血浆凝血酶原时间测定的标准操作程序
凝血四项操作规程(共4张PPT)
血浆活化部分凝血活酶时间测定
（APTT）
• 方法原理：用部分凝血活酶代替血小板膜磷脂，为凝 缩方短法， ：见冯于克先劳天斯性法因、子光学5增法多和、磁口珠服法避及孕P药T衍和生血法栓{形PT成完性成疾时病，。全部纤维蛋白原转变成纤维蛋白，纤维蛋白产生的浊度与纤维蛋白含量成正比
。血浆凝血酶时间测定（TT）
维生素K缺乏症、严重肝脏疾病及血中抗凝物质增加； 减用少激为 活先剂天激性活纤12维、蛋11白凝原血含因量子低。下。
血方浆法纤 ：维冯蛋克白劳原斯测法定、（光学FIB法）和磁珠法及PT衍生法{PT完成时，全部纤维蛋白原转变成纤维蛋白，纤维蛋白产生的浊度与纤维蛋白含量成正比
浆浊度、粘稠度增加直至凝固。 。待检血浆中加入足量的激活剂、部分凝血活酶悬液和钙离子用来启动内源凝血系统来形成纤维蛋白，使血浆浊度、粘稠度增加直至凝固。
减血少浆为 凝先血天酶性时纤间维测蛋定白（原TT含）量低下。
• 临床意义：延长，见于内源凝血系统因子（12、11、 待减检少血 为浆先中天加性入纤足维量蛋的白激原活含剂量、低部下分。凝血活酶悬液和钙离子用来启动内源凝血系统来形成纤维蛋白，使血浆浊度、粘稠度增加直至凝固。
。减少为先天性纤维蛋白原含量低下。
钙离子用来启动内源凝血系统来形成纤维蛋白，使血 缩（短AP，TT见是于监先测天肝性素因治子疗5增剂多量、的口首服选避指孕标药）和血栓形成性疾病。
方法原理：将在稀凝释血的酶血作浆用加下入，足待量检的血凝浆血中酶纤使维纤蛋维白蛋原白转原变转成变纤成维纤蛋维白蛋，白使，血测浆定浊其度凝及固粘时稠间度，增凝加血 直时至间凝的固长。短与血中纤维蛋白原含量成反比
缩短，见于先天性因子5增多、口服避孕药和血栓形成 方，法利原 用理浊：度将的稀变释化的测血得浆纤加维入蛋足白量原的含凝量血（酶散使射纤比维浊蛋法白和原透转射变比成浊纤法维，蛋原白理，为测将定测其得凝的固浊时度间变，化凝与血 校时准间血的浆长浊短度与的血变中化纤比维较蛋而白得原到含其量含成量反）比}
凝血酶时间
02 相关拓展
简称：TT (thrombin time)，是指在血浆中加入标准化的凝血酶后血液凝固的时间。在共同凝血途径中， 所生成的凝血酶使纤维蛋白原转变为纤维蛋白，可用凝血酶时时间（TT）来反映。由于纤维蛋白（原）降解产物 （FDP）能使TT延长，故也有人将TT作为纤溶系统的筛选试验。
（1）取小试管1支或表玻璃皿1个，置37℃水浴中，加受检血浆0.1ml。 （2）加凝血酶溶液0.1ml，同时开动秒表，记录凝固时间，重复2次，取平均值。
正常值16～18s。超过正常对照3s以上为异常。
（1）TT延长（超过正常对照3s以上）肝素和类肝素物质增多，如红斑狼疮、肝脏疾病、肾脏疾病等。低 （无）纤维蛋白原血症、异常纤维蛋白原血症。
（1）血浆于室温下不宜超过3h。 （2）不宜用乙二胺四乙酸二钠和肝素作抗凝剂。 （3）实验终点，试管法以出现混浊的初期凝固为准；玻璃皿法以能挑起纤维蛋白细丝为准 。 10相关疾病 红斑狼疮
相关拓展
甲苯胺蓝纠正试验或血浆游离肝素时间，甲苯胺蓝呈碱性，有中和肝素的作用。在凝血酶时间（TT）延长的 受检血浆中加入少量甲苯胺蓝，再测定TT。若延长的TT恢复至正常或明显缩短，则表示受检血浆中有类肝素物质 存在或肝素增多；若不缩短，则表示受检血浆中存在其他抗凝血酶类物质或缺乏纤维蛋白原。
医学检查
0 1
1检查名称
0 2
2分类
0 3
3取材
0 4
4测定原理
0 5
5试剂
0 6
6操作方法
8化验结果临床意 义
7正常范围
9附注
凝血酶时间
临床血液检查 >出血和凝血检查
血液
在血浆中加入“标准化”的凝血酶溶液后，血浆凝固所需时间为凝血酶时间（TT）。
活化部分凝血活酶检测标准操作规程
活化部分凝血活酶检测标准操作规程1.【目的】为保障血浆活化的部分凝血活酶时间（APTT ）测定结果的准确性，特制作本规程。
2.【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
