普罗布考促进细胞胆固醇流出及体内胆固醇逆转运

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【国家自然科学基金】_逆向转运_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140729

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2013年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44
2011年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
推荐指数 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2010年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28
科研热词高密度脂蛋白胆固醇逆向转运启动子鼻咽癌非生物胁迫霸王钙超载钙敏感性酵母逆向载脂蛋白a-ⅰ 转运蛋白转运体质膜表达葡萄糖/代谢脂质胞内运输肝靶向耐药逆转耐盐缺血再灌注损伤细胞胆固醇流出糖尿病盐酸多柔比星盐地碱蓬猪毛菜炎症水稻耐盐性水稻水溶性药物毕赤酵母植物膜心血管系统心血管疾病序列分析小凹蛋白1 小凹多药耐药多糖膜基因芯片基因家族动脉粥样硬化形成动脉粥样硬化功能制备克隆乔松中央细胞三磷酸腺苷 zxsos1 yeast
2012年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52

脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白与胆固醇代谢

脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白与胆固醇代谢【摘要】脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(FABP4)主要在脂肪组织和巨噬细胞中表达，作为一种脂质分子伴侣，主要生理作用为参与细胞内部的脂肪酸转运和靶向左位。

近来许多研究表明FABP4与胆固醇代谢关系密切，FABP4可通过影响胆固醇代谢相关的关键基因转录来调巧胆固醇的代谢、储存和转运。

随着FABP4抑制剂研究的深入，以FABP4为靶点的药物有望成为预防和治疗肥胖、2型糖尿病、高胆固醇血症以及动脉粥样硬化等疾病的新策略。

【关键词】脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白；胆固醇代谢：动脉粥样硬化；炎症反应Association of adipocyte fatty acid-binding protein with and cholesterol metabolism[summary 1 Adipocyte fatty acid-binding protein (FABP4) is abundantly expressed in adipocytes and macrophages, and the physiologic function of this lipid chaperone is involved in the intracellular trafficking and targeting of fatty acids inside cell. Studies have shown that FABP4 has a significant role in cholesterol metabolism. FABP4 can affect some key gene expression for cholesterol metabolism, thus regulate the metabolism, storage and trafficking of cholesterol. As the development of FABP4 inhibitors, drugs targeting FABP4 is possible and can lead to a novel therapeutic strategy to prevent and treat obesity, type 2 diabetes, hypercholesterolemia and atherosclerosis.【key words] Adipocyte fatty-acid binding protein； Cholesterol metabolism；Atherosclerosis ； Inflammatory response由于环境及饮食因素的改变，以动脉粥样硬化为基础所致的冠心病发病率逐年上升，成为疾病死亡的重要原因。

巨噬细胞自噬在动脉粥样硬化中的作用_许秋莲

The Effect of Macrophage Autophagy in Atherosclerosis
XU QiuLian， YANGYang，and TIAN Ye （ Department of Cardiovascular，First Affiliated Hospital of Harbin Medical University，Harbin，Heilongjiang 150001 ， China）［ KEY WORDS］ Macrophage； Autophagy； Cholesterol Efflux； Inflammasome； Atherosclerosis Recent research has shown that ［ABSTRACT］ Autophagy is a lysosomal degradation pathway for cellular homeostasis． activation．
macrophage autophage inhibits progression of atherosclerosis by promoting efflux of cholesterol and restraining inflammasome However macrophage autophagy is defective in the advanced plaques， which results in increasing of plaque vulAfterwards how to regulate the macrophage autoFurther investigation on the mechanism of nerability and risk of plaque rupture to cause acute coronary syndrome．

