Alcalase碱性蛋白酶对中华稻蝗蛋白水解条件的研究[1]
Alcalase
１３２ 酶水 解 工 艺 流程 ： 料 一 浸 泡 一 调 ｐ 一 加酶 滚 水 解 一 灭 酶 一 离 心 、 涤 一 合 并 滤 液 、 ．． 原 Ｈ 洗 １３． 蛋 白质 含 量 测定 ： Ｂ５０ ．＿ ８ ３ Ｇ ０９５ ＿ ５ １３４ 氨 基 态 氮 测 定 ： ．． 甲醛快 速 滴 定 法 ． １３５ 水 解 程 度 （ Ｈ） ．． Ｄ 的溅 定 ： Ｈ＝（ 离氪 基 氮／ 氯 ） ０ ％ Ｄ 游 息 ×１０ 水 解 后 产 生 的游 离 氨 基氮 用 甲醛 滴 定 法 铡 定 ， 氮用 凯 氏定 氮 法 测 定 ． 总 Ｉ３６ 蛋 白质 溶 出 率 的测 定 ： 白质 溶 出率 （ ） 水解 液 中 总 氮 ×水 解 液 体 积 ）（ 料 中总 ．． 蛋 ％ ＝（ ／原 氮 ×原 料 克 数 ） ０ ％ ． ×１０
１ 材 料 与 方 法
Ｉ １ 材 料 ．
玉米皮 ， 龙江省肇东金 玉集 团 ： ｌ ｌ ￣ 性 蛋 白酶 ， ｏ ｏ 司产 ， 活力 ２４ Ｕ ｇ 其它 黑 Ａｅ ａ ａｓ ＮＶ 公 酶 ． ／； Ａ
试 剂 均 为分 析 纯 ． Ｉ２ 仪 器 ． 恒温水浴 ； 析天平 ； 氏定氮仪 ； 分 凯 粉碎 机 ； 心 机 ． 离
２ 结 果 与 讨 论
２ Ｉ 原 料 前 处理 对 水 解 程 度 的影 响 ． 采 用 蛋 白质 变 性 （０Ｅ加 热 ３ ｎ 及 不 变 性两 种不 同 的前 处 理 方 法 进 行 对 比试 验 ． 图 ｌ ９＇ Ｏ ） 从 中可看 出， 变性 处 理 对 蜚 白质水 解 度 并 无提 高 ， 故后续 实验 采 用 蛋 白不 变 性 原 料 ．
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暗 尔 滨 师 范 大 学 自然 科 学 学 报
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Alcalase碱性蛋白水酶解大豆蛋白的工艺过程及动力学研究
由 图 ４可 看 出 ， 温 度 为 ５ ． 时 Ａｃ ｌｓ 白 酶 当 ５５ ｌａ ｅ蛋 ａ 活 力 相 对 较 低 ，相 同 反 应 时 间 内 大 豆 蛋 白 水 解 度 低 于
６ 条件 下 的最 大水 解 度 ， 随着 温 度进 一 步升 高 ， ０ 但 酶
迅 速 失活 ， 因而使 水解 度 降低 ， 因此水 解温 度选 择 ６ ０
６０ ． 应 ｐ 值 ８０ 酶 用 量 ０８ 。 此 基 础 上 ， 解 反 ． 反 ％ Ｈ ．， ．％ 在 酶 应 时 间 ４小 时 ， 验 水 解 度 为 ２ ２ 。 试 ２０ ％
表 ２ 实 验 安 排 及 结 果
