氨基酸序列测定
蛋白质结构分析方法
蛋白质结构分析方法：X射线晶体衍射分析和核磁共振x 射线衍射法的分辨率可达到原子的水平，使它可以测定亚基的空间结构、各亚基间的相对拓扑布局，还可清楚的描述配体存在与否对蛋白质的影响。
多维核磁共振波谱技术已成为确定蛋白质和核酸等生物分子溶液三维结构的唯一有效手段。
NM R技术最大的优点不在于它的分辨率，而在于它能对溶液中和非晶态的蛋白质进行测量。
蛋白质的序列结构测定:1.到目前为止，最经典的蛋白质的氨基酸序列分析方法是，sarI等人基于Edman降解原理研制的液相蛋白质序列仪，及后来发展的固相和气相的蛋白质序列分析仪。
2.质谱：早期的质谱电离的方式主要是电子轰击电离(EI)，它要求样品的挥发性好，一般与气相色谱联用。
但使用G C／M S分析，肽的长度受到限制，只能分析小的肽段。
近年来，在离子化的技术及仪器方面取得了突破性进展，使得质谱所能测定的分子量的范围大大超出了10k u。
因此，软离子化技术、基质辅助的激光解吸／离子化(MALDI)和电喷雾离子化(E SI)显得尤为有前途。
通过串联质谱技术(MS／MS)和源后衰减基质辅助的激光解吸／离子化(PSD—MAIDI—MS)，人们就可以从质谱分析中获得肽及蛋白质的结构信息。
蛋白质三维结构的研究：1.X射线单晶衍射分析2.核磁共振分析3.蛋白质的二维晶体与三级重构：蛋白质二维结晶及其电子晶体学的结构分析是目前结构生物学最活跃的领域之一。
此法既适用于水溶性蛋白质，也适用于脂溶性膜蛋白的研究。
电子晶体学的结构分析源于早期的电子衍射分析。
与X射线衍射方法类似，电子衍射数据的实验分析得到的只是结构因子的振幅部分，丢掉了相位信息。
但从剑桥MRC分子生物学实验室的Klug和DeRo sier建立了三维重构的方法开始，电子晶体学才真正发展成为一种独立的空间结构的分析方法，并从传统的X射线晶体学中脱胎出来。
所谓电镜图像的三维重构是指由样品的一个或多个投影图得到样品中各成分之间的三维关系。
串联质谱测定肽段序列的原理与方法
串联质谱测定肽段序列的原理与方法串联质谱法（Tandem Mass Spectrometry，简称MS/MS）是一种广泛用于确定肽段或蛋白质的氨基酸序列的分析技术。
这种技术主要基于两个质谱技术：质谱分析（Mass Spectrometry，MS）和串联质谱（Tandem Mass Spectrometry，MS/MS）。
本文将详细讨论串联质谱测定肽段序列的原理和方法。
1.原理：质谱分析（Mass Spectrometry，MS）是一种测量和分析化学物质离子质量和相对丰度的技术。
在质谱仪中，样品被气化并离子化，然后通过离子能量分析器分离出不同质量/电荷比（m/z）的离子。
MS/MS将两个MS仪放在一起使用。
首先，一台MS仪将样品分解为碎片离子，然后这些碎片离子经过质量分析器分离出不同m/z值。
然后，这些碎片离子进入第二台MS仪，通过二次质谱分析进一步鉴定和确定它们的结构。
2.方法：串联质谱测定肽段序列的方法通常包括以下几个步骤：（1）蛋白质或肽段的酶解：首先，蛋白质样品通过特定的酶进行酶解，将蛋白质降解为短肽段。
常用的酶包括胰蛋白酶、胰蛋白二酶、氨基肽酶等。
（2）质谱分析：酶解后的肽段样品被注入质谱仪进行质谱分析。
常用的质谱仪包括电喷雾质谱（Electrospray Ionization Mass Spectrometry，ESI-MS）和基质辅助激光解吸/电离质谱（Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry，MALDI-MS）。
其中，ESI-MS是将样品通过电喷雾离子源转化为带电离子，然后通过毛细管进入质谱仪分析；MALDI-MS是通过激光解吸蒸发样品中的分析物，将其带向质谱仪质量分析器分析。
