实验二 放线菌、霉菌和酵母菌形态的观察
细菌 、放线菌 、酵母菌及霉菌的分离与纯化
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化一、实验目的1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物的技术。
2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。
3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培养时间。
4. 学习平板菌落计数法。
二、实验原理将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。
要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。
微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。
表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求样品来源分离对象分离方法稀释度培养基名称培养温度/℃培养时间/d土样细菌稀释分离10-5，10-6，10-7牛肉膏蛋白胨30～37 1～2土样放线菌稀释分离10-3，10-4，10-5高氏1号28 5～7土样霉菌稀释分离10-2，10-3，10-4马丁氏琼脂28～30 3～5面肥或土样酵母菌稀释分离10-4，10-5，10-6马铃薯葡萄糖28～30 2～3细菌分离平板细菌单菌落划线分离10-2 牛肉膏蛋白胨30～37 1～2三、实验材料1. 菌源土样2. 培养基牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见附录Ⅲ。
3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。
4.5 mL无菌水试管(每人5～7支)。
4. 其他物品无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。
（一）系列稀释平板法1. 取土样选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
盛土的容器应是无菌的。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
酵母菌的纯培养实验报告
酵母菌的纯培养实验报告姓名＿＿小组成员＿＿＿指导老师＿＿＿＿＿年＿＿月＿＿日实验名称观察酵母菌和霉菌实验目的认识酵母菌和霉菌的形态结构实验用具酵母菌永久装片、培养好的橘子皮青霉，吸管、镊子、显微镜、解剖针（或牙签）、载玻片、盖玻片、放大镜、吸水纸。
实验步骤观察实验现象并记录1、仔细观察酵母菌取酵母菌永久装片，用显微镜观察。
（多/单）细胞动物。
酵母菌的细胞有＿＿＿＿、＿＿＿、＿＿＿和结构。
从培养皿中取一块长有青霉的橘子皮，垫上白纸，用放大镜观察。
取少量菌丝制成临时装片，置于显微镜下观察接起来的＿＿＿＿构成，每个细胞都有＿＿＿＿、＿＿＿、＿＿＿、＿＿＿＿。
青霉菌丝有两种＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿。
菌丝顶端有＿＿＿＿状的结构，呈＿＿＿＿色。
讨论：《观察酵母菌与霉菌》实验教案一.实验目的1.观察酵母菌的形态与结构并掌握其特征。
2.观察霉菌的菌落特征，学会霉菌的一般制作方法。
3.观察并掌握各种霉菌的个体形态及生长繁殖方式。
4.进一步熟悉显微镜的使用。
二.实验原理酵母菌是一类单细胞真菌，一般呈圆形、椭圆形，无性繁殖以芽孢为主，也有少数是裂殖，有些酵母菌能产生囊孢子，有的能形成假菌丝。
酵母菌的菌落似细菌菌落，但较大且厚，多呈白色，少数为红色。
酵母菌在液体中生长可形成菌膜、菌环、沉淀和浑浊。
酵母菌的细菌结构较完善，即有壁、膜、质、核等结构。
酵母菌的细胞形态、繁殖方式和培养特征均为菌种鉴定的依据。
酵母活细胞新陈代谢旺盛，活力强，还原力也强，若无毒的染料进入细胞，既被还原脱色，但死细胞及代谢作用缓慢的老弱细胞无此还原力。
美兰是无毒染料，且能被活细胞还原成无色，故可用来区别细胞的死活。
霉菌是一些小型丝状真菌、单细胞（根霉、毛霉）或多细胞（曲霉、青霉），其细胞结构与酵母类似，同属真核细胞。
霉菌形态较复杂，个体较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。
其菌丝分为气生菌丝与营养菌丝（菌丝比放线菌粗得多）观察时请注意菌丝是否具有横膈膜、有无假根、无性繁殖时形成何种孢子，孢子着生方式以及孢子头的构造等，以区别各种不同霉菌的形态。
