愈伤组织培养
草莓茎尖愈伤组织的诱导与增殖培养实验报告册
草莓茎尖愈伤组织的诱导与增殖培养实验报告册1、培养程序和培养基5--6月于晴天的下午在健壮、无病的草莓刚抽出的匍匐茎上取茎尖，大小为0.3--0.4mm，作为组织培养的外植体。
用于草莓茎尖培养诱导芽分化的基本培养基为MS，附加6-BA 0.5mg/L，NAA 0.2mg/L，蔗糖30g/L，琼脂粉6.5g/L，pH 值调至5.8--6.0。
在草莓茎尖的扩大繁殖阶段，采用MS 培养基附加6-BA 0.5mg/L 、NAA0.01mg/L。
扩大繁殖主要是将丛生苗分块即每5--7株切成一块，转入继代培养基。
在转苗过程中，去掉原生叶片有利于新苗分化，在扩大繁殖中随时清除愈伤组织，有利于新苗增殖和生长。
诱导生根培养基用1/2MS 附加。
经查文献得知0.1mg/L浓度的IBA处理的生根率最高，为100%，平均根条数为2.4条。
不加TBA及IBA浓度超过0.2mg/L，多数苗都是先于苗基切口处产生愈伤组织，随后在愈伤组织上分化生根，致使成活率大大降低。
2、操作技术要点及培养条件⑴)灭菌与接种预处理―为了灭菌彻底，常把接种材料先进行湿润处理，采用的是75%的酒精，湿润的时间为半分钟至1分钟。
灭菌处理在草莓组织培养中常用灭菌剂的种类很多。
我们曾用过次氯酸钠10%水溶液(含有效氯0.4--0.5%)，浸泡接种材料10--15分钟;次氯酸钙(漂白粉)，用其饱和上清液，浸泡接种材料15--30分钟;过氧化氢10--12%水溶液浸泡10--20 分钟;新洁尔灭5--10%水溶液，浸泡10--15分钟;升汞0. 1%水溶液，浸泡8--10分钟。
其中前4种灭菌剂对接种材料比较安全，但因灭菌时间较长，常常使接种材料的外层氧化变褐，以致影响培养效果。
升汞有很强的杀菌能力，但浸泡时间稍长会造成接种材料中毒。
因此，在草莓组织培养中，如把握好时间，升汞是应用较多的灭菌剂。
灭菌后的接种材料，要用无菌水充分清洗，通常要换水 3--5次。
接种以培养无病毒苗为主要目的的草莓组织培养，所接种的茎尖材料很小，在接种时首先要求准确熟练地剥取茎尖生长点，并使用固体培养基比较适宜，接种时应注意不能将整个茎尖埋入培养基中。
第三章 植物愈伤组织的诱导、继代及分化
⑶先芽后根：愈伤组织中产生多个分生细胞形成分生中心， 从中仅分化出芽，一般情况下待芽长到一定大小时，切下 移入生根培养基中，在其基部即可分化出根。
有些植物在分化芽的培养基上同时在芽器官基部分化出根， 形成完整的植株。大多数植物均属这类正常的分化途径， 这类苗移栽较易成活。
⑷先根后芽：有些植物外植体脱分化后在愈伤组织上先分 化出根，而后在靠近愈伤组织的根部上再分化出芽，有的 将根切下放入分化培养基，再于根上分化出芽器官，甚至 在根端也能分化出芽。
从单个细胞或外植体上脱分化形成典型的愈 伤组织，大致经历三个时期：
起动期：又称为诱导期,
是愈伤组织形成的起点。 外植体已分化的活细胞 在 外源激素的作用下，
通过脱分化起动而进入 分裂状态，并开始形成 愈伤组织。
起动期
分裂期
分裂期：外植体切口边缘开
始膨大，外层细胞通过一分 为二的方式进行分裂，从而 形成一团具有分生组织状态 细胞的过程。
二、从愈伤组织建立悬浮培养体系
多数悬浮培养物（suspension cultures）是将生长快、质地 疏松的愈伤 小块转移到与愈伤诱导含同样成分的液体培养 基里进行振荡培养而获得。
接种时必须有足够多的细胞块，以保证有较合适的细胞密 度。振荡速度一 般为 30-150rpm。
第一次继代时，应去掉开始时接入的大块细胞团——过滤。
第三节 愈伤组织分化与植株再生
