微生物数量测定
微生物数量检查方法及其验证报告(修改)
微生物数量检查方法及其验证报告(修改)引言本报告旨在介绍微生物数量检查方法及其验证过程。
微生物数量检查是确定产品或样品中微生物数目的重要步骤，对于保证产品质量和安全至关重要。
本报告将详细描述常用的微生物数量检查方法以及相应的验证过程。
微生物数量检查方法1. 蓝斯菌落计数法（LBC法）蓝斯菌落计数法是一种常用的微生物数量检查方法，特点是操作简单、成本低廉。
该方法主要通过将待测样品均匀涂布在琼脂平板上，培养并计算形成的菌落数量来确定微生物的数量。
2. 膜过滤法膜过滤法是另一种常用的微生物数量检查方法，适用于水样等液体样品。
该方法通过将待测样品通过微孔膜过滤器，将微生物捕获在膜上，然后将膜放置在固定培养基上进行培养，最后统计菌落数量来确定微生物的数量。
3. 流式细胞术流式细胞术是一种现代化的微生物数量检查方法，能够快速准确地测定微生物数量。
该方法通过将待测样品与荧光染色剂结合，利用流式细胞仪进行检测，并通过计算机软件进行数据分析，得出微生物数量的结果。
微生物数量检查方法验证为了保证微生物数量检查方法的准确性和可靠性，在使用前需要对其进行验证。
以下是一些常用的验证项目：1. 精密度：通过重复测试同一样品，验证方法的重复性和一致性。
2. 线性：通过测试不同浓度的微生物样品，验证方法的线性关系。
3. 灵敏度：通过测试不同浓度的微生物样品，确定方法的检测限和灵敏度。
4. 特异性：通过测试不同微生物种类的样品，验证方法对于特定微生物的识别和检测能力。
验证过程应严格按照相关规章制度进行，并记录所有实验结果和分析。
结论微生物数量检查方法是保证产品质量和安全的重要步骤。
本报告介绍了蓝斯菌落计数法、膜过滤法和流式细胞术作为常用的微生物数量检查方法，并介绍了相关的验证项目。
通过严格进行方法的验证，可以保证微生物数量检查结果的准确性和可靠性。
中国药典中对微生物的测定
中国药典中对微生物的测定
中国药典对微生物的测定包括以下方面：
1. 菌落总数测定：该方法用于测定制剂和原料药中的菌落总数。
通过将样品接种在特定的培养基上，培养一定时间后，进行菌落计数，计算出单位重量或单位体积中的菌落总数。
2. 大肠菌群测定：该方法用于测定制剂和原料药中的大肠菌群的数量。
通过将样品接种在含有特定抑制剂的培养基上，培养一定时间后，进行菌落计数，计算出单位重量或单位体积中的大肠菌群数量。
3. 霉菌测定：该方法用于测定制剂和原料药中的霉菌的数量。
通过将样品接种在含有特定抑制剂的培养基上，培养一定时间后，进行菌落计数，计算出单位重量或单位体积中的霉菌数量。
4. 周赤霉糖的测定：该方法用于测定制剂和原料药中的周赤霉糖的含量。
通过将样品提取，使用特定试剂反应后，测定反应产物的吸光度，通过比对标准曲线计算出样品中的周赤霉糖含量。
5. 大肠杆菌测定：该方法用于测定制剂和原料药中的大肠杆菌的数量。
通过将样品的提取液接种在含有特定抑制剂的培养基上，培养一定时间后，进行菌落计数，计算出单位重量或单位体积中的大肠杆菌数量。
以上是中国药典对微生物测定的一些常见方法，用于评估药品和药物原料的微生物质量。
【实验】测定土壤中微生物的数量
[三]微生物的培养与观察
不同菌落的鉴定指标：菌落的形状、大小、 隆起程度、颜色等。
（二）统计菌落数目
每克样品中的菌株数致 C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积（ml) M：稀释倍数
为了测定微生物的数量，接种时应采用_稀__释__涂__布__平__板___ 法，某同学在4个培养基上分别接种稀释倍数为106的土 壤样液0.1 mL，培养后菌落数分别为180、155、176、 129个，则原土壤样液中上述微生物的含量为 __1_.6_×__1_0_9_个__/m__L_______，测定的活菌数比实际活菌数 ____低____(填“低”“高”“基本一致”)。
（1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌； （2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。
尿素分子的立体结构
（一）筛选菌株
美国微生物学科布鲁克1966 年发现耐热细菌，从水生耐 热细菌Taq得到耐高温的Taq DNA聚合酶。
