临床血液学检验：抗凝物质与纤溶活性的检验
6抗凝物质异常性疾病检验
原理：血浆+肝素(一定量)+ FⅩa/凝血酶(过量)
灭活
AT
FⅩa/凝血酶（水解显色肽S-2765）
pNA
(405nm显色）
使AT结合凝血酶能力、速度、稳定性大大增强；
结合并激活HCⅡ，可特异性结合凝血酶并失活。
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6
介绍两类肝素（肥大细胞和嗜碱性粒细胞）：
(普通)肝素+AT
抑制凝血酶和FXa 对两者的作用相同 效果强、作用快、
维持时间短 易导致出血风险。
低分子量(<7000)肝素+AT
60%结合—结合C4bp(属于急性时相反应物） 两种形式
40%游离—作为APC的辅因子参与抗凝机制
急性炎症及相关疾病中C4bp水平增高，游离PS降低。
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（三）血栓调节蛋白
(thrombomodulin,TM)
主要由血管内皮细胞合成（除外脑血管)； 1982年兔脑中分离。
1.在PS协同下灭活FⅤa和FⅧa，需磷脂和Ca2+的参与。
2.灭活FⅤa，抑制FⅩa与血小板膜磷脂的结合。
3. 通过激活PA，灭活PAI-1，增强纤溶活性。
4.增强AT与凝血酶的结合。
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特例介绍：Leiden突变
FV的Arg506Gln，致APC不能灭活FⅤa，发生APCR
是凝血酶的受体,也称凝血酶调节蛋白。
功能:形成凝血酶-TM复合物,加速PC活化(2万倍以上)
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（三）血栓调节蛋白
(thrombomodulin,TM)
主要由血管内皮细胞合成（除外脑血管)； 1982年兔脑中分离。
临床血液学和血液学检验教学大纲
临床血液学和血液学检验教学大纲临床血液学和血液学检验是采用各种实验方法和技术分析研究血液和造血器官的病理变化，以阐明血液系统疾病的发生机制，用于造血系统疾病的诊断、鉴别诊断、疗效观察和预后监测的一门科学。
血液学检验既属于血液学范畴，又是医学检验的一个分支，是医学检验的主干课程之一。
近十年来，血液学基础理论研究随着实验手段的不断更新而迅速发展，而实验性很强的血液学，也越来越多的引进各种新的检验项目或赋予基础检验以新的评价。
作为一门理论与实践相结合的课程，临床血液学和血液学检验设置在医学检验专业必修课程中，其目的是使该专业的学生掌握血液学检验的基本理论、基本知识和基本技能，为今后临床工作打下坚实的基础。
通过本课程的学习，要求学生能够掌握本门课程的基本理论知识，熟悉临床血液学相关基础知识；同时掌握血细胞的正常形态和常见血液病的检验方法及血液学特点，能对常见血液病作出初步诊断结论。
临床血液学和血液学检验的任务是利用血细胞的检验技术、超微结构技术、病理学技术、生物化学技术、免疫学技术、分子遗传学技术、生物遗传工程、细胞生物学及分子生物学技术以及其他多种技术，对血液系统疾病和非血液系统疾病所致的血液学异常进行基础理论的研究和临床诊治的观察，从而促进血液学和临床血液学的发展和提高，推动了血液病学研究向更高层次迈进。
学生需要经过基础医学、临床医学和实验医学的专门学习和培养，不仅要有熟练的实验医学技能，正确掌握各项有关血液病诊断和反映病情的实验；适应血液学的发展，建立有关新实验，还要有一定程度的基础医学和临床医学知识，为血液病做出诊断。
该课程共分四篇：造血细胞及其检验、红细胞疾病及其检验、白细胞疾病及其检验和血栓与止血及其检验。
