STEbuffersolution：STE缓冲液
DNA RNA提取及反转
TRIzol®Reagent提取RNA——王珠清TRIzol®Reagent（Cat. 15596-026或15596-018，Invitrogen）是提取人、动物、植物、酵母或细菌高质量总RNA（或DNA和蛋白）的试剂。
它主要由酚、异硫氰酸胍及其他促进不同种类RNA分离的组分组成。
TRIzol®Reagent在样本均质化过程中破坏细胞及分解细胞组分时，能通过高效抑制RNase活性来维持RNA 的完整性。
材料：氯仿、异丙醇、75%乙醇（用DEPC-treated water配置）、RNase-free water 或者DEPC处理水（DEPC处理水的配制：100ml盐水瓶内装40ml双蒸水，加40µlDEPC（0.01% （v/v）），37℃过夜，送至高压）。
Protocol：一、样本均质化：1备注：如RNA量很少，可适当加入4-8 µl核酸助沉剂（Acryl Carrier）/ml TRIzol2、4°C 12,000× g离心10 min，弃沉淀，将上清移入一新1.5ml离心管中（沉淀中包括细胞外基质（ECM）、多糖及高分子量的DNA，上清中则包含RNA。
而在高脂样本中在上清上层有一层油脂）；3、如继续操作，则直接进入步骤二（分相）；如果暂时不用，可直接置于室温几小时或置于-80℃保存一年。
二、分相：1、将均质样本室温静置5 min以使核蛋白质复合物分离；2、加200 µl氯仿（1ml TRIzol处理样本），盖上盖子，手剧烈摇动15s后室温静置2-3 min；3、4℃12000×g离心15 min（离心后液体分为三层：上层水相包含RNA；下层有机层包含DNA和蛋白）；4、小心将上层水相移入一新1.5 ml离心管中，避免吸到中间层及下层有机层。
三、RNA沉淀：1、加0.5%异丙醇（1ml TRIzol处理样本），室温10 min；2、4℃12000×g离心10 min。
1×TBST缓冲液说明书
加缓冲液的洗脱能力。
本产品为 1×工作液，可直接使用，用后请及时拧紧瓶盖，以防挥发。4℃保存可延长产品保质期，长
期不用建议低温保存。若产品出现结晶析出，请置于 37℃水浴至完全溶解。
组分aCl
150 mM
Tween-20
0.05%（V/V）
HCl
至 PH7.6
北京索莱宝科技有限公司
1×TBST 缓冲液说明书
货号：T1085
规格：500ml
保存：2-8℃，有效期至少 12 个月。
产品说明：
TBST 缓冲液是生物学中常使用的等渗缓冲盐溶液，主要用于 Western Blot 实验中洗去膜上非特异性
结合的抗体等试剂。由 Tris-HCl 构成稳定的 PH 缓冲体系，NaCl 提供等渗条件，Tween-20 作为去污剂可增
凝胶载样缓冲液的作用
凝胶载样缓冲液的作用凝胶载样缓冲液在生物科学实验中起着至关重要的作用。
它是一种用于凝胶电泳实验中的缓冲液溶液，用于调节样本和凝胶电泳系统之间的 pH 值，并提供必要的离子强度，以确保准确的分离和检测。
在凝胶电泳实验中，凝胶载样缓冲液的作用有以下几个方面：1. 调节 pH 值：pH 值是指溶液的酸碱度。
对于凝胶电泳实验来说，pH 值的准确性对于样本的迁移速度和分离效果至关重要。
凝胶载样缓冲液通过调节 pH 值，使其适合于样品的迁移和分离。
2. 提供离子强度：凝胶电泳需要合适的离子强度来维持电化学平衡，并影响样品的迁移速度和准确性。
凝胶载样缓冲液中的盐类提供了必要的离子强度，确保样品能够有效地在凝胶上迁移。
3. 保持稳定的温度：凝胶载样缓冲液还可以作为样品和凝胶间的热传导介质，帮助维持实验的稳定温度。
稳定的温度对于凝胶电泳实验的结果和准确性至关重要。
凝胶载样缓冲液的配方通常包含缓冲剂、离子强度调节剂和 pH 调节剂。
一些常用的凝胶载样缓冲液包括 Tris-Borate-EDTA（TBE）缓冲液、Tris-Acetate-EDTA（TAE）缓冲液和磷酸缓冲液等。
除了上述作用之外，凝胶载样缓冲液还可以在凝胶电泳实验中提供其他功能，例如：1. DNA 凝胶电泳中，凝胶载样缓冲液可以用于溶解 DNA 样本并防止其降解。
2. 蛋白质凝胶电泳中，凝胶载样缓冲液可以提供必要的离子强度和 pH 条件，确保蛋白质在凝胶上正确地迁移和分离。
3. RNA 凝胶电泳中，凝胶载样缓冲液可以用于稳定RNA 样本的结构，并提供必要的离子强度和 pH 条件，以确保准确的结果。
总结起来，凝胶载样缓冲液在凝胶电泳实验中起着至关重要的作用。
它通过调节 pH 值、提供离子强度和维持稳定温度，确保样品能够准确、有效地在凝胶上迁移和分离。
使用合适的凝胶载样缓冲液可以提高实验结果的准确性，并为后续的数据分析和解读提供可靠的基础。
凝胶电泳实验是生物学研究中常用的重要技术手段，它可以用来分析和分离 DNA、RNA 和蛋白质等生物分子。
毕赤酵母手册
毕赤酵母表达实验手册作者：Jnuxz 来源：丁香园时间：2007-9-5大肠杆菌表达系统最突出的优点是工艺简单、产量高、周期短、生产成本低。