一、研究思路
(一)筛选菌种
1 实例：耐高温的DNA聚合酶
PCR技术：要求使用耐高温（930C） 的DNA聚合酶。
稀释度（倍）
106
107
108
平板
1 2 3 12 3 1 2 3
平板菌落数（个） 432 421 445 78 67 74 9 6 8
涂布时应当在酒精灯火焰旁 附近操作，为了保证结果准确，应选 择上述稀释度为 107 倍的平板菌落数作为统计结果，原因是 计数平板的菌落数 ，计算出样品中每毫升乳酸菌数为7.3×。109 量范围为30~300
（1）样品稀释：先将样品稀释10倍，可用无菌移液管吸取25mL 酸奶样品加入盛有 225 mL无菌水的三角瓶中，使样品与水充分混 匀。然后进行系列稀释操作，得到稀释至106、107、108倍的样品。 （2）培养与统计：吸取不同稀释度的样品各1mL，分别置于不同
实验五微生物数量和大小测定霉菌的观察
01
镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将l mm等分为100格，每格长0.01 mm(即10 um) ，用于校正目镜测微尺每格的相对长度。
02
目镜测微尺是一块中央有精确的等分刻度的圆形小玻片，置于接目镜中的隔板上。目镜测微尺每小格所代表的实际长度不一样，测量前，必须先用镜台测微尺进行校正。
2、细胞大小的测量
1、目镜测微尺的校正
镜台测微尺有刻度的一面朝上，置显微镜载物台上，先在低倍镜下，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央。转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行。利用移动器移动镜台测微尺，使两尺在某一区域内两线完全重合，分别数出两重合线之间镜台微尺和目镜微尺所占的格数。计算10x、40x 、油镜下目镜测微尺的校正值。 目镜测微尺每格长度（um）＝两重合线间镜台测微尺格数×10/两重合线间目镜测微尺格数
主要观察黑曲霉菌丝分生孢子着生情况（辨认顶囊、分生孢子梗、足细胞和分生孢子）
绘制青霉（40x）、黑曲霉（40x）的形态，注明各部分名称。
1
你主要根据哪些形态特征来区分上述霉菌?
2
六、思考题
五、实验结果
目镜测微尺 镜台测微尺 利用镜台测微尺测定目镜测微尺的每格绝对值 目镜测微尺测定微生物大小
1、菌种：
酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ）
显微镜、镜台测微尺、目镜测微尺
2、器材：
三、实验器材
酵母菌悬液滴在载玻片上，盖上盖玻片，置显微镜载物台上。用目镜测微尺测量细胞宽和长。
在10×和40×下找到计数室。
盖上盖玻片将摇匀的酿酒酵母菌（或大肠杆菌）悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室。如滴入过多，溢出并流入两侧槽内，使盖玻片浮起，体积改变，会影响计数结果，需用滤纸把多余的溶液吸出，以槽内没有溶液为宜。如滴入溶液过少，经多次充液，易产生气泡，应洗净计数室，干活的和已丧失活力的细菌）
微生物实验五微生物数量的测定
1、明确血球计数板计数的原理 2、掌握测定酵母细胞总数、出芽率和死亡率的技术
二、实验原理
镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮 液，如有杂菌或杂质常不易分辨。菌体较大的酵母菌 或霉菌泡子可采用血球计数板；一般细菌则采用彼得 罗夫·霍泽(Petroff Hausser)细菌计数板。两种计数板 的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用 油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，故细 菌不易看清。
二、实验原理