体细胞胚胎发生：指从体细胞进行的类胚结构的生产。 体细胞胚是一个二极结构，不物理地附着于原组织，每一 个体细胞胚称为胚状体，它可以同 合子胚一样发育成植株。 器官发生：指从愈伤组织形成芽及根的过程，芽是一个单 极性结构，物理地同母体组织联结着。
细胞分化
无论是在离体还是在活体条件下，植物细胞分化 研究的重点是维管组织的分化，特别是木质部成 分的分化。
愈伤组织实验报告
一、实验目的1. 掌握植物组织培养技术的基本操作流程。
2. 熟悉愈伤组织的诱导方法及再分化过程。
3. 学习植物激素在愈伤组织形成与再分化中的作用。
4. 了解植物细胞的全能性及组织培养技术在植物育种中的应用。
二、实验原理植物组织培养技术是将植物器官、组织或细胞在人工条件下进行无菌培养，使其在适宜的培养环境中生长、分化，最终形成完整植株的过程。
愈伤组织是植物组织培养过程中的一个重要阶段，它是由已经分化的细胞脱分化形成的无定形细胞团。
通过诱导愈伤组织，可以进一步分化为根、茎、叶等器官，实现植物繁殖和育种。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：水稻叶片、玉米叶片、胡萝卜根段。
2. 试剂：无菌水、无菌滤纸、70%乙醇、5%次氯酸钠、琼脂、蔗糖、硝酸钙、硝酸钾、硝酸铵、磷酸二氢钾、生长素、细胞分裂素、琼脂酶、滤纸等。
四、实验步骤1. 材料预处理（1）将水稻叶片、玉米叶片、胡萝卜根段分别用70%乙醇消毒30秒，再用5%次氯酸钠消毒5分钟，最后用无菌水清洗3次。
（2）将消毒后的材料用无菌滤纸吸干水分。
2. 愈伤组织诱导（1）将预处理后的材料切成约1cm×1cm的小块，放入含有不同浓度生长素和细胞分裂素的MS培养基中。
（2）将培养皿放入培养箱中，在适宜的温度和光照条件下培养。
3. 愈伤组织再分化（1）将愈伤组织转移到含有不同浓度生长素和细胞分裂素的MS培养基中。
（2）在适宜的温度和光照条件下培养，观察愈伤组织分化为根、茎、叶等器官的情况。
4. 数据记录与分析（1）观察并记录愈伤组织的生长情况，包括生长速度、愈伤组织颜色、形态等。
（2）观察并记录愈伤组织再分化为根、茎、叶等器官的情况，包括器官形态、生长速度等。
（3）分析不同植物激素浓度对愈伤组织形成与再分化的影响。
五、实验结果与分析1. 愈伤组织诱导实验结果表明，水稻叶片、玉米叶片、胡萝卜根段在含有不同浓度生长素和细胞分裂素的MS培养基中均能诱导出愈伤组织。
实验：胡萝卜愈伤组织的培养
C1-愈伤组织 C2-形成层
四、实验结果
• 计算：
• 污染率=污染的材料数/总接种材料数 ×100% • 诱导率=形成愈伤组织的材料数/总接种材料 数×100%
3-4周后完全形成愈伤组织状态（脱分化） 组织块失去色素
把脱分化后的愈伤组织转移到培养基上
7~8周左右开始再分化，长出幼苗
一、实验背景及目的
• 3.实验分组
• 2-3人一组，每组做4个样品
二、实验仪器、材料及试剂的配制
• 1.实验仪器
• 生化培养箱，高压灭菌锅，超净工作台，医 用解剖刀，镊子，三角瓶，烧杯，平皿，灭 菌滤纸
二、实验仪器、材料及试剂的配制
• 2.材料及试剂 • ⑴实验材料：胡萝卜
二、实验仪器、材料及试剂的配制
一、实验背景及目的
植 外植 物 体脱 组 分化 织 培 养 基 本 步 骤 愈 伤 组 织 芽 根 器官发生 愈 伤 组 织 胚 状 体 植 物 体 植 物 体
人参愈伤组织
胚状体发生
一、实验背景及目的
• 2.实验目的 ⑴ ⑵ ⑶
熟练掌握植物组织培养的方法及其要点 熟练掌握培养基的配制 学会将胡萝卜根培养成愈伤组织
