第七章高效毛细管电泳
第一讲_高效毛细管电泳法在药物分析中的应用(chaj)
1. CIEF是根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技 术；
2. 毛细管内充有两性电解质(合成的具有不同等电点范围的 脂肪族多胺基多羧酸混合物)，当施加直流电压（6～8V） 时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度；
3. 氨基酸、蛋白质、多肽等所带电荷与溶液pH有关，在酸 性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时，呈 电中性，淌度为零；
conc=micellar phase[MEKC]) Cellulose (纤维素) - EOF Modifier, Sieving Medium (ex. methyl
cellulose, hydroxypropyl methylcellulose) Cyclodextrins - Solubilizer for very hydrophobic samples, chiral-
❖ 将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶。
凝胶具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。 能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。
蛋白质、DNA等由于其电荷/质量比与分子大小无关，CZE模 式很难将其分离；而采用CGE能获得良好分离。它是DNA测序 的重要手段。
特点：抗对流性好，散热性好，分辨率极高。 无胶筛分技术：采用低粘度的线性聚合物分子在溶液中的物 理缠扰作用代替高粘度交联聚丙烯酰胺。柱便宜、易制备。
现代仪器分析
第一讲: 高效毛细管电泳法 在药物分析中的应用
College of Pharmacy, Shanxi Medical University Prof. Anjia CHEN
第一节 仪器分析法概述 (generalization)
色谱分析法 √ 光谱分析法 √
仪器分析法
高效毛细管电泳分析法
CGE在分子生物学和蛋白质化学上有着十分广 阔的应用。在分子生物学上实现了包括寡聚核 苷酸纯化、DNA测序和PCR产物的分析，在蛋 白质化学方面用于多肽和蛋白质分子的分子量 测定，原蛋白和结合蛋白的分离等。此外， CGE还可用于其它带电物质的分离，并可通过 加入手性试剂、离子对试剂、络合试剂等添加 剂改变分离的选择性。
离子色谱的固定相是离子交换树 脂。在固定相的表面，分布着许多适 合于分离阴离子的活性中心（如：
+ − — N(CH3 )3 OH，或适合于分离阳离子
的活性中心（如： SO− H+ ）。当被测 — 3 定的混合离子随流动相（淋洗液）流 经固定相时，由于不同离子的电荷数
或离子半径不同，使它与固定相的作 用力大小不同，造成各种离子在相对 运动的两相之间的分配系数不同，因 此，它们在柱中的迁移速度也就不同， 从而达到分离的目的。
图 毛细管分离示意图
在HPCE中电渗流的一个重要特点是具有 平面流型，电渗的驱动力沿毛细管均匀分 布，它使整个流体象一个塞子一样以均匀 的速度向前运动。而在HPLC中流体流型 则是抛物线型的层流，其中心处速度是平 均速度的2倍。
电渗流的平面流型和HPLC中高压泵驱动 所产生的抛物线型层流的速度曲线不同， 不会直接引起样品组分区带在柱内扩张， 这是HPCE获得高效分离的重要原因之一。
3．毛细管凝胶电泳（capillary gel ．毛细管凝胶电泳（ electrophoresis，CGE） ， ）
CGE是80年代后期发展起来的毛细管电泳 的主要分离模式之一，它将凝胶电泳对生 物大分子的高效分离能力和毛细管电泳的 快速、微量和定量分析相结合，成为当今 分离度极高的一种电泳分离技术。