实验三、霉菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别
二、基本原理 基本原理
1、酵母菌形态观察和死活细胞鉴别
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物， 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常 见细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母以芽殖 少数以裂殖 见细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母以芽殖、少数以裂殖进 芽殖、 裂殖进 行无性繁殖；有性繁殖则通过结合产生子囊孢子。 子囊孢子。 行无性繁殖；有性繁殖则通过结合产生子囊孢子 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型 氧化型呈蓝色， 无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时， 无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代 谢作用，细胞内具有较强的还原能力， 谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化 型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞 型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无 活细胞是 色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则分别呈蓝色和淡 死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则分别呈蓝色和 或代谢作用微弱的衰老细胞则分别呈蓝色 蓝色。 蓝色。
四、操作步骤
在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液 子挑取少许菌丝， 子挑取少许菌丝，浸于染液中 散开 盖上盖玻片 用镊 用解剖针将菌丝分 用高倍
低倍镜观察
镜观察菌丝局部
操作要点： 操作要点： • 挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态。 挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态。 • 尽可能将菌丝分开，加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。 尽可能将菌丝分开，加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。 • 挑取菌丝前镊子和解剖针要在酒精灯上灼烧灭菌。 挑取菌丝前镊子和解剖针要在酒精灯上灼烧灭菌。
实验三 酵母菌的形态观察及死、 酵母菌的形态观察及死、活细胞 的鉴别和霉菌的形态观察 的鉴别和霉菌的形态观察
实验四四大类微生物菌落及个体形态观察
一、实验目的：
比较四大类微生物菌落特征; 学习自制水浸片观察霉菌的个体形态.
二、实验原理
1、菌落观察
微生物菌落即微生物聚集在一起的群体结构。 在自然界中，我们肉眼所见到的微生物都是以菌 落状态存在，不同种类的微生物有其特定的群体 结构。因此，根据群体结构（菌落特征），我们 可以初步把它们“分门别类”作粗略鉴定。本实 验通过对细菌、放线菌、酵母菌，霉菌等四大类 微生物菌落特征的观察，学习以菌落特征来区分 四大类微生物的基本方法。
③ 培养：将平板倒置，于28℃培养3-5天；
④ 镜检：用镊子小心取出盖玻片，用纸擦去背面培 养物，有菌面朝上放在载玻片上，通过显微镜直接 用低倍镜和高倍镜镜检观察（在盖玻片菌体附着部 位低价0.1%吕氏碱性美蓝染色后观察效果更好）。
（三）霉菌观察方法
制水浸制片观察法：在载玻片上滴加一滴蒸馏水， 用解剖针从生长有霉菌的平板中挑取少量带有孢 子的霉菌菌丝，放入载玻片上的水滴中,盖上盖 玻片（勿使产生气泡，且不要再移动盖玻片）. 标本片制好后，先用低倍镜观察，必要时再换高 倍镜。注意观察菌丝有无隔膜，有无假根、足细 胞等特殊形态的菌丝。注意其无性繁殖器官的形 状和构造，孢子着生的方式和孢子的形态、大小 等。
根霉（Rhizopus)
曲霉(Aspergillus)
青霉（Penicillium)
五、实验作业
（1）参考书本63页表描述细菌、放线菌 和霉菌的菌落形态.