普罗布考对ApoE-

精准医学杂志2023年8月第38卷第4期 JP r e c i sM e d ,A u gu s t 2023,V o l .38,N o .4d o i :10.13362/j .j pm e d .202304002 文章编号:2096-529X (2023)04-0289-05[收稿日期]2023-03-11; [修订日期]2023-05-09[基金项目]青岛西海岸新区2019年度科技项目(2019-58)[通讯作者]安毅,E m a i l :1423120555@q q.c o m 普罗布考对A po E -/-小鼠动脉粥样硬化的影响及其机制李栋1,2安毅1(1 青岛大学附属医院心内科,山东青岛 266003; 2 临沂市人民医院急诊内科)[摘要] 目的探讨普罗布考抑制巨噬细胞M 1极化对A po E -/-小鼠动脉粥样硬化进展的影响及其机制㊂方法 20只A po E -/-小鼠随机分为对照组和普罗布考组㊂两组均给予高脂饲料喂养,普罗布考组隔日1次以普罗布考灌胃,对照组以等剂量生理盐水灌胃,干预12周后分别麻醉后心尖取血,然后颈椎脱臼法处死小鼠留取主动脉血管,利用生化仪检测小鼠血脂㊁肝肾功能情况;E L I S A 法检测小鼠血清中炎性因子(I L -1β㊁I L -6和T N F -α)水平;对主动脉进行整体油红O 染色,检测动脉粥样硬化斑块面积;取主动脉根部行冰冻切片,通过油红O 染色检测斑块面积和脂质沉积情况,采用M a s s o n 染色检测斑块稳定性,以组织免疫荧光法检测斑块巨噬细胞㊁平滑肌细胞㊁胶原纤维及巨噬细胞M 1极化情况,采用实时荧光定量P C R (R T -q P C R )方法检测两组小鼠主动脉斑块中炎性因子m R N A 的水平㊂提取C 57B L /6J 小鼠腹腔原代巨噬细胞,分为两组,对照组给予脂多糖(L P S )联合干扰素-γ(I F N -γ)处理,普罗布考组在对照组基础上给予普罗布考处理,通过E L I S A 和R T -q P C R 方法检测炎性因子(I L -1β㊁I L -6和T N F -α)㊁巨噬细胞M 1极化标志物(i N O S ㊁C D 86)m R N A 的水平㊂结果与对照组相比,普罗布考组A po E -/-小鼠血清中三酰甘油㊁总胆固醇及低密度脂蛋白水平改善(t =2.445~4.024,P <0.05),主动脉血管斑块面积减小(t =3.599㊁2.954,P <0.05);同时,普罗布考组主动脉根部斑块中脂质沉积减少,平滑肌和胶原纤维含量增多,巨噬细胞及其M 1极化标志物明显减少㊂普罗布考组和对照组相比,小鼠血清以及主动脉根部斑块中炎性因子I L -1β㊁I L -6和T N F -α水平降低(t =2.388~4.891,P <0.05)㊂同时与对照组相比,普罗布考组小鼠腹腔原代巨噬细胞中炎性因子I L -1β㊁I L -6和T N F -α水平降低(t =4.238~9.580,P <0.05),C D 86㊁i N O S m R N A 水平明显降低(t =3.251㊁20.860,P <0.05)㊂结论普罗布考可延缓小鼠主动脉粥样硬化进展并促进斑块稳定,其机制可能与抑制主动脉巨噬细胞M 1极化㊁减轻斑块炎症反应有关㊂[关键词] 动脉粥样硬化;普罗布考;巨噬细胞;炎症;疾病模型,动物[中图分类号] R 543.5 [文献标志码] AE F F E C TO FP R O B U C O LO NA T H E R O S C L E R O S I S I N A p o E -/-M I C EA N DI T SM E C H A N I S M L ID o n g ,A N Y i (D e p a r t m e n t o fC a r d i o l o g y ,T h eA f f i l i a t e dH o s p i t a l o fQ i n g d a oU n i v e r s i t y ,Q i n gd a o 266003,C h i n a )[A B S T R A C T ] O b je c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e ef f e c t o f p r o b u c o l o n t h e p r og r e s s i o no f a th e r o s c l e r o si s i n A po E -/-m i c e b y i n -h i b i t i n g m a c r o p h a g eM 1p o l a r i z a t i o n a n d i t sm e c h a n i s m. M e t h o d s At o t a l o f 20A po E -/-m i c ew e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o c o n -t r o l g r o u p a n d p r o b u c o l g r o u p .B o t h g r o u p sw e r e g i v e n h i g h -f a t d i e t ,a n d t h em i c e i n t h e p r o b u c o l g r o u p w e r e g i v e n p r o b u c o l b y g a -v a g eo n c e e v e r y o t h e r d a y ,w h i l e t h o s e i n t h e c o n t r o l g r o u p w e r e g i v e n a n e q u a l v o l u m e o f n o r m a l s a l i n e b y g a v a ge .Af t e r 12w e e k s o f i n t e r v e n t i o n ,b l o o d s a m p l e sw e r e c o l l e c t e d f r o mt h e a p e xo f t h eh e a r t a f t e r a n e s t h e s i a ,a n d t h em i c ew e r e s a c r i f i c e db y c e r v i c a l d i s l o c a t i o n t o c o l l e c t t h e a o r t av e s s e l s .Ab i o c h e m i c a l a n a l y z e rw a s u s e d t om e a s u r eb l o o d l i p i d s a n d l i v e r a n d r e n a l f u n c t i o n s ,a n d E L I S A w a s u s e d t om e a s u r e t h e s e r u ml e v e l s o f i n f l a mm a t o r y f a c t o r s (I L -1β,I L -6,a n dT N F -α).O i l r e dOs t a i n i ng w a s p e r f o r m e d f o r th e a o r t a t om e a s u r e t h e p l a q u e a r e a o f a t h e r o s c l e r o si s ;t h e a o r t i c r o o tw a s c o l l e c t e d t o p r e p a r e f r o z e n s e c t i o n s ,a n d t h e n o i l r e d Os t a i n i n g w a s u s e d t om e a s u r e p l a q u e a r e a a n d l i p i dd e p o s i t i o n ;M a s s o n s t a i n i n g w a s u s e d t om e a s u r e p l a q u e s t a b i l i t y .I mm u n o f -l u o r e s c e n c e a s s a y w a su s e dt oo b s e r v e m a c r o p h a g e s ,s m o o t h m u s c l ec e l l s ,c o l l a g e nf i b e r s ,a n d m a c r o p h a g e M 1p o l a r i z a t i o ni n p l a q u e s ,a n d q u a n t i t a t i v e r e a l -t i m e P C Rw a s u s e d t om e a s u r e t h em R N Ae x p r e s s i o n l e v e l s o f i n f l a mm a t o r y f a c t o r s i n a o r t i c p l a q u e s .P r i m a r yp e r i t o n e a lm a c r o p h a g e sw e r e c o l l e c t e d f r o m C 57B L /6J m i c e a n d d i v i d e d i n t o c o n t r o l g r o u p a n d p r o b u c o l g r o u p.T h em a c -r o p h a g e s i n t h e c o n t r o l g r o u p w e r e t r e a t e dw i t h l i p o p o l y s a c c h a r i d e (L P S )c o m b i n e dw i t h i n t e r f e r o n -γ(I F N -γ),a n d t h o s e i nt h e p r o b u c o l g r o u p w e r e t r e a t e dw i t h p r o b u c o l i na d d i t i o nt o t h e t r e a t m e n t i nt h ec o n t r o l g r o u p .E L I S Aa n dR T -qP C R w e r eu s e dt o m e a s u r e t h em R N Ae x p r e s s i o n l e v e l s o f i n f l a mm a t o r y c y t o k i n e s (I L -1β,I L -6,a n dT N F -α)a n dm a c r o p h a g eM 1p o l a r i z a t i o nm a r -k e r s (i N O S a n dC D 86). R e s u l t s C o m p a r e dw i t h t h e c o n t r o l g r o u p ,t h e p r o b u c o l g r o u p h a d s i g n i f i c a n t i m pr o v e m e n t s i n t h e s e -r u ml e v e l s o f t r i g l y c e r i d e ,t o t a l c h o l e s t e r o l ,a n d l o w -d e n s i t y l i p o p r o t e i nc h o l e s t e r o l (t =2.445-4.024,P <0.05)a n das i g n i f i c a n t r e d u c t i o n i n a o r t i c p l a q u e a r e a (t =3.599,2.954,P <0.05),a sw e l l a s a s i g n i f i c a n t r e d u c t i o n i n l i p i d d e p o s i t i o n ,s i g n i f i c a n t i n c r e a s e s i ns m o o t h m u s c l ea n dc o l l a g e nf i b e r ,a n ds i gn i f i c a n tr e d u c t i o n s i n m a c r o p h a ge s a n d t h e i r M 1p o l a r i z a t i o n m a r k e r si n a o r t i c r o o t p l a q u e s .C o m p a r e dw i t ht h ec o n t r o l g r o u p ,t h e p r o b u c o l g r o u p ha d ㊃982㊃Copyright ©博看网. All Rights Reserved.