苏云金芽孢杆菌简介
微生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌(Bt)的研究现状及应用
微生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌（Bt）的研究现状及应用作者：高成华来源：《农业工程技术·温室园艺》2015年第06期苏云金杆菌又称苏云金芽胞杆菌，简称Bt。
苏云金杆菌的发现，为人们利用微生物消灭植物病虫害提供了美好的前景。
化学杀虫剂的长期使用对生态环境产生了严重的破坏，而害虫种群的抗药性也日益提高，因此生物杀虫剂因为其“绿色环保”的特点日益引起人们的广泛关注。
现在，人们已经用发酵罐大规模地生产苏云金杆菌并制成粉剂或可湿剂、液剂，应用于农业，对100多种害虫有不同的致病和毒杀作用。
苏云金芽孢杆菌是目前世界上产量最大、应用最广的生物杀虫剂。
本文简要介绍作为生物杀虫剂的Bt的发展历史、研究现状和应用情况。
研究历史[1]1901年，日本学者石渡繁胤（Ishiwata Shigetane）从虫尸体液中分离出苏云金杆菌猝倒变种（Bacillus.thuringiensis var.sott）成为苏云金杆菌研究的起点[2]。
1911年，Berliner发现一杆菌，并详细描述了该菌的形态和培养特征，定名为苏云金杆菌（Bacil-lus.thuringiensis），指明苏云金杆菌含伴孢晶体（Paraspora crystl）[3]。
1938年，苏云金杆菌商品化，用于防治地中海粉螟。
20世纪50年代许多国家进行了商业性生产。
1953年，Hannay第一次发现苏云金杆菌的杀虫活性与伴孢晶体有关，并和Fitz-James于1955年证实，伴孢晶体是一种蛋白质。
1981年，Schnept和Whiteley首次将HD21菌株伴孢晶体的基因克隆到大肠杆菌中，并得到表达。
20世纪60年代用血清学技术进行Bt的鉴定和分类。
自二次世界大战后，苏云金芽孢杆菌被广泛使用，至今已有60多年[4]。
由于其推广力度以及人们的农药使用意识的传统观念限制，目前生物农药仅占全部农药市场份额很少一部分，从此可看出，苏云金芽孢杆菌杀虫剂任然具有较大的发展潜力。
苏云金杆菌的利用现状、发展及问题探讨
到２００５年使生物农药使用量占到农药总量的３０％，２０１５年占到５０％。
目前，我国农药耗用量每年达１５０万吨以上，按此比例计算，２００５年需生物农药４５万吨，２０１５年达７５万吨。
而目前我国生物农药仅８０００吨，在农药总量中不到１％。
由此可见，生物农药具有很好的发展前景。
苏云金杆菌作为应用最广泛的生物农药，其发展潜力是可以预测的。
２苏云金杆菌的产生背景及发展１９叭年，德国南部一个叫苏云金的小城镇上，一家面粉加工厂发生了一件怪事，一种叫地中海粉螟的仓库害虫，平时粉蛾飞舞，幼虫在面粉中爬来爬去，这一天，有人发现那些小爬虫突然卷曲死ｌ二。
这件事弓ｆ起了生物学家贝尔内里的注意，经过无数次努力，贝尔内里从虫ｔｒ＿｜中分离出来这利，杆状细菌。
４年以后．克林诺发现．在细菌的芽孢形成不久，还会形成一些正方形或菱形的晶体，可惜这个发现来被重视。
１９５３年，汉纳证明了这种晶体是有赤的噩白晶体，粉螟幼虫自然死【＝＝的原因不吉臼明了。
这种细菌以发现的地方命名，叫嚣云金杆菌。
经过几十年的势力。
科学家们用实验证明苏云金杆菌可以防治鳞翅曰、膜翅日、直翅目、鞘翅目等１３０多种害虫。
３苏云金杆菌的杀虫机理苏云金杆菌杀虫作用的主要成分是孢子形成过程中产生的伴孢晶体（ＩｃＰｓ），它足单基因表达的产物”。
伴孢晶体经敏感昆虫口服后，在中肠碱性环境中，被降梓为活性的多肽片断（ＩｃＰ的毒性片断包含三个不同的结构域。