它是以血液学的理论为基础，以检验的实验方法为手段，以临床常见的血液病为主线，创建了一个理论-检验-疾病相结合、紧密联系的新体系，且在实践过程中不断发展、完善和提高。
本课程主要由医学检验系临床血液学教研室安排，课程设置建立在医学院医学检验系学生完成公共基础课后。
血凝五项检测的应用及注意点
血凝四项及D-二聚体检测的应用及注意事项2014年12月郑秋文凝血系统包括凝血和抗凝两方面，其动态平衡是维持体内血液流动和防止失血的关键。
掌握人体凝血系统和纤溶系统的功能，了解机体是否正常止血和凝血很重要。
以往凝血检查常用B T、C T 等检测，但操作复杂、敏感度低，结果不太可靠。
随着止血与血栓研究的发展和检测手段的进步，现在医疗单位一般都用半自动或全自动血凝仪进行凝血功能检测。
凝血酶原时间( P T)、活化部分凝血活酶时间( AP TT)、凝血酶时间( TT)、纤维蛋白原( F I B)检测是常用的凝血系统的筛选试验，再此基础上增加了D-二聚体测定，简称血凝五项。
为了提高大家对血凝五项检测应用的认识，掌握检测过程中的注意点。
从P T、AP TT、TT、F I B及D-二聚体检测的应用范围、临床意义、检测注意点等方面陈述，对各环节的影响因素加以分析。
只有掌握血凝五项检测的临床应用及意义，了解影响检测结果的原因，并加以重视，才能做好血凝五项的检测AP TT 主要反映内源性凝血，P T则主要反映外源性凝血加上纤维蛋白原定量测定和T T测定，可将患者的凝血系统及抗凝血成份做一个较为全面的检查。
目前临床主要应用于患者术前常规检测、抗凝和溶栓治疗的监测、出血性疾病的筛查等；而D-二聚体反映着继发性张溶的增强，是唯一反映凝血和纤溶的理想指标，在临床上已视为体内高凝状态和血栓性疾病的诊断及预后判断有一定指导意义。
对降低患者的发病率和病死率是十分重要,可作为监测溶栓药物的疗效指标。
另外，由于I、Ⅱ、V、Ⅶ、Ⅸ、X因子均在肝细胞内合成，用血凝五项检测来判断肝细胞损坏或预后也有一定的意义。
虽然用血凝仪进行血凝五项检测来评价患者凝血系统功能，准确度和灵敏度较手工法都大为提高。
但其检测同样受多种因素的影响，现将血凝五项检测的应用及影响因素进行了总结，阐述如下。
一．血凝四项及D-二聚体检测的临床应用1 . P T检测P T属筛选性试验，广泛应用于外科手术前及各种外源性凝血途径中各因子检查，凝血因子的定量检测及口服抗凝剂治疗的检测。
临床血液学检验测试题(附参考答案)
临床血液学检验测试题（附参考答案）一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1.下列有关止血血栓理论中错误的一项是()A、内源性、外源性凝血系统形成凝血活酶时，都需要因子X参与B、血管壁参与内源性凝血途径C、血小板只参与止血而不参与凝血过程D、因子IV参与内源性和外源性凝血途径E、血管壁参与外源性凝血途径正确答案：C2.对粒细胞集落形成有特异性刺激的因子是()(中)A、Meg-CSFB、BFU-EC、M-CSFD、Multi-CSFE、G-CSF正确答案：E3.凝血酶时间(TT)参考值(手工法)是()（易）A、11～14sB、18～22sC、2～5minD、16～18sE、23～36s正确答案：D4.引起继发性纤维蛋白溶解症的理论基础是()（中）A、t-PA或u-PA激活PLGB、尿激酶、链激酶激活PLGC、PAI增多或活性增高，抑制PLG激活D、因子Ⅻ激活，使PK转变为激肽释放酶，后者激活PLGE、t-PA或u-PA的含量减低或功能减弱正确答案：D5.下列哪项符合戈谢病()（中）A、多有肝脾肿大B、外周血细胞数正常C、临床上主要分为急性神经型、慢性非神经型、慢性神经型及成人型D、戈谢细胞的SBB染色呈阳性E、戈谢细胞的POX染色呈阳性正确答案：D6.