精准医学杂志2023年8月第38卷第4期JP r e c i sM e d,A u g u s t2023,V o l.38,N o.4 s i g n i f i c a n t r e d u c t i o n s i n t h e l e v e l so f t h e i n f l a mm a t o r y f a c t o r sI L-1β,I L-6,a n d T N F-αi ns e r u m a n da o r t i cr o o t p l a q u e s(t= 2.388-4.891,P<0.05).C o m p a r e dw i t h t h e c o n t r o l g r o u p,t h e p r o b u c o l g r o u p o f p r i m a r yp e r i t o n e a lm a c r o p h a g e sh a ds i g n i f i c a n tr e d u c t i o n s i n t h e l e v e l s o f t h e i n f l a mm a t o r y c y t o k i n e s I L-1β,I L-6,a n dT N F-α(t=4.238-9.580,P<0.05)a n d t h em R N Ae x p r e s-s i o n l e v e l s o f i N O S a n d C D86(t=3.251,20.860,P<0.05).C o n c l u s i o n P r o b u c o l c a nd e l a y t h e p r o g r e s s i o no f a t h e r o s c l e r o s i sa n d p r o m o t e p l a q u e s t ab i l i t y i n A p o E-/-m ic e,p o s s i b l y b y i n h i b i t i n g m a c r o p h a g eM1p o l a r i z a t i o n a nd a l le v i a t i n g p l a q u e i nf l a mm a-t o r y r e s p o n s e.[K E Y W O R D S] A t h e r o s c l e r o s i s;P r o b u c o l;M a c r o p h a g e s;I n f l a mm a t i o n;D i s e a s em o d e l s,a n i m a l动脉粥样硬化(a t h e r o s c l e r o s i s,A S)是由多种因素参与的动脉血管的慢性炎症性疾病[1]㊂巨噬细胞在A S发生㊁发展和转归中发挥重要作用㊂斑块中的巨噬细胞可根据局部微环境的变化呈现不同的表型,其中M1型巨噬细胞分泌促炎因子,加速斑块进展,并使斑块不稳定性增高;M2型巨噬细胞分泌抗炎因子,可抑制A S进展[2]㊂因此,如何抑制巨噬细胞M1极化或促进巨噬细胞M2极化,对于减轻斑块炎症反应㊁促进斑块稳定意义重大㊂普罗布考具有抗氧化和调血脂的作用,临床上主要用于高脂血症和A S治疗[3]㊂另外普罗布考还具有减轻同型半胱氨酸引起氧化应激和炎症反应㊁抑制血管弹性纤维降解㊁抑制白细胞黏附㊁抑制树突状细胞活化以及改善内皮功能等作用[4-8]㊂但普罗布考能否调控动脉中巨噬细胞极化尚无研究报道㊂本研究通过构建A S小鼠模型和体外细胞实验,旨在揭示普罗布考对A S进展的影响,并从巨噬细胞极化角度探讨普罗布考影响A S进展的分子机制㊂1材料与方法1.1材料与试剂清洁级健康雄性A p o E-/-小鼠20只,8周龄,品系背景为C57B L/6J,健康雄性C57B L/6J小鼠10只,8周龄,均购自北京维通利华实验动物技术有限公司,均于恒温恒湿及昼夜交替环境中饲养㊂普罗布考购自美国S i g m a公司,E L I S A试剂盒购自美国R D公司,一抗α-S MA㊁C D86购自美国C S T公司,MOMA-2购自美国B i o-R a d公司,i N O S㊁I L-1β购自美国A b c a m公司㊂1.2方法1.2.1动物分组与处理20只A p o E-/-小鼠随机分为对照组和普罗布考组,每组10只㊂两组小鼠均以高脂饲料喂养12周后,普罗布考组小鼠隔日1次灌胃普罗布考(30m g/k g),对照组隔日1次灌胃等剂量的生理盐水,均灌胃12周㊂1.2.2两组小鼠各项指标检测灌胃12周后,腹腔注射10g/L戊巴比妥钠(50m g/k g)麻醉两组小鼠,心尖取血,离心以后采用全自动生化检测仪检测血清中三酰甘油(T G)㊁总胆固醇(T C)㊁低密度脂蛋白(L D L-C)㊁肌酐(C R E)㊁尿素(U R E A)㊁尿酸(U A)含量及丙氨酸氨基转移酶(A L T)和天门冬氨酸氨基转移酶(A S T)的水平,采用E L I S A法检测血清中炎性因子白细胞介素1β(I L-1β)㊁I L-6㊁肿瘤坏死因子α(T N F-α)的水平,检测步骤严格按照试剂盒说明书进行㊂颈椎脱臼法处死小鼠后开胸取主动脉血管(包括主动脉弓及分支部分),置于40g/L多聚甲醛溶液中固定㊂随机取每组5只小鼠的主动脉血管,进行油红O染色,检测斑块面积,计算斑块面积占血管壁总面积百分比㊂取每组另外5只小鼠的动脉血管,O C T包埋,制备5~6μm厚冷冻切片,使用油红O染色检测主动脉根部切片中斑块面积大小,以M a s s o n染色法检测斑块稳定性,采用组织免疫荧光方法检测两组小鼠动脉斑块中的巨噬细胞㊁平滑肌细胞㊁胶原纤维以及巨噬细胞M1极化情况,采用实时荧光定量P C R(R T-q P C R)方法检测两组小鼠主动脉斑块中I L-1β㊁I L-6和T N F-αm R N A 的水平,检测步骤严格按照试剂盒说明书要求进行㊂1.2.3小鼠腹腔原代巨噬细胞提取和分组8周龄雄性C57B L/6J小鼠10只,颈椎脱臼法处死后,立即浸于含体积分数0.75乙醇中2m i n㊂然后在小鼠腹部剪一小口,充分暴露腹膜,使用无菌注射器向腹腔注入约10m L预冷的无菌P B S,使腹腔内充满P B S;反复抽打腹腔P B S后,以无菌注射器将腹腔悬液移至另一无菌管中,以800r/m i n离心5m i n;弃掉P B S,并使用含有体积分数0.10胎牛血清的D M E M培养基重悬细胞;置于37ħ培养箱中进行培养,待细胞贴壁生长融合度约75%时,P B S清洗1次,更换新鲜含体积分数0.10胎牛血清的D M E M 培养基后继续培养,获得小鼠腹腔原代巨噬细胞㊂将小鼠腹腔原代巨噬细胞分为两组,每组设置3个复孔,结果取平均值,其中对照组的巨噬细胞以L P S(100μg/L)+I N F-γ(20μg/L)处理24h;普罗布考组的巨噬细胞以普罗布考(10μm o l/L)+L P S (100μg/L)+I F N-γ(20μg/L)处理24h㊂然后采㊃092㊃Copyright©博看网. All Rights Reserved.精准医学杂志2023年8月第38卷第4期JP r e c i sM e d,A u g u s t2023,V o l.38,N o.4用E L I S A方法检测两组巨噬细胞中的炎性因子I L-1β㊁I L-6㊁T N F-α水平,检测严格按照试剂盒说明书进行㊂1.2.4 R T-q P C R方法检测各组细胞中I L-1β㊁I L-6㊁T N F-α㊁C D86和i N O S m R N A的相对表达水平分别取对照组㊁普罗布考组小鼠主动脉根部血管和巨噬细胞,后分别加入1m LT R I z o l试剂,根据试剂盒说明书要求提取总R N A,根据反转录试剂盒说明书的要求进行逆转录,条件为42ħ30m i n,95ħ2m i n㊂根据S Y B R G R E E N染料试剂盒说明书要求,以c D N A模板为底物进行扩增,反应体系的总体积为15μL,其中引物1μL,c D N A模板1μL, S Y B RG R E E N染料5.5μL和去离子水7.5μL㊂以β-a c t i n为内参照,根据2-әәC T法计算目的基因的相对表达水平㊂引物由上海博尚生物技术有限公司提供,引物名称及其序列见表1㊂表1引物名称及其序列名称序列长度(b p) I L-1βF:5'-G T G T C T T T C C C G T G G A C C T T-3'20R:5'-A A T G G G A A C G T C A C A C A C C A-3'20I L-6F:5'-C T G G T C T T C T G G A G T A C C A T A G C-3'23R:5'-T C T G T G A C T C C A G C T T A T C T C T T G G-3'25T N F-αF:5'-G T C C G G G C A G G T C T A C T T T G-3'20 R:5'-G G G G C T C T G A G G A G T A G A C A-3'20C D86F:5'-G C A G C A C G G A C T T G A A C A A C-3'20R:5'-C C T T T G T A A A T G G G C A C G G C-3'20i N O S F:5'-G G G T C A C A A C T T T A C A G G G A G T-3'22R:5'-G A G T G A A C A A G A C C C A A G C G-3'20β-a c t i n F:5'-G G C T G T A T T C C C C T C C A T C G-3'20 R:5'-C C A G T T G G T A A C A A T G C C A T G T-3'221.3统计学处理采用S P S S19.0软件对数据进行统计分析㊂使用S h a p i r o-W i l k检验数据是否符合正态分布,符合正态分布的计量资料以 xʃs表示,两组比较采用独立样本t检验,以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1普罗布考对A p o E-/-小鼠血脂和肝肾功能的影响与对照组小鼠相比较,普罗布考组小鼠血清中的T G㊁T C及L D L-C水平均明显下降(t=2.445~ 4.024,P<0.05),其他指标比较差异均无显著意义(P>0.05)㊂见表2㊂2.2普罗布考对A p o E-/-小鼠A S斑块面积和稳定性的影响主动脉血管油红O染色显示,对照组和普罗布考组小鼠的斑块面积与血管壁总面积比值分别为(27.40ʃ0.02)%和(17.40ʃ0.02)%,两组比较差异有显著性(t=3.599,P<0.05)㊂主动脉根部切片油红O染色显示,对照组和普罗布考组小鼠斑块面积分别为(35.40ʃ4.18)㊁(21.80ʃ1.93)mm2,两组比较差异具有显著性(t=2.954,P<0.05);与对照组相比,普罗布考组小鼠主动脉根部斑块中脂质明显减少(图1A㊁B)㊂M a s s o n染色结果显示,与对照组进行比较,普罗布考组小鼠的主动脉根部斑块中胶原纤维明显增多(图1C㊁D)㊂免疫荧光染色显示,与对照组相比,普罗布考组小鼠的主动脉根部斑块中巨噬细胞(MAMO-2)明显减少,斑块纤维帽处平滑肌细胞(α-S MA)和胶原纤维均明显增多(图2),图中红色为巨噬细胞,绿色为平滑肌细胞以及胶原纤维㊂表2两组小鼠血清血脂和肝肾功能指标比较(n=10, xʃs)指标对照组普罗布考组t值P值T G(c/mm o l㊃L-1)1.10ʃ0.110.84ʃ0.232.4450.040 T C(c/mm o l㊃L-1)17.95ʃ2.0013.63ʃ1.444.0240.002 L D L-C(c/mm o l㊃L-1)7.89ʃ1.034.12ʃ1.143.6650.003 A L T(z/U㊃L-1)19.76ʃ3.4321.04ʃ2.460.4970.593 A S T(z/U㊃L-1)56.41ʃ4.2152.69ʃ4.420.6090.556 C R E(c/μm o l㊃L-1)15.87ʃ3.0211.54ʃ1.781.2780.227 U R E A(c/mm o l㊃L-1)5.50ʃ0.665.53ʃ0.360.0360.971 U A(c/μm o l㊃L-1)737.40ʃ71.25613.70ʃ62.761.3020.222A㊁B:主动脉根部切片油红O染色(红色表示脂质含量),C㊁D:主动脉根部切片M a s s o n染色(蓝色表示胶原纤维含量),100倍图1两组小鼠主动脉根部切片染色结果A㊁B:对照组,C:对照组融合图,D㊁E:普罗布考组,F:普罗布考组融合图;组织免疫荧光法,200倍图2各组小鼠主动脉根部切片免疫荧光染色结果2.3普罗布考对A p o E-/-小鼠血清和动脉斑块中炎性因子的影响与对照组相比,普罗布考组小鼠血清中炎性因㊃192㊃Copyright©博看网. All Rights Reserved.