小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的制备
小鼠ES,IPS培养手册
小鼠 ES/iPS 细胞培养手册
1. 2. 3. 4. 5. 绪论.................................................................................................................... 1 饲养层细胞的准备............................................................................................. 1 ES/iPS 细胞的复苏.............................................................................................3 ES/iPS 细胞的传代.............................................................................................4 ES/iPS 细胞的冻存.............................................................................................5
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上海斯丹赛生物技术有限公司
4.10 轻轻摇匀，放入 37 度培养箱中培养。
Point： Ø 在消化过程中，最好在 3-5min 时拿出来观察一下，并稍加吹打，看是否已经消化完全。 若细胞仍不能吹打成单细胞， 请放回培养箱中继续消化几分钟， 直至能吹打至单细胞为 止。 如果消化不充分，会导致传代后的细胞结块，最终导致分化。 所以，要掌握好时间。 Ø 传代比例通常为 1：6 或 1：8。 Ø 传代后的注意事项： 1－传代后的第一天起更换新的培养液，每天换液。若细胞生长至后期，溶液 PH 改变 较快，也需及时更换培养液。 2－传代周期为 2-3days，但要视细胞状态而定，传代可以改善细胞状态。 3－传代的前两至三天预铺 feeder
成纤维细胞培养流程
《成纤维细胞培养流程》1.“先得准备好材料吧，这就像做饭得有食材，得全。
比如小李准备材料的时候可仔细了。
要是材料不齐，咋弄。
”2.“消毒得做好呀，这就像打扫房间得干净，得净。
比如小张对消毒特别重视。
要是消毒不好，完蛋。
”3.“细胞提取得小心吧，这就像摘花得轻点儿，得柔。
比如小孙提取细胞的时候小心翼翼。
要是不小心，细胞坏了。
”4.“培养基得选对呗，这就像给宝宝选奶粉，得准。
比如小周为选培养基费了不少心思。
要是培养基不对，白搭。
”5.“培养环境得合适吧，这就像人住的地方得舒服，得好。
比如小吴努力营造好的培养环境。
要是环境不好，细胞不长。
”6.“观察得仔细呀，这就像看宝贝得用心，得知。
比如小赵时刻盯着细胞观察。
要是不仔细观察，出问题都不知道。
”7.“换液得及时吧，这就像给花浇水得按时，得勤。
比如小郑按时换液。
要是不及时换液，细胞渴死。
”8.“得防止污染吧，这就像保护宝贝不被弄脏，得防。