然而，许多蛋白质在翻译后，需经过翻译后的修饰加工，如磷酸化、糖基化、酰胺化及蛋白酶水解等过程才能转化成活性形式。
大肠杆菌缺少上述加工机制，不适合用于表达结构复杂的蛋白质。
另外，蛋白质的活性还依赖于形成正确的二硫键并折叠成高级结构，在大肠杆菌中表达的蛋白质往往不能进行正确的折叠，是以包含体状态存在。
包含体的形成虽然简化了产物的纯化，但不利于产物的活性，为了得到有活性的蛋白，就需要进行变性溶解及复性等操作，这一过程比较繁琐，同时增加了成本。
大肠杆菌是用得最多、研究最成熟的基因工程表达系统，当前已商业化的基因工程产品大多是通过大肠杆菌表达的，其主要优点是成本低、产量高、易于操作。
但大肠杆菌是原核生物，不具有真核生物的基因表达调控机制和蛋白质的加工修饰能力，其产物往住形成没有活性的包涵体，需要经过变性、复性等处理，才能应用。
近年来，以酵母作为工程菌表达外源蛋白日益引起重视，原因是与大肠杆菌相比，酵母是低等真核生物，除了具有细胞生长快，易于培养，遗传操作简单等原核生物的特点外，又具有真核生物时表达的蛋白质进行正确加工，修饰，合理的空间折叠等功能，非常有利于真核基因的表达，能有效克服大肠杆菌系统缺乏蛋白翻译后加工、修饰的不足。
因此酵母表达系统受到越来越多的重视和利用。
［1］。
同时与大肠杆菌相比，作为单细胞真核生物的酵母菌具有比较完备的基因表达调控机制和对表达产物的加工修饰能力。
酿酒酵母（Saccharomyces.Cerevisiae）在分子遗传学方面被人们的认识最早，也是最先作为外源基因表达的酵母宿主。
1981年酿酒酵母表达了第一个外源基因----干扰素基因［2］，随后又有一系列外源基因在该系统得到表达［3、4、5、6］。
干扰素和胰岛素虽然已经利用酿酒酵母大量生产并被广泛应用，当利用酿酒酵母制备时，实验室的结果很令人鼓舞，但由实验室扩展到工业规模时，其产量迅速下降。
tbs缓冲液 亲和纯化
tbs缓冲液亲和纯化
TBS缓冲液是Tris Buffered Saline的缩写，是一种常用的生物化学实验缓冲液。
TBS缓冲液通常由Tris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲剂、盐和pH调节剂组成，用于稀释样品、洗涤膜和抗体，以及在免疫印迹、免疫沉淀和其他蛋白质实验中使用。
TBS缓冲液的pH通常在7.2至7.6之间，这使得它非常适合用于许多生物学实验，因为这个pH范围对于大多数生物分子的稳定性都是理想的。
TBS缓冲液中的盐浓度通常为0.15M，这种浓度对于保持生物分子的天然构象非常重要。
在亲和纯化中，TBS缓冲液通常用作洗涤和平衡缓冲液。
在亲和纯化过程中，目标蛋白与亲和树脂结合，然后通过洗涤步骤去除非特异性结合的蛋白质。
TBS缓冲液的使用可以帮助保持蛋白质的天然构象和活性，同时去除非特异性结合的蛋白质。
总之，TBS缓冲液在亲和纯化中扮演着重要的角色，它能够提供适当的pH和离子强度条件，帮助维持蛋白质的天然状态，并且对于洗涤和平衡步骤都非常适用。
希望这些信息能够帮助你更好地理解TBS缓冲液在亲和纯化中的作用。
蛋白上样缓冲液的主要成分和作用
蛋白上样缓冲液的主要成分和作用蛋白上样缓冲液是生物化学实验中常用的一种缓冲液，它的主要作用是在蛋白质电泳分离过程中，维持样品的稳定性，防止蛋白质的降解和聚集。
本文将从成分和作用两个方面来介绍蛋白上样缓冲液。
一、成分蛋白上样缓冲液的主要成分包括缓冲剂、还原剂、表面活性剂和添加剂等。
1. 缓冲剂缓冲剂是蛋白上样缓冲液中最重要的成分之一，它能够维持溶液的pH 值，防止蛋白质在电泳过程中发生电泳漂移。
常用的缓冲剂有Tris-HCl、MES、MOPS等。
2. 还原剂还原剂是蛋白上样缓冲液中的另一个重要成分，它能够还原蛋白质中的二硫键，使其保持在还原状态下，从而防止蛋白质的氧化和聚集。
常用的还原剂有DTT、β-巯基乙醇等。
3. 表面活性剂表面活性剂是蛋白上样缓冲液中的一种添加剂，它能够降低蛋白质的表面张力，使其更容易进入凝胶中。
常用的表面活性剂有Tween-20、Triton X-100等。
4. 添加剂添加剂是蛋白上样缓冲液中的一种辅助成分，它能够增加样品的稳定性和电泳分离效果。
常用的添加剂有甘油、牛血清白蛋白等。
二、作用蛋白上样缓冲液的主要作用是维持样品的稳定性，防止蛋白质的降解和聚集。
具体来说，它有以下几个作用：1. 维持pH值稳定蛋白上样缓冲液中的缓冲剂能够维持溶液的pH值，防止蛋白质在电泳过程中发生电泳漂移，从而保证电泳分离的准确性和稳定性。
2. 还原蛋白质中的二硫键蛋白上样缓冲液中的还原剂能够还原蛋白质中的二硫键，使其保持在还原状态下，从而防止蛋白质的氧化和聚集，保证电泳分离的准确性和稳定性。
3. 降低表面张力蛋白上样缓冲液中的表面活性剂能够降低蛋白质的表面张力，使其更容易进入凝胶中，从而保证电泳分离的准确性和稳定性。
4. 增加样品稳定性蛋白上样缓冲液中的添加剂能够增加样品的稳定性，防止蛋白质的降解和聚集，从而保证电泳分离的准确性和稳定性。