酶 的 活 性部 位 的基 团对 反 应 体 系 ｐ 值 的 变 化 比 Ｈ 较 敏 感 ， 解 离 状 态 随 着 ｐ 值 的变 化 而 变 化 ， 些 变 其 Ｈ 这 化 会 影 响 酶 分子 的特 殊 构 象； 外 ， 物 大 豆 蛋 白也 随 另 底 ｐ Ｈ值 的变 化表 现 出不 同 的解 离状 态 ，因此 ｐ Ｈ值 直 接 影 响 了酶 与底 物 的结合 和 酶对 底物 的催 化 。 图 ３的实 从 验结 果 可 以看 出 ： ｐ 值 在 ６５ ～ ．０范 围时 ， 解 度 当 Ｈ ．０ ８０ 水 随 ｐ 值 的增 大而 增加 ，Ｈ 值 为 ８Ｏ Ｈ ｐ ．０时 水解 度 最大 ； 当 ｐ 值在 ８Ｏ ～ ． Ｈ ．０ ８５ ０范 围 时 ， 解 度 随 ｐ 水 Ｈ值 的增 大 而 减
工程 量 的计 算 规则 、定 额子 目的组 成及 包 含 的工 作 内 容、 工程 造价 计算 程序 、 费用定 额 包含 内容 及 计取 方 法 ， 还要 掌 握其 编 制 原理 、 内在 联 系 ， 保 工 程造 价 计 算 的 确 准确 性 。此外 ， 要坚 持深 入现 场 ， 还 掌握 工程 动态 ， 了解 工程 是否 按 图纸 和 工 程变更 施工 ， 在结 算 时不 能 只停 留 在对 图纸 和工 程变 更 的计算 审核 上 。 实行 内审和 专业 应 审计 二审 终审 制 ， 严格 控制 每 个环 节 ， 层把 关 ， 工 程 层 使
Alcalase
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谈酶 水 解 鼓 果 的影 响 。 通 过 正 茭宴 验 和极 差 分 析 可 确 定
酶 具 有 高 度 的 操 作 安 全 性 ． 合 Ｆ ＨＯ Ｊ Ｃ Ａ／ 符 Ａｏ ／Ｅ Ｆ
Ｆ Ｃ 推 荐 的食 品 级 酶 制 剂 标 准 ： Ｃ
最佳 工 艺 蒂 件 为 ： 度 ５ ￣ ｐ ， 物 质 量 旁 敷 ５ ． 温 ８Ｃ，Ｈ８０ 虎 酶 用 量 １．ＹＥＳ ， ０ｅＫ ：）水解 时 间 ３ ０ ｉ ０ｒｎ ａ ＾ｃｌｅ碱 性 蛋 白 酶 ］ａ ｓ ａ 水解
研 览 了 Ｉｃ ａ ｄ ｌ ｅ碱 ＇ ａ ｓ 性 蛋 白酶 时 大 豆 分 离蛋 白 的 水 解敢 ．
并研 完 了 ｐＩ温 度 、 甩 量 、 糟 质 量 分 敷 、 鲜 时 阃 对 ｌ、 － 酶 威 啦
白 酶 Ａ 是 一 种 内 切 蛋 白 酶 。 而 且 Ａｌ ａａ ｅ碱 性 蛋 白
本 试 验 通 过 Ａｌａａ ｅ碱 性 蛋 白 酶 对 大 豆 分 离 蛋 ｃ ｌｓ 白酶 解 效 果 和 影 响 因 素 的 研 究 ， 确 定 最 佳 水 解 １ 艺
Ａｂ ｔａｃ Ｅ ｓｌ ｏ ＡＩ ｌ ｅ Ｐ ｓｅｉａｓ ｏｎ ｈ ｄｒ ｙ ｉ ｏ ｓｒ ｔ ｆ ｆ ｓａａｓ ｒ ｔ ｎ ｅｓ ｙ ｓｓ ｆ ｏｌ ｓ ｂｅ ｐ ｏｅｉ ｌｏｌｔ ｓ ｗａ ｓｕ ｄ Ｅｆ ｃ ｏｙ ａｎ ｒｔ ｎ ｓ ａｅ ｓ ｔ ｄｅ ｆ 乜 ｅ ｉｆ ｅｎ ｉｇ ｎｌ ｃｎ ｐａａｍｅｅ ｓ ｕ ｒ ｔｒ ｉ ｌ ｉｇ ｎｃｕｄｎ ｐＨ ｖ ｕ， ａｌ ｅ ｔｒ ｐｅａｔｒ ｎ ｙ ｄ ａ ｅ ｓ ｂｓｒｔ ｃ ｃ ｔａ ｉ ｅ ｎ ｒ ｕｅ ｅ ｚ ｍｅ ｏｓ ｇ ｕ ｔ ｅ ｏｎ ｅｎ ｒｔ ａ ｏｎ ａ ｄ ｙ ｏｌｓｓ ｆ ｎ ｙ ｏｙ ｉ ｂ ｏ ａ ｅ ｎ ｈ ｄｒ ｙ ｉ ｉ ｍｅ ｏ ｈ ｄｒｌｓｓ ｙ ＡＩａｌｓ ｗｅｒ ｅ ｓ Ｉｖ ｓ ｉａｔｄ Ｒｅｓ ｌ ｉｄｉａｌｄ ｉａ ｔｅ ｂ ｏ ｎｅｔ ｅ ｑ ｕｔ ｎ ｃ ｅ ｈ ｌ ｈ ｅｓ ｓ １
