活菌计数法
活菌数的测定方法
活菌数的测定方法
一、直接计数法：
1.显微镜计数法：将样品通过适当稀释后涂布在平板上，然后在显微
镜下直接观察，将显示出的活菌数量进行计数。
2.罗氏计数室法：将适当稀释后的样品放在罗氏计数室中，通过显微
镜下观察菌落数并计数，然后根据稀释倍数计算活菌数。
3.涂布法：将稀释后的样品均匀涂布在琼脂平板上，在适宜温度下培
养一段时间，然后观察并计算菌落的数量。
二、间接计数法：
1.白细胞计数法：用白细胞计数板进行白细胞计数，由于白细胞数与
活菌数有一定的相关性，可以通过白细胞计数的结果进行推算。
2.生物标志物法：通过检测样品中特定的生物标志物，如ATP、葡萄
糖等，间接反映出活菌的数量。
3.代谢产物测定法：通过测定样品中的代谢产物（如氧气消耗量、二
氧化碳产生量等），间接推测出活菌的数量。
以上是常见的活菌数测定方法，不同的方法适用于不同的实际应用场景。
在选择测定方法时，需要考虑样品类型、检测目的、测定时间和精确
度等因素。
另外，为了提高测定结果的准确性，还需要严格控制实验条件，如温度、湿度、培养时间等。
最后，需要注意的是，活菌数的测定方法只能提供大致数量，无法直
接得到准确的数值。
因此，在进行活菌数测定时，需要结合其他的检测方
法和数据进行综合分析。
细菌计数简述
细菌计数【目的要求】1、掌握倾注培养法、活菌计数法和光电比浊计数法。
2、熟悉菌落形成单位（cfu）含义。
【器材和试剂】1、器材无菌平皿（直径90mm）、孵育箱、水浴箱、菌落计数仪、无菌刻度吸管、灭菌空试管、坐标纸。
2、培养基普通营养琼脂（每支15ml）、液体培养基。
3、其他待检样品，如饮用水、饮料、食品、药品、化妆品等。
【步骤和方法】1、倾注培养和活菌计数（1）按食品微生物学检验和医药化妆品检验国家标准（GB）的要求处理样品，如固体标本用无菌研钵研碎制成匀浆、油脂类物品用分散剂Tween-80、医药标本宜加入消除药物作用的中和剂等。
所有操作过程必须严格无菌，防止污染。
（2）将标本用无菌生理盐水按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5梯度稀释。
（3）取不同稀释度液体1ml注于直径90mm的无菌平皿，迅速加入已熔化并冷却至50℃的营养琼脂15ml，立即在平面上向同一方向平稳转动，使之混匀，待凝固后翻转平板。
一个稀释度接种两个平板。
（4）置35℃孵育18~24h，计数菌落形成单位（colony forming unit，cfu），求出每毫升或每克标本中所含活菌数。
1ml标本中活菌数=全平板cfu×稀释倍数（5）菌落计数方法：1）平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要使用放大镜检查，以防遗漏。
记下各平板上的菌落数后，应求出同一稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。
2）在求同一稀释度的平均数时，若其中一个平板有较大片状菌落时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。
3）若片状菌落不足平板一半，而其余一半中菌落数分布均匀，则计数后乘2代表全平板菌落数，然后再求该稀释度的平均菌落数。
（6）不同稀释度平均菌落数的确认：1）平均菌落数在30~300之间：①若两个稀释度的比值＜2，报告两个稀释度的平均菌落数，如表1-3-1例2；若比值≥2，应报告两个稀释度中较大菌落数者，如表1-3-1例3、例4.②当只有一个稀释度的平均菌落数在30~300之间时，即以该平均菌落数乘以稀释倍数报告之，如表1-3-1例1。
微生物活菌计数方法
杂菌数 亿/g
细菌杂菌 (亿 / g ) 10 8 19 .3 10 4
100 0.19 10 .10 0.1
重复 1 2 3 菌落 平均数
稀释倍数 （霉菌在马丁培养基 上） 103 104 105 6 / / 7 / / 8 / / 7.0 /
3
/
霉菌数 个/g 0.69×106
两个稀 释倍数 度菌落 数之比 / / / 1.1 2.5 / /
菌数 亿 /g,mL 25.3 3.2 0.38 0.30 / 0.032 0.015
无法数 无法数 无法数 313 289 无法数 32 15 315 38 32 136 5 3
3.2 标准差
标准差(Standard Deviation) ：各数据偏离平均数的距离 （离均差）的平均数，它是离差平方和平均后的方根。用δ表 示。标准差体现随机变量取值与其期望值的偏差。 标准 NY411-2000 固氮菌肥料的7.2.6.2。
浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正 比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表 示样品菌液浓度。根据浊度计算出细菌的数量。该方法一 般可以估计出细菌的数量级。
经常用于一些特殊的微生物的快速计数，如光合细菌和
藻类的测数。但是由于该方法仅能估测菌数，不能准确定 量，而且由于一些颗粒和添加剂的作用，不能正确反映该 样品的质量，所以在质检过程中不予采用。
微生物活菌平板计数方法和技术
微生物肥料和食用菌菌种质检中心 曹凤明
微生物计数方法种类
1. 2. 3.