精准医学杂志2023年8月第38卷第4期 JP r e c i sM e d ,A u gu s t 2023,V o l .38,N o .4子I L -1β㊁I L -6和T N F -α水平明显降低(t =2.388~4.891,P <0.05);主动脉斑块中I L -1β㊁I L -6以及T N F -αm R N A 的表达水平亦明显降低,差异具有显著性(t =3.060~4.507,P <0.05)㊂见表3㊂2.4 普罗布考对小鼠巨噬细胞M 1极化的影响与对照组相比较,普罗布考组中MOMA -2+和i N O S +细胞数量及其比例明显减少,见图3㊂图中绿色为MOMA -2,红色为巨噬细胞M 1极化标志物i N O S ㊂E L I S A 检测结果显示,与对照组比较,普罗布考组细胞中I L -1β㊁I L -6㊁T N F -α含量明显减低(t =4.238~9.580,P <0.05);R T -q P C R 检测结果也显示,巨噬细胞的M 1极化标志物C D 86㊁i N O S 和炎性因子I L -1β㊁I L -6㊁T N F -αm R N A 的水平亦均明显降低(t =3.251~36.190,P <0.05)㊂见表4㊂A ㊁B :对照组,C :对照组融合图;D ㊁E :普罗布考组,F :普罗布考组融合图;组织免疫荧光法,400倍图3 两组小鼠动脉斑块中巨噬细胞及其M 1极化标志物的比较表3 两组小鼠动脉斑块和血清炎性因子水平变化比较(n =10, x ʃs )组别 E L I S A 检测结果(ρ/n g ㊃L -1)I L -1βI L -6T N F -αR T -qP C R 检测结果I L -1βI L -6T N F -α对照组 15.98ʃ2.652.92ʃ0.452.26ʃ0.541.02ʃ0.211.09ʃ0.131.01ʃ0.14普罗布考组8.50ʃ1.522.13ʃ0.361.65ʃ0.190.59ʃ0.230.75ʃ0.140.62ʃ0.14表4 小鼠腹腔原代巨噬细胞M 1极化标志物及上清炎性因子水平变化比较(n =10, x ʃs )组别R T -qP C R 检测结果C D 86i N O SI L -1βI L -6T N F -αE L I S A 检测结果(ρ/n g ㊃L -1)I L -1βI L -6T N F -α对照组 16.67ʃ0.943623.09ʃ129.103753.35ʃ183.594406.52ʃ495.20207.50ʃ23.2226.43ʃ3.61116.21ʃ5.30214.49ʃ10.54普罗布考组13.39ʃ1.75892.40ʃ21.91369.81ʃ35.27242.59ʃ13.18144.52ʃ8.9216.37ʃ3.1182.61ʃ5.35143.95ʃ10.143 讨论A S 是一种涉及多种细胞和多种生物学过程的复杂病变㊂当各种因素诱导血管发生A S 时,血管内皮细胞受损,白细胞黏附到受损处,进而通过内皮间隙浸润至血管内膜㊂内膜中的单核细胞进一步分化为巨噬细胞,可吞噬修饰的低密度脂蛋白及凋亡细胞等,变成泡沫细胞[9]㊂泡沫细胞是A S 的特征性细胞[10]㊂泡沫细胞后期发生凋亡坏死,释放脂质和各种抗原,构成了斑块的坏死核心,加剧斑块的炎症反应㊂巨噬细胞或泡沫细胞可分泌大量的炎性因子㊁趋化因子和基质金属酶,一方面会招募更多的白细胞浸润,另一方面会导致内皮细胞和平滑肌细胞发生形态和功能学改变,如内皮细胞凋亡㊁平滑肌细胞表型转换,此外基质金属酶会直接降解胶原纤维,导致斑块纤维帽变薄,易于破裂㊂巨噬细胞极化与A S 发生关系密切㊂斑块中的多种成分比如胆固醇结晶㊁氧化L D L -C ㊁T N F -α以及微修饰L D L -C 均可诱导巨噬细胞M 1极化[9-11]㊂M 1型巨噬细胞与斑块发生㊁发展及不稳定有关㊂M 1型巨噬细胞分泌的T N F -α㊁I L -6和I L -1β一方面增加L D L 跨内皮进入内膜中,促进了A S 的进展[11];另一方面导致内皮细胞活化,内皮细胞凋亡增加,内皮一氧化氮合酶表达降低,引起内皮功能紊乱,加速A S 的进展[11]㊂其次,M 1型巨噬细可引起平滑肌细胞凋亡,使动脉中膜变薄,血管重构㊂最后,M 1型巨噬细胞大量分泌基质金属蛋白酶,降解胶原纤维,使纤维帽变薄,易于发生斑块破裂[12]㊂普罗布考具有多重药理学效应,包括调脂㊁抗炎㊁抗氧化及改善血管内皮功能等,在临床上多用于A S 性心血管疾病的防治[13-16]㊂近年来研究还发现了普罗布考的多种生物学作用,如普罗布考可逆转同型半胱氨酸诱导的单核细胞分化和氧化应激[4],抑制链脲霉素诱导的糖尿病小鼠C D 11c +树突状细胞的免疫成熟[7],抑制脂多糖诱导的白细胞黏附[6],抑制血管弹性纤维降解等[5]㊂但是,普罗布考能否调控巨噬细胞极化尚不清楚㊂本研究探讨了普罗布考对高脂饮食诱导的小鼠A S 的影响及对斑块中巨噬细胞极化的影响㊂通过以上实验结果显示该浓度的普罗布考干预未对小鼠㊃292㊃Copyright ©博看网. All Rights Reserved.精准医学杂志2023年8月第38卷第4期JP r e c i sM e d,A u g u s t2023,V o l.38,N o.4的肝肾功造成损害,经普罗布考治疗能降低小鼠血脂水平,减小A S斑块面积,使得斑块更加稳定,降低全身和斑块中炎性因子水平;更重要的是,普罗布考抑制了斑块中巨噬细胞M1极化,表现为多种M1极化标志物例如C D86㊁i N O S㊁I L-1β的m R N A水平均明显降低㊂本研究在体外实验中,进一步验证了普罗布考对巨噬细胞M1极化的调控作用㊂由此,我们揭示了普罗布考通过调控巨噬细胞极化和炎症反应从而抑制A S的新机制㊂本课题尚有一些局限性㊂首先,本研究虽然发现了普罗布考可抑制巨噬细胞M1极化,但没有阐明普罗布考调控M1极化的分子机制㊂其次,普罗布考能否调控巨噬细胞M2极化尚不清楚㊂再者,普罗布考调控的巨噬细胞M1极化在多大程度上影响A S仍需研究㊂最后,在临床上服用普罗布考能否减轻A S患者斑块中巨噬细胞M1极化亦需要进一步研究㊂综上所述,本研究探讨了普罗布考对A p o E-/-小鼠A S的影响,结果显示普罗布考可延缓小鼠A S 进展并促进斑块稳定,其机制可能与抑制巨噬细胞M1极化㊁减轻斑块炎症反应有关㊂伦理批准和动物权利声明:本研究涉及的所有实验均已通过青岛大学附属医院实验动物福利伦理委员会的审核批准(文件号A HQ U-MA L20190510)㊂所有实验过程均遵照‘实验动物福利伦理原则“的条例进行㊂作者声明:李栋㊁安毅参与了研究设计和论文的写作和修改㊂所有作者均阅读并同意发表该论文,且均声明不存在利益冲突㊂[参考文献][1]L I B B YP.I n f l a mm a t i o n i na t h e r o s c l e r o s i s-N o l o n g e rat h e o r y[J].C l i nC h e m,2021,67(1):131-142.[2]J I N N O U C H IH,G U OL,S A K AMO T OA,e t a l.D i v e r s i t y o fm a c r o p h a g e p h e n o t y p e sa n dr e s p o n s e s i na t h e r o s c l e r o s i s[J].C e l lM o l L i f eS c i,2020,77(10):1919-1932.[3]K A N G H J,K I M M H,S U N GJ,e ta l.E f f e c to f p r o b u c o la n d/o r c i l o s t a z o l o nc a r o t i d i n t i m am e d i a t h i c k n e s s i n p a t i e n t sw i t hc o r o n a r y h e a r t d i s e a s e:Ar a n d o m i z e d,m u l t i c e n t e r,m u l-t i n a t i o n a l s t u d y[J].JA t h e r o s c l e rT h r o m b,2021,28(2):124-136.[4]Z H A N G M L,HO U YC,S H E N YL,e t a l.P r o b u c o l r e v e r-s e s h o m o c y s t e i n e i n d u c e d i n f l a mm a t o r y m o n o c y t e s d i f f e r e n t i a-t i o n a n do x i d a t i v e s t r e s s[J].E u r JP h a r m a c o l,2018,818:67-73.[5]C H E NC,WA N G Y X,C A O Y N,e t a l.M e c h a n i s m s u n d e r-l y i n g t h e i n h i b i t o r y e f f e c t s o f p r o b u c o l o ne l a s t a s e-i n d u c e da b-d o m i n a l a o r t i ca ne u r y s mi n m i c e[J].B rJP h a r m a c o l,2020,177(1):204-216.[6]Z U C O L O T O AZ,MA N C H O P E M F,S T A U R E N G O-F E R-R A R IL,e t a l.P r o b u c o l a t t e n u a t e s l i p o p o l y s a c c h a r i d e-i n d u c e d l e u k o c y t er e c r u i t m e n ta n di n f l a mm a t o r y h y p e r a l g e s i a:E f f e c t o nN F-кBa c t i v a t i o na n dc y t o k i n e p r o d u c t i o n[J].E u r JP h a r-m a c o l,2017,809:52-63.[7]Z HU H,J I NXT,Z H A OJ J,e t a l.P r o b u c o l p r o t e c t s a g a i n s ta t h e r o s c l e r o s i s t h r o u g h l i p i d-l o w e r i n g a n d s u p p r e s s i n g i mm u n em a t u r a t i o no fC D11c+d e n d r i t i c c e l l s i nS T Z-i n d u c e dd i a b e t i c L D L R-/-m i c e[J].J C a r d i o v a s c P h a r m a c o l,2015,65(6):620-627.[8]C H E N Y,HU K,B U H R,e t a l.P r o b u c o l p r o t e c t s c i r c u l a-t i n g e n d o t h e l i a l p r o g e n i t o rc e l l sf r o m a m b i e n tP M2.5d a m a g e v i a i n h i b i t i o no f r e a c t i v eo x y g e ns p e c i e s a n d i n f l a mm a t o r y c y-t o k i n e p r o d u c t i o n i nv i v o[J].E x p T h e r M e d,2018,16(6): 4322-4328.[9]L E V I N M G,Z U B E R V,WA L K E R V M,e t a l.P r i o r i t i z i n gt h e r o l eo fm a j o r l i p o p r o t e i n sa n ds u b f r a c t i o n sa sr i s kf a c t o r sf o r p e r i p h e r a la r t e r y d i s e a s e[J].C i r c u l a t i o n,2021,144(5):353-364.[10]Y U A N Y,L I P,Y EJ.L i p i d h o m e o s t a s i s a n d t h e f o r m a t i o n o fm a c r o p h a g e-d e r i v e d f o a m c e l l s i na t h e r o s c l e r o s i s[J].P r o t e i nC e l l,2012,3(3):173-181.[11]Z H A N G YZ,Y A N G X Y,B I A N F,e t a l.T N F-αp r o m o t e se a r l y a t h e r o s c l e r o s i sb y i n c r e a s i n g t r a n s c y t o s i so fL D La c r o s se n d o t h e l i a l c e l l s:C r o s s t a l kb e t w e e nN F-κBa n dP P A R-γ[J].JM o l C e l l C a r d i o l,2014,72:85-94.[12]HU A N G W C,S A L A-N E W B Y G B,S U S A N A A,e ta l.C l a s s i c a l m a c r o p h a g e a c t i v a t i o n u p-r e g u l a t e ss e v e r a l m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e s t h r o u g h m i t o g e na c t i v a t e d p r o t e i nk i n a s e sa n dn u c l e a r f a c t o r-κB[J].P L o SO n e,2012,7(8):e42507.[13]D E R A N G U L A K,J A V A L G E K A R M,K UMA R A R R U R IV,e ta l.P r o b u c o la t t e n u a t e s N F-κB/N L R P3s i g n a l l i n g a n da u g m e n t sN r f-2m e d i a t e da n t i o x i d a n td e f e n c e i nn e r v e i n j u r yi n d u c e dn e u r o p a t h i c p a i n[J].I n tI mm u n o p h a r m a c o l,2022,102:108397.[14]王敏,谭茗月,赵水平.普罗布考对高脂血症患者血脂及氧化型低密度脂蛋白和单核细胞趋化蛋白-1的影响[J].中国循环杂志,2014,29(1):31-34.[15]赵雯娜,李姗,董晓楠,等.瑞舒伐他汀与普罗布考抗大鼠动脉粥样硬化机制研究[J].中国现代应用药学,2013,30(6):601-606.[16]刘茂柏,李娜,郑斌,等.普罗布考抗动脉粥样硬化作用的m e t a分析[J].中国现代应用药学,2017,34(4):579-586.(本文编辑耿波厉建强)㊃392㊃Copyright©博看网. 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健康讲座(高脂蛋白血症)