毛细管电泳一般由一个高压电源，一 根毛细管，一个检测器及两个缓冲液 贮液槽及数据记录系统组成，其仪器 结构示意图如图
高效毛细管电泳使用说明
高效毛细管电泳使用说明
1.毛细管的冲洗方法
首先用双手拇指将压力冲洗装置的顶推盘压下，旋转一个角度，使其固定住。
然后将毛细管盖连同毛细管从高压端取出放到装有冲洗液的顶端处，并一同放到下盒盖中，盖上上盒盖后，再用双手拇指将顶推盘旋转回原来角度，使其顶住注射器推杆，即可进行毛细管冲洗。
2.施加高压方法
初次升压时，必须先将电压调节扭6逆时针旋到底后，再按高压启动扭3,并缓慢逆时针旋转高压扭6至所须电压值。
如果发生异常立即按高压关断扭5,排除故障后，再重新升压。
3.电迁移进样的方法
把电压调到所需电压。
掀开上盖，把样品瓶放在样品瓶托盘上,将毛细管的一端从放在样品瓶托盘上的缓冲液瓶里抽出，插进样品瓶里，盖上上盖。
然后立即按高压启动扭，待达到预定时间后，掀开上盖，将毛细管从样品瓶抽出，插入缓冲液瓶里。
立即盖上上盖,把电压上升到工作电压，开始数据采集。
维护与保养
1 .长时间不使用的试剂不得存放于仪器托盘中，特别是盐酸，有可能造
成仪器部件的腐蚀，和仪器内的湿度增加。
2 .未涂层的毛细管长时间不用，要先用水清洗，再用空气吹干。
3 .长时间不使用仪器，在停机之前必须使样品及缓冲溶液托盘处于
Load状态。
4 .仪器要注意防尘和防潮。
CH07毛细管电泳
差速迁移－分离
一、偶电层核Zeta电势
偶电层：是浸没在液体中的所有表面都具备的一种特性，指 两相之间的表面由相对固定和游离的两部分离子组成的与表面 电荷异号的离子层。在毛细管电泳中，不论是带电粒子的表面 还是毛细管管壁的表面都有偶电层。 带电粒子：粒子自身的电荷被异号的带电离子中和，这些异 号离子中有一些被不可逆地吸附到粒子上，而另一些则游离在 附近，并扩散到电介质中进行离子交换。“固定”离子有一个 切平面，它和离得最近的游离离子之间的电势则被称之为粒子 的Zeta电势（ξ）种。 管子表面：毛细管电泳通常采用的是石英毛细管柱，是硅胶 表面。在一般情况下(pH>3)，这种表面带负电，当其和溶液接 触时，在溶液中，也会形成紧贴硅胶表面的和游离的两部分离 子。由这两部分离子组成的与表面电荷异号的离子层，称之为 偶电层。
三、吸附
吸附是一种广义的分配，确切地说是一种发生在界
面或者表面上的分配作用。 毛细管电泳中吸附一般是指毛细管管壁对于被分离 物质粒子的作用。 在毛细管电泳中，造成管内壁表面吸附的主要原因 有两个，一是阳离子溶质和带负电的管壁的离子相 互作用，二是疏水相互作用。 毛细管内表面积和体积之比越大，有利于传热，但 是吸附的可能性也越大，因此，细管径的毛细管不 利于降低吸附。 吸附问题在蛋白质分子的分离中表现最为明显，因 为它们有许多带电和疏水的粒子，管壁的硅羟基与 其产生强烈的相互作用，从而对组分谱带的展宽以 及而后的分离影响极大，必须尽可能地予以抑制。 一般采用对管壁内表面的种种修饰来抑制吸附。
六、温度
在毛细管电泳中，温度对迁移的影响主要通过粘度体现。 温度控制的主要目的是保持柱温的恒定． 在压力进样时，通过增加温度所造成的粘度减小、可达到
名称高效毛细管电泳分析技术及应用(研究生方向课)
分析化学专业硕士研究生课程
教学大纲
课程名称：高效毛细管电泳分析技术
课程编号：0703022F14
学分：2
总学时数：40学时
开课时间：第二学期—第三学期
考试方式：笔试
课程说明：研究生方向课
课程内容：高效毛细管电泳技术（HPCE）是近年来发展的一种以毛细管为分离通道，高压直流电场为驱动力的新型液相分离分析技术，是分析科学中继高效液相色谱之后的又一重大发展。
它使分析科学得以从微升水平进入纳升级水平，并使单细胞分析，单分子分析成为可能，广泛应用于化学、药学、生命科学以及材料科学和环境科学等领域。
通过本学位方向课程教学，要求学生掌握高效毛细管电泳的基本原理，仪器装置系统，分离条件的选择，毛细管的制备方法，电渗现象的影响因素及控制方法，毛细管电泳的应用和发展动态趋势等，从而为进一步深入研究和应用打下坚实的理论知识和技能。
教学学时安排：
