微生物限度检查若干问题
微生物检测过程中的问题及解答
微生物检测过程中的问题及解答1.微生物实验过程中使用的移液枪怎么灭菌？答：移液枪用纱布包好，外面报纸包好灭菌。
不能湿热灭菌的枪，在枪口处塞入少许棉花，外面采用表面灭菌的方法擦拭灭菌，里面采用热空气交换法或者洁净空气交换法处理。
2.微生物实验过程中如果移液枪枪头想要重复使用怎么办？答：枪头盒装好，报纸包好灭菌。
枪头少的话放入平皿或者小烧杯后，报纸包好灭菌。
3.微生物实验回收率上下限是多少？答：50—200%（药典规定）。
4.灭菌后的物品怎么保存，几天内可以继续使用?答：移液管、平皿之类的工器具没打开放无菌室一般可以放置两个星期左右。
灭菌后的培养基放冰箱冷藏保存通常可放一星期。
6.新国标GB4789.10-2016金黄色葡萄球菌检验中培养时间很多都改成了24-48h，这个跨度有点大，具体怎么判定啊？答：如果培养24h后已经长菌就不需要再进行培养了；如果培养24h后未长菌则需要继续培养至48h。
7.新标准GB4789.15-2016霉菌和酵母计数，有一条新的变化：“菌落数在10以内时，采用一位有效数字报告；菌落数在10-100之间，采用两位有效数字报告”，有这样一种情况：样品按照1:10稀释后，最低稀释倍数10倍的结果，如果分别为：1，0，算平均数并乘以相应稀释倍数后，结果为：5，这个时候，结果报：5CFU/g(mL)吗？以前我们是报<10。
就是如果样品稀释了10倍，检测结果是5，这个时候报"5"还是"<10"?这条规则其他标准没提，只适用于霉菌酵母？其他项目菌落总数，大肠菌群等，是否适用？？？答：6.1.5若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
也就是说以小于1乘以稀释倍数形式报告时，是指均无菌落生长时，你的平板既然有长菌落，结果就应该是5，“菌落数在10以内时，采用一位有效数字报告；菌落数在10-100之间，采用两位有效数字报告”这个主要是为了防止出现8.5这样的结果，按10版100以内采用两位有效数字报告，那8.5是符合要求的，存在歧义，16版更严谨了些。
药品微生物限度检查中的污染及追溯
药品微生物限度检查中的污染及追溯摘要：本文主要探讨了药品微生物限度检查中的污染问题及其对策，同时也介绍了药品微生物限度检查中的追溯方法。
在分析药品微生物限度检查中污染的原因时，我们发现人为因素、环境因素、材料因素和检测方法因素都会对检测结果产生影响。
为了解决这些问题，我们提出了人员管理、环境控制、材料管理、检测方法优化和仪器设备管理等对策。
特别地，在本文中，我们重点讨论了仪器设备管理对药品微生物限度检查的重要性。
此外，我们还介绍了药品微生物限度检查中的追溯方法，包括样品来源的追溯、检测方法的追溯和检测结果的追溯。
这些追溯方法可以帮助我们确定检测结果的真实性和准确性。
本文旨在为药品微生物限度检查提供一些有效的方法和措施，以确保药品的质量和安全性。
关键词：药品微生物限度检查、污染、追溯、质量控制引言药品微生物限度检查是衡量药品安全和有效性的重要指标之一。
在这一检查过程中，药品的微生物质量限度被确定为有害微生物在药品中存在的最大数量。
这些有害微生物包括细菌、真菌、酵母、霉菌等。
对于药品制造商和监管机构来说，保证药品质量和安全是一个首要任务，药品微生物限度检查是确保药品质量和安全的重要环节。
然而，药品微生物限度检查过程中可能会发生污染现象，影响药品检测结果的准确性和可靠性。
因此，在药品微生物限度检查中，必须采取相应的对策，防止污染的发生，同时也要掌握一定的追溯污染源的方法，以便及时有效地处理和解决问题。
本文将针对药品微生物限度检查中的污染现象进行分析，并提出相应的对策和追溯方法，以期为药品质量控制提供参考。
一、药品微生物限度检查中污染的原因分析药品微生物限度检查中的污染主要来源于以下几个方面：（1）人为因素药品微生物限度检查需要操作人员在检测过程中进行多次开盖、取样、封盖等操作，操作不当或操作人员本身的微生物水平不符合要求都会导致检测结果的污染。