普罗布考、贝特类、他汀类及脂溶性维生素的吸收。【联合用药】丙丁酚，烟酸类，贝特类，他汀类【临床研究】LRC-CPPT; NHLBI Type II; CLAS; FATS; STARS
【烟酸类】
代表药物
药物名
别名
常规剂量
烟酸(Niacin)
l-2g／次，3次／d。为减少服药反应，开始服药的3—7日内，可服0.1-0.5g／次，4次／d，以后酌情渐增至1-2g／次，3次／d。
运到肝脏
【脂蛋白的临床意义】
LDL
CM
VLDL HDL
五、高脂血症
【高脂血症的定义】
高脂血症是指血浆中胆固醇或/和甘油三酯水平升高。实际上是血浆中某一类或某几类脂蛋白水平升高的表现, 严格说来应称为高脂蛋白血症。
近年来, 已逐渐认识到血浆中高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)降低也是一种血脂代谢紊乱。因而, 有人建议采用脂质异常血症, 并认为这一名称能更为全面准确地反映血脂代谢紊乱状态。
【脂蛋白和载脂蛋白】
脂蛋白主要是由胆固醇、甘油三酯、磷脂和蛋白质组成, 绝大多数是在肝脏和小肠组织中合成, 并主要经肝脏进行分解代谢。位于脂蛋白中的蛋白质称为载脂蛋白(Apo), 现已发现有20余种载脂蛋白。
载脂蛋白能介导脂蛋白与细胞膜上的脂蛋白受体结合并被摄入细胞内进行分解代谢。在脂蛋白的代谢过程中, 有几种酶也起很重要的作用, 主要包括脂蛋白脂酶(LPL)和甘油三酯脂酶(HTGL)。
影响TG水平
抑制CE在肝内合成; 促进无活性的非酯化TC转入活性池; 促进调节性氧化类固醇形成; 降低细胞表面LDL受体活性; 降低LDL与LDL受体的亲和性。
【年龄、性别对血脂的影响】
人在出生时脐带血中总胆固醇、LDL-C、HDL-C和甘油三酯均较低。6个月后上升较快，青春期前上升较缓慢，成年期男、女两性血脂水平随年龄增高而继续增高，直到50~55岁。随着年龄的增加, 体重也会增加。但是, 依年龄增加而伴随的胆固醇升高并非全是体重增加所致。有人发现老年人的LDL受体活性减退, LDL分解代谢率降低, 也是年龄效应的原因。老年人LDL受体活性减退的机制尚不清楚, 可能是由于随着年龄的增加, 胆汁酸合成减少, 使肝内胆固醇含量增加, 进一步抑制LDL受体的活性。现有资料表明, 除体重因素外, 年龄本身可使血浆胆固醇增加0.78mmol/L(30mg/dL)左右。