综上所述，蛋白上样缓冲液是生物化学实验中不可或缺的一种缓冲液，它的主要作用是维持样品的稳定性，防止蛋白质的降解和聚集。
20×TBS缓冲液说明书
北京索莱宝科技有限公司
20×TBS缓冲液说明书
货号：T1080
规格：500ml
保存：室温储存，有效期至少12个月。
产品简介：
TBS缓冲液是生物学中常使用的等渗缓冲盐溶液，主要用于免疫组化和原位杂交，酶联免疫等实验中，清洗免疫印迹实验中非特异性结合的抗体等。
由Tris-HCl构成稳定的PH缓冲体系，NaCl提供等渗条件。
本产品为20×浓缩液，稀释后使用。
组分浓度
Tris200mM
NaCl3M
PH7.5-7.6
使用说明：
1×TBS缓冲液配制：量取50ml20×TBS缓冲液，加入950ml去离子水定容至1L，充分混匀。
注意事项：
4℃保存可延长产品保质期，长期不用建议低温保存。
若产品出现结晶析出，请置于37℃水浴至完全溶解。
使用时稀释成1×，可加入0.05%Tween-20，用于免疫印迹膜清洗。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
第1页共1页。
常用缓冲液配制
常用缓冲液配制Buffer Formula (required precision; 2 %)Always to try to prepare buffer solution a t the temperature and concentration befor e planing to use during the experiment. Stock solutions are acceptable as long a s pH adjustment made after temperature and concentration adjustment. Also good buffers, e.g., Tris and Phosphate, are sta ble for a long time period.10X TE (10:2)1X1L 10X10mM Tris-HCl 8.9 g Tris-HCl5.3 g Tris-Base2 mM Na3EDTA 7.4 gpH 8 at 25 C. Mix and store at 4 C. Per iodically dump the 1X TE and make up t he fresh 1X TE from 10X stock.10X TE (10:1)1X1L 1X1L 10X10mM Tris-HCl 1.06 g Tris-HCl 10.6 g 0.39 g Tris-Base 3.94 g1mM Na2EDTA 0.475 g 4.75 gpH 8 at 25 C. Mix and store at 4 C.10X TE (50:50)1X1L 10X50 mM Tris-HCl 44.4 Tris-HCl26.5 Tris-Base50 mM Na3EDTA 186 gStore at 4 C.TE (25:10) 50 mM Glucose1X0.25 L 1X25 mM Tris-HCl 0.55 g Tris-HCl0.33 g Tris-Base10 mM Na3EDTA 0.92 g50 mM Glucose 2.25 gStore at 4 C.50 mM Tris pH 8.0 10 mM EDTA50 mM 1 M Tris pH 8.0 5 ml1 mM 0.5 M EDTA2 mlH2O up to 100 mlStore at 4 C.1 M Tris pH 8.0, 1.5 M NaCl1X1L 1X2L 1X1M Tris-HCl 88.8 g Tris-HCl 178 g53.0 g Tris-Base 106 g1.5 M NaCl 87.7 g 175 gStore at 25 C (room temperature is OK) 1 M Tris pH 7.4, 1.5 M NaCl1X1L 1X2L 1X1M Tris-HCl 132.2 g Tris-HCl 264.4 g19.4 g Tris-Base 38.8 g1.5 M NaCl 87.7 g 175 gStore at 25 C (room temperature is OK) 0.5 M Tris pH 7.5, 1.5 M NaClConc. 