一般认为结构Ｉ参与孔道的形成．结构域ＩＩ决定毒素与受体的特异性结合。
结构域ＩＩＩ主要调节毒素的活性）”’，再与巾肠受体蛋白（陷锄）结合，形成细胞膜通道，破坏渗透膜，引起细胞溶解，展终导致虫体死亡。
ＩｃＰ的杀虫作用表现出种属专一性，然而，ＩｃＰ对敏感昆虫的特异性和毒力，除决定于菌株本身外，还决定于昆虫肠液对伴孢晶体的溶解和激活方式，幼虫中肠上皮细胞毒蛋白专一性受体的存在以及昆虫对ＢＴ的抗性“３。
目前，全世界拱分离到５００００株苏云金杆菌，分为６２种血清型和矩种。
苏云金芽孢杆菌杀虫剂作用机理及应用
苏云金芽孢杆菌杀虫剂作用机理及应用一、苏云金芽孢杆菌杀虫作用机理1、苏云金杆菌致病机理苏云金杆菌对昆虫的致病作用是通过它所产生的毒素和芽孢而引起的。
一般是伴孢晶体的毒素使昆虫发生毒血症而死亡，由于晶体毒素对昆虫中肠上皮有破坏作用，使肠壁受损，中肠的碱性、高渗内含物进入昆虫血腔，使血液pH升高导致染病幼虫麻痹而死亡。
而芽孢是在肠道中萌发为菌体通过由晶体毒素破坏的中肠肠壁进入血腔，菌体在血腔中进行繁殖从而引起昆虫败血症的发生，造成染病昆虫的死亡。
而β-外毒素是RNA聚合酶的竞争抑制剂，可干扰昆虫有关激素的合成，从而导致幼虫发育畸形或不能正常化蛹。
苏云金芽孢杆菌虽然有较强的杀虫能力，但它必须经吞食过程进入体内才能杀死昆虫。
因此，在实际应用中，将其与吸引昆虫的物质一起喷洒，可以增加昆虫吞食的可能性。
二、苏云金芽孢杆菌在害虫防治上的应用苏云金芽孢杆菌类的各变种对鳞翅目、膜翅目、直翅目、双翅目、鞘翅目等350余种昆虫有不同程度的防治效果，但主要应用于防治下列害虫。
1、经济作物类棉铃虫，红铃虫，造桥虫，烟青虫。
2、蔬菜类菜青虫，小菜蛾，菜螟。
3、粮食作物类二化螟，三化螟，稻苞虫，稻纵卷叶螟，玉米螟等。
4、果树类松毛虫，桃小食心虫，尺蠖，大袋蛾，卷叶蛾等。
三、苏云金芽孢杆菌的使用方法苏云金芽孢杆菌杀虫剂效果对虫龄越小防治效果越好，使用时必须掌握好时机和用量。
苏云金芽孢杆菌农药药效较慢，一般害虫进食30min后停止为害作物，24h开始死亡，48h达到死亡高峰，72h死亡率达95%以上。
1、单用喷粉，喷雾均可。
2、混用为提高药剂的防治效果，特别是在害虫大发生和多种害虫混合发生时，可与非碱性的杀虫双、杀虫单、甲胺磷、三唑磷等常用化学杀虫剂混用，作用互补，效果更佳。
但必须现配现用，最好不和其他杀菌剂混用，以免影响防治效果。
3、与其他生物农药混用可与白僵菌，小菜蛾GV等混用。
四、苏云金芽泡杆菌使用注意事项：1、温度使用苏云金芽孢杆菌制剂的适宜温度在25℃以上，温度过低完全失去杀虫作用：在25～30℃时使用，其防治效果比10～15℃时高出1～2倍，温度低于20℃时最好不使用。
苏云金杆菌cry1aa基因的表达和定点突变
ＡＢＳＴＲＡＣＴＩｎｓｅｃｔｓｗｏｕｌｄｄｅｖｅｌｏｐｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｗｈｉｃｈｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅＢ口ｃｆ盯淞历“ｒｆ愕ｆＰ珊括ｔｏｘｉｎｓ，ａＩｌｄｄｅｃｒｅａｓｉｎｇｏｆｐＨｏｆｉｔｓｍｉｄｇｕｔｊｕｉｃｅｔｏｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｓｕｎｋｎｏｗｎ．ＡｍｏｄｉｆｉｅｄＳＤＳ—ａｌｋａｌｉｎｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｔｏｅｘｔｒａｃｔｐｌａｓｍｉｄｓｏｆＢｔ４．