活菌培养计数检验方法
细菌菌落计数
直接法 血球记数板 活菌染色：美蓝、吖啶橙、TTC
01
间接法
02
目录
直接法—血球记数板
细菌计数板和血球计数板都用来侧微生物的总菌数。血球计数板用来测较大微生物如酵母菌和霉菌孢子的总数，细菌计数板用来测细菌的总菌数。两种计数板的构造相似，不同的是细菌计数板的深度仅为血球计数板深度的1/5。
平板菌落计数法(Colony-counting Methods)
一个活菌在合适的培养基表面，逐渐生长成一个 肉眼可见的菌落（菌落形成单位，colony forming unit, CFU），从而得知原始活菌含量。 涂布平板法Spread Plate 浇注平板法Pour Plate
间 接 法
间 接 法—平板l）=某一稀释度的平均菌落数 ×10×稀释度 注意事项见实验讲义
菌落数
1
2
平均
1
2
平均
1
2
平均
每毫升中 总活菌数
1
0.1ml
1
2
3
4
5
6
广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、饮料和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。
疾病诊断 泌尿系感染性疾病的诊断------尿培养
细菌感染及药物治疗效果 临床病人 实验动物
适用领域：
3、菌落计算方法
3、菌落计算方法 （1）菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 （2）菌落计数的报告 ①平板菌落数的选择 选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。
光合菌的检验方法
光合菌活菌数的检验方法①取样：先清洗一个容量为30～50毫升的取样瓶或烧杯。
由于光合细菌在培养液中的分布是不均匀的，尤其是具有强烈运动能力的种类更明显，所以在取样前必须充气或搅拌，待分布均匀后，立即用移液管（移液管应预先进行消毒处理，以免造成污染）取样，取样的量为10～15毫升。
如果取样的密度太大，计数困难，必须加水稀释到适宜浓度后方可计数。
②样品放于计数板：放置前必须将血球计数板和盖玻片清洗干净、擦干，不能有油污染和杂质。
将血球计数板平放在桌子上，盖好盖玻片；然后把样品瓶轻轻摇动几下，使光合细菌分布均匀，并立即用干净的微吸管取样品，迅速把微细吸管放到盖玻片的边缘处，轻压微细吸管的橡皮帽，使样品流入计数板内。
注意控制样品流入量，不能过多，过多则流入到沟内；也不能过少，过少则计数时不准确（计数后的数量一般偏少），应充满画线方格及其周边部分。
还应注意盖玻片下不能有气泡存在，否则会造成计数不准确。
不符合操作要求时，应立即重新开始。
样品吸入血球计数板后，稍停1分钟，待细菌沉降在玻片表面上再在显微镜下进行计数。
③计数：光合细菌的计数，必须使用油镜才能观察清楚。
可以计数中央大格的4个角的中格，每个中格有25个小格，逐一计数，4个中格相加共计数100个小格。
计数时应从计数框一角开始，在计数框边缘的标本应按"计上不计下、计左不计右"的原则，计数出细菌的总量后，按下式计算出每毫升菌液中的细菌数量：细菌数量＝100个小格的细菌数×4×10000×稀释倍数。
注意每个样品最少重复计数两次，然后取其平均值，计算细菌的数量，两次计数结果和平均数之差应不大于其平均数偏差的10％才有效。
因为盖玻片下每个大方格上的空间为0.1立方毫米，故1个大方格内的细菌数量若为n，则细菌密度为每立毫米10n个，将此换算为每毫升的细菌数量，则需乘以10000，因此1个大方格内细菌平均数是多少，则细菌的密度就是每毫升多少万个。
产酸活力及发酵酸度检验方法活菌总数检验方法
产酸活力及发酵酸度检验方法活菌总数检验方法1.实验材料和仪器-pH计-电热水浴器-试管、培养皿和培养基-乳酸菌培养物2.培养基配制-将适量的培养基加入适量的蒸馏水中，混合均匀。
-蒸煮20分钟，冷却到适宜的温度。
-转移到试管或培养皿中。
3.显微观察-取一个培养基试管，将待检测菌株接种到培养基中。
-用无菌技术操作，将试管放入电热水浴中，保持在适宜的温度下。
-在一定时间间隔内，取出试管，用显微镜观察菌株的酸化能力和酸度水平。
4.酸度测定-取一定量的培养基，用pH计测定其初始酸度。
-将菌株接种到培养基中，培养一定的时间。
-每隔一段时间，取一定量的培养基，用pH计测定培养基的酸度变化。
5.数据分析-根据测定的酸度变化数据，计算并比较不同菌株的酸化能力。
-评估菌株的产酸活力和发酵酸度水平。
活菌总数检验是一种常用的微生物检验方法，用于确定菌群的数量和活性水平。
这种方法通常用于食品和医药行业，以评估产品的卫生质量和稳定性。
1.实验材料和仪器-培养基-试管和培养皿-灭菌的吸铬棒或其他工具-电热灭菌器-pH计或比色计2.培养基配制-根据需要，选择适合的培养基，如平板培养基、液体培养基或加入一些选择性物质的培养基。