（3）鉴定肽段：鉴定肽段是将质谱图的离子片段与已知蛋白质数据库进行比对，找到最佳匹配。
鉴定肽段主要是利用质量对电荷比（m/z）值和碎片离子的相对丰度分析。
用fdnb法和edman降解法测定蛋白质原理
用fdnb法和edman降解法测定蛋白质原理用FDNB法和EDMAN降解法测定蛋白质的原理是相同的，都是通过测定蛋白质的N-末端氨基酸序列来推断蛋白质的结构和功能。
FDNB法（Sanger反应）是多肽链N末端氨基酸与FDNB（2，4-二硝基氟苯）反应生成二硝基苯衍生物（DNP-蛋白），然后将其进行酸水解，打断所有肽键，N末端氨基酸与二硝基苯基结合牢固，不易被酸水解。
水解产物为黄色的N端DNP-氨基酸和各种游离氨基酸。
将DNP-氨基酸抽提出来并进行鉴定可知N端氨基酸的种类，但不能测出其后氨基酸的序列。
EDMAN降解法是通过循环3个化学反应实现N末端氨基酸的序列测定。
其基本原理是利用异硫氰酸苯酯(PITC)特异性识别并连接在待测蛋白质的N端氨基酸上形成PITC-蛋白复合物；在酸处理条件下，PITC连接的N端氨基酸被切割，形成不稳定的PITC-氨基酸复合物；被萃取的PITC-氨基酸复合物在酸性条件下转化为稳定的苯基乙内酰硫脲(PTH)衍生物；最后利用高效液相色谱HPLC鉴定氨基酸种类。
每次EDman 反应只断裂一个氨基酸，将少了一个氨基酸的多肽链进行回收并重复以上操作，直到最后鉴定出N末端的氨基酸排列
顺序。
以上信息仅供参考，建议查阅专业书籍或咨询专业人士。
蛋白质测序方法的发展历程
蛋白质测序方法的发展历程蛋白质测序方法在过去几十年中经历了许多的进展和发展。
下面是其中一些重要的发展历程：1. 传统方法：最早的蛋白质测序方法是通过从生物样本中提取蛋白质，然后使用酶进行酶解将蛋白质分解成片段，最后通过测定蛋白质片段的氨基酸序列来确定蛋白质的序列。
这种方法费时费力，且只能测序较短的蛋白质片段。
2. Edman降解法：在20世纪50年代，发明了Edman降解法，这是一种基于化学反应的蛋白质测序方法。
该方法通过使用酸把蛋白质的N端氨基酸从分子中分离出来，然后通过化学反应将其标记，并使用高效液相色谱法（HPLC）来分离和测定标记的氨基酸。
虽然Edman降解法是一种重要的里程碑，但其操作复杂且测序长度有限。
3. 质谱法：随着质谱技术的发展，蛋白质测序也取得了重大突破。
其中一种重要的质谱方法是基于质谱仪监测蛋白质酶解产生的碎片离子谱图。
这种方法被称为“自身辅助测序技术”（de novo sequencing），可以通过分析碎片离子的质荷比和离子片段的顺序来推断蛋白质的序列。
4. 基因测序与基因注释：近年来，随着基因测序技术的发展，蛋白质测序的方法也得到了改进。
通过将蛋白质的编码基因序列测序，并结合基因注释数据库中的信息，可以预测和推断蛋白质的氨基酸序列。
这种方法被称为基于基因测序的转录组学或基因组学测序。
5. 高通量测序技术：最近，高通量测序技术的快速发展也为蛋白质测序提供了新的机会。
通过整合RNA测序与质谱技术，可以更准确和全面地测定蛋白质的序列和含量。
总体而言，蛋白质测序方法的发展经历了从传统的手工方法到高通量自动化方法的演变。
这些方法的进步促进了对蛋白质功能和调控的理解，以及在药物研发和临床诊断中的应用。
未来的发展将继续在提高测序准确性、提高测序速度和降低成本等方面努力。
氨基酸与dnfb反应的原理与应用
氨基酸与DNFB反应的原理与应用引言氨基酸是构成蛋白质的基本单位，其结构含有氨基和羧基。
氨基酸与二硝基酚（DNFB）反应是一种常用的化学方法，可以用于检测氨基酸的含量、分析氨基酸序列以及修饰氨基酸残基等。
本文将介绍氨基酸与DNFB反应的原理和应用。