０７１８ｓｔｒａｉｎ，ａｎｄＰＣＲａｎａｌｙｓｉｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔＰ３ｐｌａｓｍｉｄｃｏｎｔａｉｎｃ，），１Ａａｇｅｎｅ．Ｂｙａｎａｌｙｚｅｔｈｅｃｏｎｓｅｎｓｕｓｒｅｇｉｏｎｏｆ１３ｋｉｎｄｓｏｆｃＷｌＡａｇｅｎｅｗｉｔｈｍｅＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｎｆｂｎｎａｔｉｏｎ’ｓＢＬＡＳＴＷＷＷｓｅｒｖｅｒ’ｐｒｉｍｅｒｓＨ０１ａｎｄＨ０２ｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄｔｏａｍｐｌｉ６ｅｄｆＷｌＡａｇｅｎｅｆｒｏｍＰ３ｐｌａｓｍｉｄ，ｔｈｅｎｔｈｅＰＣＲＤｍｄｕｃｔｓｓｕｂｃｌｏｎｅｄｔｏｏｂｔａｉｎｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＭＤＡａｓｔｒａｉｎ．Ｔｈｅ３．５一ｋｂＢ日历ＨＩａｎｄＳ口ｆＩｉｎｓｅｒｔｏｆｐＭＤｌ８一ＴｗａｓｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎｔｏｔｈｅｐＥＴ３０ａｖｅｃｔｏｒ，ｔｈｅｎｔｒａｎｓｆｏⅡｎｅｄＥ∞，ｆｓｔｒａｉｎＢＬ２ｌ（ＤＥ３）ｔｏｇｉＶｉｎｇＥＴＡａｓｔｒａｉｎ，ａｎｄａ１４１－ｋＤｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄａｓｉｎｃｌｕｓｉｏｎｂｏｄｙｂｙｉｎｄｕｃｅｄｗｉｔｈＩＰＴＧＳｉｔｅ—ｄｉｒｅｃｔｅｄｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓｗａｓｐｅｒｆｏｍｅｄｉｎａｔ、Ｖｏ－ｓｔ印ＰＣＲｗｉｔｈｔｈｒｅｅｐｒｉｍｅｒｓ．Ｔｈｅｆｒａｇｍｅｎｔｓｐｒｏｄｕｃｅｄｉｎｍｅｆｉｒｓｔｓｔｅｐｗｅｒｅｕｓｅｄａｓｔｈｅ“ｂｉｇｐｒｉｍｅｒ＂ｉｎｔｈｅｓｅｃｏｎｄＰＣＲｔｏａｒｎｐｌｉｆｉｅｄｔｈｅｌ０４８－ｂｐｆｒａｇｍｅｎｔｓａｎｄｓｕｂｃｌｏｎｅｄ．Ａ２２４－ｂｐｍｕｔａｔｅｄｆ｝ａｇｍｅｎｔｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｄｉｇｅＳｔｉｎｇｐＭＤＭＸｗｉｔｈ砌ＰＩａｎｄ丑ｆｓＨＩＩａｎｄｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄｍｅｆｈｇｍｅｎｔｉｎｐＭＤＡａａｔｔｈｅｓａｒｎｅｐｏｓｉｔｉｏｎｔｏｇｅｔｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｐＭＤＭａ．ｐＭＤＭａｄｉｇｅｓｔｅｄｗｉｔｈＢ日ｍＨＩａｎｄＳｂ，Ｉ，ｔｈｅ３．５－ｋｂｍｕｔａｔｅｄ矗ａｇｍｅｎｔｗａｓｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎｔｏｔｈｅｐＥＴ３０ａＶｅｃｔｏｒｔｏｏｂｔａｉｎｔｈｅｍｕｔａｇｅｎｉｃｓｔｒａｉｎＥＴＭａＣ８１２ＡａｎｄＣ８１４Ａ．ＳＤＳ—ＰＡＧＥｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｍｕｔａｍｃ，），１ＡａｇｅｎｅｗａｓａｌｓｏｏＶｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ．Ｉｎｃｌｕｓｉｏｎｂｏｄｉｅｓ舶ｍＥＴＡａｓｔｒａｊｎａ１１ｄｍｕｔａｔｅｄＥＴＭａｓｔｒａｉｎｄｉｓｓｏｌＶｅｄｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐＨｏｒｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆ２一Ｍ［ｅｒｃａｐｔｏｅｍａｎｏｌｓ锄ｅｐＨｏｒｉｎｄｉＶｉｄｕａｌｌｙ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥｓｈｏｗｅｄｔ１１ａｔ，ｕｎｄｅｒｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ２－Ｍｅｒｃａｍｏｅｔｈａｎｏｌ，ｉｎｃｌｕｓｉｏｎｂｏｄｉｅｓ疔ｏｍｍｕｔａｔｅｄＥＴＭａｓｔｒａｉｎｗｅｒｅｍｏｒｅｅａｓｙｔｏｄｉｓｓｏｌｖｅ，ａｎｄｃｏｕｌｄｄｉｓｓｏｌｖｅｂｅｔｔｅｒｉｎ１０ｗｐＨｏｒｌｏｗｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ２一ＭｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌｔｈａＪｌｉｎｃｌｕｓｉｏｎｂｏｄｉｅｓｆ＿ｒｏｍＥＴＡａｓｔｒａｉｎ．ＩｔｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｎｕｔａｇｅｎｅｓｉｓｏｆＣ８ｌ２ＡａｎｄＣ８１４Ａｃｏｕｌｄｓｉｇｎａｌｌｙｃｈａｎｇｅｔｈｅｄｉｓｓｏｌｖａｂｉｌｉｔｙｏｆｊｎｃｌｕｓｊｏｎｂｏｄｉｅｓ．ＴｈｅｓｔｕｄｙｐｒＤＶｉｄｅａＶａｌｕａｂｌｅｏｐｔｉｏｎｆｌｏｒｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，ａｎｄｏｎｓｕｃｈａｂａｓｅ，出ｅｒｏｌｅｏｆｄｉｓｕｌｐｈｉｄｅｉｎｔｈｅｐｒｏｔｏｘｉｎｓｔａｂｉＩｉｔｙａ１１ｄｔｏｘｉｃｉｔｙｃａｎｂｅｍｒ出ｅｒａｃｈｉｅｖｅｄＫｌｅｙｗｏｒｄｓ：８口ｃ“，￡岱ｆ是“ｒ豫ｉｌ拿挖ｓ扭，ｃ，ｙｌＡａｇｅｎｅ，ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｓｉｔｅ—ｄｉｒｅｃｔｅｄｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ，ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ前言１．苏云金芽孢杆菌１．１苏云金芽孢杆菌（Ｂｔ）概论苏云金芽孢杆菌（肋ｃｆ，，“ｓ胁“ｒｆ娼招瑚如，简称Ｂｔ）是一种在自然界广泛分布的革兰氏阳性细菌，按照《伯杰氏细菌鉴定手册》第九版可将其归属为第二类第十八群芽孢杆菌属（口口ｃ讲珊）中的一种【ｌＪ。
产细菌素苏云金芽孢杆菌的鉴定及其所产抗菌物质性质
※生物工程食品科学2010, Vol. 31, No. 11147产细菌素苏云金芽孢杆菌的鉴定及其所产 抗菌物质性质李 云，杨胜远 * ，林晓东，钟瑜红，苏 婷，刘湘嘉(韩山师范学院生物系食品与发酵工程研究所，广东 潮州 摘 521041)要：从腌制蔬菜表面分离到一株产细菌素的菌株 K2，其中和后的无细胞发酵液主要抑制革兰氏阳性细菌，特别是对芽孢杆菌有强烈的抑制作用。
发酵上清液经硫酸铵盐析和透析后，仍然有很强的抗菌活性，并对多种蛋白 酶敏感，表明抗菌活性物质为蛋白类物质。
通过形态培养特征、生理生化特征、16S rDNA 序列比对及系统发育 分析，鉴定菌株 K2 是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)。
