苏云金芽孢杆菌
苏云金芽孢杆菌使用说明
注 意 事 项 ：
1、菌种活化前，将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中，长时间室温下放
置会导致菌种衰退；
2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行；
3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才能
正常生长； 4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时来 电询问； 5、某些厌氧菌的培养，自开封到接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧 状态；培养过程中亦要保持厌氧状态； 6、某些菌种，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要 5-‐10%CO2 促 进生长； 7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况，应停止使用对应产品。 8、部分菌种有致病性、扩散性，请专业人员在专业环境下有保护性操作。 保 藏 条 件 ： -‐20℃保存（复溶液于 2-‐8℃保存） 保 藏 时 间 ： 2-‐10 年，应根据菌种状况及时转接
苏云金芽孢杆菌
编号
名称
北京华越洋生物 NRR00380
苏云金芽孢杆菌
基 本 信 息 ： பைடு நூலகம்
名称：苏云金芽孢杆菌
规格：300ul 甘油菌
储存温度：-‐80℃
基 因 组 ：
苏云金芽孢杆菌
简 介 ：
苏云金杆菌，简称 Bt,是包括许多变种的一类产晶体芽孢杆菌。该菌可
（必要时，可适当延长培养时间）。
菌 株 传 代 ：
将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量
增大接种量：如用无菌吸管吸取≥50μl 新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓
慢释放），适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。
苏云金芽孢杆菌筛选及其对蚊科幼虫的杀虫活性
苏云金芽孢杆菌筛选及其对蚊科幼虫的杀虫活性苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）是一种常见的土壤细菌，被广泛用作生物杀虫剂。
它通过产生特殊的杀虫晶体蛋白（Cry蛋白），对某些昆虫的幼虫具有高度的杀虫活性，对环境和人类安全无害。
本文主要探究苏云金芽孢杆菌的筛选方法，并研究其对蚊科幼虫的杀虫活性。
苏云金芽孢杆菌的筛选可以通过以下步骤进行：采集土壤样品，将其接种到富含营养的培养基中，如T3培养基。
将培养基孵育在适宜的温度下，并进行连续传代培养，以保持苏云金芽孢杆菌的纯度和活力。
接下来，用半定量法检测培养基中的苏云金芽孢杆菌数量。
可以使用琼脂糖平板法，将一定体积的培养基平铺在琼脂糖平板上，然后在适宜温度下培养。
苏云金芽孢杆菌形成的典型菌落呈灰白色，巨大菌落的培养液显示菌落明显，以及青霉菌类在菌落表面的出现等都是筛选的重要指标。
然后，根据苏云金芽孢杆菌对蚊科幼虫的杀虫活性，进行活性筛选。
将苏云金芽孢杆菌转接到含有蚊科幼虫的培养基中，进行培养。
观察苏云金芽孢杆菌对蚊科幼虫的杀虫效果，并进行杀虫活性测试。