第一章概述(2学时)
第二章高效毛细管电泳基本理论（6学时）
第三章高效毛细管电泳仪器装置系统（4学时）
第五章高效毛细管电泳分离条件的选择（6学时）
第六章毛细管的制备方法技术（4学时）
第七章高效毛细管电泳分析联用技术（6学时）
第八章高效毛细管电泳分离分析技术的应用(8学时)
第九章高效毛细管电泳分析发展动态(6学时)
参考目录：
1.邓延倬，何金兰编著，高效毛细管电泳，科学出版社，北京，2000。
2.《分析化学》有关毛细管电泳技术和应用论文选读
大纲起草人：阎宏涛大纲审定人：雷根虎。
高效毛细管电泳技术简介
高效毛细管电泳技术简介
高效毛细管电泳又称高效毛细管区带电泳（又称毛细管区带电泳），它的分离根据是电场中毛细管内的溶质具有不同的迁移速率。
高效毛细管电泳（high performance capillary electrophoresis, HPCE）是在传统的电泳基础上结合高效液相色谱技术发展起来的一种高效分离分析技术，由于其具有无与伦比的高效.准确和高灵敏性，这项技术广泛运用于有机离子.无机离子，氨基酸，多肽，蛋白质，核酸分子，对映异构体和临床医学分析，同时它在生物工程，药物，环保，食品检验等领域也显示了极其重要的运用前景。
毛细管电泳仪的结构和特点
毛细管电泳仪主要由5个部分组成，毛细管柱.进样系统，高压系统，检测系统和数据采集系统组成。
毛细管电泳的特点
（1）电泳在细径（25-75u m，内径）弹性石英毛细管中进行，其有限长度一般为50cm.
（2）高电压（10-30KV）加在毛细管两端以产生高电场强度（100-500V/cm）.
（3）分析时间短，数分钟至几十分钟可完成一次分析。
（4）多种分离模式，应用范围广(从生物大分子至小分子。
离子)
（5）样品需求量少，仪器自动化高。
现阶段取得的主要进展
P/ACE MDQ主要用于蛋白质的分析：
●毛细管等点聚焦●肽蛋白和糖蛋白的鉴别分析●纯度检测●免疫毛细管电泳检测
●SDS-分子量测定●肽谱分析。
高效毛细管电泳实验
高效毛细管电泳实验一、实验目的1.进一步了解毛细管电泳的基本原理；2.熟悉毛细管电泳仪的组成；3.了解影响毛细管电泳分离的主要操作参数。
二、实验原理1．电泳淌度毛细管电泳（CE）是一种液相微分离技术，它以电渗流（EOF）为驱动力，以毛细管为分离通道，根据组分在样品中的迁移率和分布行为的差异，实现分离。
离子在自由溶液中的迁移率可以表示为：？=？E（1）?? 问题6？？R（2）哪里离子迁移率是多少，？是电泳迁移率，E是电场强度。
？是介质的粘度，R是离子的流体动力学半径，Q是电荷。
因此，离子的电泳迁移率与其电荷成正比，与其半径和介质粘度成反比。
2．电渗流和电渗淌度电渗流（EOF）是指毛细管内壁上的表面电荷引起的液体在管内的整体流动，它来自外部电场对管壁上溶液的双电层的影响。
在水溶液中多数固体表面根据材料性质的不同带有过剩的负电荷或正电荷。
就石英毛细管而言，表面的硅羟基在ph大于3以后就发生明显的解离，使表面带有负电荷。
为了达到电荷平衡，溶液中的正离子就会聚集在表面附近，从而形成所谓双电层，如图1所示。
这样，双电层与管壁之间就会产生一个电位差，叫做zeta电势。
但毛细管两端施加一个电压时，组成扩散层的阳离子被吸引而向负极移动。
由于这些离子是溶剂化的，故将拖动毛细管中的体相溶液一起向负极运动，这便形成了电渗流。
电渗流的大小可以用速率和流动性来表示：?eof????/??e?eof???/?（3）或者（4）哪里EOF是电渗流速，？EOF是电渗迁移率，？zeta电位是吗，？是介电常数。
3.毛细管电泳分离方式ce有6种常用的分离模式，其中毛细管区带电泳（cze）、胶束电动毛细管色谱（mekc）和毛细管电色谱（cec）最为常用。
本实验的内容为cze。
