反义寡核苷酸(aso)实验方法
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抗HBV最佳反义寡核苷酸片段的体外筛选抗HBV最佳反义寡核苷酸片段的体外筛选摘要：目的寻找抗HBV最佳反义寡核苷酸区段。
方法合成4种互补于HBV不同区段的反义硫代寡核苷酸（asON），加入HBV基因转染的肝癌细胞模型HepG2.2.15，以ELISA法测定HBsAg、HBeAg含量。
结果互补于pre-S2翻2译起始区的asON（序列Ⅰ）抗HBV基因表达作用最强(P<0.02)，对HBsAg、HBeAg的最高表达抑制率分别为66%和91%,针对增强子Ⅱ(ENⅡ)的序列Ⅲ也有较强的抑制作用（52%、56%）。
asON抗HBV作用具有明显时相性，其抑制作用随时间延长而有反跳，且针对增强子Ⅱ的反义序列Ⅲ和针对S基因起始区的反义序列Ⅱ的抑制作用规律相似，并在时相上与序列Ⅰ互补。
结论4种asON 中，序列Ⅰ抗HBV基因表达作用最强，而且序列Ⅰ与Ⅲ或Ⅱ配伍有望成为理想的抗HBV基因药物。
关键词：乙型肝炎病毒；反义寡核苷酸；基因表达Comparison of the anti-HBV effect of various antisenseoligodeoxynucleotidesMA Chunhong（）SUN Wensheng（）LIU Suxia, et al（）Abstract：Objective To explore an effective anti-HBV oligodeoxynucleotide. Methods Four antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotides (asON), complementary to different sites of HBV, were synthesized and assayed for their anti-HBV activity in HepG22.2.15 cells with ELISA. Results The oligomer directed against the initiator of pre-S2 (No.Ⅰ) was most effective, with an inhibitory rate of 66% on HBsAg and 91% on HBeAg (P<0.02). The decrease in virus production was time-dependent. The asON, complementary to enhancer Ⅱ (No.Ⅲ), or asON directed against initiator of S gene (No.Ⅱ) together with asON (No.Ⅰ) had an co-inhibition effect on HBV gene expression. Conclusion asON directed against initiator of S gene had a strong inhibition effect on HBV and asON (No.Ⅰ), or asON (No.Ⅰ) together with asON( No.Ⅲ /Ⅱ) had a therapeutic potential in the treatment of patients infected with HBV.Key words：Hepatitis B virus；Antisense；Oligodeoxynucleotides; Geneexpression▲乙型肝炎病毒（HBV）感染可致肝炎乃至肝癌，严重威胁人类生命健康，目前尚无有效治疗方法。
生存素反义寡核苷酸对乳腺癌MCF-7细胞株MMP-2及MMP-9表达的影响
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( 1. D epa rt m en t o f G e n er a l Surg er y , 2 . D epa rt m en to f P a tho lo g y, Ta i zho u P e o ple ’ s Ho spi t a l, Ta i zho u Ji ang s u 2 25 0 0 0 , C hi na )
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C-myc 反义寡核苷酸对人胆管癌细胞侵袭力及c-myc蛋白表达的影响
C-myc 反义寡核苷酸对人胆管癌细胞侵袭力及c-myc蛋白表达的影响【摘要】目的探讨C- myc反义寡核苷酸（ASODN）对人胆管癌QBC939细胞侵袭力及其c-myc蛋白表达的影响。
方法采用常规方法培养QBC939细胞，合成C-myc ASODN及NSODN，并将其转染QBC939细胞；用Western-blot法检测转染ASODN组、转染NSODN组（无义组）及空白对照组细胞中c-myc蛋白的表达；通过Transwell实验计算穿透小室基底膜的细胞数来评价各组细胞在体外的侵袭力。
结果无义组与空白对照组比较无差异（P>0.05），转染组灰度值及细胞穿透数目显著低于空白对照组（P<0.01）。
结论 C- myc ASODN能抑制QBC939细胞c-myc蛋白的表达，并抑制其体外的侵袭力。