例如，在开盖或封盖时未进行足够的消毒处理，或在操作过程中，操作人员的手或工具污染了样品。
微生物限度检查标准操作规程
微生物限度检查标准操作规程《微生物限度检查标准操作规程》一、目的微生物限度检查是药品、食品、化妆品等产品质量的重要指标之一，其目的是为了保障产品的安全性和稳定性。
本标准操作规程旨在规范微生物限度检查的操作流程，确保检查结果的准确性和可靠性。
二、范围本标准操作规程适用于药品、食品、化妆品等产品的微生物限度检查，包括大肠菌群、金黄色葡萄球菌、霉菌和酵母菌等微生物指标的检查。
三、检查设备和试剂1. 培养基：根据不同的微生物指标选择适当的培养基，如大肠培养基、Mannitol盐琼脂、Sabouraud葡萄糖琼脂等。
2. 培养皿：使用符合规定的试验培养皿。
3. 培养箱：保证培养条件的恒温培养箱。
4. 其他常用实验用具：包括无菌采样容器、吸管、移液器、无菌培养皿等。
四、操作流程1. 样品采集：从产品中采集适量样品，保持无菌状态。
2. 制备稀释液：根据样品的特性，选择适当的稀释液将样品进行适当稀释。
3. 接种培养：将稀释后的样品接种在适当的培养基上，并在符合条件的培养箱中进行培养。
4. 观察和统计：观察培养皿中微生物的生长情况，统计出微生物的数量。
5. 结果判定：根据标准规定的微生物限度标准，判断检测结果是否符合规定。
五、质量控制1. 实验员必须进行严格的无菌操作训练，并使用正确的个人防护用具。
2. 培养基的质量必须符合规定，避免培养基带有细菌污染。
3. 检查设备必须经过定期的检查和校准，保持正常的工作状态。
4. 标本的采集、处理、保存和运送必须符合规定，避免外界的污染和干扰。
六、结果报告根据检测结果和规定的限度标准，出具检测报告，标明产品的微生物限度是否符合规定，以及具体的检测结果数据。
七、总结微生物限度检查是产品质量检验的重要环节，严格按照标准操作规程进行操作，可以保证检测结果的准确性和可靠性。
实验员在操作过程中也需严格遵守规程，做好个人防护措施，确保实验室的安全和卫生。
探讨药品微生物限度检查中的误差影响因素及改进措施
探讨药品微生物限度检查中的误差影响因素及改进措施摘要：药品微生物限度检查(以下简称微限)的目的是确定药品(含原料及辅料)是否污染微生物或其污染微生物的程度，将微生物的种类和数量限制在一定的范围之内或者不得检出，是保证用药的有效性、保障药品安全性的重要措施。
也是衡量药品生产，流通以及使用全过程微生物控制水平的主要依据之一。
科学技术的进步，药品生产工艺的提高以及人民对药品安全理念的不断提升，促使药品检验标准不断提高，微生物限度检查作为药品质量的安全性评价指标也不例外。
关键词：药品微生物；限度检查；误差影响因素；改进措施；引言药品微生物限度检查法用于检验药品中非无菌制剂及其原、辅料等中的活的微生物检验方法，包括需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的计数以及控制菌的检查，是药品质量和安全控制的重要部分，其检验结果是对药品污染情况进行判定的重要指标。
化妆品微生物检验用于检验化妆品中菌落总数、霉菌和酵母菌以及耐热大肠菌群、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌三种致病菌的检验，是质量控制的重要部分。
目前，我国大多数的药品、化妆品的检验机构都以理化检验、微生物检验、毒理学检验的形式划分科室，微生物室既负责药品微生物限度检查又负责化妆品微生物检验，这就要求相关检验人员，能够清楚的掌握和区分药品与化妆品微生物检验的差异，以保证检验结果的准确可靠。
1检验标准与判定依据无论药品微生物限度检查还是化妆品微生物检验都必须严格按照国家颁布的相关法典或规范进行检验。