细胞分裂素
三、实验内容
• 2.培养基灭菌
三、实验内容
• 3.取材与消毒 • ⑴取材
P-木质部 C-形成层 X-韧皮部
三、实验内容
• ⑵消毒
• 切片经70%乙醇浸泡
5min，用20%次氯酸钠液
消毒20min。移入无菌 室，用无菌水洗3~5次。
将灭菌材料放在灭菌的滤 纸上，吸干水分。
三、实验内容
大量元素
微量元素
铁盐 有机物质
植物愈伤组织诱导培养基的配制
v1.0 可编辑可修改实验一植物愈伤组织诱导培养基的配制一、实验目的1、掌握植物愈伤组织诱导、继代、器官分化的原理。
2、培养基的配制，灭菌等基本实验操作技术。
二、实验原理植物组织培养是将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用” 。
而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用” 。
植物激素在“再分化” 过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。
三、仪器试剂培养皿及培养架、光照培养箱、超净工作台、高压灭菌锅、解剖刀、弯头镊子、剪子、100ml 烧杯、培养皿（或不锈钢浅盘）、封口膜、棉线、橡皮筋、次氯酸钠（或HgCl2）、MS 培养基全部试剂、植物激素及生长调节物质、无水乙醇、工业酒精、胡萝卜四、实验步骤1、培养基的制备①用于配制培养基的水最好是三蒸水。
②所用的各种化学药品：分析纯级别的试剂，避免药品的交叉污染和混杂。
③配制培养基最方便的方法是预先配制好不同组分的培养基母液，存放在2～4℃冰箱内，使用时按比例稀释配用即可。
v1.0 可编辑可修改①按照配方配制培养基时, 先将储存母液按顺序摆放好，根据欲配制的总体积，量取各种不同体积的母液，加入2，4-D（2mg/L），先加三蒸水至大约400ml。
②称取加入蔗糖（浓度3%），调节pH至。
③加入琼脂（8-9g/L ）加热搅拌溶解，沸腾后立即端离火源（第一个大气泡从缸底上升顶破泡沫层），分装在100ml 的三角培养瓶中（一般以容器的1/3 ～1/4 体积为宜），拧紧瓶盖。
（培养基的pH 值直接影响培养物对离子的吸收，过酸或过碱不仅影响到培养材料的生长，而且还影响到琼脂的凝固。
胡萝卜愈伤组织的培养
胡萝卜愈伤组织的培养一、实验目的1、理解胡萝卜愈伤组织培养的培养方法及条件。
2、了解培养基的成分及掌握培养基的配制方法。
3、会对外植体胡萝卜进行预处理和正确消毒。
4、能严格按照操作规程进行无菌操作。
二、实验原理在离体根培养中，首先解决外植体消毒问题，因为在自然条件下，根生长在土壤中，要进行彻底灭菌、消毒。
为了消灭这种污染源，在把植物组织接种到培养基上之前必须要进行彻底的表面消毒；内部已受到真菌或细菌侵染的组织在组织培养研究中一般都淘汰不用。
胡萝卜的肉质根，其硬度较大，容易操作，可直接用灭菌剂进行处理。
无菌操作技术室用于防止微生物进入实验室区内的操作技术。
要求：①在进行无菌操作之前将界面上的细菌和病毒等微生物杀灭；②操作过程中是界面与外界隔离，避免微生物的侵入。
目前，多数实验室都使用各种类型的超净工作台进行无菌操作。
三、实验材料与用具1、器具：培养瓶、电磁炉、玻璃棒、酒精灯、解剖刀、镊子、酒精棉球（浓度为75%）、烧杯、废液缸、滤纸、玻璃棒、移液管、PH试纸2、材料：新鲜健康的胡萝卜肉质直根3、试剂、2.4-D、6-BA、大量元素母液、微量元素母液、铁盐母液、有机物母液、蔗糖、琼脂、钙盐母液、无菌水、蒸馏水四、实验方法与步骤1、配制培养基（1）、确定配方和配制量：根据实验需要，确定配制培养基的配方。