血球计数板是一块特制的厚载玻片，载玻片上有4条槽 而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分 隔成两半，每个半边上面各有一个方格网。每个方格网共 分9大格，其中间的一大格(又称为计数室)常被用作微生物 的计数。计数室的刻度有两种：一种是大方格分为16个中 方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大 方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。 但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同特点， 即每个大方格都由400个小方格组成。
3、加样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴
管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘让菌液沿缝隙靠毛细渗透 作用自动进入计数室，用吸水纸吸去多余菌液。样品要均 匀充满计数室，不可有气泡。
4、显微镜计数 加样后静止5min，然后将血球计数板置于显微镜载物台
上，先用低倍物镜寻找计数室的位置，然后换成高倍物镜 （40倍）进行计数。显微镜视野中的光线要暗一些，否则， 不容易看清计数室的方格线。计数时，对位于线上的酵母 菌，可采取只计数两条边的办法，即遵循查上不查下，查 左不查右的原则。当酵母菌芽体达到母细胞大小1/2时， 即可计作两个细胞。
死细胞数
死亡率=
×100%
土壤微生物生物量测定方法
土壤微生物生物量测定方法
土壤微生物生物量的测定方法有很多种，一般可以分为直接和间接测定方法。
直接测定方法包括：
1. 水解法：将土壤样品经过水解处理，然后通过高密度离心和显微镜观察计数获得微生物生物量。
2. 利用滴定法：通过向土壤中添加抑制剂或适宜的滴定液，测定细菌和真菌的数量以确定生物量。
3. 融解法：将土壤样品与溶解剂混合，在特定温度下溶解土壤中的微生物，然后通过测定溶液中的生物量来计算土壤中的微生物生物量。
间接测定方法包括：
1. 培养基测定法：将土壤样品接种到特定的培养基中，利用培养基中微生物生长所需的营养物质来测定微生物生物量。
2. 脂肪酸测定法：通过提取土壤样品中的脂肪酸，并利用气相色谱仪测定来确定微生物的生物量。
3. 磷脂酸测定法：通过提取土壤中的磷脂酸，并利用色谱或质谱仪测定磷脂酸来估计微生物生物量。
这些方法各有优缺点，选择适合的方法需要考虑实验条件、样品处理的方便程度
和测定结果的准确性。
土壤微生物生物量的测定方法
土壤微生物生物量的测定方法1.直接计数法：直接计数法是通过显微镜观察土壤样品中微生物数量来测定土壤微生物生物量。
常用的直接计数法包括滴定法、薄层计数法和电镜计数法。
滴定法是将土壤样品溶解后，通过滴定法来计数微生物细胞的数量。
滴定法主要包括用荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）作为参比菌，将细菌与土壤样品混合，经一系列稀释后进行滴定。
通过观察滴定液中菌落的数量，可以推算出原始土壤样品中微生物的生物量。
薄层计数法是将土壤样品制成薄层，然后在显微镜下进行计数。
这种方法可以直接观察微生物的形态特征，通过计算单位面积上微生物的数量来估算微生物生物量。
电镜计数法是利用电镜的高分辨率特性，观察土壤样品中微生物的形态和数量。
这种方法可以观察到更小的微生物和微生物的形态细节，但是操作复杂，成本较高。
2.间接测定法：间接测定法通过测定土壤中微生物活性代谢产物来估算微生物生物量。
常用的间接测定法包括ATP测定法、细胞膜脂肪酸测定法和氮素代谢产物测定法等。
ATP测定法是通过测定土壤中的三磷酸腺苷(ATP)含量来估算微生物生物量。
微生物的ATP含量与其生物量有一定的关系，因此可以通过测定ATP含量来间接估算土壤微生物生物量。
细胞膜脂肪酸测定法是通过测定土壤样品中微生物细胞膜中的脂肪酸含量来估算微生物生物量。
微生物细胞膜中的脂肪酸种类和含量与微生物群落的组成和数量有关，因此可以通过测定脂肪酸的含量来间接估算微生物生物量。
氮素代谢产物测定法是通过测定土壤样品中微生物氮素代谢产物的含量来估算微生物生物量。
微生物的氮素代谢活动与其生物量有关，因此可以通过测定氮素代谢产物的含量来间接估算微生物生物量。
3.分子生物学方法：分子生物学方法是利用PCR技术对土壤样品中微生物的DNA或RNA进行扩增和测定来估算微生物生物量。
常用的分子生物学方法包括引物扩增法、荧光原位杂交法和高通量测序法等。