药品微生物限度检查与判定的主要依据是由国家药典委员会编制的《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)。
化妆品微生物检验依据则是《化妆品安全技术规范》。
两者的检验依据、判定依据都会与时更新，不同的是更新的周期不一样。
自1985年以来，《中国药典》定期每5年更新一版，期间还会根据需要发行增补本或修订本，目前执行的2020年版为第十一版药典。
而《化妆品安全技术规范》的更新是不定期的，相对来说周期较长，且名字也有变动，起初为《化妆品安全规范》，2002年首次发布，2007年更新一版、目前执行的是2015年版《化妆品安全技术规范》。
无菌、微生物限度、细菌内毒素方法学验证
问题：生长缓慢的判断标准？
敏感菌株与阳性对照菌
阳性对照菌不是验证试验选定的敏感菌 株
问题：降低了阳性对照菌的意义，实际 工作中抑制枯草芽孢杆菌的样品很多 （敏感菌株），但阳性对照只能选择金 黄色葡萄球菌。
关于大肠埃希菌的问题
供试品无菌检查中规定“抗革兰阴性菌 为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌”， 但在方法学验证中所用菌株没有大肠埃 希菌。 解决措施：抗革兰阴性菌的抗菌药物进 行方法学验证时增加大肠埃希菌。 即将修订，将铜绿假单胞菌修订为大肠 埃希菌。修订后按新方法执行。
问题：冲洗条件、冲洗量的选择
有些厂家提供的验证资料中，对非抑菌
性供试品也采用大量的冲洗，100ml/次 *10次/膜，增加了出现误差的机会。 1. 对膜的损伤 2. 检验方法繁琐，大大增加检验人员 的工作量（检验要按照已经验证的方法 进行） 3. 验证试验方法选择总的原则是由易 到难
结果判断：
与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均 生长良好，则供试品的该检验量在该检验条件下 无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检 查法和检查条件进行供试品的无菌检查。 如含供试品的任一容器中微生物生长微弱、缓慢 或不生长，则供试品的该检验量在该检验条件下
有抑菌作用。
消除供试品抑菌的方法
药品无菌和微生物限度检查法验证作为中国药 典2005年版增订的一项重要内容对促进我国药品 微生物检验的标准化是十分重要和必要的，执行
近一年以来的情况表明，方法验证是促使我国药
品无菌和微生物限度检查方法更加合理、科学和 严谨的重要途径。（2006年6月全国会议纪要）
中检所和药典会多次召开会议肯定工作的成绩、 研讨存在的问题，希望各级领导能给予高度重 视，从各方面支持这项工作长期持续发展。
医疗器械规范检查中常见的微生物检验问题
医疗器械规范检查中常见的微生物检验问题摘要：医疗器械规范检查中针对微生物检测的特殊性，相关部门要加强对检验员的专业知识的培养。
微生物检验要求检验人员既要有一定的专业理论知识，又要有实际操作经验。
希望企业管理者将重点放在对规范检查能力的建设上，加大对硬件的投资力度，为检验人才的培养创造良好的环境，同时对检验人员的工作经验等方面给予足够的重视，从而提高医疗器械规范检查中微生物检验的能力。
关键词：医疗器械；规范检查；微生物检验1微生物检验人员1.1实验人员在微生物培养和生化鉴定的过程中，常常会对实验菌形态、实验菌颜色变化展开识别。
作为一名从事微生物检验的试验人员，必须具备较好的颜色识别能力。
在招聘微生物化验专业技术人才时，可适当增设“色度”考核。
为更好地保护实验者的健康，应将实验者的全部血液样本保存，并进行超低温冷冻保存。
同时每年组织一次对试验者进行身体检查，并建立相应的健康记录。
实验室要按照不同的工作需要，制定有针对性的每年的训练方案，确保实验室工作人员能在短时间内了解到国家和有关方面的政策和要求，并熟练地掌握新的实验技术。
