动物遗传学实验指导书

动物遗传学实验指导

动物遗传育种教研组

2006年5月

实验室守则

一、必须以严肃认真的科学态度从事各项实验，不得高声喧哗，更不得嘻笑打闹。

二、必须严格执行操作程序和按规定的步骤进行各项实验，不得随意取舍、变动。

三、必须按正规要求锻炼基本功，不断培养和提高实验室的动手能力，不得以任何借口拒绝教师的正确指导。

四、必须爱护仪器，节约原材料，保持试剂的纯净度，遇到损坏情况发生，要报告指导教师，如损坏仪器设备，除口头报告外，还应根据情况折价赔偿。

五、课前必须认真预习有关实习内容，课后要认真分析实验结果，按时交出实验报告。

六、进入实验室后，各组学生按规定位置入座，清点好每次所分配的仪器、用品、试剂，用完后须洗净(不能洗涤者例外)如数归还原处，如有短缺情况，应由该组同学共同负责。

2006年5月

动物遗传学实验课考核制度

一、总则：实验课考核成绩占该门课程总成绩的30％，若实验课考核成绩达不到60分，则不能参加该门课程的期终考试。

二、考核内容及成绩计分方法：

1.平时作业、测验、课堂表现考核(40分)

①平时作业：实验报告应独立、按时完成，缺交一次扣10分，抄袭他人作业者及被抄者一律记0分。

②平时测验：实验操作或回答提问抽查不符要求，每次扣10分。

③考勤：迟到或早退每次扣5分，旷课一次扣10分并交学工组老师处理。

④课堂纪律：参照实验室守则，违反纪律每次扣10分并交学工组老师处理。

⑤卫生：课堂乱涂画者，每次扣10分并清除之；课后卫生不符要求擅自离去者，每人每次扣10分。

2.期终考核(60分)：采取抽签、口试形式，考核内容包括：

①实验内容有关问题。

②实验操作。

动物遗传育种教研室

2006年5月

目录

实验一果蝇的饲养和观察 (1)

实验二单因子试验(3：1分离试验) (4)

实验三两对因子的自由组合 (6)

实验四伴性遗传 (6)

实验五三点测交(基因定位) (7)

实验六粗糙链孢霉的分离与培养 (9)

实验七果蝇唾腺染色体的观察和制片 (11)

实验八骨髓细胞染色体涂片法 (13)

实验九外周血淋巴细胞培养和染色体标本制备 (15)

实验十染色体—显带标本的制备与识别 (17)

实验十一人群中P、T、C味盲基因频率的分析 (18)

实验十二遗传力和重复率的估算 (20)

实验十三遗传相关的估算 (23)

实验十四动物组织中总DNA的提取与纯度鉴定 (26)

实验十五 PCR扩增 (27)

图1 果蝇的生活史

实验一 果蝇的饲养和观察

一、实验目的

了解实验材料果蝇，学会果蝇的饲料制备、果蝇的性别和突变性状鉴别，为以后实验打下基础。

二、经典的遗传实验材料——果蝇

果蝇(fruit fly)，属于节肢动物门有气管亚门昆虫纲双翅目果蝇属，果蝇属共有900多个品种，通常用作遗传实验材料的是黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)。

(一)生活史： 1. 果蝇的生活周期。 卵→幼虫→蛹→成虫→卵

2. 生活周期长短与温度的关系（见表1-1）：一般温度在30℃以上能使果蝇不育或死亡，低温能使果蝇生活周期延长，生活力下降，饲养果蝇的最适温度20～25℃。

表1-1 生活周期长短与饲养温度的关系

温度 10℃ 15℃ 20℃ 25℃ 卵→幼虫 8天 5天 幼虫→成虫

57天

18天

6天

4天

3. 果蝇的繁育

只要温度适宜又有充足的食物，果蝇就能进行正常繁育，果蝇以酵母菌为食，因此实验室内凡能发酵的基质，均可作为果蝇饲料。常用的有玉米饲料、香蕉饲料、米粉饲料三种(见表l —2)，果蝇一般在恒温箱内培养，野生型果蝇生活力很强，突变型生活力较弱，在培养中要防止霉菌污染，须精心管理才行。

表1-2 三种果蝇饲料的配方 配料 水 （ml ） 琼脂（g ） 蔗糖（g ） 香蕉浆（g ） 玉米粉（g ） 米粉（g ） 麸皮（g ） 酵母粉（g ） 丙酸（g ） 玉米饲料 150 1.5 13 - 17 - - 1.4 1 米粉饲料

100

2

10

-

-

8

8

1.4

1

4. 果蝇性别及突变性状

果蝇的每一个体细胞染色体只有4对，三对为常染色体，一对为性染色体(♂XY，♀XX)。在幼虫期雌雄不易区别，在成虫期区别相当容易。雄果蝇个体一般较雌体为小。腹部环纹五条，腹尖颜色深(从背面看第三条环纹后呈黑色)，在第一对脚的跗节前端表面有黑色鬃毛流梳，称为性梳(Sex combs)；雌蝇个体较大，腹部环纹七条，前肢跗节无性梳。实验中选用的果蝇突变性状大多数肉眼可见，或用放大镜可见，如红眼、白眼；长翅、痕迹翅；灰体、黑檀体等。另有些性状则要在解剖镜下鉴定，如焦刚毛与直刚毛等。突变性状的基因符号及所在染色体上位座见表l—3。凡与野生型果蝇一致的性状都标以基因符号(+)。

从上叙各点可见，果蝇具有：饲养容易，世代间隔短，染色体数少，唾腺染色体制作容易，雌雄好鉴别，突变性状多，而且多数是形态突变，便于观察等特点，是理想的遗传实验材料。

表1-3 实验中使用的果蝇突变品系

三、实验用具和药品、用料

恒温箱、解剖镜、培养瓶、棉花、纱布、剪刀、麻醉瓶、干燥箱、灭菌锅、白瓷板、铝锅、电炉、玻璃棒、200毫升量筒、1000毫升和250毫升烧杯、酒精灯、镊子、角匙、毛笔、滤纸。

丙酸(或乳酸)、乙醚、煤油、75％酒精、琼脂、蔗糖、米粉、麸皮、酵母粉(片)

四、操作步骤

(一)米粉饲料制备(每组制取一份200毫升水样的米粉饲料)取100毫升水→加入剪碎的琼脂→加热溶解→加入用另100毫升水调成的米粉、麸皮、蔗糖糊、调匀→加热煮至熟透→加入酵母粉、丙酸充分调匀→分装培养瓶，盖上棉塞→冷却后用酒精棉擦干瓶内积水，插入滤纸片盖上棉塞即可。

附：制备前培养瓶、滤纸(用酒精浸湿)、100毫升烧杯干燥灭菌、棉花、纱布高压蒸汽消毒。培养瓶棉塞在饲料制成前做完。

(二)性别和突变性状的鉴别