（2）绘出根霉、青霉、曲霉的个体形态 图，并注明各部位名称。
第四组值日生值日
2、放线菌观察
放线菌自然生长的个体形态的观察常用盖 玻片插片培养法。 采用盖玻片插片培养法，能使放线菌生长 在盖玻片上，然后将长菌的盖玻片用镊子 取出，贴放在载玻片上，用显微镜镜检可 见到放线菌自然生长的个体形态。
【初中生物】初中生物知识点：观察菌落
【初中生物】初中生物知识点：观察菌落实验目的：识别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌的菌落特征。
观察实验：一、观察内容：1．观察已知菌的菌落的形态、大小、色泽、透明度、致密度和边缘等特征。
2.根据菌落的形态特征判断未知细菌的类型。
二、实验材料和用具：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、粘红酵母、热带假丝酵母菌、黄色链霉菌、灰色链霉菌、黑曲霉、产黄青霉、葡萄球菌和其他细菌。
牛肉提取物蛋白胨培养基、土豆培养基、高氏1号培养基、无菌水。
接种环、接种针、酒精灯、多套无菌培养皿、电热培养箱。
三、操作步骤（一）已知细菌单菌落的制备1．制备平板将已融化的无菌培养基待冷却至50℃左右，分别制备牛肉膏蛋白胨培养基平板、马铃薯蔗糖培养基平板和高氏1号培养基平板各一皿。
2.制备菌悬液或孢子悬液，向培养的斜管中加入5ml无菌水，制备菌悬液备用。
3．制备单菌落通过平板划线法获得细菌、酵母菌和放线菌的单菌落。
用三点接种法获得霉菌的单菌落。
细菌于37℃恒温培养24～48h，酵母菌于28℃培养2～3d，霉菌和放线菌置28℃培养5～7d，待长成菌落后，仔细观察四大类微生物菌落的形态特征，并将观察结果记录于表中。
（二）未知菌落的制备l．倒平板2.接种可通过土壤爆破法进行。
要点如下：收集校园土壤，风干研磨后，将细土撒在无菌硬木纸表面，先清除纸面浮土，然后打开锅盖，使含土的纸面朝向平板培养基表面，然后用手指轻轻地弹一下硬木纸的背面，接种各种微生物。
3．培养将牛肉膏蛋白胨培养基平板倒置于37℃培养箱中恒温培养2～3d，将马铃薯蔗糖培养基倒置于28℃培养箱中恒温培养3～5d，即可获得未知菌的单菌落。
4.编号从培养的未知平板中选择8个不同的单菌落，逐个编号，根据菌落鉴定要点区分未知菌落群，将判定结果填入表4~2。
(三)直接观察菌落直接用实验3中的“土壤稀释分离”获得的单菌落进行观察识别，并将结果填入表4-2中。
四、注意事项：在观察菌落特征时，选择一个广泛分离的大菌落；已知的殖民地和未知的殖民地应该编号。
04 实验四 放线菌、酵母和霉菌形态的观察
04 实验四放线菌、酵母和霉菌形态的观察实验目的：1. 了解微生物的形态特征。
2. 熟悉显微镜的使用方法，学习普通染色技术。
3. 学习鉴别放线菌、酵母和霉菌的形态特征。
实验材料：1. 盐酸裂解液、甲醛定型液、碘酒、甲基橙、溴酚蓝等。
2. 放线菌、酵母和霉菌的培养物。
实验步骤：1. 取一小块培养物放在玻片上，滴上一滴生理盐水并用小棒子将其研磨均匀。
2. 放线菌培养物制片：将研磨好的放线菌制成薄片，滴上盐酸裂解液使其变成透明，定型液使其固定，并在空气中晾干。
然后，在火上加热定邦，再用碘酒染色，过后清水洗净，醋酸洗净并晾干或用吹风机吹干。
3. 酵母培养物制片：将研磨好的酵母制成薄片，滴上碘酒染色剂染色，过后清水洗净，醋酸洗净，晾干或用吹风机吹干。
4. 霉菌培养物制片：将研磨好的霉菌制成薄片，滴上甲基橙染色剂染色，过后清水洗净，醋酸洗净，晾干或用吹风机吹干。
5. 用显微镜观察制片。
实验结果：放线菌：放线菌为革兰阳性菌，细胞形状呈弯曲的短小棍形，光学显微镜下看到的细胞较长，一般在1-20微米之间，可以分枝，分枝形成的菌丝从外形上呈现出类似于蜘蛛网的形状。
勃林美细胞内有许多成熟的孢子，呈现为典型的链状。
常常在不规则的小菌落或黏液内生长。
酵母菌：酵母细胞直径一般在2-5微米之间，为单细胞生物，在将染好色的玻片放在光学显微镜下很容易看到直径3微米以上的球形，卵圆形等细胞结构，表面光滑。
细胞质软，柔软而透明。
霉菌：霉菌属真菌，具有多种形态，种类繁多，细胞直径1-5微米，长1-10微米，细胞呈现不规则形状，通常形成的是在菌丝基础上聚合并且扩展而成的菌落。
通过本次实验观察和比较放线菌、酵母和霉菌的形态特征，可以得出以下结论：1. 放线菌为分枝杆菌，细胞型态呈弯曲状，外观类似于蜘蛛网。