比如小胡想尽办法防污染。
要是被污染，全完。
”9.“得有耐心吧，这就像等花开得能等，得耐。
比如小杨耐心等待细胞生长。
要是没耐心，急也没用。
”10.“得有技术吧，这就像开车得会开，得会。
比如小宋努力提高自己的技术。
要是技术不行，咋培养。
”结论：成纤维细胞培养有流程，得认真。
猪胎儿成纤维细胞制作方法的改进及应用2002
一，酶消化法制备猪胎儿成纤维细胞猪胎儿成纤维细胞制作方法的改进及应用20021. 3. 1剪切猪妊娠35 d，剖腹手术取出子宫，用75% 的酒精浸泡消毒，无菌取出胎儿，用含双抗的PBS ( 137mmol /L NaCl2. 7 mmol /L KCl 10 mmol /L Na2HPO4 2 mmol /L KH2 PO4 1 mmol /L CaCl20. 5mmol /L MgCl2 ) 漂洗2 遍，放入含双抗的PBS 中，分离2 个胎儿,放于塑料平皿中, 用无Ca 2+、Mg2+，含有双抗的PBS 缓冲液洗涤3次, 洗至无色, 备用。
将洗涤好的胎儿转移到另一平皿中,用无菌剪子剪掉头,四肢, 尾,去掉内脏, 继续用无Ca2+、Mg2+- PBS 缓冲液洗涤数次, 洗至无色, 将剩余的部分放入到100mm 的平皿中，然后用剪子将胚胎剪切成2～3 mm 小块, 将碎块转移到50ml离心管中。
1. 3. 2消化向放有组织块的离心管中加入二分之一离心管体积的0.25% Trypsin-0.04%EDTA 消化液（胰蛋白酶常用浓度为0.25%，PH为8.0。
也有用胶原酶的，因为此酶消化温和，但是价格高，如果用胶原酶则为胶原酶+DMEM+Antibiotic-antimycotic，小鼠多用10ml离心管，因此加入胰酶消化液5ml即可）然后在室温下轻轻吹打组织块(或者，在37℃水浴摇床内消化)。
室温消化15～20 min 左右（如果在37摄氏度最好在5min 内消化完）。
可以边消化边吹打组织块, 也可以每隔5 min 吹打一次。
消化结束后, 加入等体积的终止液10% 胎牛血清的DMEM 培养液(即吸出来细胞上层液如果多则放于到5ml 离心管中，如果少则放于1.5ml离心管中）,并轻轻吹打。
1. 3. 3离心、接种和培养800 r·min 离心5 min, 弃上清液, 然后加入5ml（或1ml) 的含20%胎牛血清的低糖DMEM 培养液培养基, 轻轻吹打重新悬浮细胞, 按常规方法进行细胞计数（1ml离心沉淀的细胞数=5个中方格中细胞个数X 5 X10 X1000 X稀释倍数，此时的计算值为体细胞的密度即个/ml. 大约徘徊在1-3 x 106个/ml）。
超数排卵对家兔早期胚胎体外发育的影响
早期胚 胎体外 生 长过程 ，考察 超数 排卵 对兔 早期
收 稿 日期 ：０ Ｏ １－ ６ ２ １－ ２ １
超数排 卵对 家兔早 期胚 胎体 外发 育 的影响 一 曾君 君
（Ｌ Ｆ Ｃ Ｔ Ｌ Ｂ Ｎ ． ０ — ５ 。 ｈ Ｉ ， Ｙ Ｏ Ａ ， ｏ ３ ０ ０ ）
家兔胚胎为对 照，观察培养 ９ ６ｈ贴壁情况和内细胞 团传代 能力 。超数排 卵处理的家兔交配后经 筛选所获 得 的可用胚胎数量增 多；其 ９ ６ｈ贴壁率和成功传代 内细胞 团比率与 自然发情组无显著 差异 。家兔超数排 卵所获得的可用胚胎对其体 外发育能力无显著影响。 关键词：家兔；胚胎；体外培养；传代
