辽宁绒山羊副结核分枝杆菌的分离鉴定及分子生物学检测

ＳＯＮＧ Ｘｉａｎ—ｃｈｅｎ ，ＬＩ Ｂｉｎｇ ，ＺＨＵ Ｙａｎ—ＸＵ ，ＺＨＡＮＧ Ｘｉｎｇ—ｈｕｉ。 Ｗ ＡＮＧ Ｓｈｉ—ｑｕａｎ ， ， ＧＵＯ Ｌｉｎｇ ，ＸＵ Ｐｅｎｇ ，ＧＵＯ Ｗｅｉ－ｊｕｎ ，ＬＩＵ Ｘｉａｏ—ｇａｎｇ
（１ Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｌｉａｏｙａｎｇ １ １ １０００ ，Ｃｈｉｎａ ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒ ｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ，Ｊｉｎｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ，Ｊｉｎｚｈｏｕ １２１００１ ，Ｃｈｉｎａ ；３．Ｊｉｎｚｈｏｕ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｎｉｍａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｊｉｎｚｈｏｕ １２１００２ ，Ｃｈｉｎａ）
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
副结 核 病 是 由 副结 核 分 枝 杆 菌 引 起 的一 种 慢 性 、消耗 性 传 染 病 ，以 顽 固性 腹 泻 、逐 渐 消 瘦 、肠 黏 膜 增厚 为 特 征 。主 要 感 染 牛 、羊 、鹿 等 反 刍 动 物 。 该 病 １９５８年在 地 中海 首次 发现 ，同期 我 国内蒙 古也 发 现 了 ｌ例 ，随 后 该 病 迅 速 蔓 延 至 全 国 大 部 分 地 区 Ｈ ，给我 国 牛羊饲 养 业带 来 了极 大损 失 Ｊ。
辽 宁南部 地 区某 绒 山羊 养 殖 场 ，有 少部 分 母 羊 产 羔后 陆续 出 现 顽 固性 腹 泻 、逐 渐 消 瘦 ，后 期 食 欲 废绝 而衰 竭 死 亡 ，剖 检 发 现 回 肠 和 结 肠 肠 黏 膜 增 厚 、肠 系膜 淋 巴结水 肿 、脾脏 明显萎 缩 等一 系列 临床 症 状和剖检 病 变 ，初 步诊 断 为副 结 核病 ，为 了 对本 病 进一步确 诊 ，同时为今后绒 山羊副 结核病 的诊断 与 防控工作提 供科学依 据 ，开展 了本项试 验工作 。
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｍａｋｅ ａ ｃｏｒｒｅｃｔ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｃａｓｅｓ ｉｎ ｏｎｅ Ｌｉａｏｎｉｎｇ ｃａｓｈｍｅｒｅ ｇｏａｔ ｆａｒｍ ，ｗｅ ｃｏｎｄｎｃ· ｔｅｄ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｄｕｂｏｄｓ ｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ ａｇａｒ ｍｅｄｉｕｍ ｆｎｒ ９—１ ３ ｗｅｅｋｓ ａｔ ３７℃ ｆｏｒ山ｅ ｖｉｓｃｅｒａｌ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ ｉｎｔｅｓｔｉｎａ ｌ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ ｓｈｅｅｐ，Ａ ｓｔｒａｉｎ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｉｔｓ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ． Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ，ａｃｉｄ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｔａｉｎｉｎｇ，ＰＣＲ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎ— ｃｉｎｇ ｗｅｒｅ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｆｏｒ ａｃｉｄ—ｆａｓｔ ｓｔａｉｎｉｎｇ ａｎｄ ｔｈｅ ｍ ｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｗａｓ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｈａｒａｅｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｔｌｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＰＣＲ ｗｅｒｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｗａｓ １００％ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｔｏ ＪⅡ一
（１辽 宁省畜牧科学研究 院 ，辽 宁 辽 阳 １１１０００；２．锦州医科大学畜牧兽 医学院 ，辽 宁 锦州 １２１００１； ３．锦州市动 物疫病预防控制 中心 ，辽宁 锦州 １２１００２）
摘要 ：为了对某辽宁绒 山羊饲 养场 疑似副结核病例作 出正确诊 断 ，本 研究针 对疑似病 羊的 内脏 组织 和肠内容 物在 Ｄｕ— ｂｕｄｓ油酸琼 脂培养基上经过 ３７℃条件下 ９～１３周 培养 ，从其 肝脏组织 中分离获得 ｌ株细 菌 ，对该分离菌株开 展 了形 态学观 察 、抗 酸染 色镜检 、ＰＣＲ检测及基 因序列测定等研究工作 。结 果显示 ，分离菌 为抗 酸染 色 阳性 菌 ，而且形 态学符 合副 结核分 支杆菌 的特征 ；ＰＣＲ检测结果为 阳性 ，测定 的序列与 ＧｅｎＢａｎｋ中 ＪⅡ一１９６１（ＣＰ０２２１０５．１）基 因序列 同源性高 达 １００％ ，证实 了
３２ 中国兽 医杂 忐 ２０１８年 （第 ５４卷）第 ６期
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒ ｎ ａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
辽 宁 绒 山 羊 副 结 核 分 枝 杆 菌 的 分 离 鉴 定 及 分 子 生 物 学 检 测
宋先忱 ，李 冰 ，朱延旭 ，张兴会 ，王世 泉 ，郭 伶。，徐 鹏 ，郭维军 ，刘孝 刚
１９６１（ＣＰ０２２１０５．１）ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ，Ｃｏｎｆ ｉｒｍｉｎｇ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅ ｗａｓ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏＡｓ．
Ｋ ｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ；Ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆ ｉｃａｔｉｏｎ ；Ｍ ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇ ｙ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ；Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｃａｓｈｍ ｅｒｅ Ｇｏａｔ Ｃ ｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ： ＬＩＵ Ｘｉａｏ—ｇａｎｇ
该分离菌株 为副结核分支杆菌 。 关 键词 ：副结 核病 ；病原分 离鉴定 ；分 子生物学检测 ；辽宁绒山羊
中图分 类号 ：￥８５５．１＋２
文献标志码 ：Ａ
文章编 号 ：０５２９—６００５（２０１８）０６—００３２—０３
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍ ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍ ｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｆｒｏｍ Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｃａｓｈｍ ｅｒｅ Ｇｏａｔｓ