下列哪项不是促进内皮细胞合成或释放PAF的物质()（难）A、PGI2B、凝血酶C、TNFD、IL-1E、胶原正确答案：A7.白血病性原始细胞的超微结构观察，以下不属于胞核内特殊结构的是()(中)A、核环B、Auer小体C、核泡D、假性包涵体E、核内小体正确答案：B8.下列物质哪一种有利止血()（中）A、PGI2B、t-PAC、ATD、PAIE、肝素正确答案：D9.下列哪项说法不符合DIC的有关理论()（中）A、体内有血小板聚集，生成病理性凝血酶B、大量血小板和凝血因子被消耗，生成病理性凝血酶C、通过内激活途径发生继发性纤溶亢进D、纤溶系统被抑制E、导致血管内凝血正确答案：D10.下列哪项不是血管内皮细胞分泌的抗血栓物质()（难）A、PGI2B、ETC、ATD、NOE、TM正确答案：B11.关于多发性骨髓瘤，下列说法正确的是()(难)A、是惟一可以出现M蛋白的疾病B、所有病人尿检均能找到本-周蛋白C、外周血中可发现10％以上的异常浆细胞D、出现缗钱状红细胞是本病特异性的诊断依据E、血清或尿免疫电泳出现大量IgM型M成分一般不考虑本病正确答案：E12.D-二聚体水平超过多少可排除肺梗死()(中)A、200μg/LB、300μg/LC、400μg/LD、500μg/LE、600μg/L正确答案：D13.在采用聚集仪测定PAgT时，下列哪种诱导剂诱导出现单峰()（难）A、ADP(1.0μmol／m1)B、ADP(O.5μmol／m1)C、肾上腺素(O.4μg／ml)D、胶原(3.Oμg／ml)E、瑞斯托霉素(1.5mg／ml正确答案：D14.泡沫样细胞是指什么细胞()（易）A、尼曼-匹克细胞B、戈谢细胞C、脂肪细胞D、骨髓瘤细胞E、R-S细胞正确答案：A15.下列哪一组是维生素K依赖的凝血因子()（中）A、因子Ⅺ、Ⅻ、PK、HMWKB、因子Ⅷ、Ⅸ、X、ⅪC、因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、XD、因子I、V、Ⅷ、ⅫE、因子Ⅱ、V、Ⅶ、X正确答案：C16.下列哪项不是骨髓纤维化和慢性粒细胞白血病的鉴别要点()（难）A、Ph染色体检查B、骨髓活检C、脾肿大程度D、NAP染色的积分E、泪滴形红细胞比例正确答案：C17.下列哪项是真性红细胞增多症的血象特征()（易）A、血红蛋白增加，男性>180g/L，女性>170g/LB、红细胞比容增高，男性>O.50，女性>0.48C、多染性红细胞明显增多D、红细胞数增加，男性>6.0×1012／L，E、血涂片中出现幼粒细胞和粒细胞分叶过度正确答案：A18.某男，50岁，腰背疼痛4月余，牙龈出血2周。
凝血检验你了解多少？
凝血检验你了解多少？邛崃兴盛医院 611535凝血检验作为损伤的紧急应对机制，我们应该对凝血检查多一点关注，尽快将这一检查普及下来，从而应付更加复杂多变的外界损伤。
一、凝血检验病人在做手术前，或者是因为受伤引起出血，医生在处理当中往往会进行人体凝血功能的检查，防止术中严重出血，引发患者休克，甚至是死亡，从而引起更大损失的出现。
首先，血液是生物重要循环系统的一部分，在人体中起到了十分重要的作用，比如氧气的运输，以及将细胞代谢物带离细胞，还有身体内环境的维持。
不过由于人体的脆弱性，出血的情况也会经常出现。
当一个健康的人出血量达到血液总量的三分之一的时候，则会出现休克性致死，所以凝血功能相当于人体的最后一道防护伞，因此凝血检查对人体的意义十分重大。
二、凝血检查的作用我们可以规避很多失血的发生，比如某些疾病，就像血友病，它会增加出血的风险或者使原本轻微的出血变得具有生命威胁，类似的疾病还有血小板减少症。