（2）、计算各种母液和药品用量：a、确定培养基配制量b、查看MS培养基母液的扩大倍数、植物生长调节剂母液浓度c、由母液用量=培养基配方浓度/培养基母液浓度*培养基配制量植物生长调节剂母液用量=培养基配方浓度/植物生长调节剂母液浓度*培养基配制量（3）、量取：由表一的数据仔细量取相应的量并用托盘天平分别称取蔗糖、琼脂。
（4）、溶解：a、在锅内加配制量60%左右的蒸馏水，至于电磁炉加热b、加入琼脂，加热不断搅拌，待琼脂完全溶化后加入蔗糖c、将所量取的各种母液的混合液倒入锅中，搅拌均匀d、琼脂必须完全熔化，以免造成浓度分布不均匀（5）、用蒸馏水定容：a、将完全溶解、混匀后的培养基倒入烧杯中b、加蒸馏水定容至规定体积。
植物组织培养中的愈伤组织的形成及再分化
植物组织培养中的愈伤组织的形成及再分化
植物组织培养中使用的外植体一般是高度分化了的细胞,在植物体中是不会再分裂繁殖的,只是执行某种功能直至死亡。
这些细胞在培养基上培养时会由原来的分化状态变成分生状态的细胞,分裂产生愈伤组织,这个过程称为脱分化过程。
组织培养的研究结果表明分化细胞的脱分化需要两个条件,即创伤和外源激素。
目前人们对于脱分化过程的本质还不清楚。
分化细胞在细胞周期中是处于一种相对
静止状态的细胞(G
0期细胞),脱分化是要打破这种状态,使细胞进入细胞周期中的G
1
期,
并沿着G
1期→S期→G
2
期→M期的循环进行细胞分裂,形成愈伤组织。
现在发现细胞周期
受基因调控,一种称为编码细胞周期依赖性激酶的基因和一种细胞周期蛋白可能与植物细胞脱分化的第一次分裂启动有关。
那么,什么因素诱导细胞周期调控基因的作用,培养实践证明与外源激素有关。
至于激素如何诱导以及诱导作用的过程目前仍不清楚,有待深入研究。
当细胞脱分化形成愈伤组织后,经过一段时期的分裂,细胞群体又会产生分化,形成分生细胞或分生细胞团,由此再生成植株有两条途径:一是形成体细胞胚(功能类似于受精过程产生的胚),通过体细胞胚形成再生植株;二是通过器官发生的途径再生植株,分生细胞在一定的诱导条件下重建芽的分生组织,分化出芽后再生根,成为完整的植株。
对于植物组织培养来说,光照条件非常重要,包括光照强度、时间和波长。
但在愈伤组织的诱导阶段往往要暗培养,而在分化再生的过程中一定要有光照。
愈伤组织诱导阶段的暗培养有利于细胞脱分化产生愈伤组织,如果在光照条件下容易分化产生维管等组织,不利于产生大量的愈伤组织。
胡萝卜愈伤组织的诱导培养(实验报告)【管理资料】
本科学生综合性实验报告学号114120*** 姓名@ ￥&学院生命科学学院专业、班级11应用生物教育%班实验课程名称植物组织培养实验教师及职称龙维彪（讲师）开课学期2013 至2014 学年下学期填报时间2014 年 5 月20 日云南师范大学教务处编印一．实验设计方案6．参考文献：[1]. 李浚明，（第3版）.,2.[2].孙静三，：科学出版社，1995.[3].：中国农业出版社，2002.[4].潘瑞炽主编. 植物组织培养（第三版）.广州：广东高等教育出版社，2003.[5].郭勇，崔堂兵，谢秀帧编著. ：科学出版社，2004.[6].曹孜义，刘国民主编. ：甘肃科学技术出版社，2001.二．实验报告1、实验现象与结果1）、实验现象胡萝卜愈伤组织诱导培养时，在恒温箱全黑条件下培养1周就可看出诱导结果，1-2周可用于继代培养。
胡萝卜在培养过程中的颜色变化如下：橙红色→浅黄色→乳白色→浅绿色(见分析)。
2）、实验结果（1）胡萝卜愈伤组织诱导培养，共5瓶，最终结果只有2瓶诱导成功，且长势良好，其余3瓶均被污染。