原理DNFB是一种具有强烈氧化性的试剂，可以与氨基酸中的氨基发生反应，形成可见的黄色产物。
这种反应被称为DNFB反应，其原理如下：1.DNFB与氨基酸中的氨基发生亲核加成反应，生成一个中间产物。
2.中间产物经过内部重排和氧化反应，最后生成黄色产物。
3.黄色产物的形成量与氨基酸中的氨基含量成正比，可以通过比色法确定氨基酸的浓度。
应用氨基酸与DNFB反应在生化研究和药物开发中有着广泛的应用。
以下是一些主要的应用领域：1.氨基酸含量测定：利用DNFB反应可以测定氨基酸的含量。
通过比色法测定黄色产物的吸光度，可以计算出氨基酸的浓度。
这对于食品工业、营养学研究和药物研发中的营养成分分析非常重要。
2.氨基酸序列分析：DNFB反应可以标记氨基酸中的氨基，形成黄色产物。
通过比较不同氨基酸样品的黄色产物的色谱图，可以分析氨基酸序列。
这对于研究蛋白质结构和功能十分重要。
3.氨基酸残基修饰：氨基酸与DNFB反应也可以用于修饰氨基酸残基。
DNFB可以与氨基酸中的氨基发生化学反应，将多巴胺等官能团引入氨基酸中，从而改变其性质和功能。
这在药物开发和生物工程领域具有重要意义。
4.其他应用：氨基酸与DNFB反应还可以用于分析土壤中的氨基酸含量、研究酶的底物特异性以及评估蛋白质水解的程度等。
实验操作步骤以下是氨基酸与DNFB反应的实验操作步骤，供参考：1.准备样品：将待测氨基酸溶解于适当的溶剂中，制备成一定浓度的溶液。
2.加入DNFB试剂：将DNFB溶解于溶剂中，再加入氨基酸样品溶液中，充分混合。
3.反应：将混合溶液加热反应一定时间，通常在80-100°C下反应1小时。
4.冷却：将反应溶液冷却至室温。
氨基酸分析检测方法的研究进展
氨基酸分析检测方法的研究进展一、本文概述氨基酸作为生命活动的基本组成单位，其检测分析在生命科学、医学、食品科学、农业科学等领域中具有至关重要的作用。
氨基酸分析检测方法的研究进展不仅关乎理论科学的发展，更直接影响到实践应用中的质量控制、疾病诊断、营养评估等多个方面。
本文旨在综述近年来氨基酸分析检测方法的研究进展，包括传统方法的优化以及新兴技术的开发和应用，以期为推动氨基酸分析领域的持续进步提供参考。
我们将首先回顾氨基酸分析的传统方法，如色谱法、电泳法等，分析它们的优缺点及适用范围。
随后，将重点关注新兴技术在氨基酸分析中的应用，如质谱技术、光谱技术、生物传感器等，探讨这些技术在提高检测灵敏度、准确性和效率方面的优势。
我们还将讨论氨基酸分析在各个领域中的实际应用案例，以及面临的挑战和未来的发展趋势。
通过本文的综述，我们期望能够为读者提供一个全面而深入的视角，了解氨基酸分析检测方法的最新研究进展，以及这些方法在实际应用中的潜力和局限性。
我们也希望借此机会激发更多科研工作者对氨基酸分析领域的兴趣和热情，共同推动该领域的创新和发展。
二、传统氨基酸分析检测方法传统氨基酸分析检测方法主要包括色谱法、电泳法、化学分析法等。
这些方法在过去的几十年中得到了广泛的应用，为氨基酸的分析检测提供了重要的手段。
色谱法是最常用的氨基酸分析方法之一，其中主要包括离子交换色谱、氨基酸专用高效液相色谱（HPLC）和气相色谱（GC）等。
离子交换色谱基于氨基酸在离子交换剂上的吸附和解吸附作用，可以对氨基酸进行定性和定量分析。
HPLC具有高分辨率和高灵敏度，是分析复杂样品中氨基酸的有效方法。
GC则通过与衍生化试剂反应，将氨基酸转化为挥发性衍生物后进行分析。
电泳法是一种基于氨基酸在电场作用下的迁移速度差异进行分离的方法。
其中，薄层电泳和毛细管电泳是常用的电泳技术。
薄层电泳通过将氨基酸在支持介质上进行分离，可以用于简单样品的分析。
毛细管电泳则具有更高的分辨率和灵敏度，适用于复杂样品的分析。
蛋白质序列查法
蛋白质序列查法
