几种常用的细菌计数方法
微生物数量测定解析
《环境微生物新技术》课程作业2.微生物数量测定方法有哪些？空气、水、土壤样品分别适用哪些方法？请举例说明。
常见微生物数量的测定方法<1>1.计数器测定法：即用血细胞计数器进行计数。
取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。
由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。
本法简便易行，可立即得出结果。
本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
2、电子计数器计数法:电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。
该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。
因此，要求菌悬液中不含任何碎片。
3、活细胞计数法 :常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。
取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出活菌数。
此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。
使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。
广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。
4、比浊法比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。
细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。
5、测定细胞重量法此法分为湿重法和干重法。
湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。
酵母菌计数
酵母菌计数简介酵母菌是一种单细胞真核生物，它们在酿酒、发酵和食品加工等过程中起着重要的作用。
为了控制和监测这些过程，我们需要对酵母菌的数量进行准确计数。
本文将介绍几种常用的酵母菌计数方法，并提供一些实用技巧和注意事项。
方法一：显微镜计数法显微镜计数法是最常用且准确的酵母菌计数方法之一。
具体步骤如下：1.取一定数量的酵母菌样品，通常采用培养液或悬浮液。
2.在显微镜下观察样品，并设定合适的倍数。
通常使用40倍或100倍的镜头。
3.使用显微镜的目镜网格或计数室，在一个区域内计数酵母菌的数量。
4.重复以上步骤，直到计数了足够多的区域。
5.将计数得到的酵母菌数量求平均，乘以相应的倍数，得到样品中的总酵母菌数量。
需要注意的是，在进行显微镜计数时，要保持显微镜的透明度，以便更清楚地观察和计数酵母菌。
此外，在计数过程中，应避免重复计数和漏计。
方法二：涂布法涂布法是一种简单快捷的酵母菌计数方法，适用于大批量的样品。
具体步骤如下：1.准备培养基。
选择适合酵母菌生长的培养基，可以是液体培养基或固体培养基。
固体培养基通常是琼脂糖培养基。
2.取一定数量的酵母菌样品，将其均匀地涂布在培养基上。
3.使用细菌铲或棉签，将酵母菌样品均匀涂布在培养基表面。
4.将涂布好的培养基放置在适当的条件下，如温度、湿度等，并进行培养。
5.在适当的培养时间后，观察涂布培养基上酵母菌的生长情况，并计算酵母菌的数量。
涂布法的优点是操作简单、快捷，适用于大样本量的计数。
但由于酵母菌的生长情况可能受到很多因素的影响，因此在进行计数时需要注意控制这些影响因素，如温度、湿度等。
方法三：电子计数法电子计数法是一种利用电子计数器对酵母菌进行计数的方法。
具体步骤如下：1.准备电子计数器。
选择适合的电子计数器，并与适当的软件相结合，以便更准确地进行计数。
2.取一定数量的酵母菌样品，并将其放置在电子计数器中。
3.打开电子计数器，开始对酵母菌样品进行计数。
4.计数完成后，软件会自动计算和显示酵母菌的数量。
细菌总数名词解释
细菌总数名词解释细菌总数，又称菌数，是指一个立方体内所含的细菌的总数。
细菌总数的计算方法为：以样本中所含菌数占总样本菌数的百分率表示，如每克干固体标本或每毫升液体标本中所含的菌数，即为细菌总数。
细菌总数常用每克（或毫升）干固体标本或每毫升（或毫升）液体标本中所含的细菌菌落数来表示，它表示某一个地区、某一环境中所有存在于固体或液体培养基上的细菌菌落总数。