【关键词】胆管癌；基因；C- myc；反义；侵袭力The effect of c-myc antisense oligodeoxynucleotide on the invasiveness and c-myc expression in QBC939 cellsWU Yi-Fei，LI Zhuo-R，MAO Xian-Hai，WU Jin-Shu（Department of Hepatobiliary Surgery，Hunan Provincial People’s Hospital，Changsha 410005，China）【Abstract】Objective To investigate the effect of c-mycASODN on the invasiveness and c-myc expression in human bile duct carcinoma cell line QBC939.Methods QBC939 cells was conventionally cultured.C-myc ASODN and NSODN was designed and transfected to the cell line；Western-blot was used to detect the expression of c-myc in ASODN array，NSODN array and control group；Transwell experiment was used to evaluate the invading capacity of QBC939 cellsby calculating penetrated cells.Results The luminosity numerus and the number of cells penetrated in ASODN group was significantly lower than that in blank comparison group（P<0.01）；NSODN group was no difference to blank comparison group（P>0.05）.Conclusions C- myc ASODN can inhibit the c-myc expression and invasiveness in QBC939 cells in vitro..Key words：Bile Duct Carcinoma；Gene，c-myc；Antisense，invading capacity胆管癌是起源于胆管上皮细胞的恶性肿瘤，近年来其发病率有增加趋势[ 1-3 ]，且经数十年努力，其预后并无明显改善[4]。
aso机理
aso机理
ASO即反义寡核苷酸，是一种短的、合成的低聚核苷酸，通常包含15～25个核苷酸。
其作用机制主要分为两大类：基于RNase H1介导的mRNA降解机制：ASO通过碱基配对原则与靶RNA结合，招募RNA酶H将mRNA降解，从而使得基因表达下调。
这种机制主要利用ASO与mRNA的高度互补性，以及ASO在结构上可能包含的化学修饰，以提高其结合靶序列的亲和力并抵抗细胞内核酸酶的降解。
基于ASO结合带来的空间位阻：ASO与mRNA结合后，形成空间位阻，阻止mRNA进入核糖体进行蛋白质翻译，或者干扰mRNA、miRNA、Pre-mRNA或RNA蛋白的相互作用，从而影响基因的表达。
这种机制可以通过多种方式实现，例如选择性排除或保留特定的外显子，靶向并掩盖目标mRNA的AUG起始密码子以中断翻译起始，或者通过改变剪切和聚腺苷酸化信号的使用来调节转录本的稳定性。
人巨细胞病毒反义寡核苷酸抗病毒活性研究
人巨细胞病毒反义寡核苷酸抗病毒活性研究
黄文杰;刘志红
【期刊名称】《中华实验和临床病毒学杂志》
【年(卷),期】1998(012)004
【摘要】目的观察反义寡核苷酸（ＡＳＯＮ）的抗病毒活性。
方法根据ＨＣＭＶ立即早期基因ＵＬ３６序列，设计并合成了３条与该基因互补的硫代反义寡核苷酸，以人胚肺细胞作为美丽感染的靶细胞做了体外抗病毒活性评价。
结果研究结果显示作用于剪接供体的ＡＳＯＮ具有较强的抗病毒活性。
结论特异的ＡＳＯＮ有一定的抗病毒活性，有可能作为一种新的手段用于人ＨＣＭＶ感染的防治。
【总页数】3页(P361-363)
【作者】黄文杰;刘志红
【作者单位】军事医学科学院放射医学研究所;军事医学科学院放射医学研究所【正文语种】中文
【中图分类】R373
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关于靶向ASGPR的反义核酸体外抗HBV作用
关于靶向ASGPR的反义核酸体外抗HBV作用【摘要】目的研究以宿主基因ASGPR 为靶的反义核酸的抗-HBV 作用，为HBV 感染的用药提供新的思路。
方法以Hep G212115 细胞为靶细胞，脂质体为载体将靶向ASGPR 的硫代反义寡核苷酸(ASODN) 转染至Hep G212115 细胞中， 72h 后收集细胞培养液，采用酶联免疫法及荧光定量PCR 法测定细胞培养液中HBsAg、HBeAg。
结果结果表明，随着浓度的升高，ASODN抗HBsAg ， HBeAg和HBV DNA的作用逐渐增强。
当ASODN高于0.5μmol/L.时作用逐渐减弱。
结论 ASODN具有抗HBsAg ， HBeAg和HBV DNA的作用。