引物扩增法是通过设计特定的引物对微生物的DNA或RNA进行扩增，并通过PCR反应的产物数量来估算微生物生物量。
微生物的生长量的测定方法
实验误差分析
误差来源
01
分析实验过程中可能出现的误差来源，如样品采集、培养条件
控制、测定方法等。
误差控制
02
采取有效措施，如使用标准品、进行重复实验等，减小误差对
实验结果的影响。
误差评估
03
对实验误差进行评估，了解误差对实验结果的影响程度，提高
实验的准确性和可靠性。
THANKS
感谢观看
显微镜直接计数法
总结词
显微镜直接计数法是通过显微镜观察微生物细胞并计数来测定微生物生长量的 方法。
详细描述
该方法通过显微镜观察微生物细胞，利用血球计数板或细胞计数板进行计数， 根据计数结果计算微生物生长量。该方法适用于各种生长阶段的微生物生长量 测定，但操作较为繁琐，需要一定的技术要求。
流式细胞计数法
菌落计数法
总结词
菌落计数法是一种通过培养微生物并计数菌落数量来测定微生物生长量的方法。
详细描述
该方法通过将微生物接种在固体培养基上，经过一定时间的培养，微生物繁殖形成肉眼可见的菌落，然后通过计 数菌落的数量来推算原始接种的微生物数量。该方法适用于对数生长期的微生物生长量测定，具有操作简单、直 观的优点。
通过测量与微生物生长相关的生理指 标来间接评估微生物的生长量。
详细描述
生理指标法包括测量细胞密度、细胞 形态、细胞代谢产物等，这些指标的 变化与微生物的生长状态密切相关， 可以间接反映微生物的生长量。
比浊法
总结词
利用微生物悬液的光学性质来测量其浓度，从而评估微生物的生长量。
详细描述
比浊法是通过测量微生物悬液的光密度来计算微生物的浓度。在一定波长下，光 密度与微生物浓度呈线性关系，因此可以用来评估微生物的生长量。该方法操作 简便、快速，适用于大量样本的快速检测。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
《环境微生物新技术》课程作业2.微生物数量测定方法有哪些？空气、水、土壤样品分别适用哪些方法？请举例说明。
常见微生物数量的测定方法<1>1.计数器测定法：即用血细胞计数器进行计数。
取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。
由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。
本法简便易行，可立即得出结果。
本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
2、电子计数器计数法:电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。
该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。
因此，要求菌悬液中不含任何碎片。
3、活细胞计数法 :常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。
取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出活菌数。
此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。
使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。
广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。
4、比浊法比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。
细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。
5、测定细胞重量法此法分为湿重法和干重法。
湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。
此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。
6、测定细胞总氮量或总碳量氮、碳是细胞的主要成分，含量较稳定，测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量。