1.2检验人员存在的问题在微生物检验人员中，普遍存在着专业技能欠缺的问题，配置不合理，一人多个岗位，责任交叉。
缺乏经验，思维能力受到限制，无法对检验过程中产生的问题进行有效地分析和解决。
对微生物检验技术的培训不足，对新技术的应用不能及时掌握。
微生物学基础知识的欠缺，对微生物学的基本概念、实验原理和实验目标的认识模糊不清。
实践操作方法不完善，标准不统一，测试误差大，重复性差。
2微生物检验环境2.1检验环境微生物检测结果的真实性和可靠性，取决于检测环境是否符合各项有关标准的要求。
实验室必须根据所建立的监控文件，执行相应的监控工作。
如果检测出环境清洁度不符合标准，则必须立即停止在此环境下进行试验。
发现问题并排除后，应重新做环境清洁度试验，试验结果符合要求，方可投入使用。
在化验室频繁使用，或者检测到不合格品时，必须进行环境监测。
微生物限度检查的影响因素探讨
微生物限度检查的影响因素探讨
微生物限度检查是药品质量控制中的一个重要环节，其结果直接关系到药品的安全性和有效性。
影响微生物限度检查的因素非常多，包括药品本身的特性、样品的采集和保存方式、测试方法的选择和执行等。
药品本身的特性是影响微生物限度检查的关键因素之一。
不同类型的药品对微生物的抑制和杀灭有不同的能力，因此在设定限度时需要根据药品的特性进行合理的设定。
眼药水和注射剂等液体制剂由于其含水量高，微生物易于生长繁殖，因此对微生物的限度要求较高；而片剂和胶囊等固体制剂对微生物的生长繁殖有较好的抑制作用，限度要求相对较低。
样品的采集和保存方式也会对微生物限度检查的结果产生影响。
样品采集时应注意避免污染，采用无菌技术进行操作，避免外源性微生物的污染。
采集后的样品应存放在低温条件下，避免微生物的生长繁殖。
在运输和储存过程中也需要注意避免温度过高、湿度过大等条件对微生物产生不良影响。
测试方法的选择和执行也是影响微生物限度检查的重要因素之一。
常用的微生物检测方法主要包括菌落计数法、膜过滤法、酶标记法等。
不同的药品和要求可以选择不同的测试方法，但无论采用哪种方法，都需要严格按照相应的操作规范进行。
在操作过程中需要注意防止交叉污染，确保测试结果的准确性和可靠性。
还有一些其他因素也会对微生物限度检查产生影响。
药品生产过程中的无菌条件、生产工艺和设备的合理性等因素都会对产品的微生物水平产生影响。
药品的无菌性是保证微生物限度合格的前提条件，只有在无菌条件下才能有效进行微生物限度检查，并保证其结果的可靠性。
化妆品微生物检验值得注意的几个问题
化妆品微生物检验值得注意的几个问题大多数的化妆品因为其中含有水分、油脂、蛋白质以及多元醇等元素为微生物的生长创造了良好的条件，也因此造成了产品变质的可能。
因此，生产厂家为了能够抑制微生物的繁殖和降低消费者在使用的过程中出现产品污染的情况，往往会在化妆品当中加入适当的防腐剂，但不能过量。
因此，大多数的化妆品虽然一方面为微生物的生长繁殖提供了良好的环境，另一方面又由于使用了防腐剂而帮助抑制了微生物的生长。
因此，为了能保障消费者的使用安全，降低微生物对人体的损害，有必要在进行化妆品微生物检验时注意以下几个问题。
①抽取样品时，应该抽取具有代表性的样品，随机抽取的原则，例如从批的整体当中各部位进行抽取，可以分为上中下层或者梅花点式，或上、中上、中、中下以及下层等，而需要保证所有接触样品的工具和容器都必须要保持清洁，干净。
在进行检验时，应分别从两个包装单位以上的样品当中抽取10g或10ml，而包装量＜20g的样品，采样量可以适当增加样品的包装数量。
②样品采集完毕后，应放在室温阴凉干燥的地方，先进行微生物的检验，再进行完成其他指标，过程中应该防止出现微生物再污染或者扩散的情况。
例如，当检测出粪大肠菌群或者其他的致病菌群时，自出报告开始，该菌种和被检测样品就应该保存一个月及以上。
此外，应该尤为注重对菌落总数的检验，这能够帮助判断样品被细菌污染的程度，这也是对于样品进行卫生学总评价的综合理论依据。