【关键词】寡核苷酸反义乙型肝炎病毒【Abstract】Objective To investigate the inhibitory effects against HBV of a phosphorothioate antisense oligodeoxynucleotide “ASODN” targeted to ASGPR in vitro. The assay attempted to access a new method and idea to refresh the thinking way about hepatitis B treatment by the ASODN targeted to asialoglycoprotein receptor (ASGPR). Methods (ASGPR ) mRNA was synthesized Using Hep G212115 cell as the target cell， ASODN was t ransfected into Hep G212115 cell by lipofection. The cultures were incubated for 72h. Then cell media were collected and detected. HBV DNA level in cell medium was examined by real-time PCR. HBsAg and HBeAg were detected by ELISA1. Results Our Results showed that ASODN showed an additive effect towards the inhibition of HBsAg， HBeAg and HBV DNA With the increasing of ASODN concentration. The effect decreased gradually when the level of ASODN concentration higher than 0.5μmol/L. Conclusion It is concluded that under certain experimental conditions， the ASODN is a powerful anti-HbsAg， anti-HbeAg and HBV DNA.【Key words 】 antisense oligodeoxynucleotides hepatitis B virus乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的一种世界性疾病。
ionis配体偶联反义(lica)技术的原理
ionis配体偶联反义(lica)技术的原理IONIS配体偶联反义（LICA）技术是一种创新的药物研发方法，旨在提高反义寡核苷酸（ASO）的靶向性和疗效。
LICA技术的核心原理在于将特定的配体（如GalNAc）与反义寡核苷酸（ASO）偶联，从而实现针对特定组织和细胞的精准递送。
在LICA技术中，配体被选择性地与ASO结合，形成配体-ASO复合物。
这种复合物能够识别并结合到目标细胞表面的特异性受体上，进而通过细胞内吞作用进入细胞内部。
一旦进入细胞，ASO就能够发挥其反义作用，通过碱基配对原则与特定的mRNA结合，进而调控基因表达或诱导mRNA降解，从而达到治疗疾病的目的。
LICA技术的优势在于其能够提高ASO的靶向性和疗效，同时降低药物剂量和副作用。
通过选择适当的配体，LICA技术可以实现针对特定组织和细胞的精准递送，从而提高药物在目标部位的浓度，减少在非目标部位的分布。
此外，LICA技术还可以延长ASO在体内的半衰期，从而提高其疗效持续时间。
LICA技术目前仍处于不断发展和完善阶段，其应用范围和疗效仍需进一步研究和验证。
同时，LICA技术也面临着一些挑战，如配体的选择、ASO的稳定性和安全性等问题，需要在未来的研究中加以解决。
LICA（配体偶联反义）技术在疾病治疗方面的应用主要集中在那些可以通过调节特定基因表达来治疗的疾病。
由于LICA技术能够精准地递送反义寡核苷酸（ASO）到目标细胞，并调控特定基因的表达，因此它在多种疾病治疗中具有潜力。
具体来说，LICA技术可能适用于以下类型的疾病治疗：1.遗传性疾病：对于由基因突变引起的遗传性疾病，LICA技术可以通过调节突变基因的表达来减轻症状或治疗疾病。
2.代谢性疾病：LICA技术可以针对代谢通路中的关键基因进行调节，以纠正代谢紊乱，从而治疗代谢性疾病，如糖尿病、高脂血症等。
3.感染性疾病：LICA技术可以针对病原体的基因进行调节，以抑制病原体的生长和繁殖，从而治疗感染性疾病。
寡核苷酸前处理流程
寡核苷酸前处理流程引言：寡核苷酸（oligonucleotide）是由少于20个核苷酸组成的短链分子，具有广泛的应用价值，例如在基因工程、药物研发和分子诊断等领域。
然而，由于其分子结构的特殊性，寡核苷酸在实验前需要进行一系列的前处理步骤，以确保实验结果的准确性和可靠性。
本文将详细介绍寡核苷酸前处理的流程和关键步骤。
一、质量检测在进行寡核苷酸实验前，首先需要对样品进行质量检测。
常用的检测方法包括核酸浓度测定、纯度检测和长度分析等。
核酸浓度测定可以通过比色法、荧光法或光谱法来进行，以确定样品中的核酸含量。
