 cm 即可。
此时用食指与中指和拇指一起把材料捏住, 幼嫩的材料捏时不可用力过猛, 以免损坏组织细胞。
右手的拇指和食指捏住双面刀片的一侧, 手腕端平, 把刀片的前端与要切的材料保持垂直相接状态, 先切平材料, 然后用腕力向内连续切片, 刀片只要搭住材料就可以垂直切片。
另外还可以用同样的方法将双面刀片的先端与材料搭住、垂直、从右向左推切, 如此连续切下去, 然后用毛笔将切得薄而透明的材料刷入培养皿的水中,避免干燥。
3 染色、封片
把载玻片和盖玻片用纱布擦拭干净, 放在实验台上, 加上1 滴中性红染液或红墨水, 用毛笔在培养皿中选择薄而透明切片沾到染色液上, 用解剖针轻轻拨入染色液中, 大约30 s 后, 吸去染色液, 加1 滴清水封片。
为了防止气泡的产生, 用左手拇指与食指拿住盖玻片的两侧,。