可以通过观察幼虫的死亡情况、体表异常和生长抑制等指标来评估杀虫活性。
选取具有较高杀虫活性的苏云金芽孢杆菌进行进一步研究。
可以通过形态学观察、鉴定晶体蛋白类型和测定晶体蛋白的产量等方法，对选择出的苏云金芽孢杆菌进行深入研究。
苏云金芽孢杆菌对蚊科幼虫的杀虫活性主要依赖于其产生的Cry蛋白。
Cry蛋白在蚊科幼虫的肠道内起到杀虫作用。
当幼虫摄入含有Cry蛋白的培养基时，Cry蛋白与幼虫肠道内的特定受体结合，使幼虫肠道发生溶解和结构破坏，最终导致幼虫死亡。
Cry蛋白具有高度的选择性，对昆虫的杀伤作用明显，而对其他生物几乎无毒性。
研究表明，苏云金芽孢杆菌对蚊科幼虫具有较高的杀虫活性。
对白纹伊蚊幼虫的研究发现，苏云金芽孢杆菌具有很好的杀虫效果。
实验结果显示，苏云金芽孢杆菌处理组的幼虫死亡率明显高于对照组，而且处理组的幼虫体长、体重显著低于对照组，说明苏云金芽孢杆菌不仅能有效杀死蚊科幼虫，还能抑制其生长发育。
苏云金芽孢杆菌筛选及其对蚊科幼虫的杀虫活性
苏云金芽孢杆菌筛选及其对蚊科幼虫的杀虫活性苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis var. israelensis，简称Bti）是一种广泛应用于生物农药领域的细菌，被广泛应用于蚊虫控制。
本文主要介绍苏云金芽孢杆菌的筛选方法及其对蚊科幼虫的杀虫活性。
苏云金芽孢杆菌主要通过筛选分离或遗传改造获得。
筛选分离方法主要包括土壤样品采集、产孢核查、杀虫活性测定等步骤。
采集土壤样品，可以从湖泊、河流、池塘、沼泽等水源附近的土壤中采集，因为这些地方通常是蚊子孳生的地方。
然后，将土壤样品接种在含有适宜营养物质的培养基中，促使苏云金芽孢杆菌的生长。
接下来，通过形态学观察和生物学特性鉴定来确认是否获得了苏云金芽孢杆菌。
使用家蚊幼虫等蚊科昆虫幼虫进行杀虫活性测定，以评价苏云金芽孢杆菌的杀虫效果。
苏云金芽孢杆菌的杀虫活性主要通过其产生的杀虫晶体蛋白（Cry蛋白）实现。
这些Cry蛋白可以与蚊科幼虫的消化酶相互作用，破坏其肠道细胞膜，引起幼虫发生中毒死亡。
苏云金芽孢杆菌对蚊科幼虫的杀虫作用主要表现在以下几个方面：1. 快速杀虫：苏云金芽孢杆菌能迅速产生大量的Cry蛋白，只需几小时就可以导致蚊科幼虫死亡。
2. 高度选择性：苏云金芽孢杆菌的Cry蛋白对蚊科幼虫具有强烈的杀虫活性，但对其他昆虫和动物没有明显杀伤作用。
3. 持久的杀虫效果：苏云金芽孢杆菌在水中具有较长的存活期，可以持续释放Cry蛋白，从而更好地控制蚊科幼虫的数量。
4. 不易产生抗药性：由于苏云金芽孢杆菌的杀虫机制是通过破坏肠道细胞膜导致幼虫死亡，而不是通过直接杀死昆虫的神经系统，因此不易产生抗药性。
苏云金芽孢杆菌是一种有效且安全的生物农药，可用于控制蚊科幼虫的数量。
它具有快速杀虫、高度选择性、持久的杀虫效果和不易产生抗药性等优点，对蚊虫的控制起到了积极的作用。
在蚊虫防控中，苏云金芽孢杆菌的应用前景广阔，但也需要在实际应用中不断完善其筛选方法和杀虫活性评估体系，提高其在蚊虫控制中的应用效果。
苏云金芽孢杆菌杀虫剂作用机理及应用
苏云金芽孢杆菌杀虫剂作用机理及应用一、苏云金芽孢杆菌杀虫作用机理1、苏云金杆菌致病机理苏云金杆菌对昆虫的致病作用是通过它所产生的毒素和芽孢而引起的。
一般是伴孢晶体的毒素使昆虫发生毒血症而死亡，由于晶体毒素对昆虫中肠上皮有破坏作用，使肠壁受损，中肠的碱性、高渗内含物进入昆虫血腔，使血液pH升高导致染病幼虫麻痹而死亡。