此法适于细胞浓度较高的样品。
7、颜色改变单位法（colour change unit,简称CCU）通常用于很小，用一般的比浊法无法计数的微生物，比如支原体等，因为支原体的液体培养物是完全透明的，呈现为清亮透明红色，因此无法用比浊法来计数，由于支原体固体培养很困难，用cfu法也不容易计数，因此需要用特殊的计数方法，即CCU法。
它是以微生物在培养基中的代谢活力为指标，来计数微生物的相对含量的，下面以解脲脲原体为例单介绍其操作：（1）取12只无菌试管，每一管装1.8ml解脲脲原体培养基。
（2）在第一管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液，充分混匀，从中吸取0.2ml加入第二管，依次类推，10倍梯度稀释，一直到最末一管（3）于37度培养，以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU，也就是支原体的最大代谢活力，比如第六管出现颜色改变，他的相对浓度就是10的6次方CCU/ml.取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数或做片在显微镜下数，均称为显微镜直接计数法。
用琼脂平板计数，称为菌落计数法。
一般来说，比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数，但是对支原体这样比较特殊的微生物，用CCU法比较合适。
<2>微生物主要包括原核微生物、真核微生物、病毒等三大类，由于多数微生物的个体较小，肉眼无法观察，对其计数一般比较困难。
在目前的微生物实验教学,对微生物计数的方法主要有三大类：总细胞计数法、活细胞计数法和微生物生长量测定法。
并不是每一种方法都是通用的,不同的微生物种类需要不同的计数方法, 目前多用以下8种方法进行计数：1.总细胞计数法1.1 血细胞计数板计数法血细胞计数板是一块特制的载玻片,其上划有计数室,通过对计数室中的微生物数量的读取,计算原溶液中的微生物数量。
此方法由于计数板较厚,且计数室的高度是0.1mm ,不能采用油镜进行观察,故只能对体积较大的真核微生物进行测定,如酵母菌、霉菌抱子等,只能测得所有细胞的总数,不能区别死细胞和活细胞,尤其是对运动能力强的活细胞难以计数。
目前已经提出一些方法,如结合特定的美蓝染色技术,区别酵母菌死活细胞,将运动的细胞加人甲醛溶液中,破坏其运动以便计数等。
1.2 细菌计数板计数法细菌计数板是在血细胞计数板的基础上改进而来,主要是降低计数板的厚度,同时将计数室的高度从0.1mm 降低到0.02mm ,以用油镜对较小的原核微生物进行计数。
1.3 膜过滤计数法利用计数板对高浓度的菌液测定比较准确,但当样品中细菌的数量很低时,如湖水、海水或饮用水等,用膜过滤计数法更精确些,可以将一定体积样品溶液加结晶紫染色,再用0.02um的聚偏二氟乙烯膜负压过滤,再用无菌水冲洗至无色后,将过滤的膜进行抽干,将膜放到载玻片上,滴加甘油,盖上盖玻片,即可在显微镜下计数。
一般随机抽取20个视野进行计数,最后算平均数,计算整个滤膜上的菌的数量,得到原菌液中的微生物数量。
此测定方法一般只能用于样品中细菌数量很低的情况,多数时候细菌个体由于粘附成团而影响结果。
所以,过滤前的细胞分散处理很重要,例如将细菌悬液经过酸碱或超声波处理,将聚团的细胞打散, 可以增加此方法的准确性。
2.活细胞计数法2.1 平板菌落计数法平板菌落计数法只能用于测定活细胞的数量,但是操作过程相对计数板而言复杂一些,而且测得的细菌数量往往小于实际值。
主要原因是在计算细菌浓度时,往往每个菌落并不一定是由一个单细胞生长繁殖而来,有可能是2个或多个,致使结果比实际菌液样品中的细菌数量低,这也就是为什么现在都用菌落形成单位数（cfu/mL）来取代过去的绝对细菌数量。
为了使菌落数更接近实际菌液中细菌的数量值, 目前多数办法是:尽量扩大稀释倍数,涂布平板时少取稀释菌液,使平板中的菌落数减少,避免由于菌液中细菌数过多造成多个细菌形成一个菌落。
例如,将系列梯度稀释至10-8或更低(稀释倍数取决于原菌液)。
2.2 比浊法微生物细胞在一定浓度范围内,与浊度成正比,即与光密度成正比,菌越多,光密度越大。