同时细菌总数也可作为细菌学研究、细菌污染及医疗事业防疫措施的依据之一。
细菌总数测定仪器主要有光密度计和光计数管。
前者的读数原理为折射原理，后者的读数原理为散射原理。
在大多数情况下，当需要估计菌数总量时，可采用光密度计；如果需要测定浓度范围很宽的标本中的细菌菌数总量，则可采用光计数管。
但是在液体培养基中进行测定时，只能使用光密度计。
测定细菌总数的光密度计按结构特点又可分为自然光密度计和荧光显微镜两种。
光密度计有一套检测系统和计数系统。
它们一起保证了读数的准确性。
在使用光密度计测定细菌总数时，需对标本稀释成不同的稀释度，然后以一定的稀释度从标本中吸取适量的菌悬液，装入反应管内，加满冷凝管，使之与空气隔绝，在显微镜下进行计数。
由于菌悬液中各细菌的分布状态不一致，有些细菌密集在上层，而有些细菌则沉降到底部。
因此在使用光密度计测定总菌数时，应同时取几管混匀，以便观察。
在正常情况下，菌悬液经10— 20分钟就会被均匀分散开，这时可看到红色视野中出现许多白色小圆圈，或看到红色视野里有细小的圆形光亮区。
随着细菌总数的增加，红色视野中小圆圈的直径逐渐变小，红色视野逐渐缩小。
当菌数达到一定数量时，圆圈消失，变成无数小亮点，最后细胞集结成云雾状或团块状。
1、数值测定法用肉眼、光镜或低倍镜观察标本，计算在一定体积或重量的细菌菌体所占的百分比。
2、化学测定法用化学药品、酶制剂处理标本，通过颜色反应和显色反应来计数细菌菌体，有关细菌数量的计数单位还有个细胞，活菌数，活菌个数等。
快速计数水体中的大肠杆菌的方法
快速计数水体中的大肠杆菌的方法大肠杆菌是研究公共卫生和水质安全而十分重要的病原体，长期暴露在水体中会危害人类健康。
因此，快速计数水体中的大肠杆菌是评价水体质量的重要指标。
本文介绍了常用的快速计数水体中的大肠杆菌的方法，包括穿孔板法、扩散系数法、单管复管法、通径复量稀释法和计数接种法等。
穿孔板法是一种同定法，其基本原理是将大肠杆菌悬浮液滴在被视为一个平面的培养板中，当大肠杆菌发生膨胀和分裂后，细菌群会按一定规律在板上形成一个计数的圆形穿孔群，根据该穿孔的直径进行计数，从而快速算出水体中的大肠杆菌数量。
扩散系数法是另一种用于快速计数水体中的大肠杆菌的方法，其基本原理是根据细菌的降解率和能够与特定培养基结合的特性，借助专门研制的“扩散系数”计算出细菌在水体中的数量。
单管复管法是一种改良的穿孔板法，其基本原理是测定在一小段时间内大肠杆菌数量的变化，从而得出水体中大肠杆菌的数量。
单管复管法间断计数大肠杆菌，可减少细菌复制及其他细菌活力之间的紊乱。
通径复量稀释法利用复合稀释内稀释法分析多级接种瓶中的稀释、复制法进行大肠杆菌的快速计数，即在小瓶中混合原始细菌悬液与荧光染料，并按一定比例进行稀释后，在此条件下，复制到大瓶中的细菌的量即为水体中的细菌的量。
计数接种法是直接接种法的变形，其基本原理是将细菌悬液滴在含有抗生素的接种板上，放置一定时间后进行观察和计数，从而得出水体中大肠杆菌的数量。
因此，以上是快速计数水体中的大肠杆菌的常见方法，各种方法各有优缺点，根据不同的实验任务选择不同的方法以节省时间和成本，进而高效可靠地测定水体中大肠杆菌的数量。
总之，测定水体中的大肠杆菌数量非常重要，必须采取有效措施进行检测，以确保水体质。
介绍几种新的水中细菌总数检测方法
介绍几种新的水中细菌总数检测方法
1.流式细胞术：利用流式细胞仪将水样中的细菌进行分析和计数。
这种方法可以快速、高效地获取大量细菌数据，并且还可以进行不同种类细菌的分类和分析。
2. 基于荧光的检测方法：这种方法利用细菌表面的荧光素来进
行检测。
通过添加特定的荧光素探针，可以在短时间内快速、准确地测量水中细菌总数。
3. 基于DNA技术的检测方法：这种方法通过提取水样中的DNA，利用聚合酶链式反应(PCR)等技术来进行检测。
这种方法可以检测到
非常微小的细菌数量，而且还可以进行不同种类细菌的分子生物学鉴定。
4. 浸润法：这种方法是将一定量的水样浸润在适宜生长条件下
的培养基上，然后通过培养基上产生的菌落来计算水中细菌总数。
这种方法具有简单、易操作等特点，但是需要较长时间的培养过程。
5. QPCR技术：这种方法是一种快速、灵敏的检测细菌数量的方法，它利用荧光探针来放大和检测DNA序列。
这种方法可以在数小时内完成检测，而且可以检测不同种类的细菌。
- 1 -。
微生物接种方法
微生物接种方法微生物接种是生物实验中的一项基本技术，也是各种微生物检测和研究中不可缺少的步骤。
本文将介绍一些常见的微生物接种方法，包括平板划线法、斜面接种法、液体培养基接种法和穿刺接种法等。