ｈ ｕ ．ｇ ｄ ｒ ｂ ｉ ｅ ｒ ｏ ｒ ｏ ｌｃｅ － ｒ ｍ ａｕ ａ ｎ ｅ ｃ ｕ ｓ ａ ｂ ｔ ａ ｄ ｓ ｐ ｒ ｖ ｌｔ ｎ ｔ ａｅ ａ ｂ ｔ ｏ ｒａ ｅ ａ ｂ ｔ ｍｂ ｙ ｓ ｗｅ ｅ ｃ ｌ ｔｄ ｆ ｅ ｏ ｎ ｔ ｒ ｌ ｉ ｔｒ ｏ ｒｅ ｒ ｂ ｉ ｎ ｕ ｅ ｏ ｕ ａ ｉ － ｅ ｔｄ ｒ ｂ ｉ ｓ ｏ ｒ ， ｒ ｓ ｅ ｔ ｅｙ ｅ ｐ ｃｉ ｌ ．Ｔｈ ｍｂ ｏ ｒ ｅｅ ｔｄ ａ ｃ ｒ ｉｇ ｑ ａｉ ｏ ｄ ｔ ｎ ａ ｄ ｓ ｂ ｅ ｕ ｎ ｌ ｕ ｔ ａｅ ｎ ｍｏ ｓ ｖ ｅ ｅ ｒ ｓ ｗｅ ｅ ｓ ｌｃｅ ｃ ｏ ｄ ｎ ｕ ｌ ｙ ｃ ｎ ｉ ｏ ｎ ｕ ｓ ｑ ｅ ｔ ｃ ｌ ｖ ｔｄ ｏ ｕ ｅ ｙ ｔ ｉ ｙ ｉ
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3T3-L1脂肪前体细胞
细胞名称3T3-L1小鼠胚胎成纤维细胞，也称3T3-L1脂肪前体细胞
细胞描述3T3-L1是从Swiss-3T3小鼠胚胎中分离克隆的细胞株，该细胞有接触性抑制生长特征且能向脂肪样细胞分化，高血清培养液可促
进细胞脂肪积累等
动物种别小鼠
组织来源胚胎
细胞形态成纤维细胞（长梭形）
培养条件高糖DMEM培养液，含10%胎牛血清和1%青链霉素
High glucose DMEM medium with 10% fetal bovine serum, 100
IU/ml penicillin and 100 g/ml streptomycin in the humidified
atmosphere with 5% CO2 and 95% O2 at 37℃
细胞传代以50 ml细胞培养瓶为例说明：
1．无菌PBS轻轻洗涤细胞1或2次（每次约4 ml PBS）；
2．倒掉PBS后再加入4ml PBS，将细胞培养瓶翻转；
3．加入0.25%胰酶和0.02%EDTA的溶液约1ml，拧紧细胞培养瓶盖，轻轻混匀；
4．在镜下观察细胞形态，当细胞稍稍变圆，轻轻并立即翻转培养瓶，终止消化（消化时间与细胞状态有关）；
5．倒掉胰酶加入适当培养液，轻轻吹打瓶壁，使细胞脱落分散；
6．细胞悬液一分为二，继续传代培养（避免密度过高导致细胞分化）。
2022-2023学年湖北省武汉市三中高二5月月考生物试题
2022-2023学年湖北省武汉市三中高二5月月考生物试题1.某同学想通过选择培养基分离以下生物，下列叙述错误的是（）A．欲筛选硝化细菌，培养基中无需有C源，但必须有N源B．欲筛选分解尿素的细菌，培养基中必须有N源，可以无C源C．欲筛选固氮菌，培养基中必须有C源，可以无N源D．欲筛选分解纤维素的细菌，培养基中必须有C源和N源2.近年来发酵酸豆奶的营养价值和独特风味已得到消费者的认可。
下图是酸豆奶的生产工艺流程，利用大豆与奶粉混合，经乳酸菌发酵制成的酸豆奶，不但具有动、植物蛋白的双重营养，还能有效缓解牛奶资源的匮乏。
下列相关分析不合理的是（）A．在两者混合液中加入适量的葡萄糖有利于发酵的进行B．巴氏消毒在杀死大部分微生物的同时不破坏营养成分C．发酵过程早期需密封，后期需不断地通入无菌空气D．一定范围内，随着发酵时间的增加，酸度会逐渐增加3.如图为酱油的制作流程，其中米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油所需的蛋白酶、脂肪酶等，该过程需要提供营养物质、通入空气。