菌株 K2 产生的抗菌物质在 pH6～9 条件下 80℃处理 30min 仍保持稳定的抗菌活性，其对敏感菌的作用主要是杀菌，而且对芽孢萌发有很好的抑制作用。
该抗菌物质 在菌体生长对数中期产生，在稳定期中期抗菌活性达到最大。
关键词：苏 云 金 芽 孢 杆 菌；细菌素；鉴定；抗 菌 物 质Identification of Bacteriocin-producing Bacillus thuringiensis and Properties of Its Antibacterial SubstancesLI Yun，YANG Sheng-yuan*，LIN Xiao-dong，ZHONG Yu-hong，SU Ting，LIU Xiang-jia (Food and Fermentation Engineering Institute, Department of Biology, Hanshan Normal University, Chaozhou 521041, China)Abstract： Strain K2 having the ability to produce bacteriocin was isolated from the surface of picked vegetables. The neutralized cell-free fermentation supernatant exhibited an inhibition effect against Gram-positive bacteria, especially strong inhibition effect against Bacillus strains. The inhibition activity of the fermentation supernatant still kept high after ammonium sulphate precipitation and dialysis, and the activity of the dialysis retentate was sensitive to a variety of proteases. These results indicated the protein nature of antibacterial substances contained in the dialysis retentate. Base on morphological, physiological and biochemical characteristics, 16S rDNA sequence and phylogenic analysis, the strain K2 was classified as Bacillus thuringiensis. The antibacterial substance from strain K2 remained strong antibacterial activity after heating treatment at 80 ℃ and pH 6 － 9 for 30 min, suggesting its excellent thermostable property and pH resistance. The antibacterial activity was generated from midlogarithmic growth phase and reached the maximum activity at mid-stationary phase. Key