因此，检验人员应该提前准备供试液和混合平板，记录检验的数据指标，并对检查结果进行分析观察。
对于不同的化妆品中的防腐剂含量，在进行检验时应该加入不同的中和剂，例如卡松的中和剂半胱氨酸，具有较好的中和卡松的抑菌效果。
③严格配置培养基，这是保证检验质量的关键步骤，且必须严格按照规定的方法进行培养，观察培养基的PH值，并与不同厂家所生产的干燥培养基进行对比试验。
注意最好使用蒸馏水，这样能够有效保证所制成的培养基透明度高，利于实验的观察。
微生物检测常见问题问答集锦（二）
微生物检测常见问题问答集锦（二）技术交流知识分享应广大粉丝的需求，小编将陆续推出《微生物检验问答集锦》系列。
本系列所列出的问题均是微生物检验过程中提问频次较高的问题，我们咨询专家老师后汇编，希望可以帮助微生物检验从业人员对检验过程中遇到的问题有新的理解。
大家对感兴趣的、比较关注的问题，也可以后台留言，我们一起交流探讨！一- 问答 - GB 4789系列什么情况下应作阳性对照，假如检测50批样品致病菌都是阴性结果，需要人工污染样品做阳性对照来做质控吗？答：GB 4789.1里规定要定期进行，没有明确说什么时候进行。
自己实验室需要制定sop进行规定，比如我们实验室总是检出某个致病菌的阳性结果，就规定一个月的时间来进行阳性对照。
保证实验室人员具有可以持续进行阳性检出的能力的。
最新的RB/T 038-2020 食品微生物检测结果质量监控指南文件里规定：对于日常质量监控,应执行检测方法的规定，否则建议每批或每组样品每20个样品1次的频次进行；质控不一定需要人工污染样品来做，可以用标准菌株来做阳性和阴性对照。
二- 问答 -商品化的即用培养基（比如血平板平皿），有供应方的验收报告和CMA报告，购入后实验室是否还需要做验收吗？商品化基础培养基中需要添加的配套添加剂是否需要进行验收吗？如何验收呢？答：目前的标准需要做，配套添加剂不需要单独验收。
三- 问答 -关于培养基性能测试，我们公司也有文件要求，我们平时做培养基性能测试除了参考GB4789.28外，可不可以也参考我们的文件做验收？GB4789.28是一个最低的标准，一定要达到。
比如EC肉汤只写了大肠埃希氏菌和粪肠球菌这两的菌株，必须要达到，如果企业自己的验收标准（里包含了国家标准里的菌株）高于国家标准，那就更好。
四- 问答 -在琼脂培养基制备过程中，发现灭菌后的培养基制成的平板部分偏软甚至有不凝固的现象，是什么原因？答：主要是琼脂分布不均导致的。
建议琼脂类培养基灭菌前加热溶解均匀（如果是大体积配制进行分装灭菌的培养基，建议煮沸溶解，搅拌分装）；灭菌后，使用前，关注培养基的透光性是否均一，如果不均一，轻轻摇晃使其均匀，再倾注平皿使用。
2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查
2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查本文介绍了非无菌产品微生物限度检查中的微生物计数法。
该方法适用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
在检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应严格遵守无菌操作，防止再污染。
计数方法的选择应考虑供试品理化特性和微生物限度标准等因素，并经过确认。
此外，商品化的预制培养基和由脱水培养基或按处方配制的培养基都应进行培养基适用性检查。
在供试液制备过程中，应根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液，并在加温时均匀加热，且温度不应超过45°C。
供试液从制备至加人检验用培养基，不得超过1小时。
在进行多种品种计数方法的适用性试验时，需要注意时效问题。
在“供试液制备”这一节中，水溶性供试品、水不溶性非油脂供试品、油脂类供试品的制备方法没有变化。