1 L 2L 3 L0.5 M Tris Tris-HCl 63.5 g 127.0 190.0 Tris-Base 11.8 g 23.6 g 35.4 g1.5 M NaCl 87.6 g 175.0 g 262.8 g Store at 25 C (room temperature is OK) 10 mM Tris pH 7.5, 15 mM NaClConc. Stock Volume10 mM 1 M Tris pH 7.5 100 µl15 mM 5 M NaCl 30 µlH2O to 10 mlStore at 4 C.10X TBE Buffer (pH 8)1X1L 10X 4L 10X89 mM Tris-Base 108 g 432 g89 mM Boric acid 55 g 220 g2 mM Na2EDTA 9.3 g 37.2 gEtBr (10mg/ml) 0.5 ml 2 mlMix and store at room temperature witho ut EtBr, 4 C with EtBr in a brown bottle. Use EtBr stock solution (10 mg EtBr/ml) when TBE is made.50X TAE Buffer (pH 8)1X1L 50X 1 L 10X40 mM Tris-acetate 242 g Tris Base 48.4 g57.1 ml acetic acid 11.4 ml2 mM Na2EDTA 37 g 7.4 gEtBr (10mg/ml) 2.5 ml 0.5 mlMix and store at room temperature witho ut EtBr, 4 C with EtBr in a brown bottle. Use EtBr stock solution (10 mg EtBr/ml) when TAE is made.Cotton DNA Extraction buffer (pH 6)Conc. Stock 1L 1X100 mM Na2citrate.2H2O 29.4 g Glucose 63 g5 mM 0.5 M Na2EDTA 10 mlNa2Diethyldithiocarbamic acid 10 gPVP-40,000 MW 20 gBSA 10 gAdjust to pH 6.0 with HCl. Store at 4 C. RSB (Reaction Stop Buffer)Conc. Stock Volume (ml)10 mM 1 M Tris pH 8.0 1.02 mM 0.5 M EDTA 0.40.2 % 20 % SDA 1.0H2O 97.6Store at room temperature.STE (Sodium chloride and TE) pH 8.0Conc. Stock 1X1 L 10X1L10 mM 1M Tris pH 8.0 10.0 8.88 g Tris-HCl5.3 g Tris-Base1 mM 0.5 M EDTA 2.0 4.65 g Na2EDTA100 mM 5 M NaCl 20.0 5.84 g NaClH2O up to 1 L up to 1 LpH 8.0 at 25 C. Store at 4 C.1.5 M NaCl 0.5 N NaOH1X1L 1X2L 1X0.5 N NaOH 20.0 g 40 g1.5 N NaCl 87.7 g 175 gStore at room temperature.0.2 N NaOH 0.6 M NaClConc. 1L 2L 3L 4L0.2 N NaOH 8.0 g 16.0 g 24.0 g 32.0 g0.6 M NaCl 35.04 g 70.08 g 105.2 g 14 0.2 gStore at room temperature.20X SSC (Adjust pH 7.0)1X1L 20X 2L 4L 6L150 mM NaCl 175.3 g 350.6 g 701 g 10 52 g15 mM Na3Citrate 88.3 g 176.6 g 353 g 530 g Mix, adjust pH to 7.0 with HCl, and store at 4 C25X SSC (Adjust pH 7.4)25X1L 4L3.0 M NaCl 219 g 876 g0.3 M Na2Citrate 110 g 440 gMix, adjust pH to 7.4 with HCl, and store at 4C.3 M K 5 M Ac1X200 ml 1 X3 M KAc 29.4 g (or 20 ml of5 M KAc) 2 M Acetic acid 23 mlDissolve the KAc in 150 ml of H2O, brin g to 177 ml, and then add the glacial ac etic acid. Mix and store at 4 C.Minimal Hybridization BufferConc. Stock 1L 2L10 % 50 % PEG 200 4007 % 20 % SDS 350 7000.6 X25 X SSC 24 4810 mM 1 M NaHPO4 10 205 mM 0.5 M EDTA 10 20100 µg/ml Denature Salmon Sperm 10 2 0H2O 396 792Aliquote 45 ml into 50 ml PPT, store at -20 C.Oligo BufferAfter preparing the following stock solutio ns, mix A, B, and C in a ratio of 1:2.5:1. 