3.【标本类型及实验前准备】1.标本类型1小时内（30r/minx15min）分离血浆，室温放置不超过2小时,2〜8C保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70C不超过6个月），只能冻融1次，在37C 迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。
抗凝剂不符合,采血量不准确，凝固，溶血，脂血标本不能作测定。
2.患者准备早晨空腹采血（空腹12小时左右），静脉采血。
3.容器、添加剂类型3.8 %枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。
4.仪器设备1.仪器名称：Sysmex CA-15全自动血液凝固分析仪2.仪器厂家：日本Sysmex公司3.仪器型号：Sysmex CA-154.仪器技术参数：4.1速度：最快检测速度180测试/小时，组合检测约140测试/小时4.2试剂位：36个,具冷藏功能。
4.3样本位：50个，可自动连续添加。
5.仪器校准程序：5.1校准频率：当方法改变，试剂厂家或试剂批号改变，仪器维修影响测定结果等情况时，必须进行校准。
5.2校准操作:设置标准曲线分析（由仪器提供商指定工程师执行5.实验试剂德国Dade Behring Marburg公司凝血酶原测定试剂，每瓶加4ml蒸镏水溶解（40人份），未开封试剂2〜8C贮存到说明书上有效期，复溶试剂2〜8C保存不超过5天。
4.【测定原理】凝固法确定量的血浆（50微升）样本经一定时间加温后，加入APTT试剂（50微升），一定时间孵育后加入氯化钙溶液（50微升），采用波长660nm的光照射样本，凝血过程中血浆的混浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定，然后通过凝固曲线得到活化的凝血活酶时间。
C3510凝血酶原时间(PT)测定磁珠法
凝血酶原时间（PT）测定（分析仪器法）1实验原理：光电磁珠法测试杯两侧的有一组驱动线圈，它们产生恒定的交替电磁场，使测试杯内特制的去磁小钢珠保持等幅振荡运动。
凝血激活剂加入后，随着纤维蛋白的产生增多，血浆的粘稠度增加，小钢珠的运动振幅逐渐减弱，仪器根据另一组测量线圈感应到小钢珠运动的变化，当运动幅度衰减到50%时确定凝固终点。
2 标本采集2.12.23.831长时间456.6.16.2 ,室温保存7.7.17.27.37.4 仪器技术参数:7.4.1 速度:最快检测速度350测试/小时,组合检测约140测试/小时7.4.2 试剂位:28个,具冷藏功能。
7.4.3 样本位:80个,可自动连续添加。
7.5 仪器校准程序:7.5.1 校准频率:当方法改变,试剂厂家或试剂型号改变,仪器维修影响测定结果等情况时,必须进行校准。
7.5.2 校准操作:设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)8. 操作步骤:8.1 检查前准备:8.1.1 清空废液瓶,清空反应杯抛弃槽。
8.1.2 添加足够反应杯(不能超出警告线)。
8.1.3 添加清洁液试剂,清洗用蒸馏水等。
8.2 开机先开打印机再开主机,开机后仪器自检,约15分钟,屏幕上方“Not Ready”变为“Ready”,表示仪器预热完成,进入系统准备工作状态,可进行测定。
8.31.2.目PT345.8.4按8.38.5 按“8.68.6.1 用蘸有清洗液的纱布或棉签擦拭加样针和试剂的外表面。
8.6.2 清空废液瓶,和已使用过的反应杯，检查清洗液是否充足。
8.6.3 检查预温及测量通道内是否有掉落的钢珠，如果有请清除。
8.6.4 仪器连续工作24小时后需要关机1次。
9．检验结果的判断与分析:9.1 仪器测定PT的线性范围在5-120秒,测定完成后仪器显示PT秒数、PT活动度、INR值等参数。