-按照制定的方案和菌株需求配制培养基。
3.样品处理-将待测样品进行适当的处理，如加热、稀释等。
-可以根据需要，将样品分成不同部分，进行不同的处理。
4.培养和计数-将准备好的培养基加入试管或培养皿中。
-将样品分配到培养基中，用吸铬棒均匀涂布。
-将培养皿密封好，预培养一段时间。
-在一定的时间后，观察并计数菌落的数量。
-根据计数的结果，计算样品中活菌的总数。
5.数据分析-根据计数结果，计算并比较不同样品中的活菌总数。
-评估样品的卫生质量和稳定性。
总结产酸活力及发酵酸度检验方法和活菌总数检验方法是常用的微生物检验方法，用于评估菌株酸化能力和样品中活菌的数量。
这些方法对于食品和饮料工业以及医药行业中产品质量的评估非常重要。
细菌计数简述
细菌计数【目的要求】1、掌握倾注培养法、活菌计数法和光电比浊计数法。
2、熟悉菌落形成单位（cfu）含义。
【器材和试剂】1、器材无菌平皿（直径90mm）、孵育箱、水浴箱、菌落计数仪、无菌刻度吸管、灭菌空试管、坐标纸。
2、培养基普通营养琼脂（每支15ml）、液体培养基。
3、其他待检样品，如饮用水、饮料、食品、药品、化妆品等。
【步骤和方法】1、倾注培养和活菌计数（1）按食品微生物学检验和医药化妆品检验国家标准（GB）的要求处理样品，如固体标本用无菌研钵研碎制成匀浆、油脂类物品用分散剂Tween-80、医药标本宜加入消除药物作用的中和剂等。
所有操作过程必须严格无菌，防止污染。
（2）将标本用无菌生理盐水按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5梯度稀释。
（3）取不同稀释度液体1ml注于直径90mm的无菌平皿，迅速加入已熔化并冷却至50℃的营养琼脂15ml，立即在平面上向同一方向平稳转动，使之混匀，待凝固后翻转平板。
一个稀释度接种两个平板。
（4）置35℃孵育18~24h，计数菌落形成单位（colony forming unit，cfu），求出每毫升或每克标本中所含活菌数。
1ml标本中活菌数=全平板cfu×稀释倍数（5）菌落计数方法：1）平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要使用放大镜检查，以防遗漏。
记下各平板上的菌落数后，应求出同一稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。
2）在求同一稀释度的平均数时，若其中一个平板有较大片状菌落时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。
3）若片状菌落不足平板一半，而其余一半中菌落数分布均匀，则计数后乘2代表全平板菌落数，然后再求该稀释度的平均菌落数。
（6）不同稀释度平均菌落数的确认：1）平均菌落数在30~300之间：①若两个稀释度的比值＜2，报告两个稀释度的平均菌落数，如表1-3-1例2；若比值≥2，应报告两个稀释度中较大菌落数者，如表1-3-1例3、例4.②当只有一个稀释度的平均菌落数在30~300之间时，即以该平均菌落数乘以稀释倍数报告之，如表1-3-1例1。
有效活菌数的测定方法_允许差与判定_李元芳
技术讲座 有效活菌数的测定方法、允许差与判定 李元芳 (农业部微生物肥料质检中心 北京 100081)摘 要 微生物肥料的有效活菌的数量是微生物肥料质量好坏的关键指标。
根据N Y 227-94微生物肥料标准的规定,有效活菌数用平板计数法测定。
该文就平板计数法规范化操作的有关规定作了说明。
又对测定平板上菌落允许差、计算公式及判定规则进行了介绍。
该文有较强的可操作性,对工厂企业按标准提高自检的准确性有重要的参考价值。
关键词 微生物肥料 有效活菌数 平板计数法 允许差 判定 施用微生物肥料,就是把大量有益微生物施入到农作物根际土壤中,并通过它们的活动来提高土壤肥力,刺激作物生长和抑制有害微生物的活动。
因此,1994年公布的NY227-94微生物肥料标准,再次以法制形式规定有效活菌数作为微生物肥料质量的关键指标。
近几年来,我国微生物肥料发展很快,并出现一些新品种和新剂型。
但据我们从市场和厂家收集到一些经企业检测认为质量达标的微生物肥料产品,按N Y 227-94有效活菌数的测定方法进行了检测,有相当一部分产品的有效活菌数达不到标准的要求。
据调查,目前尚有的工厂,仅用血球计数板或显微镜计数法进行样品有效活菌数的测定,这种方法虽然快捷,但有一定局限性,不易区别细菌的细胞和有机颗粒,特别是不能区分活菌或死菌,结果往往使计数量偏高;有的工厂虽也用了菌落平板记数法,但方法不规范,如不设3个稀释度或3个稀释度不成梯度,或菌落不做显微镜观察确认,或平板重复数不做统计分析,只要是平板上出现了菌落就记数计算,如稀释至10-8次平板上出现了一个菌落,就折算成每克样品有1亿个菌,这样的计数结果误差很大,不能反映样品中的实际活菌含量。