5, repectively.Solution AStock2-mercaptoethanol (bME) 18 µlDXTPs (A, T, G) 5 µl eachSolution O 850 µlStore at -20 CSolution OConc. Stock 250 ml 100 ml1.47 M Tris-Base 44.52 g 17.81 g0.147 M MgCl2 7.47 g 2.99 gAdjust pH to 8.0 with conc. HCl.Solution B: 2M hepes bufferConc. Stock 250 ml 100 ml2 M Hepes 119.15 g 47.66 gAdjust pH to 6.6 with 4 N NaOH. Store at 4 C.Solution CHexamer or oligo nucleotides. Add 55 µl H2O directly to the Pharmacia bottle whic h contains 50 units of lyophilized hexame r. Store at -20 C.KlenowDilute to 1 unit Klewnow fragment by ad ding klewnow buffer. Stock Klenow from BRL comes as 500 units in 84 µl. Dilute to 1 unit by adding 420 µl of klenow bu ffer to the 500 unit/84 µl stock. Store - 2 0 C.Klenow buffer (250 ml)Conc Stock7 mM Tris-HCl 0.211 g7 mM MgCl2 0.355 g50 mM NaCl 0.730 g50 % Glycerol 125 mlAdd the above to about 80 ml H2O. Stir to dissolve. Adjust volume to 250 ml wit h H2O. Store at -20 C.REact buffer (See Restriction enzyme buffer formula)10 X REact buffer 2 : for, e.g. Hind III and Sst 1 (5 ml)1 X Conc. Stock500 mM 1 M Tris (pH 8.0) 2.5 ml100 mM 1 M MgCl2 0.5 ml500 mM NaCl 0.5 ml25 mM Spermidine(3HCl) 0.032 gH2O 1.5 mlMix, aliquote 2 ml in screw-cap vial, store at -20 C.10 X REact buffer 3 : for, e.g. Eco RI(5.0 ml)1 X Conc Stock500 mM 1M Tris (pH 8.0) 2.5 ml100 mM 1M MgCl2 0.5 ml1 M 5 M NaCl 1.0 ml25 mM Spermidine(3HCl) 0.032 gH2O 1.0 mlMix, aliquote 2 ml in screw-cap vial, store at -20 C. HTTP/1.1 404 Object Not Found Server: Microsoft-IIS/5.0 Date: Wed,16 Nov 2005 02:44:39 GMT X-Powered-By: Connection: close Content-Type: text/htmlPHEM (500 mls) 2x18.14 g Pipes6.5 g Hepes3.8 g EGT A0.99 g MgSO4pH 7.0 w/ KOHPBS (5x in 500 mls)20.45 g NaCl0.465 g KCl10.142 g Na2HPO4*7 H2O0.545 g KH2PO4pH 7.2Mounting Media20mM Tris pH 8.00.5% N-propyl gallate90% GlycerolStore at 4oCPM Buffer* 100 ml 1 M PIPES (100 mM P IPES pH= 6.9)2 ml 1 M MgSO4, (2 mM MgSO4)2 ml 0.5 M EGTA (1 mM EGT A,)distilled water to 900 mladjust pH to 6.9distilled water to 1 literstore at 4oCValap*Put 50 g Vaseline, 50 g lanolin, and 50 g paraffin (all available from Fisher) in a 1 L Pyrex beakerHeat on "low" setting on a hotplate, stirring occasionally, until all components are melted and well mixedPour into several small screw-cap jars (~50 ml capacity)Store at room temperature20 x Energy Regeneration System*150 mM creatine phosphate (Boehringer #127574) 2 ml of 100 mM MgATP Stock (20 mM ATP, 20 mM MgSO4)40ml 0.5 M EGT A (2 mM EGT A)distilled water to 10 mlDisburse into 100 ml aliquots and store at -20oC Isolation Buffer*20 ml 5 M NaCl Stock (0.1 M NaCl)4 ml of 1 M MgSO4 Stock (4 mM MgSO4)2 ml of 0.5 M EDTA (1mM EDT A)10 ml of 1 M HEPES Stock (10 mM HEPES) distilled water to 900 mladjust pH to 7.0distilled water to 1 literstore at 4oCHigh Salt Buffer*120 ml of 5 M NaCl Stock (0.6 M NaCl)4 ml of 1 M MgSO4 Stock(4 mM MgSO4)2 ml of 0.5 M EDTA (1mM EDT A)10 ml of 1 M HEPES Stock (10 mM HEPES) distilled water to 900 mladjust pH to 7.0distilled water to 1 literstore at 4oC10 x Column Buffer*500 ml 1 M PIPES Stock (250 mM PIPES)40 ml of 0.5 M EGT A Stock (10 mM EGT A)40 ml of 1 M MgSO4 Stock (5 mM MgSO4)distilled water to 1800 mladjust pH to 6.7distilled water to 2 litersStore at 4oCHomogenization Buffer*300 ml PM buffer52.3 mg PMSF (1mM PMSF)3 g leupeptin (10 mg/ml leupeptin)300 mg pepstatin A (1 ug/ml pepstatin A)3 mg T AME (10 ug/ml T AME)mix well to dissolve, use immediatelyPMG Buffer*80 ml 1 M PIPES Stock (80 mM PIPES)2 ml 1 M MgSO4 Stock, (2 mM MgSO4)2 ml 0.5 M EGTA Stock (1 mM EGT A,)600 ml Glyceroldistilled water to 900 ml, mix welladjust pH to 6.9distilled water to 1 literstore at 4oCPBS*8.18 g NaCl (140 mM NaCl)0.186 g KCl (2.5 mM KCl)0.218 g KH2PO4 (1.6 mM KH2PO4)2.15 g Na2HPO4 (15 mM Na2HPO4)distilled water to 1 literStore at room temperature1M MgSO4Stock*24.074 g MgSO4distilled water to 200 mlstore at room temperature1 M HEPES, pH = 7.0 Stock*119.15 g HEPES (free acid)distilled water to 400 mladd solid NaOH a few pellets at a time while mixing until the pH is ~6.8add concentrated NaOH dropwise to achieve pH = 7.0distilled water to 500 mlsterile filter and store at 4oC1 M PIPES, pH = 6.9 Stock*151.2 g PIPES (free acid)distilled water to 400 mladd solid