而芽孢是在肠道中萌发为菌体通过由晶体毒素破坏的中肠肠壁进入血腔，菌体在血腔中进行繁殖从而引起昆虫败血症的发生，造成染病昆虫的死亡。
而β-外毒素是RNA聚合酶的竞争抑制剂，可干扰昆虫有关激素的合成，从而导致幼虫发育畸形或不能正常化蛹。
苏云金芽孢杆菌虽然有较强的杀虫能力，但它必须经吞食过程进入体内才能杀死昆虫。
因此，在实际应用中，将其与吸引昆虫的物质一起喷洒，可以增加昆虫吞食的可能性。
二、苏云金芽孢杆菌在害虫防治上的应用苏云金芽孢杆菌类的各变种对鳞翅目、膜翅目、直翅目、双翅目、鞘翅目等350余种昆虫有不同程度的防治效果，但主要应用于防治下列害虫。
1、经济作物类棉铃虫，红铃虫，造桥虫，烟青虫。
2、蔬菜类菜青虫，小菜蛾，菜螟。
3、粮食作物类二化螟，三化螟，稻苞虫，稻纵卷叶螟，玉米螟等。
4、果树类松毛虫，桃小食心虫，尺蠖，大袋蛾，卷叶蛾等。
三、苏云金芽孢杆菌的使用方法苏云金芽孢杆菌杀虫剂效果对虫龄越小防治效果越好，使用时必须掌握好时机和用量。
苏云金芽孢杆菌农药药效较慢，一般害虫进食30min后停止为害作物，24h开始死亡，48h达到死亡高峰，72h死亡率达95%以上。
1、单用喷粉，喷雾均可。
2、混用为提高药剂的防治效果，特别是在害虫大发生和多种害虫混合发生时，可与非碱性的杀虫双、杀虫单、甲胺磷、三唑磷等常用化学杀虫剂混用，作用互补，效果更佳。
但必须现配现用，最好不和其他杀菌剂混用，以免影响防治效果。
3、与其他生物农药混用可与白僵菌，小菜蛾GV等混用。
四、苏云金芽泡杆菌使用注意事项：1、温度使用苏云金芽孢杆菌制剂的适宜温度在25℃以上，温度过低完全失去杀虫作用：在25～30℃时使用，其防治效果比10～15℃时高出1～2倍，温度低于20℃时最好不使用。
苏云金杆菌解读
精心整理苏云金杆菌解读苏云金杆菌，简称Bt，又称苏云金芽孢杆菌，1901年由日本细菌学家石渡繁胤首先在受病害的蚕蛾中发现，但是当时没有保存下来。
1911年，德国人贝尔奈(Berliner)从德国苏云金省一家面粉厂地中海粉螟上，分离到一种有很强杀虫力的细菌，并正式定名为苏云金芽胞杆菌。
是包括许多变种的一类产晶体的芽孢杆菌。
商品名称作用机理苏云金杆菌杀虫活性物质有二种，一种是晶体和孢子。
它是一种蛋白质（Cry蛋白），当害虫取食了伴孢晶体和芽孢之后，在中肠蛋白酶的作用下，伴孢晶体溶解，释放出对鳞翅目幼虫有较强毒杀作用的δ-内毒素。
这种毒素使幼虫的中肠麻痹，与中肠细胞膜受体结合，肠道内碱性内含物漏入血腔，孢子和菌体通过被破坏的肠壁进入体腔。
使其呈现中毒症状，食欲减退，对接触刺激反应失灵，厌食，呕吐，腹泻，行动退缓，身体萎缩或卷曲。
经一段发病过程，害虫肠壁破损，毒素进入血液，引起败血症，同时芽孢在消化道内迅速繁殖，最终麻痹而死。
还有一种Bt毒素，作用方式是干扰中肠细胞的线粒体功能，引起害虫中毒死亡。
甘蓝夜蛾、烟青虫、玉米螟、稻纵卷叶螟、二化螟、松毛虫、茶毛虫、茶尺蠖、玉米粘虫、豆荚螟、银纹夜蛾等多种害虫。
使用技术1、防治玉米螟，每亩用16000IU/毫克可湿性粉剂150～200克，拌细沙土3～5公斤，拌匀撒于心叶内。
2、防治棉铃虫、造桥虫、水稻、稻纵卷叶螟、螟虫，每亩用8000IU/毫克可湿性粉剂200~400克，或16000国际单位／微升悬浮剂100—150毫升，兑水50～70公斤喷雾。
3、防治果树、林木、松毛虫、食心虫、尺蠖、茶茶毛虫、茶尺蠖：每亩用16000国际单位／毫克可湿性粉剂150~200克/亩，兑水50公斤喷雾。
国际单位／微升悬浮剂250—300倍液喷雾。
9、防治枣尺蠖，用8000国际单位／毫克可湿性粉剂600—800倍液，或16000国际单位／微升悬浮剂200倍液喷雾。