若不能对参数进行正确计算,将出现下列信息:﹡﹡﹡.﹡出现错误,不能得到分析数据ˉˉˉ.ˉ不能计算参数＋＋＋.＋数值超出线性范围.9.2 仪器设定PT参考范围在9-13秒,如果得不到一个正常数值,在数据的左侧将出现下列标记:﹡出现错误信息< 数据低于可报告的低限> 数据高于可报告的高限10. 质量控制:每批样本同时测定两个浓度水平(高值和正常值)的质控品,以2S为警告限,3S为失控限,1111.111.2 PT11.3 PT、11.41212.112.2成结果变异。
凝血四项操作流程及评分标准
操作流程及评分标准凝血四项PT、APTT、TT、FIB操作流程时间： 20分钟一、说明1．本题满分100分，90分合格，完成时间20分钟。
2．要求独立完成，不得相互询问或讨论。
3．考核成绩为操作过程评分、操作结果评分和考核时间评分之和。
4．全部操作过程时间和操作后处理时间计入时间限额。
二、实验原理待测血浆加入过量的含钙组织凝血活酶，重新钙化的血浆在组织因子存在时激活因子X成为Xa,后者使凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白，测定凝固所需的时间，即为待测血浆凝血酶原时间（PT）。
待测血浆加入APTT试剂，37℃混匀预温一定时间，在钙离子参与下，激活内源性凝血系统，使纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白，测定凝固所需的时间，即为待测血浆的活化部分凝血活酶时间（APTT）。
适量的凝血酶将血浆样品中的纤维蛋白原转化成纤维蛋白，从而使血浆凝固。
凝固所需时间即为凝血酶时间（TT）。
采用Clauss凝固法原理，利用纤维蛋白原与凝血酶作用形成不溶性纤维蛋白，加入凝血酶使血浆凝固，测定其时间，根据高浓度凝血酶存在时，待稀释血浆的凝固时间与其纤维蛋白原（FIB）含量成反比关系，从而求得纤维蛋白原的含量。
三、实验器材半自动血凝仪、恒温水浴箱、一次性采血用具、测试杯、小磁珠、微量加样用具。
四、实验试剂PT、APTT、TT、FIB试剂盒，枸橼酸钠抗凝管。
五、实验标本枸橼酸钠抗凝静脉血、分离乏血小板血浆。
六、操作步骤1.静脉采血制备乏血小板血浆准确采集血液至抗凝管2毫升标线处，充分混匀，以3000r/min离心10min，分离乏血小板血浆。
3.每个项目测定时间一般重复测定2-3次，取平均值。
七、结果与报告参考范围：APTT 男性：（37±3.3）s ；女性：（37.5±2.8）sPT 11-14sTT 16-18sFIB 成人：2-4g/l ；新生儿：1.25-3.00g/l八、报告方式APTT:△.△s ； PT:△△s ； TT:△△s ； FIB:△.△g/l 。
凝血酶原(PT)SOP文件
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ZYYY/LJxm--b10--20XXsop文件附录bb10：血浆凝血酶原时间（pT）测定第一页页首内容：血浆凝血酶原时间（pT）测定（凝固法)科左中旗中医医院检验科操作规程文件号：ZYYY/LJxm--b10--20XX第4版共6页20XX年9月13日起实施。
〔该sop变动程序〕本操作程序的改变可由使用sop文件工作人员提出，人，科主任批准签字。
本规程每2年复审一次复审日期:年月日复审人：规程编写者：李凤兰审批者：李凤兰批准日期：20XX年9月13日医务科保管者：包金泉检验科保管者：李凤兰临检实验室保管者：于庆芝并报告专业负责ZYYY/LJxm--b10--20XXsop文件b10.1:测定原理:待测血浆加入过量的钙组织凝血活酶，重新钙化的血浆在组织因子存在时激活因子x成为xa，后者是凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白，测定凝固所需的时间，即为待测血浆凝血酶原时间。
b10.2:标本采集与处理：b10.2.1:受检者准备：空腹静脉取血b10.2.2：受检者体位：坐位、静脉取血、使用止血带时间不超过1分钟。