下列说法错误的是（）A．发酵罐发酵与啤酒生产中的糖化都存在大分子降解的过程B．发酵罐发酵需要将罐内的pH控制在中性或弱碱性条件下C．发酵罐发酵类型为有氧发酵，而发酵池发酵为无氧发酵D．发酵池发酵过程中添加的食盐可以抑制杂菌的生长繁殖4.野生型大肠杆菌菌株能在未添加某种维生素的基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在添加了多种维生素的完全培养基上生长，下图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，①②③④代表培养基，A、B、C表示操作步骤，D、E为菌落。
下列叙述错误的是（）A．图中①②④为基本培养基，③为完全培养基B．紫外线的目的是提高突变率，增加突变株的数量C．B的正确操作是用涂布器把菌液均匀地涂布在②表面D．经C过程原位影印及培养后，可从④中挑取D进行纯化培养5.解磷菌可以使土壤中难以利用的磷转化为植物易吸收的磷。
原代成纤维细胞培养基配方
原代成纤维细胞培养基配方1.引言1.1 概述成纤维细胞是一类常见的细胞，广泛存在于人体各个组织中，包括皮肤、血管、肌肉和内脏等。
在细胞培养技术的发展过程中，原代成纤维细胞培养基的配方变得越来越重要。
原代成纤维细胞培养基是一种提供养分和适宜环境的培养液，可以维持原代成纤维细胞的生长和增殖。
原代成纤维细胞培养基的配方包括多种关键成分，如培养基基础成分、生长因子、附加物等。
不同的组分可以提供细胞所需的营养和信号物质，使细胞能够在体外环境下继续生长和繁殖。
原代成纤维细胞培养基配方的研究对于细胞生物学、组织工程和再生医学等领域具有重要意义。
通过优化培养基的配方，可以提高原代成纤维细胞的增殖速度和存活率，同时改善其功能和特性，为细胞研究和临床应用提供更好的工具和基础。
然而，目前关于原代成纤维细胞培养基的配方研究还比较有限。
不同实验室和研究者之间存在着很大的差异，配方的选择和调整仍然依赖经验和试错。
因此，进一步的研究和探索仍然是十分必要和迫切的。
本文将深入探讨原代成纤维细胞培养基配方的概念和重要性。
我们将详细介绍培养基的组成、各种成分的作用机制，并总结现有研究的进展和局限性。
最后，我们将展望未来的研究方向，希望通过进一步的研究和探索，为原代成纤维细胞培养基的配方优化和应用提供更好的指导和支持。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包括以下内容：文章结构部分的主要目的是为读者提供对整篇文章的摘要和框架。
通过描述文章的组织结构，读者可以更好地理解文章的内容和逻辑顺序。
首先，本文将介绍原代成纤维细胞培养基的概念和重要性。
这一部分将讨论成纤维细胞在生物医学和生命科学研究中的重要作用，以及为什么培养基对于细胞培养的成功和细胞功能的研究是至关重要的。
其次，本文将详细介绍原代成纤维细胞培养基的组成。
这一部分将讨论培养基中各种组分的作用和功能，如营养物质、生长因子、酶和血清的添加等。
读者将了解到培养基中各种组分的重要性和对细胞生长和功能的影响。
四倍体滋养层干细胞的分离培养与鉴定
１ ２ 方法
１ ２ １ ＥＳＣｓ 的 培 养: 培 养 基 Ｍ１５Ｌ 由 Ｋｎｏｃｋｏｕｔ
ＤＭＥＭ、１５％ ＦＢＳ、ＧｌｕｔａＭＡＸ ＴＭ 、ＭＥＭ ＮＥＡＡ、青链霉
素、β￣巯基乙醇、ＬＩＦ(１ ０００ Ｕ / ｍＬ) 配制而成ꎮ