直接计数法 核酸计数法 活菌计数法（培养法）
MPN（Most-Probable-Number ）最大可能数法 混菌法 平板技术法
活菌计数实验报告稀释蜂蜜
活菌计数实验报告稀释蜂蜜
1、直接计数法：
这是一种非常简单的检测方法，我们可以利用计数板或计数仪直接得出活菌数目。
2、活菌稀释蜂蜜计数板：
首先制备活菌悬液，蜂蜜取一定体积的样品活菌悬液置于活菌计数板的计数池内，用显微镜观察计数。
根据计数室刻度内的活菌数，计算样品中的含菌数。
特点：所需设备简单，测定结果较准确，可迅速得到结果，而且在计数的同时能观察到所研究微生物的形态特征。
不能区分是否为活菌，不能区分活活菌和死活菌。
单位：个/mL计算方法：
（1）25×16的计数板：
每毫升活菌数量=（100小格内的细胞数/100）×400×1000×稀释倍数。
（2）16×25的计数板：
每毫升活菌数量=（80小格内的细胞数/80）×400×1000×稀释倍数。
3、电子计数器计数法：
电子计数器也属于直接计数法，其工作原理类似于血细胞分析仪，测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个活菌，当一个活菌通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在
电子记录装置上。
计数单位：x个/mL。
特点：该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为活菌。
因此，要求菌悬液中不含任何碎片。
微生物生长的测定方法
微生物生长的测定方法作者：刘华来源：《神州·下旬刊》2013年第02期摘要：微生物生长情况可以通过测定单位时间里微生物数量或生物量（biomass）的变化来评价。
通过微生物生长的测定可以客观地评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响，或评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制（或杀死）作用的效果，或客观地反映微生物生长的规律。
因此微生物生长的测量在理论上和实践上有着重要的意义。
关键词：微生物测定方法计数法生理指标法微生物生长的测定有计数、重量和生理指标等方法。
1、计数法此法通常用来测定样品中所含细菌、孢子、酵母菌等单细胞微生物的数量。
计数法又分为直接计数和间接计数两类。
⑴直接计数这类方法是利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
此法的缺点不能区分死菌与活菌。
计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积l mm2和高0.1mm的计数室，在1mm2的面积里又被刻划成25个（或16个）中格，每个中格进—步划分成16个（或25个）小格，但计数室都是由400个小格组成。
将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计算4-5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按下面公式求出每毫升样品所含的细菌数。
每毫升原液所含细菌数=每小格平均细菌数×400×l000×稀释倍数⑵间接计数法此法又称活菌计数法，其原理是每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。
将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.2ml 故人无菌平皿，再倒人适量的已熔化并冷至45℃左右的培养基，与菌液混匀，冷却、待凝固后，放人适宜温度的培养箱或温室培养，长出菌落后，计数，按下面公式计算出原菌液的含菌数：每毫升原菌液活菌数=同一稀释度三个以上重复平皿菌落平均数×稀释倍数×5此法可因操作不熟练造成污染，或因培养基温度过高损伤细胞等原因造成结果不稳定。
活菌计数操作方法
活菌计数操作方法
活菌计数是一种用于确定样品中活着的微生物数量的技术。
下面是一种常见的活菌计数操作方法：
1. 准备培养基：选择适当的培养基，根据需要添加适当的营养物质和抑制微生物生长的物质。
2. 取样：从样品中取一定量的液体或固体样品。
对于液体样品，可以直接取样；对于固体样品，需要将其加入适量的缓冲液中进行均匀分散。
3. 稀释：将取样的液体稀释为一系列不同浓度的溶液。
这样做是为了确保培养基中的微生物数量处于可计数范围内。
4. 接种：将已稀释的样品溶液分别加入培养皿或培养瓶中，然后将培养皿或培养瓶密封。
5. 培养：将密封的培养皿或培养瓶放置在适当的温度和湿度下进行培养。
不同的微生物需要不同的温度和环境条件。
6. 计数：在培养一定时间后，使用显微镜或其他计数装置进行活菌的观察和计数。
活菌通常会产生可见的生长。
7. 计算：根据每个培养皿或培养瓶中观察到的活菌数量，结合稀释倍数和取样量，计算出原始样品中的活菌数量。
注意事项：
- 操作过程需要做好无菌操作，以防止细菌的交叉感染。
- 操作要求精确和细致，避免误差的出现。
- 需要根据需要选择适当的物品和仪器来进行实验。
- 操作过程中应注意安全，避免对自身和他人造成伤害。
微生物活菌数影响因素与计算方法