words：Bacillus thuringiensis；bacteriocin；identification；antibacterial substance 中图分类号：Q939.9 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2010)11-0147-06细菌素是某些细菌在代谢过程中通过核糖体合成机 制产生的一类具有生物活性的蛋白质或多肽，主要抑制 其他相近种类的细菌，一般产生菌自身对其细菌素具有 免疫性[ 1 ] 。
生物农药苏云金杆菌
编辑：杨风光**************文/ 赵国庆生物农药苏云金杆菌苏云金杆菌(Bt制剂)是在德国苏云金地区发现的一种细菌性杀虫剂。
常见商标名称：阿苏、苏力菌、菜蛙、天然之宝、敌宝、拂康、贝林、碧绿、碧星、娇蓝、金中、奇佳、芯钻、乐棵多、驱雀济农、百事威风、高点、九鲤、力道、灵秀、润奇、生绿、顺诺、应螟、真精、洲际、爱地益、塞诺菲、蛙先生、强敌315、杀虫菌1号、菌杀敌、青虫灵、都来施、农林丰、BT、Bt等。
苏云金杆菌性能原药为黄褐色晶体，属好气性蜡状芽孢杆菌群，在芽孢囊内内产生晶体，有12个血清型、17个变种，主要杀虫成分为内毒素和外毒素。
干粉在40℃以下稳定，碱性环境中分解，属低毒性杀虫剂，对人无毒性反应。
苏云金杆菌(Bt制剂)是一种有很多变种的芽孢杆菌，属细菌杀虫剂，由于杀虫范围广，防治效果好，不污染环境，生产工艺先进，目前世界上已有几十个国家500余个厂家获准登记，商品种类达100余种，年生产能力达50余万吨，是生物杀虫剂第一品牌。
苏云金杆菌杀虫剂作用方式主要是胃毒作用，苏云金杆菌从害虫口腔进入消化道后，在体内大量繁殖，同时吸收虫体内的营养物质，使害虫不能正常生长发育；同时细菌还产生大量毒素，使害虫形成败血症死亡。
病死虫体颜色加深变黑，并软化腐烂失去原形，一般均有臭味。
我国生产的苏云金杆菌大多加入0.1%～0.2%菊酯类杀虫剂，可加快害虫死亡。
苏云金杆菌特点1.选择性强，对人畜安全。
只对病虫害有作用，一般对人、畜及各种有益生物(包括动物天敌、昆虫、蜜蜂、传粉昆虫及鱼、虾等水生生物)比较安全，对非靶标生物的影响也比较小。
2.对生态环境影响小。
苏云金杆菌的活性成分完全存在和来源于自然生态系统，最大特点是极易被日光分解，是一种来于自然，归于自第12月 上半月刊然正常的物质循环方式。
因此可以认为对自然生态环境安全、无污染。
3.生产过程节能环保。
生产加工生物农药，一般主要利用天然可再生源，如农副产品的豆饼、花生饼、菜籽饼、鱼粉、麦麸或某些植物体等，原材料的来源十分广泛、生产成本比较低廉。
苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白对棉铃虫活性分析
白组合较少 ， 这限制了 Ｂ 的应用 ，因此 ，用 已克隆 ｔ
的 ５种 Ｂ ｒ 因和 １ ｔ ｙ基 Ｃ 种野 生 菌株 ＨＤ ７ （ ｒｌ ｃ － ３ＣｙＡ ）
虫活性 主要来原于 一 内毒素 ，又称杀虫 晶体蛋 白
应用 ，迄今 已发现的毒力较高的杀虫晶体蛋 白及蛋
表 １ 供 试 菌株 蛋 白 及 ｐ Ｈ
Ｔａ ｌ Ｔｈ ｒ ｔ ｉ ｏ ｔａ ｎ ｎ Ｈ ｂｅ １ ｅ ｐ ｏ ｅｎ ｆｓｒ ｉ ｓ ａ ｄ ｐ
１２ 杀 虫晶体 蛋 白的制备 ． １ ． Ｂ 菌株 培养 ．１ ｔ ２
（ ｓ ｔ ｉ ｌ ｒｓ ｔＰｏ ｉ ，ＩＰ ） ，目前 已分离 Ｉ ｅ ｉ ｄ ｙ ａ ｒ ｅ ｓ Ｃ ｓ［ ｎ ｃｃ ａＣ ｔｌ ｔｎ １
的 Ｂ 菌 株 超过 了 ５万株 ，Ｂ 的杀 虫 范 围 已经扩 大 ｔ ｔ