纯度检测则可以通过比值法、凝胶电泳或高效液相色谱等技术来进行，以评估样品中的杂质含量。
长度分析可以通过凝胶电泳或毛细管电泳等方法来确定寡核苷酸的长度分布情况。
二、寡核苷酸合成合成是寡核苷酸前处理的关键步骤之一。
目前常用的寡核苷酸合成方法有固相合成和液相合成两种。
固相合成是将核苷酸单体通过磷酸二乙酯键连接在固相载体上，通过化学反应逐个添加核苷酸单体，最终合成出目标寡核苷酸。
液相合成则是将核苷酸单体通过液相反应逐步连接，最终合成出目标寡核苷酸。
在合成过程中，需要注意控制反应条件，以确保合成的寡核苷酸具有良好的纯度和合成效率。
三、寡核苷酸修饰寡核苷酸修饰是指在合成或合成后对核苷酸分子进行化学修饰，以赋予其特定的性质或功能。
常见的修饰包括磷酸酯修饰、脱氧修饰、磷酸二乙酯修饰和标记修饰等。
磷酸酯修饰可以增加寡核苷酸的稳定性和亲合性，脱氧修饰可以增加寡核苷酸的抗酶降解能力，磷酸二乙酯修饰可以增加寡核苷酸的药代动力学性质，标记修饰则可以用于寡核苷酸的检测和定位。
四、寡核苷酸纯化在寡核苷酸前处理过程中，纯化是必不可少的一步。
常见的纯化方法包括溶剂沉淀、凝胶过滤、离心过滤和高效液相色谱等。
溶剂沉淀是将寡核苷酸溶液加入有机溶剂中，通过溶剂的沉淀作用将寡核苷酸分离出来。
凝胶过滤则是通过凝胶的孔隙将寡核苷酸和杂质分离开来。
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反义寡核苷酸(ASO)实验方法
一、概述
反义寡核苷酸（ASO）是一种用于基因沉默和治疗的工具，通过与特
定靶向核酸配对形成双链RNA或DNA，从而调控蛋白质的表达水平。
ASO实验方法的选择和技术操作对于获得准确和可靠的实验结果至关
重要。
二、实验前的准备工作
1. 确定实验目的和设计合理的实验方案。
2. 准备ASO的合成和纯化，确保其质量和浓度。
3. 确定靶向的核酸序列，设计适当的ASO。
4. 确定实验所需的细胞系或动物模型。
三、ASO转染实验
1. 转染细胞系或动物模型：ASO转染前需选择合适的转染试剂和适当浓度的ASO。
根据实验需要选择合适的转染实验方法，如电穿孔法、
磷脂体转染法等。
2. 转染时间和转染效率的优化：反义寡核酸的转染时间和转染效率对
实验结果的影响较大，需根据实验需要进行优化。
3. 转染后的细胞处理：确定ASO对细胞的影响，包括蛋白表达水平、细胞凋亡等。
四、ASO治疗实验
1. 确定治疗方案：确定治疗ASO的剂量和给药途径，如静脉注射、皮下注射等。
2. 治疗时间的确定：根据实验需要确定治疗时间，包括持续性治疗和短期治疗。
3. 治疗后的样本采集：治疗实验结束后，对样本进行采集并进行相关分析，如蛋白质检测、基因表达水平分析等。
五、实验结果的分析和解读
1. 数据统计和分析：对实验结果进行合理的数据统计和分析，包括均值、标准差、方差分析等。
2. 实验结果的解读：根据实验结果进行科学的解释和结论，不断优化实验方法和技术流程。
六、实验注意事项
1. ASO的优化：在实验前进行ASO的优化工作，包括ASO的浓度、转染时间和治疗方案的优化。
2. 实验控制：在实验过程中设置合理的对照组，并严格控制实验组和对照组的一致性。
3. 实验安全：在实验过程中要严格遵守相关的实验守则和安全规范，保障实验人员的安全。
七、结论
ASO实验方法的选择和操作对于实验结果的准确性和可靠性具有重要
影响。
科学合理的实验方法和技术操作是获得高质量实验结果的关键，需要科学家们不断地进行实验优化和技术革新，为ASO的应用和研究提供更为有效的技术支持。
八、ASO实验方法的优化
在进行ASO实验的过程中，实验方法和技术操作的优化非常重要。
需要根据实验的具体目的和要求，选择合适的ASO转染和治疗方法。
在转染实验中，可以尝试不同的转染试剂和转染时间，以及不同的ASO
浓度，以找到最适合实验的条件。
在ASO治疗实验中，也需要确定最佳的治疗剂量和给药途径，以及最合适的治疗时间。
对于不同的细胞
系或动物模型，可能需要针对性地优化ASO实验方法，以获得更可靠和准确的实验结果。
九、实验结果的分析和解读
对于ASO实验的结果，需要进行科学合理的数据统计和分析。
在统计数据时，需要注意使用适当的统计分析方法，包括均值、标准差、方
差分析等，以确保结果的可靠性和准确性。
对实验结果进行科学的解
释和结论也是非常重要的。
科学家们需要通过对实验结果的深入分析，不断完善自己的实验方法和技术流程，以更好地支持ASO的应用和研究，推动相关领域的发展。
十、实验注意事项
在进行ASO实验时，有一些注意事项需要特别重视。
ASO的优化工
作是至关重要的，实验前需要对ASO的浓度、转染时间和治疗方案进
行充分的优化工作，以确保实验条件的科学合理性。
在实验过程中还
需要合理设置对照组，并严格控制实验组和对照组的一致性，避免实
验结果的误差。
在实验过程中，也要严格遵守相关的实验守则和安全
规范，保障实验人员的安全。
十一、结论
ASO实验方法的选择和操作对于实验结果的准确性和可靠性具有重要
影响。
科学合理的实验方法和技术操作是获得高质量实验结果的关键，需要科学家们不断地进行实验优化和技术革新，为ASO的应用和研究提供更为有效的技术支持。
通过不断地优化ASO实验方法，科学家们可以获得更加准确和可靠的实验结果，推动相关领域的发展。
相信随
着科技的不断发展，ASO实验方法将会呈现出更加完善和高效的发展
趋势，为基因治疗和基因沉默领域的研究提供更多的可能性和机遇。