微生物活菌数影响因素与计算方法Abstract：The factors affecting the number of live bacteria were obtained by analyzing the counting methods of microecological agents in recent years, which provided the theoretical basis for the fermentation process of microecological agents in the future.By analyzing the influence of different conditions and fermentation technology on the number of living bacteria, the main factors which can affect the number of living bacteria were obtained.Results showed that fermentation temperature, fermentation time and culture medium were the main factors affecting the number of live bacteriahe fermentation temperature and fermentation time were controlled in the process of optimization of microecological preparation process.Keyword：viable count; microecologics; preparation process;微生态制剂源自于微生态学原理学, 其具有保护或调节微生态平衡的功能, 通过对宿主产生益生菌或者通过促进有益物质生成而制备成的制剂, 主要起到预防、调节和治疗疾病的作用。
活菌培养计数方法
活菌培养计数方法1.2 它也是衡量很多工作效果的一把尺子。
比如说在环境治理中，想要知道治理措施对微生物群落的影响，活菌计数能给我们答案。
这就如同在农田里，农民伯伯要知道地里有多少害虫，才能判断防治措施有没有用，活菌计数就是这样一个判断微生物相关工作成效的关键手段。
二、活菌培养计数的常见方法2.1 平板菌落计数法。
这是个经典的方法，就像老祖宗传下来的手艺一样靠谱。
把样品稀释后，接种到琼脂平板上，让细菌们在平板上“安营扎寨”，一个细菌经过繁殖就会形成一个菌落。
然后我们就像数星星一样去数这些菌落，再根据稀释倍数算出原来样品中的活菌数量。
不过这个方法也有点小麻烦，就像绣花一样，得小心操作，不然容易出错。
比如说稀释的时候手抖了一下，那结果可能就差之毫厘谬以千里了。
2.2 液体稀释法。
这个方法有点像玩猜数字的游戏。
把菌液进行一系列的稀释，然后接种到液体培养基中。
观察哪个稀释度的培养基最后有细菌生长，哪个没有。
通过这种方式来推算出原来菌液中的活菌数量。
但是这个方法有时候就像雾里看花，不是那么直观，得有一定的经验才能准确判断结果。
2.3 膜过滤计数法。
这个方法就像是用筛子筛东西一样。
把样品通过特定的滤膜，细菌就被留在滤膜上了，然后把滤膜放到培养基上培养，最后数菌落。
这个方法对于那些菌量比较少的样品特别适用，就像大海捞针的时候，这个方法能让你更容易找到那根针。
3.1 操作过程要严格无菌。
这是重中之重，就像士兵上战场要带好武器一样。
一旦有杂菌混入，那就会像一颗老鼠屎坏了一锅粥，结果就完全不可信了。
所以在操作的时候，要像做手术的医生一样小心翼翼，从培养基的制备到接种的每一个环节，都不能马虎。
3.2 培养条件要合适。
不同的细菌就像不同的植物，有的喜欢阳光，有的喜欢阴凉。
细菌对温度、湿度、氧气等条件都有要求。
如果培养条件不合适，就像把热带植物种到寒带一样，细菌可能长不好或者干脆不长，那计数结果肯定也是不准确的。
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平板法
上述平皿法还可以将稀释的菌液取 0.2ml 加到已制备好的平板上，然后用无菌涂棒将 菌液涂布整个平板表面，放入适宜温度下培 养，计算菌落数，再按上公式计算出每毫升 原菌液的所含活菌总数。
薄膜过滤法
原理：将供试液通过已灭菌的膜过滤器。然后将滤 膜置于适宜培养基上培养，计算长出的菌落数。
操作：取相当于每张滤膜含1g、1ml 或10cm2 供试 品的供试液，加至适量的稀释剂中，混匀，过滤； 若供试品所含的菌数较多时，可取适宜稀释级的供 试液1ml 进行试验。用pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓 冲液或其他适宜的冲洗液冲洗滤膜。冲洗后取出滤 膜，菌面朝上贴于适宜培养基平板上培养。
每毫升原菌液活菌数＝同一稀释度三个以上重复平皿
菌落平均数×稀释倍数× 5
❖ 注意： 此法可因操作不熟练造成污染，或因 培养基温度过高损伤细胞等原因造成结果不 稳定。但由于该方法能测出样品中微量的菌 数，仍是常用的一种测定细菌数的有效方法。 细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此 法测定。但不适于测定样品中丝状体微生物。
活菌计数法
活菌计数的方法
❖ 平皿法 ❖ 平板法 ❖ 薄膜过滤法 ❖ 比浊法
平皿法
原理：每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条 件下可以通过生长形成菌落。
操作：将待测样品经一系列 10 倍稀释，然后选择 三个稀释度的菌液，分别取 0.2ml 放入无菌平皿， 再倒入适量的已熔化并冷至 45℃ 左右的培养基， 与菌液混匀，冷却、待凝固后，放入适宜温度的培 养箱或温室培养，长出菌落后，计数，按下面公式 计算出原菌液的含菌数：
比浊法
原理：在一定范围内，菌的悬液中细胞浓度与浑浊 度成正比，即与光密度成正比，菌越多，光密度越 大。因此可以借助于分光光度计，在一定波长下， 测定菌悬液的光密度，以光密度(OD值) 表示菌量。 操作：取适量供试液于适宜液体培养基中培养24h， 在一定波长下，用分光光度计测定菌悬液的光密度。 注意：实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成 正比的线性范围内，否则不准确。