平板划线法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种纯化，得到单一的菌落。
该方法通过在固体培养基上划线，使菌种在培养基上繁殖并形成菌落。
具体步骤如下：(1)将固体培养基灭菌后倒入培养皿中，待凝固后加入适量菌液。
(2)用接种环取适量菌液，在培养皿表面划线。
(3)将培养皿放入适宜的温度下培养，观察菌落的生长情况。
(4)根据需要重复划线操作，直至得到单一的菌落。
斜面接种法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种接种到斜面培养基上，以便于观察和保存。
该方法通过将菌液加入到灭菌后的斜面培养基中，使菌种在斜面上繁殖并形成菌落。
具体步骤如下：(1)将斜面培养基灭菌后放置在实验台上，用无菌操作法加入适量菌液。
(2)将接种环放入菌液中沾取少量菌种，然后在斜面培养基上划线接种。
(3)将培养皿放入适宜的温度下培养，观察菌落的生长情况。
(4)根据需要重复划线操作，直至得到单一的菌落。
液体培养基接种法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种接种到液体培养基中，以便于微生物的生长和繁殖。
该方法通过将菌液加入到灭菌后的液体培养基中，使菌种在液体培养基中繁殖并形成微生物。
具体步骤如下：(1)将液体培养基灭菌后倒入试管中，加入适量菌液。
(2)用摇床或其他设备将试管中的培养基混合均匀。
(3)将试管放入适宜的温度下培养，观察微生物的生长情况。
微生物接种技术是生物工程中一项重要的技术，广泛应用于生物制品制造、环境生物治理、医学诊断等领域。
本文将介绍微生物接种技术的基本原理、应用场景以及发展前景。
微生物接种技术是指将目的微生物通过一定的方式引入到培养基或发酵系统中，使其在特定的环境下生长繁殖，以达到特定的生物制品或环境治理的目的。
该技术的主要环节包括菌种选择、接种量确定、接种方法选择和培养条件控制等。
测定微生物数量的方法
测定微生物数量的方法1.计数器测定法：即用血细胞计数器进行计数。
取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。
由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。
本法简便易行，可立即得出结果。
本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
2、电子计数器计数法:电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。
该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。
因此，要求菌悬液中不含任何碎片。
3、活细胞计数法常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。
取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。
此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。
使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。
广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。
4、比浊法比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。
细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。
5、测定细胞重量法此法分为湿重法和干重法。
湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。
此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。
常见微生物数量测定方法比较(共12张PPT)
总结与比较
血细胞计数板和细菌计数板常用于测定单细胞或孢子, 相对比较准确;
膜过滤用于测定细胞浓度很低的样品,平板菌落计数对 多数微生物的测定都适用, 但是相对其他计数法要复杂;
比浊法相对准确,但需要作标准曲线; 对于丝状微生物的数量测定,国际上有明确的标准; 而凯氏定氮法和DNA 含量测定法都是通过对微生物细 胞内含量相对稳定的物质进行定量测定, 再算出细胞的数 量,操作相对复杂.