蛋白质序列测定主要有以下几种方法：
1. 末端测序法，包括Edman降解法和羧肽酶法等，这种方法是通过测定蛋白质的末端氨基酸序列来推断整个蛋白质的序列。
2. 基于质谱的方法，如鸟枪法蛋白质测序，通过将蛋白质多重水解成小分子肽段，再对经高效液相色谱分离的肽段进行质谱鉴定，根据肽段的质谱信息获取肽段的氨基酸组成和排列顺序，然后将各肽段拼接成完整的蛋白质便可以得到完整样品蛋白的氨基酸组成和排列顺序。
3. 质谱法（Mass Spectrometry），蛋白质或多肽被分解成较小的片段，然后使用质谱仪来测量这些片段的质量/质荷比，从而推断出氨基酸序列。
这通常通过碎片化技术（如碰撞诱导解离或电子转移解离）来实现。
这些方法各有优缺点，可以根据需要选择合适的方法进行蛋白质序列测定。
蛋白质鉴定内容
百泰派克生物科技
蛋白质鉴定内容
蛋白质鉴定就是对蛋白进行定性鉴定，主要鉴定内容包括蛋白质的相对分子质量、氨基酸序列、等电点、分子结构等。
蛋白质的相对分子质量就是组成蛋白质的各原子的相对分子质量之和，蛋白质分子量测定的方法有很多，目前常用的主要包括化学法、渗透压法、凝胶色谱法、SDS-聚丙烯凝胶电泳法、沉降法、光散射法以及质谱法等。
蛋白质的氨基酸序列又称蛋白一级结构或初级结构，主要通过测序法进行鉴定，如质谱法、Sanger法、毛细管电泳法和Edman降解法等。
蛋白质的等电点就是其在溶液中溶解度最小时溶液的pH值，通常利用沉淀法或等
电聚焦法进行测定。
蛋白质的高级结构测定比较复杂，现有的一些预测方法的准确度还有待进一步提升。
目前分析蛋白高级结构的主要方法有圆二色光谱法、X射衍射法、核磁共振技术、
同源模拟法、折叠识别法、从头计算法以及基于神经元网络的统计方法等。
百泰派克生物科技采用高分辨率质谱平台提供蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴
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饲料蛋白水解氨基酸含量的测定-实验方案
表 1.PH 型色谱柱分离 17 种氨基酸出峰顺序
缩写 支链 等电点
R基
分子量
1
天冬氨酸 Asp 酸性 苏氨酸 Thr 亲水性 丝氨酸 Ser 亲水性 谷氨酸 Glu 酸性 脯氨酸 Pro 疏水性 甘氨酸 Gly 亲水性 丙氨酸 Ala 疏水性 半胱氨酸 Cys 亲水性 缬氨酸 Val 疏水性 甲硫氨酸 Met 疏水性 异亮氨酸 Ile 疏水性 亮氨酸 Leu 疏水性 酪氨酸 Tyr 疏水性 苯丙氨酸 Phe 疏水性 赖氨酸 Lys 碱性
样品、氧化水解样品等）。
7
141.78 g 401 ml 123 ml 336 ml 1000 ml
4
1
R3
2
乙醇(色谱纯) 超纯水定容
50 ml 1000 ml
备注：1. 抽滤时，使用 0.22μm 滤膜，R1-R2 有机相、R3 无机相。有机相（R1/R2）抽 滤时滤器涂抹凡士林，且要先用乙二醇甲醚透膜再过滤。 2. R1 不定容，需现用现配，避光、避免空气氧化。 3. 配制 R2 时醋酸钠不易溶解，可微热至约 60 度，促进溶解。 五、实验步骤 （一）样品前处理 1. 样品粉碎、绝干：四分法取样，选取代表性的样品 10-20 g,粉碎后 60 目过筛、混匀， 于干燥箱中 105 °C 恒重，至质量差不超过 0.0002 g，保存至干燥器内备用。 2. 称样：用酒精喷灯烧结试管 1/3 处拉细呈颈状，称样 100-200 mg,置于试管底部。 3. 水解：分批加入 15 mL 酸解剂充分浸润样品。充氮气约 1 min 除氧气，烧结密封试管。 将水解管放在(110 士 1)°C 恒温干燥箱中，水解 22-24 h。 4. 