NaOH a few pellets at a time while mixing until the pH is ~6.7add concentrated NaOH dropwise to achieve pH = 6.9 distilled water to 500 mlsterile filter and store at 4oC0.5 M EDTA Stock*16.81 g EDT A (Sodium Salt)distilled water to 90 mlAdjust pH to 7.0Distilled water 100 mlStore at room temperature0.5 M EGTA Stock*19.02 g EGT A (Sodium Salt)distilled water to 90 mlAdjust pH to 7.0Distilled water to 100 mlStore at room temperature1M dithiothreitol (DTT)*1.542 g dithiothreitoldistilled water to 10 mldisburse into 500 ml aliquots and store at -20oC1 M KCl Stock*74.55 g KCldistilled water to 1 literstore at room temperature10 M NaOH Stock*40 g NaOHdistilled water to 100 mlstore at room temperature100 mM MgGTP Stock*check formula weight of the lot of GTP you have, determine the amount required for 10 ml of a 100 mM solution.add 8.5 ml distilled water to the determined amount add 1 ml of 1M MgSO4 Stockadjust pH to 7.0,distilled water to 10 mldisburse into 200 ml aliquots, store at -20oC100 mM MgATP Stock*check formula weight of the lot of ATP you have, determine the amount required for 10 ml of a 100 mM solution.add 8.5 ml distilled water to the determined amount add 1 ml of 1M MgSO4 Stockadjust pH to 7.0distilled water to 10 mldisburse into 200 ml aliquots, store at -20oC5 M NaCl Stock*292.2 g NaCldistilled water to 1 literstore at room temperature3.6 mM Brefeldin A*10 mg Brefeldin A (available from Epicenter T echnologies Madison, WI)absolute ethanol to 12 mlstore at -20oC30 x NaF*378 mg NaF (0.9 M NaF)distilled water to 10 mlStore at -20oC30 x AlCl3*20 mg (1.5 mM AlCl3)distilled water to 100 mlStore at room temperature30 mM Mg GTP-g-S*10 mg GTP-g-S tetralithium salt (available from Boehringer Mannheim #220 467)18 ml 1 M MgSO4 Stock (30 mM MgSO4)add 572 ml distilled water (to 592 ml)Store at -20oC150 mM Mg AMP-PNP*25 mg AMP-PNP (available from Boehringer Mannheim #102 547)90 ul 1 M MgSO4 Stock (150 mM MgSO4)add 225 ml distilled water (to 315 ml)Store at -20oC100 mM Sodium orthovanadate*1.839 g Sodium orthovanadatedistilled water to 8 ml in a screw cap tubeadjust pH to 10if solution is yellow, place in boiling water until clear recheck pH, repeat as necessaryadjust to final concentration by checking A265 nm, ext. coeff.