故可通过分光光度计测定吸光值,通常测定600nm下的吸光值OD600 ,通过与标准曲线对比,求出样品中菌液浓度,计算出细胞的数量。
实验测定时容易出现误差,必须控制菌浓度在与光密度成正比的线性范围内,否则不准确。
2.3 霉菌计数法对于霉菌的计数一般比较困难, 由于霉菌生长快、菌丝叠加导致无法准确计数。
国标霉菌计数法的原理是将待测菌液进行10倍梯度系列稀释,利用高盐察氏培养基(CAO)与待测菌液混匀后倒平板,25℃~28(土1) ℃下培养3d后开始计数,选择菌落数在10－150之间的平板进行计数,取同稀释度的两个平板的菌落平均数乘以稀释倍数, 即为每g(或ml)检样中所含霉菌数。
3.微生物生长量测定法3.1 凯氏定氮计数法蛋白质是微生物细胞的主要成分,含量较稳定,可以通过测定样品中含量稳定的蛋白质的量计算细菌的数量,将细胞洗涤收集,用凯氏定氮法测全氮,蛋白质含氮量为16%,细菌中蛋白质含量因种类的不同而有差别,平均值为65%, 根据每一种微生物细胞内的蛋白质总含量可以计算出待侧样品中细胞的总质量,最后根据单个细胞的质量计算出样品的细胞数量。
总含氮量与蛋白质之间的关系为：蛋白质总量=含氮量÷16% ,那么,微生物细胞总质量=蛋白质总量÷65%，微生物细胞总数=细胞总质量÷单个细胞质量。
每一种微生物细胞的蛋白质含量不同,且不同时期的细胞蛋白质含量、单个细胞的质量都有差别,所以用此方法测定的结果误差较大,只能作为参考。
3.2 DNA含量测定法相比凯氏定氮计数法较大误差，DNA含量测定法相对较准确。
每个微生物细胞的DNA含量非常恒定,平均为8.4×10-5ng ,将一定体积的细菌悬液离心,从细菌细胞中提取DNA , 得其重量,则可计算出这一定体积的细菌悬液所含的细菌总数。
总结：本文对常用的8种微生物数量测定方法进行总结与比较,血细胞计数板和细菌计数板常用于测定单细胞或孢子,相对比较准确；膜过滤用于测定细胞浓度很低的样品,平板菌落计数对多数微生物的测定都适用,但是相对其他计数法要复杂；比浊法相对准确,但需要标准曲线；对于丝状微生物的数量测定, 国际上有明确的标准，而凯氏定氮法和DNA含量测定法都是通过对微生物细胞内含量相对稳定的物质进行定量测定, 再算出细胞的数量,操作相对复杂。
环境中的微生物数量测定方法一、空气中：空气中没有可为微生物直接利用的营养物质和足够的水分，它不是微生物生长繁殖的天然环境，因此空气中没有固定的微生物种类。
它主要通过土壤尘埃、小水滴、人和动物体表的干燥脱落物、呼吸道的排泄物等方式被带入空气。
由于微生物能产生各种休眠体，故可在空气中存活相当长的时期而不至死亡。
空气中微生物的种类，主要为真菌和细菌。
其数量则取决于所处的环境和飞扬的尘埃量。
1.自然沉降法（沉降平板法）根据空气中携有微生物气溶胶粒子在地心引力作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上，经24h,37℃温箱培养计算菌落数。
根据奥梅梁斯基建议，面积为100cm2的平板培养基，暴露于空气中5min,于37℃温箱培养24h后所生长的菌落数相当于10L空气中的细菌数。
空气中的细菌数（cfu/m3）=1000×{（100/A）×(5/t)×(1/10)}×N=50000N/(A×T)A----平板面积cm2；T----暴露时间min；N----平均菌落数(cfu/皿) 特点：简单方便，但稳定性差，直径1~5um的粒子在5min内沉降距离有限，使小粒子采集效率低。
2.撞击法Anderson采样器原理：多级筛孔型采样器由6个带有微细针孔的金属撞击盘构成，盘下放置有培养基的平皿，每个圆盘上有400个环形排列小孔，由上到下孔径逐渐减小。
气流从顶罩进第一级，较小的粒子会由于动量不足随气流绕过平皿进入下一级。
经6次撞击后，可把绝大部分的微生物采集下。
空气含菌量(cfu/m3)=【六级采样板的总菌数(cfu)÷28.3(L/min)×采样时间(min)】×1000特点：a.采集粒谱范围广，一般在0.2~20um以上；b.采集效率高，逃逸少；c.微生物存活率高。
3.过滤法使一定量的空气通过吸附剂（灭菌生理盐水），然后培养吸附剂中的细菌，计算出菌落数。
4.液体撞击法和固体撞击式采样器一样，是利用喷射气流方式将空气中的微生物粒子采集到小体积液体中，适用于高浓度的空气微生物采样。