4．毛细管电泳的基本参数一ce中的分析参数可以用色谱中类似的参数来描述，比如与色谱保留时间相对应的有迁移时间，定义为一种物质从进样口迁移到检测点所用的时间，迁移速率（?）则是迁移距离（l，即被分析物质从进样口迁移到检测点所经过的距离，又称毛细管的有效长度）与迁移时间（t）之比：?? 书信电报（5）因为电场强度等于外加电压（V）与毛细管长度（L）之比：e?vl（6）就ce的最简单的模式―毛细管区带电泳（cze）而言，结合式（1），可得：? A.什么？tetv（7）毛细管区带电泳（CZE）测量的迁移率是电泳迁移率和电渗迁移率的矢量和，称为表观迁移率？a、即：?a??e??eof（8）实验中可以采用一种中性化合物，如二甲亚砜或丙酮等，来单独测定电渗流淌度，然后求得被分析物的有效淌度。
高效毛细管电泳
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电渗流(Electroosmotic Flow, EOF)
V Q/M
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表观速度 = 电渗流速度 + 电泳速度
电渗流
纯电泳
电渗流 + 电泳
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电渗流的正面及负面作用
正面作用 • 增加分离速度 • 使得正、负电荷物质同时分离
250 200
150 100
50 0 0
No Cooling Forced Air
Liquid
5 10 15 20 25 30
VOLTAGE (kV)
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电渗流的影响因素
3.毛细管壁的吸附 出峰时间不断拖后？ 涂层毛细管
4.离子强度 离子强度越高，电渗流越小
5.缓冲溶液添加剂 离子型表面活性剂、有机溶剂、环糊精
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毛细管的预处理
• 外壁：聚酰亚胺涂层
• 窗口的制做：3-5 mm 非涂层：烧制，酸腐蚀，刀刮 涂 层：浓硫酸，加热
• 活化/预处理： 非涂层：甲醇，NaOH，水，缓冲液 涂 层：HCl，水，缓冲液
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进样方法的选择
(1) 压力进样 0.1-25 psi (2) 电动进样 1-10 kV (3) 重力进样
负面作用 • 减少分离时间和分离有效距离 • 电渗流的波动极大的影响了迁移时间的重复性
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电渗流的影响因素-1.pH值
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• 本世纪80年代初诞生的高效毛细管电泳是将色谱理论和电 泳技术相结合的产物
一、高效毛细管电泳的发展史
二、高效毛细管电泳的特点
• 高效毛细管电泳(HPCE)是指溶质以电场为推动力，在毛细管中按淌度差别 而实现的高效、快速分离的新型电泳技术
• 6毛细管电色谱
• 毛细管电色谱(简称CEC)是把毛细管电泳和毛细管液 相色谱结合起来的一种分离技术，是用装有固定相的 毛细管柱(或有固定相涂层的空心毛细管柱)以电渗流 为驱动力，使样品在两相间进行分配的色谱
• 普遍使用的是填装ODS的毛细管填充柱(50～100μm) 装在毛细管电泳仪上，以电渗流作驱动力，让样品在 固定相和流动相之间进行分配。也有把泵和电渗流同 时用作驱动力的电色谱
• 物质粒子在电场中迁移速度的不同是电泳分 离的基础
二、毛细管电泳中电渗现象和电渗流
• (一)电渗现象 • 当固体与液体相接触后，如果固体表面因某种原因
带一种电荷则因静电引力使其周围液体带另一种电 荷，在固液界面形成双电层，二者之间有电势差。 当液体两端施加电压时，就会发生液体相对于固体 表面的移动。把这种液体相对于固体表面移动的现 象叫电渗现象。 • 电渗现象中液体的整体流动叫电渗流(EOF)
• 电渗流是毛细管电泳中非常重要的物理现象，其大 小直接影响分离情况和分析结果的精密度和准确度 。
• 1 电渗流的大小和方向