2. 酵母为单细胞生物，呈圆球形或卵圆形，表面光滑、整齐。
3. 霉菌属于真菌，细胞形态呈现不规则形状。
实验二细菌、放线菌的形态观察
四、实验方法和步骤
3. 气生菌丝、孢子丝的活体观察
将培养皿盖打开，选择菌丝和孢子丝生长较薄的部 位，直接用低倍镜和高倍镜观察。
4．气生菌丝、孢子丝的印片观察
载玻片—滴1滴美兰染液—盖玻片印片—印片面向下 置于美兰中—吸去多余染液—镜检（用油镜观察）— —维护还原显微镜。
五、 思 考 题
1、绘出所观察的几种细菌和放线菌的形态并注 明名称和放大倍数。 2、放线菌菌落和细菌菌落有何不同之处？ 3、放细菌的菌体为何不易挑取？
文档名
THE END!THANK YOU !
四、实验方法和步骤
1、细菌简单染色
取菌（要求无菌操作）—涂片—干燥—固定 —染色（1min）—水洗—干燥—镜检（注意形 状、大小、排列方式）
葡萄球菌
四、实验方法和步骤
2、放线菌菌落 形态观察
（1）表面形状 大小、颜色、边缘 、紧密程度等。
（2）区别营养菌 丝、气生菌丝、孢 子丝
四、实验方法和步骤葡萄球菌、巨大芽孢杆菌、大肠杆菌、 灰色链霉菌等。
2、器材
显微镜、载玻片、盖玻片、接种针、无菌水、 香柏油、碱性染料番红、结晶紫等。
四、实验方法和步骤
1、细菌简单染色
取菌（要求无菌操作）—涂片—干燥—固定 —染色（1min）—水洗—干燥—镜检（注意形 状、大小、排列方式）
二、细菌染色的基本原理
细菌细胞小而透明，在普通光学显微镜 下不易识别，必须对它们进行染色。细菌常 用碱性染料来进行简单染色，这是因为在中 性，碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带 负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染 色部分带正电荷，很容易使细菌结合使菌体 着色，经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明 的对比，在显微镜下更易于识别。
微生物实验思考题参考答案及知识要点
微生物实验思考题参考答案及知识要点一．酵母菌形态观察及死活细胞鉴别1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响?是分析其原因。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变成为无色的还原型。
因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
美蓝浓度高了，代谢不太活跃的活细胞也会被染色，从而使观察到的死细胞较多，活细胞较少；反之，则代谢微弱的细胞也能还原美蓝，不被染色，从而使观察到的死细胞较少，活细胞较多。
二. 细菌的简单染色和革兰氏染色1. 革兰氏染色中那一步是关键?为什么？你是如何操作的？革兰氏染色的关键步骤是：乙醇脱色（是脱色时间）。
如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短还受涂片的厚薄，脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响，难以严格规定（脱色是应当控制速度，脱色时间一般为20—30s）。
2. 固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同？自然死亡的菌体本身已经部分自溶，结构已经改变。
固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。
3. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？能。
在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋），被酒精脱色为革兰氏阴性菌。
最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。
4. 涂片为什么要固定，固定适应注意什么问题？a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上；b 增加其对染料的亲和力。