b10.2.3:标本种类:采用血浆检测，用枸橼酸钠抗凝。
b10.2.4:使用器材：取血器材包括注射器、针头与试管，必须干燥、清洁，要使用一次性塑料注射器与塑料试管，使用真空采血管后应及时去除真空。
b10.2.5:离心条件与测定时间：必须以3000rpm的离心速度离心15分钟，血浆分离后应在2小时内完成测定。
b10.2.6：抗凝剂：必须用109mmol/L(32g/L)枸橼酸钠抗凝，抗凝液应防止霉变。
PT
修改纪录：1目的本操作书的制定的目的是，为操作者进行凝血酶原时间测定提供正确的操作方法。
2适用范围适用于凝血酶原时间测定3定义凝血酶原时间（Prothrombin time，PT）是一个基础的凝血筛选试验，常用来评价先天的和/或后天获得的外源性凝血途径(因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ)。
4测定原理和临床意义4.1测定原理在待检血浆中加入过量的第Ⅲ因子和适量Ca2+,使凝血酶原转变为凝血酶，后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。
采用凝固法，通过电磁感应,感测介质黏度变化，从而测定血浆凝固时间，与正常人凝血酶原时间比较，综合反映外源性凝血系统中因子（Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ）的水平。
方法为自动血凝分析仪（STA Analyzers）Clauss凝固法。
该试验对外源性凝血因子敏感：----因子II （凝血酶原）----因子V （易变因子）----因子VII （稳定因子）--因子X （Stuart 因子。
4.2临床意义为外源性凝血途径检查的筛选试验，是综合反映凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ、Ⅰ含量及活性的指标。
监测抗凝剂治疗。
延长：Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ因子先天性缺乏和低（无）纤维蛋白原血症；DIC的低凝期及继发性纤溶亢进期；原发性纤溶症；维生素K缺乏症；肝脏疾病（肝硬化、肝炎、黄疸）；循环血液中有抗凝物质；纤维蛋白降解产物（FDP）增多；口服香豆素类抗凝药；肠道重吸收紊乱；新生儿出血性剂病等。
缩短：血栓前状态或血栓性疾病、DIC早期、口服避孕药等。
PT被广泛用于监测抗凝治疗(warfarin)，因为它的灵敏度可反映依靠维生素K的因子II,VII 和X的浓度变化，所以此试验所得的结果对确定治疗药物浓度是特异的。
众所周知，血浆PT的值由于凝血活酶试剂本身及所测量的仪器的不同而不同。
WHO采用的一种标准品是“抗凝治疗强度凝血活酶国际参考标准系统”，在这个系统中，PT比值被转换成国际标准化比值（INR），病人的PT和标准PT比值符合INR与ISI（国际敏感度指数）换算公式：INR=（病人PT / 平均正常PT）ISI凝血活酶ISI 值通过使用国际参考品凝血活酶（IRP），由正常血浆和香豆素治疗病人血浆的凝血活酶来决定，PT值的获得可通过作log--log 图，并回归画出直线，该直线的斜率描绘的即是凝血活酶ISI 值。
出、凝血时间检验方法操作规程
出、凝血时间检验方法操作规程一、停止使用出血时间测定项目的Duke法，但出血时间的检验项目不废除。
若临床怀疑血管壁异常所致出血性疾病时（如血管性血友病、单纯性紫癜、过敏性紫癜等），可使用出血时间测定器法检测出血时间。
二、停止使用凝血时间测定玻片法和毛细血管法，用活化部分凝血活酶时间（APTT）或全血凝固时间（CT，试管法）测定进行替代。
三、停止使用一般外科手术前的常规出血时间检测，用活化部分凝血活酶时间（APTT）、血浆凝血酶原时间（PT）和血小板计数（PLT）联合检测取代，如临床有出血史时另加出血时间测定器法进行出血时间检测。
请将以上要求及时通知到各级各类医疗机构。
在实施过程中，有条件的医疗机构要尽快达到上述要求。