表达的 ６ 种杀虫晶体蛋 白对棉铃虫的活性进行分析 ， 这对开发和丰富的 Ｂ 资源有着十分重要的意义。 ｔ
将收集的沉淀经 １ｍ ｌ Ｎ Ｃ 洗涤 ，离心 ｏ・ 的 ａ １ Ｌ
维普资讯
东
北
农
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大
学
学
报
第 ３ 卷 ９
后用 预冷无菌水 洗涤 ，沉淀悬浮 于裂解液 （ ３ 含 ％ 一 巯 基 乙醇 ，ｐ ．） Ｈ ９ ，冰上 摇 ４ｈ溶 解 蛋 白。 １ ０ ６ ０００ ｒｍｎ ，４℃离心 ２ ｎ ・ ｉ～ ０ｍｉ，取 上清 ，用 ４ｍ ｌＬ ｏ・ 乙
该组合对棉铃 虫的共毒 系数为 １ １ ． ，有相加作 用。Ｃ ｌ ｃ ２ ｙ ｒ Ａ 与这 ５ 种蛋 白的组合对棉铃 虫都有较 高的毒 力。
苏云金杆菌杀虫增效作用研究进展
第17卷第2期 武汉科技学院学报 V ol.17 No.2苏云金杆菌杀虫增效作用研究进展曹 琼 （江汉大学 实验师范学院，湖北 武汉 430070） 摘要：苏云金杆菌是一种在自然界中广泛分布的好气芽孢杆菌，由于其对昆虫的特异性毒杀作用而广泛用于农业和卫生害虫的生物防治中。
但由于野外应用防效不稳定、残效期短、杀虫速度慢、对某些目标害虫不敏感，影响其作为生物杀虫剂的应用。
通过特异性高毒力菌株的筛选、菌株的遗传改良、剂型的改良、各种增效剂和增效因子采用等方法，以提高苏云金杆菌制剂的杀虫活性和野外应用防治效果。
本文在讨论苏云金杆菌的杀虫毒素蛋白及其作用方式的基础上，介绍了不同增效方式及其杀虫活性的影响的研究进展。
关键词：综述；苏云金杆菌；杀虫活性；增效作用中图分类号：S43 文献标识码：A 文章编号：1009－5160（2004）－0044－05 化学农药防治害虫效果显著，因此在全世界农林区得以广泛使用，带来了可观的经济效益。
但自二十世纪六十年代以来，由于化学农药引起的环境污染、害虫产生抗药性等一系列问题日益引起了人们的广泛的焦虑，生物防治也越来越受到人们的重视。
在现有的生物防治策略中，苏云金芽孢杆菌的应用尤为引人注目。
苏云金杆菌（Bacillius thuringiensis, Bt）是从自然界分离出来的昆虫病原细菌，革兰氏染色阳性，在芽孢形成期间能产生伴胞晶体[1]。
它最早在日本发现于家蚕的猝倒病，1915年Berline再次发现并定名，1938年在法国首次成为商品[2]。
Bt的真正实用化始于70年代高效菌株HD-1的发现，特别是1992年联合国在巴西召开的“世界环境和发展大会”，既促进了全球生物防治的发展，同时又推进了Bt制剂产业化的进程。
自商品化以来，Bt产品就以其高效安全、对目标害虫的特异性而倍受亲睐，并逐渐成为研究最深入、应用最广泛的生物杀虫剂[3]。
Bt的毒素成分对包括大量农林害虫及卫生害虫在内的无脊椎动物的4个门和节肢动物门中9个目，计522种昆虫具有不同程度的致病力，被广泛应用于100余种常发生在农业、林业、果树、蔬菜和环境卫生害虫的防治，对20余种重要害虫防效显著[4]，在害虫的综合防治中占有极其重要的地位。
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苏云金芽孢杆菌简介
组员：张晓云李文慧
2010年5月10日
明治维新后，日本成为当
时最大的蚕丝产地和最主要的蚕丝出产国
猝倒病
病蚕停止进食桑叶，随后
出现颤抖的症状，并且很
石渡繁胤（いしわたし
げたね）(1868-1941)
猝倒杆菌
恩斯特·贝尔林纳（Ernst
Berliner）在德国苏云金省重新分离得到
正式定名为苏云金芽胞杆
菌(Bacillus thuringiensis,B.t.)