注意事项1、施用期一般比使用化学农药提前2～3天，对害虫的低龄幼虫效果好。
科普：苏云金杆菌
科普：苏云金杆菌
苏云金杆菌
即苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis，Bt）被发现已有100 年的历史，其在害虫防治中发挥了巨大的作用，是近年来研究最深入、开发最迅速、应用最广泛的微生物杀虫剂。
苏云金杆菌的防虫原理是其菌株可产生内毒素（伴胞晶体）和外毒素两类毒素，使害虫停止取食，害虫均因饥饿、血液败坏和神经中毒而死。
应用领域
苏云金杆菌适用对象非常广泛，可应用于十字花科蔬菜、茄果类蔬菜、瓜类蔬菜、烟草、水稻、玉米、高粱、大豆、花生、甘薯、棉花、茶树、苹果、梨、桃、枣、柑橘、香蕉、芒果、荔枝等多种农作物及森林、草原。
苏云金杆菌杀虫谱较广泛，主要用于防治鳞翅目害虫幼虫，如菜青虫、小菜蛾、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾、甘蓝夜蛾、烟青虫、玉米螟、稻纵卷叶螟、二化螟、松毛虫、茶毛虫、茶尺蠖、玉米粘虫、豆荚螟、银纹夜蛾等多种害虫幼虫，部分亚种或菌株对根结线虫、蚊幼虫、韭蛆、甲虫等害虫也有一定防治作用。
注意事项
1.苏云金杆菌在气温较高时（20℃以上）才能充分发挥作用，所以在7～9月份应用效果最好；施药适期一般比使用化学农药提前2～3天为宜。
2.对稻纵卷叶螟、玉米螟、造桥虫、松毛虫和茶毛虫等都有效，但对大螟等效果较差。
3.对蜜蜂低毒，但对家蚕和蓖麻蚕有剧毒，应严格控制，不可在养蚕的地区使用。
若桑叶沾上菌粉时，要用0.2%漂白粉杀菌，洗净、晾干后再喂用。
4.不可与杀菌剂混用。
5.宜密封、遮光，在阴凉、干燥处保存，并且要防鼠咬。
苏云金芽孢杆菌筛选及其对蚊科幼虫的杀虫活性
苏云金芽孢杆菌筛选及其对蚊科幼虫的杀虫活性苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis var. israelensis，简称Bti）是一种广泛应用于生物防治的杀虫菌株，特别适用于蚊科成虫和幼虫的控制。
本文将介绍苏云金芽孢杆菌的筛选方法以及其对蚊科幼虫的杀虫活性。
苏云金芽孢杆菌的筛选通常是通过多步骤的实验流程进行的。
首先，需要收集环境中具有杀虫活性的苏云金芽孢杆菌菌株，可以是土壤、水体和其他环境样品。
然后，将这些样品分别进行细菌培养，通过高温杀菌等方法选择出富含苏云金芽孢杆菌的培养物。
接下来，将这些培养物进行纯化和鉴定，选择纯度高且效果好的苏云金芽孢杆菌菌株。
对于蚊科幼虫的杀虫活性测试，常采用生物学和生化学方法。
生物学方法包括黏贴法、培养沉降法、萤光健康法等。
这些方法通过将苏云金芽孢杆菌菌株与幼虫接触，观察幼虫的死亡情况以及菌株对幼虫的毒力大小。
生化学方法则是通过分析苏云金芽孢杆菌对蚊科幼虫的毒杀机制，了解其杀虫活性的作用途径和影响因素。
研究表明，苏云金芽孢杆菌对蚊科幼虫具有较高的杀虫活性。
其主要作用机制是通过产生一种称为晶体蛋白（Cry）的毒素来杀死幼虫。
这种毒素进入幼虫消化系统后，被分泌的蛋白酶降解，释放出毒素结晶体，然后结晶体溶解并结合到幼虫肠道上皮细胞的受体上，导致细胞破裂和死亡。
苏云金芽孢杆菌对蚊科幼虫的杀虫活性受多种因素的影响，如菌株的纯度、菌液的浓度、幼虫的种类、菌株与幼虫的接触时间等。
一般来说，苏云金芽孢杆菌的杀虫活性较高，对蚊科幼虫的毒力大，可以达到较好的防治效果。