• 电于渗电流渗的淌大度小μeo用和电电渗场流强速度度Eυ即eo：表示。电渗流速的大小决定 • υeo=μeoE • 电渗淌度μeo决定于电泳介质及双电层的zeta电势，即
•
• ①电渗流在毛细管电泳中起到像HPLC中泵一样的作用，在 一次电泳操作中可以同时完成阴离子、阴离子的分离
• ②改变电渗流的大小或方向，可以改变分离效率和选择性， 这是HPCE中优化分离的重要因素
• ③电渗流明显影响各种电性物质在毛细管中的迁移速度， 电渗流的微小变化就会影响HPCE分离测定结果的重现性。而
7.2 高效毛细管电泳基本理论
• 一、电泳法的基本原理
• 当带电粒子以速度。在电场中移动时．所受的电场力为
• FE=qE
(7-1)
• 式中FE——电场力；
• q——溶质粒子所带的有效电荷；
• E——电场强度。
• 带电粒子运动时所受的阻力，即为摩擦力，
•
F=fυ
(7-2)
• 式中F——摩擦力；
•
f——摩擦系数；
• (1)pH值对电渗流速度的影响 在电泳介质中溶液的pH对电渗流速 度有很大的影响，电渗流正比毛细管内壁的ζ电势。对于相同材料毛 细管，管中溶液的pH值不同时它们的表面电荷特性不同，毛细管壁 的ζ电势不同，其电渗流的大小也不同。以常用的石英毛细管为例： 当内充液的pH增高时，壁表面的硅羟基电离为带负电荷的Si-O-数增 多，使壁表面的负电荷密度增大，管壁ζ电势增大，电渗流增大；当 溶液的pH达到7时，壁表面的硅羟基完全电离，使壁表面的负电荷密 度达到最大，电渗流达到最大。随着溶液的pH减小，壁表面的硅羟 基电离受到抑制，使表面的负电荷密度减小，管壁ζ电势减小电渗流 减小； pH减小至3以下时，壁表面带负电荷的Si-O-完全被氢离子中 和，使壁表面呈电中性，zeta电势趋于零，电渗流也趋于零。刚此溶 液pH值的稳定，对于保持电渗流稳定、保证电泳分离分析结果的重 现性极为重要。所以，HPCE操作必须在适当的缓冲溶液中进行
图7-2 电渗流与高效液相色谱流动相的 流型及它们引起样品的区带展宽
(a)压力驱动流型 (b)电渗流驱动流型
• 从图7-2看出，高效液相色谱流动相的流型 是抛物线形的层流．在管壁处的速度为零， 管中心的速度为平均速度的2倍，所以层流 引起的区带展宽明显。而毛细管电泳中的电 渗流是平流流型，几乎不引起样品的区带展 宽。电渗流呈平流是毛细管电泳能获得高分 离效率的重要原因。
• HPCE的突出特点是 ： • ①仪器简单，操作方便，容易实现自动化 • 简易的高效毛细管电泳仪器组成极其简单，只要有一个高压电源、一根毛细管、一个检测器和两个缓冲溶液
瓶，就能进行高效毛细管电泳实验
• ②分离效率高，分析速度快 • 由于毛细管能抑制溶液对流．并具有良好的散热性，允许在很高的电场下(可达400v／cm以上)进行电泳，
• 4毛细管等电聚焦
• 毛细管等电聚焦(简称CIEF)是一种根据等电点差别 分离生物大分子的电泳技术，等电聚焦电泳在毛细 管中进行，就是毛细管等电聚焦(简称CIEF)。两性 物质以电中性状态存在时的pH值叫等电点，用pI表 示。如氢基酸、蛋白质、多肽等在其等电点时为电 中性，淌度为零，溶解度最小。当所处环境的pH值 大于其等电点时，两性物质以带负电形式存在；当 所处环境的pH值小于其等电点时，两性物质以带正 电形式存在。利用两性物质等电点时呈电中性、淌 度等于零的特性，建立了等电聚焦电泳
因此可在很短时间内完成高效分离。例如可以在3.1min内分离36种无机及有机阴离子。把碱金属和镧系元 素的24种阳离子完全分离仅需4.1min，分离效率可达l05～107块／m
• ③操作模式多，容易开发新的分析方法 • 只要更换毛细管内填充溶液的种类、浓度、酸度或添加剂等，就可以用同一台仪器实现多种分离模式 • • ④实验成本低，消耗少 • 因为进样为纳升级或纳克级，分离在水介质中进行，消耗的大多是价格较低的无机盐类；毛细管长度仅
• 3毛细管凝胶电泳