发育可以最终得到完全由二倍体 ＥＳＣｓ 发育而来的
仅能嵌合到胎儿组织的发育潜能不同ꎬ四倍体 ＥＳＣｓ
ｅｄ ｍｅｄｉｕｍꎬ ＣＭ) :用 ＴＳ 培养基培养 Ｘ￣射线处理的
Ｅ１３ ５) 和第 １６ ５ 天( Ｅ１６ ５) 小鼠的胎盘、胎膜等胚
２０ ｍｉｎꎬ０ ４５ μｍ 滤器过滤ꎬ 即为 ＭＥＦ￣ＣＭꎮ ＴＴＳＣｓ
ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓꎬＴＳＣｓ) 与二倍体 ＴＳＣｓ 相比ꎬ其发育潜能有
ｖｉｖｏ. Ｒｅｓｕｌｔｓ ＴＴＳＣｓ ｔｈａｔ ｃａｎ ｄｅｖｅｌｏｐ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｄ ｂｅ ｐａｓｓａｇｅｄ ｗｅｒｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ. Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
ｇｅｎｅｓ ｗａｓ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｂｅｔｗｅｅｎ ＴＴＳＣｓ ｄｉｐｌｏｉｄ ＴＳＣｓ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ. Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｐａｓｓａｂｌｅ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ
司)ꎻ血清(Ｈｙｃｌｏｎｅ 公司)ꎻ成纤维细胞生长因子 ４(ｆｉ￣
ｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ４ꎬＦＧＦ４)(Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ 公司)ꎻ肝素
(ｈｅｐａｒｉｎ)、Ｍ２ 培养基( Ｓｉｇｍａ￣Ａｌｄｒｉｃｈ 公司)ꎻＹ２７６３２
(ＭＣＥ 公司)ꎻＫＳＯＭ 培养基( Ｍｅｒｃｋ 公司)ꎻＴＢ Ｇｒｅｅｎ
ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｎｕｍｂｅｒ. ＲＴ￣ｑＰＣＲꎬ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ
新生小鼠皮肤成纤维细胞的分离培养与鉴定
鼠皮 肤分 离 培养 成 纤维 细胞 ， 建立 肿瘤 体 外模 拟 微环 境 提供 实 验材 料 和研 究基 础 。 为
【 键 词１ 生 小 鼠 ； 纤维 细胞 ； 外 培 养 ； 形蛋 白 关 新 成 体 波
【 中图分 类 号１ ３ ２ １ ９． Ｒ 【 文献 标 识码 】Ａ 【 章编 号】 １ ３ ７ １ ２ １ ）０（ 一 ０ — ４
１Ｄ ｐ ｒ ｎ ｆＲｅｐｒｔｒ ｄｃｎ ，ｔｅ ＦｒｔＡ ｆｉｔｄ Ｈｏｐｔｌｏ ｉｍｅ ｎｖ ｒｉ ，Ｆ ｊ ｎ Ｐｏ ｉｃ，Ｘｉｍ ｎ ． ｅ ａｔ ｔ ｏ ｓｉ ｏｙ Ｍｅｉｉｅ ｈ ｉ ｆｌ ｅ ｓ ｉ ｆＸ ａ ｎ Ｕ ｉｅ ｔ ｕｉ ｒｖｎ ｅ ｍｅ ａ ｓ ｉａ ａ ｓ ｙ ａ ａ ｅ ３ １ ０ ， ｈｎ ； ． ｐ ｒ ｎ ｆＩ ｍｕ ｏｏｙ Ｂ ｓ ｄｃ ｅＳ ｉ ｃ ｎｔｅＭｅ ｉａ Ｃ ｌ ｇ ｆ ｉｍｅ ｎｖｒｉ ， ｕｉ ６ ０ ３ Ｃ ｉａ ２Ｄｅ ａｔ ｔ ｍｅ ｏ ｍ ｎ ｌｇ， ａｉ Ｍｅ ｉｉ ｃ ｎ ｅｉ ｄｃｌ ｏ ｅ ｅｏ ａ ｎＵ ｉｅ ｔ Ｆ ｊ ｎ ｃ ｎ ｅ ｈ ｌ Ｘ ｓ ｙ ａ