总体而言，苏云金芽孢杆菌的筛选方法较为简单，其对蚊科幼虫的杀虫活性较高。
将苏云金芽孢杆菌应用于蚊虫的综合防控中，有助于减少农药的使用，保护生态环境，提高防控效果。
苏云金芽孢杆菌(Bt)
苏云金芽孢杆菌(Bt)苏云金芽孢杆菌(Bt)产品名称：苏云金芽孢杆菌(Bt)是英文名称Bacillus Thuringiensis 的缩写。
理化性质：Bt有效成分伴胞晶体是由分子量2.7-14万道尔顿的三大类蛋白质组成,具有蛋白质的理化性能。
Bt的另一有效成分芽孢是活的菌体.条件适宜即萌发,生长,繁殖。
杀虫机理：当Bt被害虫吞食后,Bt的伴胞晶体在中肠被碱性肠液溶解,被蛋白酶水解为活性毒素,使中肠上皮细胞膨胀穿孔,Bt的另一有效成分芽孢侵入血腔大量繁殖,使害虫得败血症死亡。
毒性：对人、畜低毒，大鼠口服急性LD50 852.7-856.7毫克/公斤，对家禽、鸟类鱼、畜等低毒,对害虫天敌无伤害。
剂型：原药、悬浮剂、可湿性粉剂。
防治对象：Bt对鳞翅目、双翅目、鞘翅目等100多种害虫和动植物线虫有很好的毒杀作用。
国内外应用统计，Bt对64种森林害虫，34种果树害虫，12种茶树害虫都显示高毒力。
最常用具特效的防治对象有：菜青虫、小菜蛾、斜纹夜蛾、玉米螟、稻苞虫、稻纵卷叶螟、二化螟、三化螟、棉铃虫、棉小造桥虫、茶毛虫、茶尺蠖、松毛虫、天幕毛虫、毒蛾、刺蛾。
此外对大豆拌种防治地下线虫也有特效。
使用方法：对于鳞翅目害虫的幼虫，可用4000-8000IU/µl悬浮剂或8000IU/mg-16000IU/mg可湿性粉剂150-100毫升或100-50克，加水50公斤喷雾，为了扩大杀虫谱及增强Bt的速效性，视需要也可加入高效低残留易分解的中性农药混合施用。
注意事项：（1）使用Bt需在气温18℃以上,宜傍晚施药,可发挥其杀虫最佳效果。
（2）对家蚕、蓖麻蚕毒性大，不能在桑园及养蚕场所附近使用。
（3）不能与杀菌剂混用，应避光、阴凉、干燥保藏.（4）随配随用.从稀释到使用,一般不要超过2小时。
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苏云金芽孢杆菌在工农业生产中的应用
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Bt的发现
1901
日本学者石度繁从患猝倒病的家蚕幼虫中分离到第1个产生晶 体的芽孢杆菌。
1911
Berliner从德国苏云金地方一家面粉厂染病的地中海粉螟中分离到一个相 似的菌株，并正式定名为苏云金芽孢杆菌（Bt）。
一个叫克林诺的科学家发现，在这种细菌的细胞中可以形成方形或菱 形的晶体，可惜这个发现并未被重视。
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❖ 用苏云金芽孢杆菌研制热稳定性禽流感口服疫苗 刘梅等(2007)利用苏云金芽孢杆菌具有很强热稳定性及 对畜禽无毒性的优点，通过建立苏云金芽孢杆菌细胞表面 展示系统，即将AJ基因与S一层蛋白(Surface layer protein)融合后，AI病毒NP蛋白展示到受体菌株表面，从 而开发出活菌疫苗。该热稳定性AIV—苏云金芽孢杆菌重 组口服疫苗在对小鼠的实验中，表现较强免疫原性。
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苏云金芽孢杆菌
Bacillus thuringiensis
目录
简介 Bt的发现 Bt的杀虫机理 Bt的研究现状
Bt的应用前景
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简介