• 毛细管凝胶电泳(简称GCE)是毛细管内填充凝胶或 其他筛分介质，如交联或非交联的聚丙烯酰胺。电 荷／质量之比相等但分子的大小不同的分子，在电 场力的推动下经凝胶聚合物构成的网状介质中电泳， 其运动受到网状结构的阻碍。大小不同的分子经过 网状结构时受到的阻力不同，大分子受到的阻力大， 在毛细管中迁移的速度慢；小分子受到的阻力小， 在毛细管中迁移的速度快，从而使它们得以分离
• (二)电渗流
• 目前，高效毛细管电泳中所用的毛细管绝大多数是 石英材料，当石英毛细管中充入pH大于或等于3的 电解质溶液时，管壁的硅羟基(-SiOH)开始部分解离 成-SiO-，使管壁带负电荷。由于静电引力，-SiO将把电解质溶液中的阳离子吸引到管壁附近，并在 一定距离内形成阳离子相对过剩的扩散双电层，见 图7-1。这样，就好像带负电荷的毛细管内壁有一 个圆桶形的阳离子鞘
• 2胶束电动色谱
• 胶束电动色谱(简称MECC或MEKC)是1984年日本 京都大学寺部茂创立的一种HPCE模式。这种模式 把电泳与色谱相结合，其突出特点是将只能分离离 子型化合物的电泳变成不仅可分离离子型化合物， 而且也能分离中性化合物。从而大大拓宽了电泳的 应用范围
• MEKC的实验操作与CZE相同，唯一差别是在操作 缓冲溶液中加入大于临界胶束浓度的表面活性剂
(7-7)
• 式中ε0—真空介电常数；
•
ε—电泳介质的介电常数；
•
ζ一毛细管壁的zeta电势，它近似等于扩散层与吸附层
界面上的电位
• zeta电势为：
•
(7-8)
• 上式中e是毛细管内壁扩散层单位面积的过剩电荷数；δ是扩散层厚度，其 大小和溶液组成、离子强度有关。溶液离子强度越大，扩散层厚度越薄， 对于二元电解质溶液，扩散层厚度和离子强度有如下近似关系：
• 1毛细管区带电泳
• 毛细管区带电泳(简称CZE)是指溶质在毛细管内 的背景电解质溶液中以不同速度迁移而形成一个 一个独立的溶质带的电泳模式，其分离基础是淌 度的差别
• 毛细管区带电泳的突出特点是简单。但是因为中 性物质的淌度差为零，所以不能分离中性物质。 CZE模式是HPCE中最简单、应用最广的一种操 作模式，是其他操作模式的基础
• 3电渗流的作用
• 电渗流是伴随电泳而产生的一种电动现象。一般情况下，电 渗流流向阴极，电渗流速度约等于一般离子电泳速度的5～7 倍。各种电性物质在毛细管中Байду номын сангаас迁移速度为：
•
(7-12)
•
(7-13)
• 在一般情况下电渗流可以带动阳离子、阴离子和中性物质以 相同的速度从阴极端流出毛细管。
• 电渗流在HPCE的分离中起着极其重要的作用：
• “聚焦”是指当两性物质在毛细管中形成pH 梯度时，不同等电点的溶质在外电场的作用 下，分别向其等电点的pH范围迁移，该过程 叫聚焦。
• 当溶质迁移到等于其等电点的pH范围时，就 不再移动，形成一个很窄的溶质带。由于不 同两性电解质的等电点不同，聚焦的pH范围 不同，可以形成一个个独立的溶质带而彼此 分开
•
υ——溶质粒子在电场中的迁移速度
• 当平衡时，电场力和摩擦力相等而方向相反，
•
qE=fυ
(7-3)
•
qE qE f 4r
(7-4) 粒子为棒状
• 或：
(7-5) 粒子为球形
• R为离子的表观液态动力学半径，η为介质粘度
• 从式(7-4)或（7-5)可知，荷电粒子的电泳速 度除与电场强度成正比外，还与其有效电荷 成正比，与其表现液态动力学半径(r)以及介 质粘度(η)成反比。不同物质在同一电场中， 由于它们的有效电荷、形状、大小的差异， 它们的电泳迁移速度不同，所以可能分离
第七章 高效毛细管电泳
7.1 概 述
• 分离生物高聚物最有效和最广泛应用的三大方法 ： • 经典电泳技术、离心法、色谱法 • 三种方法各有优缺点 • 色谱法：气相色谱法(GC)虽然分离效率、选择性、灵敏度都很高，但是
它只适用于热稳定性好、易挥发的物质。高效液相色谱法(HPLC) 不受热稳 定性及挥发性的限制，可以分析热稳定性差、难挥发的物质，但是和GC相 比，缺乏灵敏的通用型检测器，实验中需消耗大量的有机溶剂，对于大分子 物质因其分子扩散系数小、传质阻力大，使柱效率大大降低，以至于难以分 离分子量大于2000的物质
• 2电渗流的流型