稀释、过滤：水解管冷却至室温后开管，将溶液转移至 50/100 mL 容量瓶中，超纯水 定容，混匀静置，取上清用 0.22 μm 微孔滤膜过滤至 EP 管中作为储备液。用移液枪定量 取 400 μL 至样品瓶。 5. 脱酸、稀释：样品液用液氮迅速固化后用冻干机蒸空干燥至瓶内完全无液体，加入 800 μL 0.02 N HCl 溶液，涡旋混匀，放至 4 °C 备用。 （二）上机测定 1. 色谱条件 （1）色谱柱：PH 型（钠型）：内径 4.6 mm* 长 60 mm，填料为阳离子交换树脂（强酸型 磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物）担体粒径 3 µm。 （2）进样量 20 μL。 （3）检测波长：570 nm 和 440 nm。 （4）梯度洗脱程序
氨基酸液相检测方法
氨基酸液相检测方法引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。
液相检测方法是一种常用的氨基酸分析方法，它具有灵敏度高、分辨率好、操作简便等优点。
本文将介绍氨基酸液相检测方法的原理、步骤和应用。
一、原理氨基酸液相检测方法是利用液相色谱技术实现的。
液相色谱是一种将混合物分离成各个组分的方法，其原理是根据各个组分在色谱柱中的保留时间来进行分离。
在氨基酸液相检测中，常采用离子交换色谱柱或手性色谱柱进行分离。
离子交换色谱柱是利用固定在柱子上的离子交换剂与氨基酸分子间的静电作用进行分离，根据氨基酸的电荷性质进行选择性吸附和洗脱。
而手性色谱柱则是利用固定在柱子上的手性选择性吸附剂与氨基酸分子的手性结构进行分离，根据氨基酸的手性性质进行选择性吸附和洗脱。
二、步骤氨基酸液相检测方法的步骤主要包括样品制备、色谱条件设定、色谱分离和检测等。
1. 样品制备：将待测样品进行适当处理，如酸水解或碱水解，以使氨基酸分子释放出来。
然后将样品进行过滤和稀释，以便进行后续的色谱分离和检测。
2. 色谱条件设定：选择合适的色谱柱和流动相，根据样品特性和分离要求进行条件设定。
对于离子交换色谱柱，可以选择不同的离子交换剂和缓冲剂，调节pH值和离子浓度等；对于手性色谱柱，可以选择不同的手性选择性吸附剂，调节流动相的组成和流速等。
3. 色谱分离：将样品注入色谱柱，利用色谱柱内固定相的选择性吸附作用，将各个组分分离开来。
根据各个氨基酸的特性，调节流动相的条件，使目标氨基酸在适当的保留时间内分离出来。
4. 检测：利用检测器对分离出的氨基酸进行检测。
常用的检测器有紫外检测器和荧光检测器。
紫外检测器可以根据氨基酸的吸收特性来进行检测，荧光检测器则可以根据氨基酸的荧光特性来进行检测。
三、应用氨基酸液相检测方法在生物医药、食品安全等领域有着广泛的应用。
在生物医药领域，氨基酸液相检测方法可以用于蛋白质结构和功能研究，如氨基酸序列分析、蛋白质修饰研究等。
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氨基酸序列*测定综述
【作者】
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【摘要】
氨基酸序列测定是一个较老的话题,早在20世纪30年代Pauling和Corey x-射线衍射方法研
究氨基酸和肽。可是近几年关于氨基酸序列的测定并不多，测定氨基酸序列要花很长时间，
到了较快捷分析ＤＮＡ的方法试用成功后，直接分析蛋白质的遗传密码比分析蛋白质本身更
普遍。但该文仍然将对氨基酸序列测定相关研究进展作一综述。
【引文】
氨基酸是构成蛋白质的基本单位，赋予蛋白质特定的分子结构形态，使它的分子具有生
化活性。蛋白质是生物体内重要的活性分子，包括催化新陈代谢的酶。两个或两个以上的氨