B类_型清道夫受体SR_BI表达上调剂的研究进展_李文燕

并激活载脂蛋白 A1（ ApoA1）依赖的巨噬细胞胆固醇这对动脉粥样硬化的缓解是有利的。外流，中科院医药生物技术所的司书毅、洪斌课题 BI 表达上调剂做了大量研究。他们首组对人 SＲBI 表达先建立了基于肝癌细胞（ HepG2 ）的人 SＲ［21 ］上调剂的高通量筛选模型，以此为基础筛选得 BI 表达上调活性的化合到了许多具有良好人 SＲ物。如从链霉素发酵液中分离提取得到了曲古抑菌素 A（ TSA）、曲古抑菌素 D，化学结构式见图 3 ；从红车轴草中提取得到的异黄酮类化合物红车轴草素、刺芒柄花素，化学结构式见图 4；化合物 5242331 等，化学结构式见图 5 。
3
SＲBI 基因表达的上调剂
SＲBI 被认为是治疗心由于其抗 AS 的作用， BI 过表达可以明显血管疾病的新分子靶标。 SＲ降低血浆胆固醇水平，减少粥样硬化斑块面积，预 SＲBI 基因表达的上调剂，防 AS 的形成。因此，有可能成为调节 HDL 受体通路的新型抗 AS 药 BI 基因表达的上调剂的研究尚属起步阶物。SＲ段，相关文献报道相对较少，本文作者将对这些小分子活性化合物进行简要的综述。 SＲBI 的基因表达受多种通路调控［15］，一些核转录因子如异二聚体型核受体、雌激素受体、胆 BI 的基因固醇调节元件结合蛋白等都可影响 SＲ转录；一些质膜受体的配基如胰岛素样生长因子、葡萄糖、促炎症因子和维生素 A 等也可以通过激 BI 的 mＲ活细胞内的二级信号传导通路调节 SＲNA 水平。但这些因子生理作用较为广泛，难以作为药物使用。相反，一些外源性物质如某些天 BI 然产物、合成小分子等作用单一，具有成为 SＲ基因表达上调剂的潜力。 FMVP4 是一个由菜油甾醇衍生化得到的合成小分子化合物，具有强大的降胆固醇作用临床前研究显示