还有一些药物的影响，比如一些类似于华法林的抗凝血药物，会使人体产生凝血功能障碍，会实时影响着人体的凝血能力，因此凝血检查也成为了必须实时进行的检查，并非是大多数病人所想的那样，只做一次就行。
凝血实际上是一个相当复杂的过程，所以在这里我们大致将它分为三个阶段，分别是凝血酶原激活物形成（formation of prothrombin activator）、凝血酶原转化为凝血酶（conversion of prothrombin to thrombin）和纤维蛋白原转化为纤维蛋白（conversion of fibrinogen to fibrin）。
另外凝血也受各种因素的影响。
所以，我们通常采用的凝血检查，并非是进行各种物质数量的测量，而更偏向于凝血能力的测量。
再有，凝血机制属于应急机制，正常情况下的往往效果偏低，还有为了防止正常人体形成血栓，身体另外还有抗凝血机制的产生，以及进行溶解的纤溶机制，所以凝血检查要比想象的还要苛刻一点。
临床血液学检验-23凝血因子-135
．XIIIa:Ag、AT-III<35%或PLG<20%时 提示预后不良。
．肝病时常呈多个因子的联合变化， 故需综合分析。
六、依赖维生素K凝血因子缺乏症
由于缺乏VK所引起II、VII、IX、X缺乏使皮肤、 粘膜、内脏的出血倾向。
原因：
1）吸收不良综合症：肠道内吸收不良。 2）肠道灭菌综合症：常服抗菌素 3）新生儿出血症：不能自身合成VK ，
原理：血
浆
足量 PF3
激活剂
37℃ Ca++
为内源凝血系统的筛选试验
参考值：>正常对照10″或<5″有临床意义
不同激活剂、不同实验室有别，均应做正常对照
是一个敏感且可靠的检查内源凝血系统的筛选试验。 当血浆凝血因子低于正常水平的15%-30%时，即出现异常。
临床意义：
1、延长：内源凝血系统因子缺乏、肝素、 狼疮抗凝物。(VIII：C <25%)。
演算法又称PT-衍生法
原理： 当PT反应完成时
黄疸、脂浊、溶血 使结果偏高
全部Fg
Fb
此时Fb产生的浊度
与Fg含量成正比
当Fg在正常范围时此法与Clauss法无显著差异。
六、血浆因子II、V、VII、X促凝活性检测
原理
子
PT
血
试剂
浆
患者
正常 活 度
时间
临床意义：
制备不同稀释度
增高 见于血栓前状态和血栓性疾病。
ELISA法，增高表明血液处于高凝状态
以上检测较繁琐，当结果出来时患者的凝血状态 可能已发生变化，故临床很少推广使用。
四、血友病和血管性血友病
（一）血友病
凝血的基本原理和检验项目的临床意义张弘
是指因子Ⅹ的激活到纤维蛋白形成的过程，包括因子Ⅹ、Ⅴ、Ⅱ、Ⅰ、 ⅩⅢ、Ca2+之间的相互作用。
凝血机理(瀑布学说)
▪ 凝血过程是一系列酶促反应，每个凝血 因子都被其前一个有关因子所激活，最后生 成凝血酶和纤维蛋白。
▪ 仪器方法学原理
▪ 凝结法：在定量的血浆样本经过一定时间加温后，加入试剂 （Thrombin Reagent：牛凝血酶冻干粉；OVB：巴比妥钠、氯化钠）。 然后采用波长为660nm的光照射样本。纤维蛋白原转化为纤维蛋白时 血的浑浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定。然后通过标准 曲线求得凝血时间
检测项目及临床意义
全自动凝血仪测定方法： 凝固法（PT，APTT，Fbg，TT） 免疫比浊法（D-Dimer）
APTT
PT
TT
延长
因子VIII、IX、XI活 因子II、V、VII、X、 Fg异常、循环中
性减低
Fg活性减低
抗凝物质增多
缩短 高凝状态
高凝状态
少见
监测 指标
口服肝素抗凝药物监 测
口服双香豆素类抗凝药 物监测