基酸化学聚合成肽，一个蛋白质的原始片段，是蛋白质生成的前体。氨基酸广义上是指既含
有一个碱性氨基又含有一个酸性羧基的有机化合物，正如它的名字所说的那样。但一般的氨
基酸，则是指构成蛋白质的结构单位。在生物界中，构成天然蛋白质的氨基酸具有其特定的
结构特点，即其氨基直接连接在α-碳原子上，这种氨基酸被称为α-氨基酸。在自然界中共
有300多种氨基酸，其中α-氨基酸21种。α-氨基酸是肽和蛋白质的构件分子，也是构成
生命大厦的基本砖石之一。本文对相关研究进展作一综述。
【关键词】
氨基酸,序列;氨基酸序列测定
【正文】
1. 历史背景
我们的头发,指甲……以及对生命活动有催化作用的酶的成分都有蛋白质[1]。蛋白质
称为“生命活动的载体”，可见其对生命的重要性。于是科学家对其进行研究，希望找到它
的本质，从而对它展开对人类有益的利用。
2. 前人的工作及成果
2.1 x-射线衍射方法
20世纪30年代Pauling和Corey x-射线衍射方法研究氨基酸和肽
1963年Kendrew及同事利用x-射线分析技术分析了肌红蛋白结构
2.2 高效液相层析法分析
任勇等人应用高效液相层析法和微晶纤维素薄层指纹图谱法分析分析一例稀有
β-链变异体:HbDOuledRabah [β19(B1)Asn→Lys]在我国人群中首次发现一例稀有β-链变异
体:HbDOuledRabah [β19(B1)Asn→Lys]。先证者女,14岁,壮族,广西靖西县人。先证者母亲及
其三个兄妹均为携带者,无明显临床症状。[2]
2.3 二维核磁共振谱测定
谭宁华等人在植物新环肽[太子参环肽A(HA)和B(HB)]的结构研究中,应用COL
谱较成功地解决了氨基酸序列[3]
2.4 SDS-PAGE及蛋白质电泳印迹技术
周圆等人在直组人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8的纯化与鉴定
确证该目标蛋白得到高效表达和正确加工。随后采用Bio-Gel P30凝胶过滤层析和Mono-S
阳离子交换层析对重组人NAP-1/IL-8进行了分离纯化,纯化产品达到SDS-PAGE纯。利用琼脂
糖平板法测定了纯化产品的嗜中性白细胞趋化活性,推算其比活为2.8×10~5U/mg蛋白。又
利用SDS-PAGE测出重组NAP-1/IL-8的分子量约为8.5kD,但根据凝胶过滤层析的洗脱时间推定,
在溶液中确实存在分子量稍大于14.4kD的NAP-1/IL-8二聚体。[4]
2.5 蛋白质自动测序仪
用高效液相色谱技术 (HPL C)自华支睾吸虫粗抗原 (Clonorchissinensis
Adultwormantigens,CAA)中提纯 15 / 16 ku蛋白 ,用酶联免疫吸附实验 (EL ISA)测定其抗
原活性 ,并使用蛋白质自动测序仪测定其 N端部分氨基酸顺序。结果 3个具有抗原活性
的纯化样品 (H3、H11及H13)中 ,H13的诊断效果接近 CAA,敏感性达 90 % ,特异性
95 %。分别测获3个纯样的 N端 15、14和 2 0个氨基酸残基 (aa) ,其中 H11的 N端 14
个aa与 H13的前 14个完全相同。 结论 进一步证明了 Cs15 / 16为有效的诊断抗原 ,
测获的部分氨基酸顺序可为更深入的研究提供参考。[5]
2.6 SDS- PAGE和 IEF测定
用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳和制备型等电聚焦纯化了曾报道的光敏核不育
水稻 (Oryza sativa)农垦 58S叶绿体的特异性蛋白质 P2 ,得到 SDS- PAGE和等电聚焦
(IEF )纯的 P2。经 SDS- PAGE和 IEF测定 ,该纯蛋白质的分子量是 61 k D,等电点是