2.活细胞计数法
2.3 霉菌计数法
对于霉菌的计数一般比较困难,由于霉菌生长快, 菌丝叠加导致无法准确计数.国标霉菌计数法的原 理是:将待测菌液进行10 倍梯度系列稀释,利用高 盐察氏培养基(CAO)与待测菌液混匀后倒平板,25 一28℃下培养3d 后开始计数,选择菌落数在10150 之间的平板进行计数,取同稀释度的两个平板 的菌落平均数乘以稀释倍数,即为每g(或 mL)检样 中所含霉菌数。
常见微生物数量测定方法比较
ห้องสมุดไป่ตู้
微生物主要包括原核微生物,真核微生物,病毒等 三大 类,由于多数微生物的个体较小,肉眼无法观察, 对其计数 一般比较困难.在目前的微生物实验教学 中,对微生物计 数的方法主要有三大类:总细胞计数法,活细胞计数法和 微生物生长量测定法.并不是每种方法都是通用的,不同 的微生物种类需要不同的计数方法,目前多用以下8 种方 法进行计数:
1.总细胞计数法
1.3 膜过滤计数法
利用计数板对高浓度的菌液测定比较准确,但当样品中细菌 的数量很低时,如湖水, 海水或饮用水等,用膜过滤计数法更精 确些,可以将一定体积样品溶液加结晶紫染色,再用0.22mm的 聚偏二氟乙烯膜负压过滤,再用无菌水冲洗至无色后,将过滤的 膜进行抽干,将膜放到载玻片上,滴加甘油,盖上盖玻片,即可在 显微镜下计数.一般随机抽取20个视野进行计数,最后算平均数, 计算整个滤膜上的菌的数量,得到原菌液中的微生物数量. 此测 定方法一般只能用于样品中细菌数量很低的。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
几种常用的细菌计数方法
1、计数器测定法
即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器
的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根
据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出
结果。
本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
2、电子计数器计数法
电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细
胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电
子记录装置上。
该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，
要求菌悬液中不含任何碎片。
3、活细胞计数法
常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计
的。取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板
培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。此法灵敏度高，是一种
检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注
意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确;②
为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O.001%2，3，5一氯化三苯基
四氮唑(TTC);③本法限用于形成菌落的微生物。
广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌
计数法。
4、比浊法
比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在
一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，
用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，
对颜色太深的样品，不能用此法测定。
5、测定细胞重量法
此法分为湿重法和干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行
称重;干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使
之失去水分然后称重。
此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。
6、测定细胞总氮量或总碳量
氮、碳是细胞的主要成分，含量较稳定，测定氮、碳的含量可以推知细胞的
质量。此法适于细胞浓度较高的样品。
7、颜色改变单位法(CUU)
这种方法通常用于很小，用一般的比浊法无法计数的微生物，比如支原体等，
因为支原体的液体培养物是完全透明的，呈现为清亮透明红色，因此无法用比浊
法来计数，由于支原体固体培养很困难，用cfu法也不容易计数，因此需要用特
殊的计数方法，即CCU法。它是以微生物在培养基中的代谢活力为指标，来计数
微生物的相对含量的，下面以解脲脲原体为例，简单介绍其操作：
(1)取12只无菌试管，每一管装1.8ml解脲脲原体培养基。
(2)在第一管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液，充分混匀，从中吸取0.2ml
加入第二管，依次类推，10倍梯度稀释，一直到最末一管
(3)于37度培养，以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU，也就
是支原体的最大代谢活力，比如第六管出现颜色改变，他的相对浓度就是10的
6次方CCU/ml.
一般来说，比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数，但是对支
原体这样比较特殊的微生物，用CCU法比较合适。
测定微生物生长的方法很多，各种方法均有其优缺点，也不是在任何情况下
都适用。在微生物学工作中一般常用的是平皿菌落计数法、计数器法和比浊法。
至于哪种方法比较适合你，得根据你的具体条件而定。