（二）参考值及报告方式：
PT：直接报告患者及正常对照的PT秒数。参考值为10～15s，超过正常 3s 为异常。
INR：国际标准化比值（INR）。浓度I或NR者值活主性要百用分于比口服抗凝剂监测。
（对数）
（三）PT的临床意义
延长:
① 1.先天性凝血因子Ⅱ.Ⅴ.Ⅶ.Ⅹ缺乏症,低(无)纤维蛋白原血症,
【二】活化部分凝血活酶时间 （activated partial thromboplastin time,APTT）
凝血四项检测的临床应用
凝血四项检测的临床应用开展凝血实验对临床各科的疾病诊断具有很大的意义，除了对出血疾病的筛选与诊断外，还用于血栓前状态的检查；弥漫性血管内凝血出血疾病（DIC）的实验诊断以及对各种抗凝治疗者的用药指导和预后估计等。
血栓于止血不仅涉及基础医学，且与多个临床学科（包括血液科呼吸消化科心血管科神经科妇产科普通外科）的疾病密切相关；1 所有手术前检查：外科手术（普外、骨外、妇产、五官、心脏等手术）检查病人的出凝血机能，以免术中发生危险。
2 监测抗凝及溶栓治疗：如换瓣手术后、肝素治疗、口服抗凝剂（华发令、香豆素等）减少临床治疗出血发生率。
3 血栓前状态监测：心肌梗塞、静脉血栓。
4 弥漫性血管内凝血5 先天及后天性凝血因子缺乏。
6 各类肝脏疾病及纤维蛋白原缺乏所致的出血倾向7 凝血酶原及纤维蛋白原缺乏所致的出血倾向。
8 动脉粥样硬化。
9 中医活血化淤的诊疗研究。
凝血测试项目的临床意义一血浆凝血酶原时间（prothrombin time，PT）正常参考值：12-16秒。
临床应用：凝血酶原时间是检查外源性凝血因子的一种过筛试验，是用来证实先天性或获得性纤维蛋白原、凝血酶原、和凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的缺陷或抑制物的存在，同时用于监测口服抗凝剂的用量，是监测口服抗凝剂的首选指标。
还可作为肝脏合成蛋白质功能的检测。
据报道，在口服抗凝剂的过程中，维持PT在正常对照的1-2倍最为适宜。
延长：>3秒①广泛而严重的肝脏实质性损伤，如急性重症肝炎及肝硬化②先天性外源凝血因子Ⅱ、V、Ⅶ、Ⅹ减少及纤维蛋白原的缺乏。
③获得性凝血因子缺乏，如：急性DIC消耗性低凝期、原发性纤溶亢进、阻塞性黄疸、维生素K 缺乏。
④血循环中有抗凝物质存在：如服用口服抗凝剂、肝素、FDP和香豆素等抗凝剂。
缩短：①DIC早期呈高凝状态②血栓栓塞性疾病和其它血栓前状态（凝血因子和血小板活性增高及血管损伤等）③口服避孕药④先天性凝血因子V增多监控：抗凝治疗监控：口服抗凝剂“华发令”，预期值约为参考植的2倍。
临床血液学检验复习题与答案
临床血液学检验复习题与答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1.患者血浆PT延长，蝰蛇毒时间(RV— VT)正常，下列哪一项正确( )（中）A、因子X缺乏B、因子V缺乏C、因子Ⅶ缺乏D、PF3缺乏E、因子Ⅻ缺乏正确答案：C2.因子Ⅴ、Ⅷ主要含于下列何种血液成分中( )(易)A、硫酸钡吸附血清B、正常人贮存血清C、正常人新鲜血浆D、正常人贮存血浆E、以上均有正确答案：A3.血小板致密颗粒中含有下列哪种物质( )（难）A、Ca2+B、vWFC、PAI-1D、TSPE、β-TG和PF4正确答案：A4.泡沫样细胞是指什么细胞( )（易）A、脂肪细胞B、尼曼-匹克细胞C、骨髓瘤细胞D、R-S细胞E、戈谢细胞正确答案：B5.下列哪种疾病时血小板粘附率减低( )（易）A、血栓性疾病B、糖尿病C、血小板无力症D、妊娠高血压综合征E、肾小球肾炎正确答案：C6.女性，64岁，皮肤、脸部紫红5月余，无心、肺疾病史。
体检：脾肋下3cm，肝肋下1cm。