第二十四章调血脂药和抗动脉粥样硬化药

第二十四章调血脂药和抗动脉粥样硬化药掌握洛伐他丁、考来烯胺和普罗布考的药理作用、作用机制、临床应用及主要不良反应。

熟悉氯贝丁酯、烟酸及其他常用抗动脉粥样硬化药物的药理作用特点。

动脉粥样硬化是缺血性心脑血管病的病理基础。

在我国，心脑血管病发病率与死亡率近年也明显增加。

因而，抗动脉粥样硬化药的研究日益受到重视。

动脉粥样硬化病因、病理复杂，本类药物涉及面较广。

本章主要介绍调血脂药、抗氧化药、多烯脂肪酸类及保护动脉内皮药等。

分类：①主要降低甘油三酯类：氯贝丁酯（安妥明）、非诺贝特、烟酸。

②主要降低胆固醇类：消胆胺、亚油酸。

第一节调血脂药血脂以胆固醇酯（CE）和甘油三酯（TG）为核心，外包胆固醇（Ch）和磷脂（PL）构成球形颗粒。

再与载脂蛋白（apo）相结合，形成脂蛋白溶于血浆进行转运与代谢。

脂蛋白可分为乳糜微粒（CM）、极低密度脂蛋白（VLDL）、中间密度脂蛋白（IDL）、低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL）等。

凡血浆中VLDL、IDL、LDL及apoB浓度高出正常为高脂蛋白血症，易致动脉粥样硬化。

近年来证明HDL、apoA浓度低于正常，也为动脉粥样硬化危险因子。

对血浆脂质代谢紊乱，首先要调节饮食，食用低热卡、低脂肪、低胆固醇类食品，加强体育锻炼及克服吸烟等不良习惯。

如血脂仍不正常，再用药物治疗。

凡能使LDL、VLDL、TC（总胆固醇）、TG、apoB降低，或使HDL、apoA升高的药物，都有抗动脉粥样硬化作用。

胆汗酸结合树脂考来烯胺（消胆胺）和考来替泊（降胆宁）都为碱性阴离子交换树脂，不溶于水，不易被消化酶破坏。

【药理作用】能明显降低血浆TC和LDL-c（LDL-胆固醇）浓度，轻度增高HDL浓度。

本类药物口服不被消化道吸收，在肠道与胆汁酸形成络合物随粪排出，故能阻断胆汁酸的重吸收。

由于肝中胆汁酸减少，使胆固醇向胆汁酸转化的限速酶――7-α羟化酶更多地处于激活状态，肝中胆固醇向胆汁酸转化加强。

调控胆固醇吸收的分子通路

调控胆固醇吸收的分子通路邵翅;杨林【摘要】Cholesterol imbalance can cause a variety of diseases,such as high cholesterol,cardiovascular disease, while the cholesterol balance in body is maintained by synthesis, absorption, metabolism and circulation of cholesterol,and the absorption of cholesterol is a crucial step. Cholesterol absorption occurs mainly in the small intestine and proximal jejunum, andit is regulated by a number of proteins. Niemann⁃Pick C1⁃like 1 protein (NPC1L1) is responsible for the cholesterol uptake.ATP-bindingcassette(ABC) G5/G8 inhibits the absorption of cholesterol. Acyl⁃coenzyme A( CoA):cholesterol acyltransferase( ACAT) catalyzes the cholesterol esterified reaction for raising cholesterol absorption.ATP⁃binding cassette transporters A1(ABCA1) transports cholesterol in peripheral tissues and these proteins are also affected by other regulatory factors. Parsing cholesterol absorption of molecular pathways has major directive significance the prevention and treatment of diseases related with cholesterol imbalance.Therefore, the molecular pathways of cholesterol absorption regulation were reviewed in this paper.%机体内的胆固醇失衡会引发多种疾病，如高胆固醇血症、心脑血管疾病等，而其平衡由胆固醇的合成、吸收、代谢和循环共同维持，其中胆固醇的吸收至关重要。

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普罗布考（畅躺促进细胞胆固醇流出
及体内胆固醇逆转运
中南大学湘雅二医院心内科倪占玲赵水平

胞内胆固醇流出是动脉粥样硬化斑块消退的关
键环节。胆固醇逆转运（ＲＣＴ）是指过多的胆固醇从外周细胞包括巨噬细胞转运至肝脏，进而以胆酸的形式被分泌到体外的过程。ＲＣＴ是机体排出多余胆固醇的最主要途径，也是机体抗动脉粥样硬化的重要机制之一。普罗布考是目前所知唯一能消退家族性高胆固醇血症患者黄色瘤的调脂药。动物实验发现，普罗布考可以抑制甚至消退动脉粥样硬化斑块。推测其中重要机制是普罗布考促进体内的ＲＣＴ，但具体作用机制未明。以往的研究报道，普罗布考通过调节胆固醇酯转运蛋白（ＣＥＴＰ）、卵磷脂胆固醇酰基转移酶、载脂蛋白Ｅ和Ｂ族Ｉ型清道夫受体（ｓａ—ＢＩ）等的表达与功能，增加胆固醇从外周细胞的流出及转运。但是也有相反的报道，观察到普罗布考可抑制三磷酸腺苷结合盒转运子（ＡＢＣ）ＡＩ介导的细胞胆固醇流出，而不利于胆固醇的逆转运。然而，这些结果大多来自体外研究，只能从单独的环节解释普罗布考影响ＲＣＴ。最近的研究发现，转运子ＡＢＣＧｌ、ＡＢＣＧ５，ＡＢＣＧ８对ＲＣＴ具有重要作用，但普罗布考影响ＲＣＴ的机制是否与之有关尚未有报道。巨噬细胞过度荷脂产生的泡沫细胞沉积于动脉壁形成了早期的粥样斑块，因此巨噬细胞的ＲＣＴ对动脉粥样硬化的发展起着最为关键的作用。普罗布考对体内巨噬细胞ＲＣＴ效果如何？由于缺乏测定体内ＲＣＴ的方法，至今没有直接证据。本课题参考Ｒａｄｅｒ实验室的方法建立一种测定体内巨噬细胞ＲＣＴ的方法。观察普罗布考对巨噬细胞ＲＣＴ的体内、体外影响，并探讨其中可能机制。本研究旨在建立一种直接测定动物活体内巨噬细胞ＲＣＴ的方法；研究普罗布考干预对小鼠体内巨噬细胞ＲＣＴ的影响，再观察普罗布考干预对体外巨噬细胞胆固醇流出的影响，分别探讨其中可能作用机制。方法
以Ｃ５７Ｂ圳小鼠为动物模型，给予腹腔注射经

乙酰化低密度脂蛋白（Ａｃ—ＬＯＬ）荷脂与氚（３Ｈ）标一胆
固醇标记的ＲＡＷ２６４．７细胞悬液，用液闪计数仪测定
血清、肝组织、粪便中３Ｈ一胆固醇的含量；以不同剂
量普罗布考（ｏ，０．１％，０．５％，ｌ％ｗ册干预４周的