Ｍ ｅｈｏ ：Ｆ ｒｔｙ ｋｎ ｗａ ａ ｅ ｒ ｍ ｅ ｏ ｌｂｃ ｍｉｅ ａ ｄ ｍａ ｅｉ ｔ ｔ ｄｓ ｉｓ ，ｓ ｉ ｓｔｋ ｎ ｆｏ ｎ ｗｂ ｒ Ｂａ ／ ｃ ｎ ｄ ｎｏ １ｍｍ ｔｓｕ ｓｗｉ ｃｓｏ ｓｓｅ ｉ ｌ． ｅ ｏ ｄ ｙ ｌ ｎ ｉｓ ｅ ｔ ｓ ｉｓ ｒ ｔｒｌ ｙ Ｓ ｃ ｎ ｌ， ｈ ｅ
MEF的制备
配制试剂：D-MEM培养基的配制GIBCO CAT. NO. 12800-017 D-MEMHYCLONE SH30070.03 Fetal Bovine Serum1、D-MEM一盒10小包，每一小包可配1L，将D-MEM一包加2克Na2CO3在1L ddH2O中完全溶解，0.22u滤膜过滤，500ml一瓶分装置4℃冰箱备用。
2、FBS为500ml一瓶装，置56℃水溶30分钟灭活血清中的补体，后分装至50ml离心管，置-20℃冰箱备用3、青霉素1000X：国产青霉素，80万单位一瓶，取1瓶完全溶解于8ml ddH2O，560ul一支分装置-20℃冰箱备用4、链霉素1000X：国产链霉素，100万单位一瓶，取1瓶完全溶解于10ml ddH2O，560ul一支分装置-20℃冰箱备用5、D-MEM一瓶500ml + FBS一支50ml + 青霉素1支+ 链霉素1支(血清10%，青霉素100U/ml，链霉素100U/ml)Trypsin-EDTA 10X的配制TrypsinEDTA·4Na·2H2O Gibco 11267-028 MW 4161、Trypsin 2.5克+ EDTA 1.1克完全溶解500ml PBS(-)中0.22滤膜过滤，10ml一支分装，置-20℃冰箱备用2、此溶液Trypsin浓度0.5%，EDTA浓度2.2mg/ml，一般ES cell 使用的浓度为Trypsin0.1%，将原液稀释5倍即可.MEF（原代胚胎成纤维细胞）的制备1．129小鼠（怀孕13天）断颈处死，取出胚胎（一般每个小鼠可获得10个左右胚胎）；2．在10cm dish中用眼科剪刀和镊子去除胚膜用PBS（-）洗净血只留胚胎移如另一加了PBS （-）的dish中；3．用眼科剪刀和镊子去除胚胎的头和内脏只留胚胎的躯干，用PBS（-）洗3次移入另一加了PBS（-）的dish中；4．用眼科剪剪碎组织，将剪碎的组织加入消毒三角烧瓶，随后加入等体积胰酶5X工作液，在磁力搅拌仪上37℃搅拌30分钟；（现在多转移到EP管中，手动振荡）5．小心吸取上清加D-MEM培养基中止反应；6．离心1200rpm，7分钟；（可不离心）7．细胞计数，以每5个胚胎的细胞量种于一个750ml培养瓶中，每瓶加30ml D-MEM培养基，置于37℃，5%的CO2培养箱中培养此为P0代；8．第二天细胞换液，待细胞长满以1:3的比例传代，直至P4代记做MEF P4，若这129小鼠是neo抗性的，记作neo-MEF P4。