检验：血红蛋白量185g／L，血小板数665 × 109／L，白细胞数17 × 109／L。
首先考虑下列哪一种疾病 ( ) （易）A、继发性红细胞增多症B、真性红细胞增多症C、继发性血小板增多症D、原发性血小板增多症E、骨髓增生性疾病正确答案：B7.血小板第3因子活性主要是下列哪种物质由膜内侧转向膜外侧所形成的( )A、甘油磷脂B、磷脂酰丝氨酸C、磷脂酰乙醇胺D、磷脂酰肌醇E、磷脂酰胆碱正确答案：B8.不属于内源性凝血系统的因子是( )(易)A、XIB、IXC、XIID、VIIIE、VII正确答案：E9.对鉴别M6及巨幼细胞性贫血意义最大的骨髓细胞化学染色法为( )(中)A、POXB、SBC、NAPD、PASE、NSE正确答案：D10.下列哪项不是下调PGI2合成的物质( )（难）A、阿司匹林B、亚油酸C、因子XaD、ATPE、纤溶酶正确答案：D11.下列哪项不是血管内皮细胞分泌的参与抗血栓的物质( )（难）A、PGI2B、ATC、vWFD、t-PAE、TM正确答案：C12.关于类脂质沉积病下列哪项描述正确( (中))A、为一组较多见的继发性性疾病，由溶酶体中参与类脂代谢的酶不同程度缺乏引起B、为一组较多见的遗传性性疾病，由溶酶体中参与类脂代谢的酶不同程度缺乏引起C、为一组较罕见的遗传性性疾病，由溶酶体中参与类脂代谢的酶不同程度缺乏引起D、为一组较罕见的继发性性疾病，由溶酶体中参与类脂代谢的酶不同程度增多引起E、为一组较罕见的遗传性性疾病，由溶酶体中参与类脂代谢的酶不同程度增多引起正确答案：C13.下列哪项不符合类白血病反应( ) （中）A、外周血中白细胞明显增加，红细胞及血小板常无明显变化B、血象中幼稚细胞常在30％以上C、粒细胞常有中毒颗粒D、NAP积分常明显增加E、骨髓象变化不大正确答案：B14.下列哪项不符合传染性单核细胞增多症实验室检查的特点( )（中）A、骨髓中原始淋巴细胞不增多B、骨髓象中可见异形淋巴细胞C、白细胞数增多或正常D、骨髓无特异性改变E、血中单核细胞增多正确答案：E15.毛细血管脆性试验阳性可见于下列疾病，但应除外( )（中）A、遗传性出血性毛细血管扩张症B、血友病C、血小板无力症D、过敏性紫癜E、血小板减少性紫癜正确答案：E16.尼曼－匹克细胞突出的形态特征是下列哪项( )(中)A、胞质丰富，瑞氏染色为紫蓝色B、胞体大，直径20～90μmC、胞核常为1个，染色质疏松D、胞质呈空泡状或泡沫状E、常吞噬有红细胞正确答案：D17.在PAgT试验中ADP宜保存于( )（中）A、室温B、室温避光保存C、(O-4)℃冰箱D、37℃水浴箱E、-20~C保存正确答案：E18.下列关于APTT和PT说法正确的是( )（中）A、APTT超过正常对照3B、PT超过正常对照10C、INR为PT结果报告方式之一D、PT试剂中所含的物质可激活因子XII，启动内源性凝血系统E、APTT试剂中富含组织凝血活酶和Ca2+正确答案：C19.男，29岁。
临床血液学检验-实验-APTT、TT、3P-159
整个实验过程：
准备试剂和器材 采血4 ml
1.8ml×2抗凝，离心 先做3P
再做APTT、TT
用中剂量肝素时必须作监测， 以APTTR为1.5-2.5为佳。 大剂量肝素时应选用ACT
二、凝血酶时间
(thrombin time, TT)
（一）TT原理
凝血酶
待检血浆中Fg
Fb
Fb 形成时间
即为TT
（二）TT
109mmol/L枸橼酸 钠
1.PPP制备： 1.8ml 0.2ml 的塑料试管中
颠倒混匀，3000r/min 离心10min
VII
V
without
IV without III without
II
I
PK
VASTEC MED. Ltd.