苏云金芽孢杆菌 （Bacillus thuringiensis简称Bt ） 为革兰氏阳性土壤杆菌，遗传物质是DNA，
属于芽孢杆菌属，其菌体为短杆状，生 鞭毛，单生或形成短链。可寄生在一些 蛾类和蝶类的幼虫上，甚至是植物表面。 它在芽孢形成过程中产生称为δ-内毒素 的杀虫伴胞晶体蛋白，这些蛋白具有很 高的杀虫活性。
1915
一位叫汉纳的生物学家证明了这种晶体是有毒的 蛋白质晶体，才揭示了粉螟死亡的原因。
1953
1938年第1个商品制剂 Sporeine在法国问世，以后相 继发现了有毒杀作用的Bt菌株。
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Bt的杀虫机理
昆虫取食苏云金芽孢杆菌 杆菌在其胃肠道内产生蛋白质晶体内毒素（δ-内毒素）、 热稳定毒素（β-外毒素）、叶蜂毒素（α-外毒素）及Btγ外毒素。而这种伴孢晶体对环境无毒无害。因为在动物 的胃肠道内，酸性环境下蛋白质晶体不能溶解，从而对人 畜无害。 毒素侵蚀昆虫肠道细胞，破坏肠道内膜，并进入血淋巴 组织，使害虫因饥饿而出现败血症最后死亡。
Bt的研究现状
❖ 苏云金芽孢杆菌（Bt）的研究主要集中在分子水平上
过去Bt是作为一种制剂应用于农林害虫的防治，随着 生物技术的发展，现在已对苏云金芽孢杆菌的杀虫蛋白质 和相关基因作了深入而透彻的研究，也就是说在基因的水 平上对它有了更多的了解。研究发现，在其体内具有一种 Cry基因，正是这种基因编码产生的蛋白质对上述昆虫具 有极大的毒性，所以这种基因的结构和特性就影响到它本 身，也影响到它的杀虫范围。当然某一基因的长期应用会 刺激昆虫产生抗体。因此，现在对苏云金芽孢杆菌的研究 更多地集中在分子水平上。
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❖ 苏云金芽孢杆菌的防治对象是鳞翅目、膜翅目、双翅目、 鞘翅目等多种害虫，其药性的持效期可达7～10d左右。需 要特别注意的是：苏云金芽孢杆菌（Bt）及其制剂对蚕具 有很高的毒性，桑园必须禁用。另外，勿与碱性杀菌剂混 合施用，晴天的傍晚或阴天施药效果最佳。
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Bt的应用领域
苏云金芽孢杆 菌在动物疾病 防治上的应用
苏云金芽孢杆 菌在工农业生 产中的应用
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苏云金芽孢杆菌在动物疾病防治上的应用
❖ 用苏云金芽孢杆菌防治动物捻转血矛线虫 国内有多位学者探索苏云金芽孢杆菌防治不同时期捻转血 矛线虫，均已取得较好效果。姚宝安等(1995)发现至少有 12株苏云金芽孢杆菌对捻转血矛线虫第1、2期幼虫有杀灭 作用，这些苏云金芽孢杆菌包括以色列亚种和库斯塔克亚 种在内的9个亚种，其中1株苏云金芽孢杆菌至今还没有发 现它对任何昆虫有毒，但却对捻转血矛线虫具有很高的毒 性。周林等(1999)发现至少有10株苏云金芽孢杆菌伴孢晶 体毒素对捻转血矛线虫第3期幼虫有杀灭作用，而且幼虫 死亡率可达100％，不同菌株对捻转血矛线虫的毒力差异 极显著，此外，作用时间适当延长，作用剂量稍有增大， 幼虫的死亡率也相应增加。王祥等(1999)也筛选到2株对 捻转血矛线虫第4期有效的苏云金芽孢杆菌菌株，但第四 期幼虫是在动物皱胃内，有关苏云金芽孢杆菌临床应用的 剂型和给药途径，还有待进一步研究。