5.8。现称 P2为 P61。氨基酸序列分析表明 P61的 N-端氨基酸序列与水稻和大麦叶绿体
ATPaseβ亚基的 N-端氨基酸序列同源。[6]
2.7 特异性的蛋白酶ｅｎｄｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅＬｙｓ－Ｃ和溴化氰对该酶
蛋白进行了裂解
作者对已报道的稻瘟菌诱导稻叶脂氧合酶ＣＭ－ＬＯＸ１和ＣＭ－ＬＯＸ２的纯
化方法作了进一步改进和完善。改进后的纯化方法可缩短该脂氧合酶的纯化时间，并提高纯
化倍数。利用改进的方法，作者从２０ｇ非亲和性稻瘟菌小种接种稻叶中获得了电泳纯的酶
蛋白ＣＭ－ＬＯＸ１１３３μｇ和ＣＭ－ＬＯＸ２２０８μｇ。在此基础上，采用特异性的
蛋白酶ｅｎｄｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅＬｙｓ－Ｃ和溴化氰对该酶蛋白进行了裂解，回收其
肽段，得到了ＣＭ－ＬＯＸ１的３个不同肽段共３０个氨基酸和ＣＭ－ＬＯＸ２的７个不同
肽段共８７个氨基酸的序列，为最终克隆这２个酶的基因奠定了基础[7]
2.8液质联用、两种串联质谱
运用液质联用、两种串联质谱对融合蛋白FP3的氨基酸全序列测定,确证其一级
结构。将样品还原烷基化后,通过胰蛋白酶酶解蛋白,PNGase F去除多肽混合物中糖肽的糖
基化,将去糖后的总肽用于液质联用系统,通过液相分离后,运用Q-TOF和线性离子阱两种串
联质谱测定各个肽段的b,y碎片离子,分析测定融合蛋白FP3的氨基酸全序列。[8]
3. 研究现状和问题
测定氨基酸序列要花很长时间，尤其是现在科学家更偏爱快速且更本质性的基因
测定，因此现在测定氨基酸序列的研究并不多。目前我国最近的对氨基酸的测定是2012年
LC-MS/MS 法对融合蛋白 FP3 的氨基酸全序列测定[8]
4. 未来前景
随着生物分子化学的研究，可能对氨基酸序列测定的方法和仪器会得到完善和突
破，那么科学家会继续对氨基酸直接测定。但就当今趋势，科学家们更愿意测定基因序列，
在有对应的密码子翻译成氨基酸。[9]
【参考文献】
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法分析一例稀有β-链变异体:HbDOuledRabah [β19(B1)Asn→Lys]
[3].谭宁华,赵守训,王德祖,张宏杰,陈昌祥,周俊波谱学杂志：二维核磁共振谱测定植物新环肽
—太子参环肽A和B中氨基酸序列.
[4].周圆,金冬雁,徐荣辉,侯云德生物化学杂志：直组人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8
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Chun-ming1*,WANG Jun-zhi1* (1.Department of Recombinant Product,National Institutes
for Food and Drug Control,Key Laboratory of the Ministry of Health for Research on
Quality and Standardization of Biotech Products,Beijing 100050,China; 2.School of Life
Science and Technology,China Pharmaceutical University,Nanjing 210009,China)
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报,2004