H MWK
X IX VIII VII V IV III II
I PK
H MWK
APTT Reagent
Intrinsic System
Activato r
PL
Ellagic aci d, sil ica etc.（鞣酸，硅土） Phospholi pi d（ 磷脂）
1. 标本放置时间不宜超过2h,以免使FⅤ:C、FⅧ:C降低。
2.报告的方式为：病人APTT（s）、APTT比值 。 3.鞣酸部分凝血活酶悬液用之前要混匀。 4.标本中有小凝块、溶血使APTT缩短。 5.每份标本和正常血浆均应重复测2-3次，取平均值。 6.红细胞比积超出0.20-0.55，用1:9抗凝不合适，应
2.抽血不顺利、抗凝不完全、标本保存冰箱、到时未立 即观察结果或输液导管内采血等均会导致假阳性结果。
3.若水浴温度太低或纤维蛋白原的含量过低都会造成 假阴性结果。
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抗凝物质检验
• 抗凝血酶 （AT）检测
• 蛋白C （PC）检测
• 蛋白S （PS）检测
• 蛋白C活性依赖凝固时间
二期筛查试验
• 活化蛋白C 抵抗试验（APCR） P326
• 组织因子途径抑制物（TFPI）
• 肝素、类肝素样物质
• 血浆狼疮抗凝物
病理性抗凝物质
• 血浆凝血因子抑制物
TypeⅠ —— 量少 Type Ⅱ —— 功能异常，少见 Type Ⅲ —— 游离 PS清除增多
活化蛋白C抵抗试验 （APC Resistance）
活化蛋白C抵抗（APC Resistance）试验
• APC通过灭活因子Ⅴa和Ⅷa起抗凝作用。 • 在进行APTT试验时若加入APC，由于APC使因子Ⅴa
遗传性PC缺乏 Hereditary protein C deficiency
• typeⅠ，typeⅡ；纯合子0-20%；杂合子<50%
• 华法林诱导的皮肤坏死 Warfarin-induced skin necrosis（WISN) 口服VitK拮抗剂抗凝治疗 一过性但严重的高凝状态 微血管血栓
凝血系统 抗凝系统
发色底物法 chromogenic substrate assay
PC活性检测方法评价
• 凝固法影响因素多，如存在狼疮抗凝物质、FⅧ 活性升高、FⅤ变异等。
• 若存在APC抵抗时，血浆凝固时间假性缩短。可 用乏PC的基质血浆进行稀释以纠正。
• 确诊遗传性PC缺乏，活性测定应选发色底物法。
– 合成减少（肝病，早产儿） – 丢失过多 （肾病综合征） – 消耗增加 （ DIC） – 药物诱导 （肝素、L-门冬酰
胺酶）
遗传性AT缺乏的临床特点：
• TypeⅠ,Type Ⅱ，杂合子在40%-60% • 年轻（40-45）发生血栓 • 有静脉血栓家族史 • 复发性静脉血栓形成 • 少见部位的血栓形成 • 怀孕期间血栓形成 • 肝素抵抗
抗凝物质与 纤溶活性检验
纤溶酶原的活化与抑制物 细胞、体液抗凝物质
凝血因子 血管壁 血小板
• 患者女性，41岁，首次发病前体健。29岁正常分娩后4天， 突发左下肢疼痛及肿胀，诊断为下肢深静脉血栓形成， 经一般处理后约半年恢复。35岁患细菌性痢疾后又发生 左下肢肿痛。39岁和41岁在无明显诱因情况下又有两次 发作。
Classification of protein C deficiency
血浆蛋白S（PS）检测
Protein C anticoagulant pathway
血浆蛋白S（PS）检测