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下， 能迅速 增长繁殖 ， 并在 生长 过程 中分泌 ＬＦ和 Ｉ Ｆ Ｆ等生长 因子 ， Ｇ 具有 同化培养 液 ， 改善接 种细胞 生 长环 境和 抑 制 细 胞 分 化 的 作 用 ， 以常 用 来 制 作 所 饲养层 。饲养 层主要用 于对一些特 殊细胞 如胚胎 干细胞 、 原干细胞 、 精 哺乳 动物 各种组织 的干细胞 的 培 养 。 但有 时实验室研究所 需要 的饲养层细胞有 限， 不适 于大量 的培养 、 冷冻保存 。这种情况下 ， 需要 找到 一种更有效 的方法来 解决这 一 问题 。本 实验
ｔ ｅｅ ｐ ｒｍｅ ｔ ｐ ｒ ｔ ｎ ｂ ｔ ｌｏｒ ｄ ｃ ｅｅ ｐ ｒｍｅ ｔ ｘ ｅ ｓ ｓ Ｔ ｅ Ｓ Ｃ ｕ ｔ ｒ ｄｏ ａ ｕ ｖ ｖ ｎ ｒ ｌ ｅ ａ ｅ ｈ ｘ ｅ ｉ ｎ ｅ ａ ｉ ｕ ｓ ｅ ｕ ｅｔ ｘ ｅ ｉ ｎ ｐ ｎ ｅ ． ｈ Ｓ ｃ ｌ ｅ ｎ ｉ ｃ ｎ ｓ ｒ ｉ ｅａ ｄｐ ｏ ｉ ｒ ｔ ． ｏ ｏ ａ ｈ ｅ ｕ ｔ ｆ
娠 ｌ ～ １ 的母 鼠进行胎儿 成纤维细胞饲 养层的 ３ ５ ｄ 制 各 。另 外 推 算 分 娩 日期 ， 娩 当 日记 为 ０ ， 取 分 选 ｄ ７ ８日龄 的小 鼠进行 精原细胞 的制备 。 ～
１ 实验 方法 ． ２
１ ． 成 纤 维 细 胞 的 制 备 ．１ ２
（ ｒ ｅｓ ａｒ ｕ ｕａ ｕ ｉｅｓ ｙＨ ｅｂｎ Ｈ ｉ ｎ ｉ ｎ ，ｈｎ ５ ０ ０ Ｎｏｔ ａｔｇｉ ｌ ｒｌｎｖｒｉ ａｒｉ ｅ ｏ ｇｉ ｇＣ ｉａ１０ ３ ） ｈ ｃｔ ｔ ｌ ａ
［ ｓ ａｔ Ｗ ｈｎ ｕ ｙｈ ｐ ｃ ｌｅｌｏ Ｅ ｌ ｎ Ｓ ｔｔａｕｕ ｌ ｅｄ ｏ ｕｔｒ ｅｅ ｅ ｓ ｎｔｅ ｅｄｒａｅ Ａｂｔ ｃ］ ｅ ｓ ｄ ｅ ｅｉ ｌ ｆ Ｓ ｅｌ ｄ Ｃｅ ｔ ｓａｌ ｎｅ ｌ ｅｈ ｓ ｌ ｅｅ ｙｒ ｒ ｗｅ ｔ ｔ Ｓ ａｃ ｓ ｃ Ｓ ａ ｃｈ ｙ ｔｃ ｕ ｔ ｃ ｌｏ ｈ ｆ ｌ
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成 纤 维细 胞 是 疏 松 结 缔 组 织 的 主 要 细胞 ， 生 物 中心） 按 公母 鼠 １ ４的 比例 当晚合 笼 ， 日早 属 。 ： 次 长 与 裂 殖 迅速 的细 胞 族 群 ， 适 当 的体 外 培 养 条 件 ７： ０检查 阴道 栓 。见栓 日记为妊娠 ０ 。选妊 在 ０ ．ｄ ５
维普资讯
・实 验 研 究 ・
பைடு நூலகம்
小 鼠胎 儿 成 纤 维 细胞 饲 养层 的制 备
郎洪彦 ， 海龙 ， 王 胡鹏飞 ， 张金 友 ， 张贵学 （ 东北农业 大学动物科 学技术学 院， 黑龙江 哈尔滨 １０ ３） ５０ ０
【 摘 要】 在进行胚胎干细胞、 精原干细胞等特殊细胞 的研 究时， 往往需要将这些细胞接种 到成纤维细胞的饲 养层上， 但需要量不大。因此不便于大规模的制备。本实验通过将组织块培 养法和酶消化培齐法结合起来制 备小鼠胎儿成纤维细胞饲养层 ， 在一定程度上解决了这一问题。利用该方法制备成纤维细胞饲 齐层， 既简化 了实验操作 ， 又节省了实验费用 。将精原干细胞接种到该饲养层后 ， 其可在体外进行生长和增殖。 【 关键 词】 织块培 养 法 ； 消化培 齐 法 ； 养层 ； 鼠 组 酶 饲 小 【 中图分类号１８２ Ｓ ５ 【 文献标识码】 Ａ 【 文章编号】 ６２ ２７ （０６０ ～０ ０ ｌ７ ０ ８２０ ）５ ０８—０ ２