条件尚不具备的，必须在2001年12月31日前达到要求。
附件：关于卫生部出凝血时间操作规程《通知》的理解解放军总医院临床检验科丛玉隆为了标准化出血与血栓性疾病检测，特别是解决手术前有关病人出血倾向筛查问题，卫生部颁发了（2000）412号文件，即《出血时间、凝血时间检验方法操作规程的通知》（以下简称通知）。
以下是我们对文件的理解和体会。
一、《通知》主要内容1.停止使用测定出血时间项目中的Duke法，但出血时间的检验项目不废除。
若临床怀疑血管壁异常所致出血性疾病时（如血管性血友病、单纯性紫癜、过敏性紫癜等），可使用出血时间测定器法检测出血时间。
2.停止使用测定凝血时间的玻片法和毛细管法，用活化部分凝血活酶时间（APTT）或全血凝固时间（CT，试管法）测定进行替代。
3.停止使用一般外科手术前的常规出血时间检测，用APTT、血浆凝血酶原时间（PT）、和血小板计数（PLT）联合检测取代，如临床有出血史时另加出血时间测定器法进行出血时间检测。
二、出血时间测定及临床意义从破裂或损伤的血管中，血液自行流出至血小板栓子形成暂时止血称为止血过程，许多病理因素可影响这一过程而导致出血不止。
为此设计了许多试验寻找这一病理生理的原因，比如：内皮素测定，血管性血友病因子（vWF）测定，血小板聚集试验等等。
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血浆凝血酶原时间测定（PT ）的标准操作程序
【目的】保证PT检测结果的准确性。
【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报请专业组长及科主任签字后生效。
【方法原理】在37C条件下，将待测血浆加入过量的含钙组织凝血活酶，使凝血酶原转变凝血酶，后者使纤维蛋白元转变纤维蛋白，测定血浆凝固所需的时间以即为待测凝血酶原时间（PT）,本试验不仅反映凝血酶原水平，也是反映因子V、VII、X和纤维蛋白原在血浆中的水平，所以是外源性凝血系统的筛选试验。
本实验室采用凝固法。
【标本采集】按凝血象标本采集和处理的标准操作程序所采集的枸椽酸钠抗凝血液标本。
应注意禁止血带时间越短越好,最长不宜超过3分钟，否则易引起某些凝血因子及纤溶活性的变化。
【试剂】
ThromborelS试剂：德国西门子公司生产每瓶凝血酶原冻干试剂中加入4ml无菌蒸馏水。
未开封ThromborelS试剂2-8C储存，有效期24个月。
复溶试剂稳定性：37°C（已开瓶）8小时；15-25°C（已开瓶）2天；2-8°C（未开瓶）5天。
【操作步骤】
1、按说明书复溶所需试剂、质控血浆，放置室温30分钟。
2、开机：打开主机和显示器开关，待仪器正常启动，登录报告软件。
3、按sysmex CA5血凝仪使用、维护保养的标准操作程序放置试剂。
4、先进行质控样本的检测，结果直接传入LIS系统质控软件。
待质控结果全部在控后
方可进行患者标本测定。
5、按sysmex CA5血凝仪使用、维护保养的标准操作程序放置患者标本，开始测定，
检测结果传输至软件后，核对患者信息，审核结果、打印报告。
【参考区间】
1、秒，待测者的测定值较正常对照延长超过3秒以上才有临床意义。
2、国际标准化比值0.
【临床意义】
1、PT延长或INR增加见于先天性凝血因子II、V、VV、X缺乏症和低（无）纤维蛋
白原血症；获得性见于DIC、原发性纤溶症、维生素K缺乏症、血循环在有抗凝物质存在如服抗凝剂、肝素和FDP。
2、PT缩短或INR降低见于先天性凝血因子V增多症、服避孕药、高凝状态和血栓疾病等。
3、监测服抗凝剂INR以1.8 2.5为宜，不超过3.0.
【注意事项】
1、采血要顺利，止血带不可束过紧，不应超过5分钟，血流与抗凝剂要充分混合不可有气泡,不可有凝块。
2、标本应及时检测,要求在血标本采集后1小时内检测，2-8C保存不宜超过4小时。
3、分离血浆务必使血小板去除（血小板血浆），离心以30转/MIN 10分钟为宜。
4、不宜使用EDTA-NA2、肝素、草酸盐作为抗凝剂。