血浆蛋白S（PS）检测
原理：
• 游离蛋白S活性测定（FPS:A）
– 凝固法：PT
• 游离蛋白S抗原测定（FPS:Ag）
血浆中的凝血酶抑制物
Inhibitors Antithrombin a2-macroglobulin Trypsin inhibitor
Heparin cofactor II
Target protease(s)
Thrombin, IXa, Xa, others
Non-specific Neutrophil elastase, Thrombin, others Thrombin
血浆蛋白C（PC）抗原检测
ELISA
临床意义
PC减低 • 遗传性PC缺乏 • 获得性PC缺乏
DIC, DVT,PE 严重肝病，VitK缺乏 新生儿，口服抗凝药 手术后，感染，肿瘤 L-门冬酰胺酶治疗 ARDS, HUS, TTP
PC升高 • 糖尿病 • 肾病综合征 • 妊娠晚期 • 口服避孕药 • 合成固醇类
– 胶乳凝集比浊法 – 免疫火箭电泳
Free PS activity assay：PT
Free PS antigen assay：
血浆蛋白S（PS）检测
临床意义：
• 升高：年龄
• 减低： 获得性PS缺乏：
妊娠、新生儿 、 口服避孕药； DIC, 肝脏疾病； 抗 Vit K 治疗
遗传性PS缺乏
Classification of protein S deficiency
和Ⅷa灭活，APTT出现延长。如果加入APC后APTT不 延长或延长不明显，称为APC抵抗（APC-R）。 • 与静脉血栓形成密切相关。
活化蛋白C抵抗（APC Resistance）试验
检测原理： • APTT+APC • 正常：APTT延长 • 存在APC-R：不延长/延长不明显
APC-SR=APTT+APC/APTT-APC n-APC-SR=APC-SR/APC-SRref
Antithrombin targets in plasma
Interactions with heparin
血浆抗凝血酶 (antithrombin) 检测
• 抗凝血酶活性检测（AT：A) 发色底物法
• 抗凝血酶抗原检测（AT：Ag) 免疫火箭电泳 ELISA
AT活性检测原理：
• 待测血浆中的AT抑制已知过量的Thrombin 或 FXa，剩余的酶用发色底物法检测。
• PT 12S，APTT 36S，FIG 3.2g/L，出血时间4分钟，纤溶酶 原活性105%（正常99±8.2 % ），PLT聚集功能正常。 Hb105g/L，WBC 4.3×109/L，PLT 259×109/L。
• AT活性 32% （正常100±10.1 % ） AT抗原 35% （正常98±13.6 % ）
• 目前常用FXa 。为什么？ • 肝素辅因子II （Heparin cofactor II，HC-II ）
凝血酶特异的丝氨酸蛋白酶抑制剂 用牛凝血酶或FXa代替凝血酶，避免AT假性升高
• 发色底物法反应原理：
• 发色底物法反应原理：
临床意义
• AT升高 • 口服抗凝药 • 急性出血期
• AT降低 • 遗传性AT缺乏 • 获得性AT缺乏
血浆蛋白C（PC）检测
血栓调节蛋白 thrombomodulin
→
PC→APC
Protein C anticoagulant pathway
血浆蛋白C (PC) 检测
• 蛋白C活性检测（PC：A) 凝固法（APTT） 发色底物法
• 蛋白C抗原检测（PC：Ag) 免疫火箭电泳
• 凝固法-APTT