= 2925M-1cm-1and adding distilled water as neededstore at -20oC3 M KI*4.98 g KIadd distilled water to 10 mlstore at room temperature0.5 M Na2CO3*531 mg Na2CO3add distilled water to 10 mlstore at room temperature L B BrothIn 1 liter of ddH2O, combine:10 grams Bacto-tryptone5 grams Bacto-yeast Extract5 grams NaClStir until dissolved.。
tne缓冲液的功能主治是什么
tne缓冲液的功能主治是什么引言tne缓冲液是一种常用于实验室研究的缓冲液类型之一。
它由三个组分组成，即三硝基乙酸（Tris）、氯乙酸（HCl）和乙酰胺（EDTA），因此得名tne缓冲液。
tne缓冲液在生物化学和分子生物学研究中广泛应用，具有多种功能和主治作用。
功能主治下面列出了tne缓冲液的主要功能和主治：1.缓冲作用–tne缓冲液能够维持溶液的稳定pH值。
它具有能够调节溶液酸碱度的缓冲能力，可以在实验过程中保持溶液的稳定性，避免pH值的剧烈波动对实验结果的影响。
2.维持离子强度–tne缓冲液含有离子物质，能够维持溶液的离子强度。
在某些实验中，维持溶液的离子强度对于反应条件的稳定是至关重要的。
tne缓冲液能够提供所需的离子强度，以确保实验条件的准确性和可重复性。
3.保护DNA和RNA–tne缓冲液在许多分子生物学实验中被用于保护DNA和RNA 的完整性。
其含有阳离子乙酰胺，能够与DNA和RNA结合，防止其降解和分解。
这对于进行PCR反应、核酸电泳等实验非常重要。
4.优化酶活性–tne缓冲液中的Tris是一种常用的酶反应缓冲液。
它能够优化多种酶的催化活性和特异性。
通过调节Tris的浓度和pH值，可以实现最佳的酶反应条件，提高实验结果的准确性和灵敏度。
5.用于核酸纯化–tne缓冲液也被广泛用于核酸的纯化过程中。
它具有良好的离子平衡性和溶解性，能够有效地溶解核酸和其他有机物质。
通过使用tne缓冲液进行核酸的提取和纯化，可以得到高质量和高纯度的核酸样品。
6.用于蛋白质研究–tne缓冲液也可用于蛋白质的研究。
它可以用作细胞裂解液的成分之一，帮助维持蛋白质在裂解液中的稳定性。
此外，tne缓冲液还能够优化蛋白质的折叠和稳定，有助于研究蛋白质的结构和功能。
结论tne缓冲液是一种常用于生物化学和分子生物学实验中的重要缓冲液。
它具有多种功能和主治作用，包括维持溶液的稳定pH值、维持离子强度、保护DNA和RNA的完整性、优化酶反应、用于核酸纯化以及用于蛋白质研究等。
电泳缓冲液配方 -回复
电泳缓冲液配方-回复电泳缓冲液是一种常用的实验试剂，广泛应用于生物学、分子生物学和遗传学等领域中。
它在核酸电泳、蛋白质电泳以及其他各种电泳实验中发挥着关键的作用。
一个良好的电泳缓冲液需要具备稳定的电导率、适当的pH 值以及一定的溶液渗透压等特性，以确保电泳实验的准确性和可靠性。
那么，如何配制一种优质的电泳缓冲液呢？接下来，将一步一步地回答这个问题。
首先，我们需要明确电泳缓冲液的主要组成。
电泳缓冲液一般由离子缓冲剂、溶解剂和其他辅助剂组成。
1. 离子缓冲剂：电泳缓冲液中的离子缓冲剂起着维持溶液pH稳定的作用。
常用的离子缓冲剂有Tris（三羟甲基氨基甲烷）、TAE（三乙酸酸）缓冲液和TBE（双甘酸二甲基酯）缓冲液等。
选择适当的离子缓冲剂主要依据实验的具体要求，比如所需的pH范围和所电泳的分子类型等。
2. 溶解剂：电泳缓冲液需要加入一定量的溶解剂，以确保溶液的稀释和溶解。
常用的溶解剂有水和甲醇等，其中水是最常用的溶解剂。
3. 辅助剂：辅助剂包括但不限于二甲亚砜（DMSO）、尿素（urea）和甘氨酸（glycine）等物质。
这些辅助剂的添加可以提高电泳的效果和分辨率，特别是在蛋白质电泳实验中。
接下来，我们将详细介绍一种常用的电泳缓冲液配方：TAE缓冲液。
TAE缓冲液的组成为：- 50 mM Tris（三羟甲基氨基甲烷）- 50 mM 愈创木霉素酸（Acetate acid ethanedioate）- 2 mM EDTA（乙二胺四乙酸）下面，我们将一步一步解释如何制备TAE缓冲液。
步骤1：准备1L蒸馏水。
蒸馏水可以通过蒸馏仪或商店购买。
步骤2：将50 mM Tris固体加入500 mL蒸馏水中，并搅拌直至溶解。
步骤3：将50 mM愈创木霉素酸固体加入500 mL蒸馏水中，并搅拌直至溶解。
步骤4：将2 mM EDTA加入500 mL蒸馏水中，并搅拌直至溶解。
步骤5：将Tris、愈创木霉素酸和EDTA的溶液混合并搅拌均匀。