具体情况如图1：图1胡萝卜愈伤组织诱导培养结果由图1可知：1、2号瓶内的胡萝卜愈伤组织长势良好，3、4和5号瓶内胡萝卜均被污染。
其中，3号胡萝卜块已发黑；4号瓶呈浮云状，长有大量的霉菌，虽然胡萝卜块未被污染，但不能用了；5号明显长菌，也是和3号瓶一样被细菌污染了。
具体统计如下：表1 胡萝卜愈伤组织诱导结果统计总接种瓶数5瓶总接种块数20块污染瓶数3瓶污染块数8块未污染瓶数2瓶未污染块数12块未污染块中愈伤组织发生块数9块愈伤组织发生率75% 愈伤组织发生情况记录愈伤组织的色泽较新鲜，但比较少污染情况及原因分析污染瓶中，有1 瓶是真菌（霉菌）污染，2瓶细菌污染。
可能是因为接种时用力将切块压入培养基，破坏了培养基，同时滋生了一系列的好氧细菌的繁殖；另外，也可能是操作时没有完全掌握无菌操作技术以致引入细菌或真菌，造成污染。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
愈伤组织培养
一、外植体的选择
愈伤组织培养的第一步是选择适当的外植体。
外植体可以是植物的根、茎、叶、花、果实等任何部分，但必须具有分生能力。
通常，选择新鲜、健康的幼嫩组织作为外植体，因为这些组织分生能力强，容易诱导出愈伤组织。
同时，外植体的选择还必须考虑其遗传背景、生理状态以及是否容易进行消毒等。
二、愈伤组织的诱导
外植体在适当的培养基和条件下，能够被诱导形成愈伤组织。
这个过程涉及到细胞的脱分化，即细胞从特定的组织类型转变成未分化的状态。
为了成功诱导出愈伤组织，需要使用含有足够营养物质和植物生长调节物质的特殊培养基。
例如，高浓度的生长素和细胞分裂素可以促进细胞分裂和组织形成。
三、愈伤组织的增殖
诱导出的愈伤组织需要在适合的培养基中进一步增殖。
这个过程需要持续监控并调整培养基的成分，以确保愈伤组织能够快速、健康地生
长。
同时，还需要控制培养条件，如温度、光照、湿度等，以提供最佳的生长环境。
四、细胞分化的诱导
增殖后的愈伤组织可以进行进一步的分化。
这个过程可以通过改变培养基的成分或添加特定的生长调节物质来实现。
例如，某些激素可以诱导愈伤组织分化成特定的组织或器官。
五、遗传稳定性的维持
为了保持愈伤组织的遗传稳定性，通常需要进行长期的培养和多代的筛选。
这个过程可以通过定期检查染色体数目和结构来实现，以确保细胞的遗传稳定性。
同时，通过定期进行克隆繁殖，可以进一步维持细胞的遗传稳定性。
六、培养基的选择与优化
愈伤组织培养的成功与否，很大程度上取决于培养基的选择和优化。
培养基是愈伤组织获取营养的来源，必须含有细胞生长所需的各类营养物质，如碳源、氮源、维生素、矿物质等。
同时，还需要添加植物生长调节物质，如生长素、细胞分裂素等，以调节细胞的生长和分化。
对于不同的外植体和实验目的，可能需要选择不同的培养基。
例如，MS、N6、B5等都是常用的培养基配方。
此外，培养基的pH值、渗透压等也需要进行适当的调整。
为了优化培养基，通常需要进行一系列的试验和筛选，以找到最适合特定组织或细胞的培养基配方。
七、培养条件的监控与调节
愈伤组织的培养条件对其生长和分化具有重要影响。
因此，需要对培养条件进行严格的监控和调节。
这些条件包括温度、光照、湿度、气体浓度等。
温度和光照对植物细胞的代谢活动和生长速度有显著影响。
在大多数情况下，愈伤组织需要在25-30℃的温度下，每天接受16小时的光照。
湿度和气体浓度也会影响细胞的生长和代谢，通常需要维持相对较高的湿度和适宜的气体环境。
此外，定期更换新鲜的培养基也是保持细胞良好生长的重要措施之一。
通过实时监测和调节这些培养条件，可以确保愈伤组织的正常生长和分化。