Mattes在1927年重新从
地中海粉螟中分离出了Bt 能杀死鳞翅目昆虫，对其
它动物却没有什么影响
Bacillus thuringiensis))苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis
革兰氏阳性土壤杆菌
芽孢杆菌属
菌体短杆状，生鞭毛，单
生或形成短链
20世纪20年代末，美国
用于控制舞毒蛾
法国在1938年成功地研
制出第一个商业化的Bt杀
虫剂Sporine。
20世纪50年代，Bt作为绿
色有机农药，取代DDT在
美国开始被大规模地应用
Bt 的没落和新生
•不需要人工喷洒•新作物不确定性大大降低
•误伤非农业害虫的几率变低
•尚未发现对人类健康有任何负面影响
•对环境贡献巨大
新特点
•价格昂贵•须多次喷洒
•化学合成杀虫 剂出现
旧缺点
转基因技术
抗虫蛋白
基因转入
基因转入玉米、棉花
基因
克隆cry 基因蛋白提纯cry 蛋白-内毒素伴胞晶体蛋白
发现δ-内毒素
伴胞晶体蛋白
虫吃了会死，人吃也有害？
Bt安全性
毒性检测毒理研究免疫学
•老鼠：3.8-
5g/kg体重
•我国≤2.5微克/g
•60kg的人吃120吨稻米•原毒素
•受酶激活，作用
于肠道受体造成
穿孔
•人体不存在激活
蛋白酶
•结构与已知过敏
原相差很大
•没有能引起过敏
反应的实验依据
•争议案例缺乏说
服力
Bt对环境的影响节肢动物群落特征参数
特征参数MH—BT MH-bt田
水MH—常
规
SY-Bt SY-bt田
水
SY—常规
物种 535153525152 SIMPSON(J) 0.888180.890810.893020.890950.88910.89395 SHANNON(H) 3.90161 3.92576 3.94629 3.95656 3.92669 3.97552均匀度 0.681160.692080.688960.694080.692240.69741
新型抗虫蛋白
鞘翅目昆虫（天牛）
双翅目昆虫（黑蝇）
河盲症（River
Blindness），仅次于沙
眼之后的第二大致盲传染
病
蟠尾丝虫症控制计划
（OCP），3000万人得
到保护，直接避免盲眼的
人数26.5万人
基因组测序概况2 complete，2 assembly，14
in progress
B. thuringiensis 97-27，B.
thuringiensis Al Hakam，均无
杀虫活性
苏云金芽孢杆菌YBT-1520，
华中农业大学，含有cry1A a、
cry1A b、cry1A c、cry2A a和
cry2A b，但拼接困难
内生质粒，在细胞内呈共价闭
合环状的形式(cccDNA)，已有
22 个质粒完成了全序列测定
Bt 97-27 的染色体圈图
注: 最外面两圈表示基因的起始位点
和指定的功能分类;
第1 圈包括正链基因产物;
第2 圈包括负链基因产物;
第3 圈和第4 圈表示特有基因;
第5 圈和第6 圈表示原噬菌体基因;
第7 圈表示插入序列元件;
第8 圈表示(G+C)含量;
第9 圈表示GC 偏好性(卡其色表示值
>1, 紫色表示值<1)
颜色代表功能分类如下: 浅蓝色—氨
基酸的生物合成; 浅肉色—辅助因子
的生物合成; 暗肉色—细胞膜; 橙色—
细胞加工; 橙红—重要中间代谢; 绿
色—能量代谢; 黑色—脂肪酸和磷脂
代谢; 青色—其他分类; 暗灰色—蛋白
凋亡; 黄色—嘌呤、嘧啶、核苷和核
苷酸; 浅绿色—调控功能; 蓝色—复制;
浅灰色—转录和翻译; 洋红色—转运
和结合蛋白; 褐色—未指定的编码; 红
色—未知功能
pBtoxis 质粒圈图
注: 外边两圈表示正反链
上预测的基因, 外圈刻度
标尺的单位为kb; 最里面
一圈表示GC 偏好性, 黄褐
色表示值>1, 紫色表示值
<1; 第2 圈表示（G+C）
含量
基因由不同的颜色来代表
如下: 灰色—毒素和肽类
抗生素; 粉红色—转座子
相关; 橙色—保守假定的;
红色—DNA 代谢; 蓝色—
调控; 鲜绿色—表面关联
的; 灰绿色—未知; 黄色—
各种代谢因子
谢谢！
References
/archives/37319.html
谭寿湖等. 苏云金芽孢杆菌基因组研究概况[J].基
因组学与应用生物学, 2009, 28(1),202-208
图片来源于参考文献及网络图片。