在2020版药典中，将原来的“需用特殊方法制备供试液的供试品”中的小类（四种）提升至与上述三类并列，除气雾剂供试品外，制备方法没有变化。
具体是膜剂供试品、肠溶及结肠溶制剂供试品、气雾剂供试品（2015版：气雾剂、喷雾剂供试品）、贴剂、贴膏剂供试品（2015版：贴膏剂供试品）。
需要注意的是，气雾剂供试品的变化较大，需要特别注意。
在进行供试液接种后的抗菌活性去除或灭活时，可以使用中和剂或灭活剂（表2)来消除干扰物的抑菌活性。
最好在稀释液或培养基灭菌前加入。
如果使用中和剂或灭活剂，试验中应设中和剂或灭活剂对照组，即取相应量含中和剂或灭活剂的稀释液替代供试品同试验组操作。
需要注意的是，在方法学中，这个对照组的稀释液中显然要含有相应的中和剂或者灭活剂，进一步明确，以防止错误套用。
在供试品中微生物的回收中，涂布法中“取15~20ml”修订为“取适量（通常为15~20ml）”。
在薄膜过滤法中，所采用的滤膜孔径应不大于0.45μm，直径一般为50mm。
如果采用其他直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整。
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微生物限度检查若干问题微生物限度检查若干问题微生物限度检查是对非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法，是药品微生物学检验的重要容之一。
中国药典2000年版二部附录ⅪJ“微生物限度检查法”、《中国药品检验标准操作规》（2000年版）及参考书《药品微生物学检验手册》均做了详尽的阐述。
下面对几个比较重要的问题，谈一点工作学习体会，仅供参考。
一、实验室要求开展微生物限度检查工作，首先要按照《药品检验所实验室质量管理规》及《药品生产质量管理规》的要求，建立一个布局合理，使用方便，操作安全的实验室，并且配有完善的实验设施和管理制度。
微生物限度检查、无菌检查、抗生素微生物检定实验室以及接种室（接种对照菌及菌种传代）均应严格分开。
（一）无菌室：1结构与要求：最好设在二楼以上（防潮、防霉、采光好），面积不超过10平方米，高度不超过24米，由2个缓冲间和操作间组成。
缓冲间与操作间之间应有样品传递窗，出入操作间和缓冲间的门不应直对。
无菌室应六面光滑平整，能耐受清洗消毒，墙壁与地面、墙壁与天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙、无死角。
无菌室光照应不低于300勒克斯，缓冲间和操作间均应装有紫外线杀菌灯2-25w/m3作空气消毒用。
紫外线波长200-300nm者''具有杀菌作用，其中以265-266nm最强，这与DNA的吸收光谱围一致。
其杀菌机理可能是在DNA中引起胸腺嘧啶双聚体形成，从而干扰DNA复制，导致细菌变异或死亡。
紫外线杀菌灯1m以距离杀菌效果最佳''每次开灯照射时间为20min。
其缺点：穿透力弱，一纸可以挡住，不能穿透固体物，对人的皮肤眼睛有损伤，所以紫外线灯开关应装在无菌室外便于开关。
2温度、湿度：温度应控制在18-26℃''相对湿度40-60''操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正比''不低于49Pa。
3操作间：应安装空气除菌过滤层流装置，操作间不应安装下水道，洁净度不低于1万级，净化工作台局部应为100级。
操作间应准备电子称（感量01g''最大称量300g''乙醇灯''火柴''2碘酊及75乙醇棉球，大、小橡皮乳头，记号笔，灭菌的剪刀，镊子、注射器等。
4缓冲间：应有洗手盒、消毒液、无菌衣、帽、口罩，拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物。
（二）洁净级别及检查方法：通常采用尘粒数及浮游菌数或沉降菌数测定法。