Ｃ５７ＢＬ．，６Ｊ小鼠为动物模型，分别腹腔注射上述标记
细胞悬液，测定血清、肝组织、粪便中３Ｈ一胆固醇的
含量；收集０．５％普罗布考组血清孵育不同剂量普罗
布考干预的ＲＡＷ２６４．７巨噬细胞，测定细胞胆固醇

流出；分别以ＲＴ—ＰＣＲ，Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔ方法检测肝组织
ＳＲ—ＢＩ，胆固醇７ａ羟化酶，肝脏和小肠ＡＢＣＧ５，巨噬
细胞ＡＢＣＡｌ，ＡＢＣＧｌ／：ｓＲ—ＢＩ的基因及蛋白表达。
结果
１．
腹腔注射经Ａｅ—ＬＤＬ荷脂及３Ｈ一胆固醇标
记的ＲＡＷ２６４．７细胞悬液后小鼠血清、肝脏和粪便
中均可检测到３Ｈ的放射活性，分别占注射总量的百
分比为（２．８１±０．０６，０．６８±０．０３，０．６９－ｔ－Ｏ．０３）。
２．
普罗布考（０．１％，０．５％，ｌ％）呈剂量依赖性地
降低血清总胆固醇（ｒｃ，１．７８±０．２２，１．４３±０．２０，
１．４２±０．１５
ＶＳ
２．７１－ｔ－Ｏ．４３）、高密度脂蛋白胆固醇

（ＨＤＬ－Ｃ，０．９４－ｔ－０．１６，０．７１±０．１４，０．７０
４－０．１０
ＶＳ
１．６０－ｔ－Ｏ。ｌｏ）口＜０．０１），也降低低密度脂蛋白胆固醇
（ＬＤＬ－Ｃ，０．３７±０，０８，０．３２±０．０８，０．３１±０．０７
ＶＳ
０．４７土０．０６）及甘油三酯ｆｒＧ，０．９１－ｔ－Ｏ．１２．０．８２±０．０７。
０．８４－ｔ－Ｏ．１２ＶＳ
１．１６±０．Ｚ１）（Ｐ＜Ｏ．０５），但０．５％与ｌ％酱

罗布考组问无明显差异。

３．
各普罗布考干预组（０．１％，０．５％，１％ｙｈ鼠血
清３Ｈ一胆固醇的含量较对照组剂量依赖性地显著增

多，占注射总量的百分比分别为（６ｈ：１．２７－ｔ－Ｏ．０ｌ，
１．４２－ｔ－Ｏ．０１，１．４３土０．０２
ＶＳ
１．０８±０．０２），（２４ｈ：１．８６－ｔ－

・８４・
０．０３，２．５２
４－０．０２，２．５４４－０．０２ＶＳ１．４１４－０．０２）和（４８ｈ：１．０５４－０．０１．１．１９４－０．０１。１．１７４－０．０１ＶＳ０．９４４－０．０３），（Ｐ＜０．０５），但０．５％与１％普罗布考组间无显著性差异。４．各普罗布考干预组（０．１％，Ｏ．５％，１％）小鼠肝脏中３Ｈ的含量较对照组减少（１．６５４－０．０５，１．５７４－０．０３。１．５６４－０．０２ＶＳ１．８６±０．０１。Ｐ＜Ｏ．０５）；粪便中３Ｈ的总含量显著增多（２．８１４－０．０４，３．７５４－０．０３，３．７９４－０．０７ＶＳ１．３７４－０．０４，Ｐ＜０．０１）；Ｏ．５％与１％普罗布考两组之间差异无统计学意义。５．不同剂量普罗布考（ｏ．１％，０．５％，ｌ％）干预后肝脏胆固醇７Ｏｒ．羟化酶ｍＲＮＡ（０．６８４－０．０１，０．９６４－０．０２，０．９８４－０．０４）的表达与对照组（０．５１４－０．０２）比较，呈剂量依赖性地增多（Ｐ＜０．０５）；ＡＢＣＧ５ｍＲＮＡ（０．６４．４－０．０２，０．８６４－０．０４，０．８５４－０．０３）及其蛋白（０．６１４－０．０２，Ｏ．９５４－０．０３，０．９６４－０．０４）的表达与对照组（ｏ．４５±０．０２）比较，亦呈剂量依赖性地增加Ｏ）＜０．０５）；普罗布考干预后小肠ＡＢＣＧ５ｍＲＮＡ与蛋白的表达均剂量依赖性增多（Ｐ＜ｏ．０５）；０．５％与ｌ％普罗布考两组之间差异无统计学意义。６．普罗布考干预后肝脏ＳＲ—ＢＩ的ｍＲＮＡ与蛋白表达没有明显变化（Ｐ＞Ｏ．０５）。７．普罗布考干预４周后小鼠血清（３８±０．０３％）较对照组（２０４－０．０３％）明显促进体外培养巨噬细胞的胆固醇流出（Ｐ＜０．０１）。８．不同浓度普罗布考（１０，２０，５０，１００斗ｍｏｌ／ＬｖｓＯｔＬｔｏｏｌ／Ｌ）剂量依赖性地增加巨噬细胞ＡＢＣＧＩ基因（０．７５４－０．０３，０．９４４－０．０３，１．１８４－０．０２，１．２２４－Ｏ．０４ｖ８０．５２４－０．０４）及蛋白（０．６８４－０．０３，０．８５４－０．０５，１．１７．４－０．０３，１．１９
４－０．０４
ｖｓ
０．４９±０．０４）的表达量，并加速血清

诱导的胆固醇流出率（２５４－０．０６％，２９．１±０．０４％，
３４．１±０．０４％，３４．９
４－０．０８％ｖｓ
２０
４－Ｏ．０３％）（Ｐ＜Ｏ．０５），５０

与１００肛ｍｏｌ／Ｌ两组之间无显著性差异。
９．
不同浓度普罗布考对巨噬细胞ｓＲ—ＢＩ，ＡＢ—
ＣＡｌ基因及蛋白表达无明显影响。
结论：
１．
经腹腔注射Ａｅ—ＬＤＬ及３Ｈ一胆固醇处理过
的巨噬细胞后分别检测小鼠血清、肝组织、粪便中
，Ｈ一胆固醇的含量，是一种直接检测小鼠体内巨噬细
胞ＲＣＴ的可行方法。
２．
普罗布考剂量依赖性地降低小鼠血清总胆
固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和
甘油三酯，０．５％普罗布考组达最大效应。
３．
普罗布考剂量依赖性地促进小鼠体内巨噬
细胞的胆固醇逆转运。
４．
普罗布考促进小鼠体内胆固醇逆转运可能
是通过上调肝脏胆固醇７ａ羟化酶、肝脏和小肠
ＡＢＣＧ５的表达而实现的。
５．
普罗布考促进小鼠体内胆固醇逆转运可能
与肝脏ＳＲ—ＢＩ的表达量无关。
６．
普罗布考干预后的小鼠血清显著促进巨噬
细胞胆固醇流出。
７．
普罗布考可能是通过增加ＡＢＣＧｌ的表达
而促进巨噬细胞胆同醇流出的。
８。
普罗布考促进巨噬细胞胆固醇流出的机制
可能与细胞膜ＳＲ—ＢＩ、ＡＢＣＡｌ的表达量无关。

・８５・