为了贯彻执行N Y227-94微生物肥料标准,强化标准意识,加强产品质量标准及检验规范化仍很必要。
本文将有效活菌数的测定方法、允许差与判定的有关规定加以说明。
1 有效活菌数的测定采用平板计数法测定有效活菌数,测定时采样不少于500g ,从中称取10.0g ,加入带玻璃珠的100ml 的无菌水中(液体菌剂取10ml 加入到90ml 的无菌水中),静置20min 后,在旋转式摇床上200r /min 上充分振荡30min ,即制成母液菌悬液。
简要概括菌落总数检验过程
简要概括菌落总数检验过程
菌落总数检验过程主要包括以下步骤：
采样与稀释：首先进行采样，然后对样品进行十倍梯度稀释，得到系列浓度梯度的待检液。
接种：取适宜浓度的待检液1ml，注入培养皿后再倾注降温的卵磷脂-吐温80营养琼脂，同时做空白对照，然后转动培养皿使其混匀。
培养：待培养基冷却后，将平板倒置，置于36°±1°C培养箱内培养48h±2h。
注意不同产品可能需要不同的培养时间和温度。
计数与报告：培养完成后，选择平均菌落数在30~300之间的平皿进行计数。
报告单位为CFU/g或CFU/mL。
如果菌落数不在这个范围内，需要进行适当的稀释或浓缩后再进行计数。
请注意，整个过程需要在无菌环境下进行，并且从采样到倾注最后一个平皿所用的时间不宜超过20min，以防止细菌繁殖影响结果。
同时，为了确保结果的准确性，建议进行多次重复实验。
统计活菌数目的方法
统计活菌数目的方法
统计活菌数目是微生物学研究中的一项重要工作，它可以帮助
我们了解微生物在不同环境条件下的生长繁殖情况，为我们提供科
学依据，指导我们进行微生物的应用和管理。
下面将介绍几种常用
的统计活菌数目的方法。
首先，最常见的方法是平板计数法。
平板计数法是通过将待测
样品均匀涂布在琼脂平板上，然后进行培养，最后根据菌落的形成
情况来进行统计。
这种方法简单易行，可以直接得到微生物的数量，是实验室中常用的一种方法。
其次，滤膜法也是一种常用的统计活菌数目的方法。
滤膜法是
将待测样品过滤到滤膜上，然后将滤膜放置在含有适宜培养基的琼
脂平板上进行培养，最后进行菌落计数。
这种方法适用于含有大量
微生物的样品，可以避免样品中微生物的聚集现象，得到更加准确
的结果。
另外，流式细胞术也是一种现代化的统计活菌数目的方法。
流
式细胞术是通过将待测样品中的微生物染色，然后通过流式细胞仪
进行检测，最后得到微生物数量的统计结果。
这种方法操作简便，
速度快，可以对微生物进行快速准确的检测，适用于大批量样品的统计。
除了上述方法外，还有一些其他的统计活菌数目的方法，如膜过滤法、MPN法等。
这些方法各有特点，可以根据具体的实验要求和样品特点进行选择。
综上所述，统计活菌数目的方法有很多种，每种方法都有其适用的范围和特点。
在进行微生物统计工作时，我们应该根据具体的实验要求和样品特点，选择合适的方法进行统计，以保证结果的准确性和可靠性。
希望本文介绍的方法对大家有所帮助，谢谢阅读！。
细菌计数方法
细菌计数1.计数器测定法：即用血细胞计数器进行计数。
取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。
由于计数室的容积是一定的，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。
本法简便易行，可立即得出结果。
本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
2、电子计数器计数法:电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。
该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。
因此，要求菌悬液中不含任何碎片。
3、活细胞计数法常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。
取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。
此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。
使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。
广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。
4、比浊法比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。
细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。
5、测定细胞重量法此法分为湿重法和干重法。
湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。
此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。
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1
2
3
4
5
6
……
稀释级别
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
……
3.2.5用无菌刻度吸管从 管内吸取1ml混匀后的菌液样本，加至 管内。
3.2.6将 管依照前面方法在手掌上用力振敲80次混匀，再吸取出1ml加入 管内，依照此方法，直至最后一管。
3.2.7选择适稀释度试管，以吸取其中混合均匀的菌液1ml加入无菌平皿中，每一稀释度接种3个平皿，需接种3个不同稀释度，平皿加样前，应先按组编号，以免弄混。
有限公司
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A.0
活菌计数检验方法
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生效日期
2020/01/02
3.3.3到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0~4℃，但不得超过24小时。
3.3.4计数时应选取菌落数在30~300之间的平板。
3.3.4.1若有两个稀释度均在30~300之间时，应以二者的比值（比值为高稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值除以低稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值）决定，比值小于或等于2时，以两个稀释级的菌落数乘以稀释倍数的均值报告菌数；比值大于2但不超过5时，以低稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数；当出现比值大于5时或高稀释级的菌落数大于或等于低稀释级的菌落数等异常情况时，应查明原因再行检查。
3.2.8将冷至40℃～45℃的熔化营养基倒入已加入样液的平皿中，每平皿15～20ml。
3.2.9将平皿盖好立刻轻轻摇动均匀，平放于台上，待琼脂凝固后，翻转平皿，使底朝上，置35±2℃恒温箱内培养。
3.3观察、计数和报告
3.3.1每日观察细菌生长情况，培养至48小时计算最终结果的菌落数。
3.3.2培养到时间后，计数每个平板上的菌落数，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在记下各平板的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数，计算出原始样品中每片中的菌落数，进行报告。
3.3.4.2若所有稀释度的平板菌落数均小于30，则取最低稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
3.3.4.3若所有稀释度的平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
3.3.5若所有稀释度的平板菌落数均不在30~300之间，其中一部分小于30或大于300时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
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活菌计数检验方法
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1．目的
规范及指导生物指示剂（枯草芽孢杆菌菌片）样本中含有的活菌数量的测定。
2．适用范围
适用于菌片活菌数确认。
3．内容
3.1仪器设备
净化工作台、恒温培养箱、刻度吸管(1ml)、PBS(磷酸盐缓冲液)、琼脂培养基
3.2操作步骤
3.2.1每批菌片抽取8个菌片样品试验。
3.3.6若阴性对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
3.3.7菌落总数的报告以10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
3.3.审核：
日期：
批准：
日期：
3.2.2按要求对检验操作用具进行制备及灭菌，以下操作严格按无菌要求进行。
3.2.3将菌片投入10.0ml PBS无菌试管中，每管一份样品，然后在手掌上用力振敲80次，将菌洗下形成1:10的菌液，作为 管。
3.2.4按稀释级别（次数）需要，准备相应数量的试管，将试管分别排列在试管架上，每管加入9ml PBS，从左到右在试管上标上序号。