98年国家药监局颁布药品生产质量管理规''把药品生产洁净区空气洁净度划分为四个级别：空气洁净度级别表────────────────────────────尘埃数/立方米活微生物数个洁净级别─────────────────────≥05μm≥5μm浮游菌/立方米沉降菌/皿────────────────────────────100级≤3500≤0≤5≤11万级≤35万≤2000≤100≤310万级≤350万≤2万≤500≤10────────────────────────────尘埃数：用尘埃粒子计数器测定，取样高度离地面1米，间距05-2米''每个测试点连续采样3-5次，仪器显示结果。
沉降菌数测定：无菌室及净化工作台面消毒擦拭后，先启动层流净化装置30min，将营养琼脂平板3个及改良马丁琼脂平板3个直径9cm，置净化台左、中、右各1个''开盖，暴露30min后将盖盖上。
分别在30-35℃培养48h及25-28℃培养72h''细菌和真菌总数不超过1个为100级。
无菌室应在每次操作前后均用01苯扎溴铵溶液或其他消毒液擦拭台面及紫外线照射不到可能污染的死角；用消毒液湿拖地面。
实验室一旦被污染''洁净度达不到要求''可以清洗或更换净化工作台过滤器''甲醛或丙二醇''乳酸熏蒸消毒''方法：支架上放一个烧杯（装少许甲醛，8ml/平方米''下面放一个装有少许乙醇的乙醇灯点燃后，关闭门窗，乙醇用尽后灯自灭，甲醛蒸气充满无菌室，密闭24h。
缺点：甲醛蒸气易锈蚀仪器，对人有刺激，可用氨水中和，减少对人眼的刺激。
二、无菌操作指在无菌的环境条件下，使用无菌的器材，防止微生物污染的操作技术。
从事微生物检验的工作人员必须经过无菌技术及基础微生物学专业知识培训，才具备上岗操作的资格。
所用的物品需清洗、干燥、包扎，无菌。
干烤箱160℃2h''适用于培养皿9cm、试管、吸管、锥形管、剪刀、镊子物品的灭菌；培养基及09氯化钠溶液用高压锅湿热灭菌''含糖培养基一般用113℃30min''以防温度过高成分被破坏；一般培养基115℃30min;09氯化钠溶液可用121℃20min即可。
操作者在缓冲间换拖鞋，用肥皂洗手后，穿戴无菌工作服、帽、口罩，操作前用01苯扎溴铵泡手''75乙醇棉球擦拭双手后''在乙醇灯火焰区操作。
操作中切勿用嘴直接吸吹吸管防止致病菌感染操作人员及口中的杂菌污染供试品。
三、药品微生物检验的特点（一）活体易变性：被污染的供试品中活的微生物具有繁殖能力，如细菌以二分裂法无性繁殖，20分钟繁殖一代，一个细菌10个小时后可变成10亿个细菌。
如糖浆剂细菌数标准为100个/ml，出厂时检验结果合格，由于贮存不当，放置一段时间成为不合格药品，由于营养成分耗尽细菌自身代谢产物所致的毒性或pH值改变''细菌逐渐死亡，又成为合格药品。
（二）分布不匀：由于生产环节多，从原料、中介体到成品，经过生产多个流程，与不同操作人员接触，特别是生产后期被污染，通常是局部的，药品微生物的污染存在着不均性。
要求：随机取样，二个包装以上，操作前，供试品摇匀后取样。
（三）受损状态：药品中污染的微生物，受到加工、加热过程的机械损伤，药品本身的抑菌杀菌作用，处于受损抑制状态，检验时必须创造适宜的生长环境（培养基的营养、pH值等）使细菌复苏，从而提高检出率。
如口服制剂，必须检查控制菌大肠杆菌，取1:10的供试液10ml加入胆盐乳糖增菌液中，胆盐乳糖增菌液是分离大肠杆菌的选择培养基，蛋白胨乳糖等成分提供氮源碳源外，胆盐是抑菌剂，对革兰阳性菌有良好的抑菌作用，从而使目的菌更好地生长。
（四）生态环境多样复杂性：药品的种类、剂型繁多，使污染的微生物生态环境多样而复杂。
故对不同的供试品分别采用不同的方法，正确地制备供试液，使药品中污染的微生物得以真实反映，是保证检验结果正确可靠的重要前提条件。
四、供试液的制备：将供试品制成供试液（一般为1:10），有利于供试品中污染的微生物分散，与培养基充分接触，提高阳性检出率。