固定时应注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火过3次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜），固定时应尽可能维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。
三. 霉菌、放线菌的形态观察1. 镜检时，如何区分基内菌丝与气生菌丝？一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可看到横隔膜，继而断裂成球状或杆状小体。
实验二、细菌革蓝氏染色、放线菌形态观察
印片法：取一洁净载玻片置于火焰上微热后，盖在菌苔
上，轻轻按压，使培养物（气丝、孢子丝或孢固定。
上：孢子丝
右上、右下：基内菌丝 和气生菌丝
2. 结果 革蓝氏染色阳性：深紫色 革蓝氏染色阴性：浅红色
3. 放线菌的观察
基内菌丝（substrate mycelium）：也称营养菌丝，生长于培养基内，主
要功能是吸收营养物质和排泄代谢废物，营养菌丝一般无隔膜，内含有许多核质体， 直径约为0.2-0.8μm，但长度差别很大。色浅、较细。
气生菌丝（aerial mycelium）：营养菌丝发育到一定时期，长出培养基外伸
实验二、细菌革蓝氏染色、放线菌形态观察
基本概念： 革蓝氏染色（Gram staining） 革蓝氏染色阳性（Gram Positive） 革蓝氏染色阴性（Gram Negative） 基内菌丝（substrate mycelium） 气生菌丝（aerial mycelium） 孢子丝（sporophore）
放线菌的基本特点
¾分枝丝状体，原核微生物 ¾革蓝氏染色阳性反应 ¾不运动 ¾大部分腐生菌，少数寄生菌，也有致病菌 ¾ 抗生素的主要产生菌 ¾ 许多酶和维生素的产生菌 ¾甾体转化、石油脱蜡、污水处理 ¾某些与植物共生固氮
放线菌的菌丝
1、营养菌丝 匍匐生长于培养基内，吸收营养，也称基内菌丝。一般无
隔膜，直径0.2-0.8 μm，长度差别很大，有的可产生色素。
[实验目的]
1. 学习细菌革兰氏染色原理和方法 2. 学习放线菌培养观察方法 3. 观察细菌形态及运动（活体观察）
[实验材料] 1. 菌种
实验二土壤中微生物的分离纯化及观察
实验结果
➢ 详细描述实验中各种微生物在斜面上、半固体和液体 培养基中的培养特征。
思考题
➢ 一个好氧的具周生鞭毛的菌株分别在斜面、半固体和 液体培养基中的培养特征。
➢ 用斜面检测微生物的培养特征接种时，为什么不要划 多条线或蛇形，而只要划一条直线？
➢ 接种环（针）接种前后灼烧的目的是什么？为什么在 接种前一定要将其冷却？如何判断灼烧过的接种环已 冷却？
法和步骤； ➢ 掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方
法。
培养基的种类
➢ 按成分不同分 天然培养基 合成培养基 半合成培养基
➢ 按培养基的物理状态分 固体培养基 半固体培养基 液体培养基
➢ 按培养基的用途分 基础培养基 营养培养基 鉴别培养基 选择培养基
培养基的配制方法和步骤
➢ 称量：按照配方正确称取各种原料置于搪瓷杯中； ➢ 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解，补足水
（使样品中的微生物细胞充分分散，成单个细胞存 在），再取一定量的稀释液接种，使其均匀分布于培 养皿中特定的选择性培养基内，最后根据在平板上长 出的菌落数计算出每克或每毫升样品中的微生物数量。
实验器材 ➢ 土壤稀释液的三种不同培养基的培养平板 ➢ 菌种：大肠杆菌菌悬液 ➢ 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基 ➢ 仪器或其他用具：1mL无菌吸管，无菌平皿，盛有
灭菌
干热灭菌 ➢ 火焰灼烧法 ➢ 干热灭菌法（烘箱内热空气灭菌法） 湿热灭菌法 ➢ 加压蒸汽灭菌法 紫外线灭菌法 微孔滤膜过滤除菌
火焰灼烧法
直接在火焰上灼烧灭菌 主要用于实验室接种针(环)、试管口、三角瓶口和金属小 工具等的灭菌。
干热灭菌法
设备：电热烘箱 适用于耐高温器皿，160-170℃，维持2小时 注意事项：