常用稀释剂为09无菌氯化钠溶液，滴眼剂、王浆、蜂蜜制剂可直接用供试品（原液），作为供试液。
在作10倍递增稀释时，吸管插入第1级稀释液不低于25cm，上下反复吸吹约10次。
吸液时，应先吸至高于吸管上部刻度少许，然后提起吸管，贴于试管壁调整液量至刻度，再沿第2级稀释管的壁在液面上1cm处缓慢吹出全部液体。
每个稀释级需更换吸管。
（一）一般供试品供试液的制备：1液体制剂：糖浆剂等取样10ml至含有玻璃珠的锥形瓶，加入09无菌氯化钠溶液90ml1:10的供试液。
油剂：取样10ml''加聚山梨酯-805ml''再加稀释剂至100ml。
不提倡将稀释剂定量分装后再灭菌，因高压灭菌易使液体蒸发损失。
2固体制剂：片剂：称样10g至研钵量取稀释剂100ml，先加10ml浸没样品，研磨，将上层液倒入锥形瓶，再加少许稀释剂研磨，同上操作直至样品全部研细制成1:10的供试液。
丸剂及锭剂：中药蜜丸取4丸以上剪碎后称样10g''放置匀浆仪专用的不锈钢匀浆杯，加入稀释剂100ml，3000转/分''2min制成1:10的供试液。
胶囊：硬、软胶囊，称样10g，加入稀释剂100ml''放45℃水浴10分钟后振摇''使溶解。
肠溶片（胶囊）、稀释剂用无菌磷酸盐缓冲液pH68100ml。
茶剂：称样10g加稀释剂100ml浸泡30min，用无菌纱布过滤取滤液（1:10的供试液。
袋泡茶取2袋称量''加稀释剂配成1:10浸泡30min。
胶剂：如阿胶，先放4℃冰箱1h''取出后立即称样10g，放入匀浆仪捣碎或用无菌的不锈钢捣罐捣碎，放45℃水浴促溶。
气雾剂：不含抛射剂的可拧开取样10ml，加稀释剂90ml1:10含抛射剂，需先放4℃冰箱1h减压，然后用无菌钢锥钻孔（勿拨出钢锥），转动钢锥使抛射剂徐徐抛出，再用无菌注射器抽出全部药液，然后按标示量用稀释剂补足为原液，以下操作同液体制剂。
乳膏剂：称样10g，加聚山梨酯-805ml促溶''加稀释剂至100ml。
非水溶性供试品：司盘单硬脂酸甘油酯法：眼膏、软膏剂，以凡士林为基质，不溶于水需加乳化剂使供试品乳化。
用减量法称样5g，加入含已灭菌溶化并保温45℃左右的司盘-805g、单硬脂酸甘油酯3g、聚山梨酯-8010g混合物的烧杯中，在45℃水浴中振摇使供试品中凡士林基质乳化''慢慢加入45℃左右的09无菌氯化钠溶液85ml''边加边振摇制成1:20供试液。
（二）抑菌性供试品供试液的制备抑菌及抗菌性药品，如抗生素、沙星类，既然有抑菌杀菌作用，为什么还要做微生物限度检查，其原因是：①被污染的微生物在抗菌药品中因生存环境不利，呈休眠受损状态，但未死亡，一旦用于人体，当条件改变或适宜时，便复苏仍可生长繁殖，对人体造成危害。
有的耐药性致病菌株可成为对该抗菌药的依赖株。
②抗细菌的药品，不能抗真菌，所以可能被真菌污染；抗真菌的药品不能抗细菌，所以可能被细菌污染，故2000年版药典要求口服抗生素抗细菌的药品检查真菌，抗真菌的药品检查细菌。
细菌数及真菌数的测定，供试品未经特殊处理，因三级稀释，基本上可起到稀释后消除抑菌成分的作用。
1稀释法：取1:10的供试液10ml加入增菌液在200ml以上2沉降法：制成1:10的供试液摇匀后静置10min，使药品中污染的微生物混悬于供试液中，难溶于水的抑菌成分自然沉降在容器底层，吸取上层液10ml至增菌液。
1、2法适合于抑菌性弱的药品。
3薄膜过滤法：由于细菌的直径约1μm''利用045μm微孔滤膜阻截细菌，滤除抑菌成分，冲洗膜上残留抑菌成分，达到消除抑菌成分之目的。
如氯霉素滴眼液，取1:10的供试液40ml，通过直径为50mm装有045μm孔径微孔滤膜的无菌滤器，过滤后用09无菌氯化钠溶液冲洗，冲洗量约1000ml，无菌手续取出滤膜放至无菌平皿，剪成四等份，各取一片分别放置营养汤增菌液二瓶（其中一瓶加入金黄色葡萄球菌50-100个及胆盐乳糖增菌液二瓶其中一瓶加入铜绿假单胞菌50-100个。