大豆蛋白的Alcalase酶解及酶解液在酸性条件下的稳定性研究
大豆蛋白的Alcalase酶解及酶解液在酸性条件下的稳定性研
究
陈中;蔡蕾;林伟锋;鲍志宁
【期刊名称】《粮油加工》
【年(卷),期】2007(000)007
【摘要】本文研究了Alcalase酶对大豆分离蛋白的酶解及大豆酶解液在酸性条件下的稳定性.酶解条件为:温度60℃,底物浓度8%(w/w),酶用量0.1%(v/w).酶解120min时,大豆酶解液具有最高的水解度与蛋白溶出率,分别为11.25%与50.09%,该酶解液在酸性条件下具有良好的稳定性.酶解时间超过120min,酶解液因酶解产物间的疏水性相互作用而形成不溶性絮凝物,酶解液的蛋白溶出率及其在酸性条件下的稳定性下降.
【总页数】3页(P78-80)
【作者】陈中;蔡蕾;林伟锋;鲍志宁
【作者单位】华南理工大学食物蛋白工程研究中心;华南理工大学食物蛋白工程研究中心;华南理工大学食物蛋白工程研究中心;华南理工大学食物蛋白工程研究中心【正文语种】中文
【中图分类】TQ936.1
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碱性蛋白酶Alcalase水解杏仁蛋白制备ACE抑制肽
碱性蛋白酶Alcalase水解杏仁蛋白制备ACE抑制肽
刘宁;仇农学
【期刊名称】《农产品加工·学刊》
【年(卷),期】2009(000)003
【摘要】采用Alcalase蛋白酶水解杏仁蛋白,以水解度(DH)及水解产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制率为指标进行酶解工艺优化.结果表明,较大活性的ACE抑制肽的最佳水解条件为:pH值7.0,温度50℃,酶底比4%,底物质量分数为2%.该条件下经60 min水解,其水解度为12.23%,得到ACE抑制肽的IC50值为0.85 mg/mL.
【总页数】4页(P149-152)
【作者】刘宁;仇农学
【作者单位】陕西师范大学食品工程与营养科学学院,陕西,西安,710062;陕西师范大学食品工程与营养科学学院,陕西,西安,710062
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.2
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Alcalase 2.4L碱性内切酶和Flavourzyme风味酶酶解大豆分离蛋白及脱苦工艺优化
Alcalase 2.4L碱性内切酶和Flavourzyme风味酶酶解大豆分离蛋白及脱苦工艺优化孙勇【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2014(033)008【摘要】以大豆分离蛋白为原料,选用Alcalase 2.4L碱性内切酶和Flavourzyme 风味蛋白酶对大豆分离蛋白进行酶法水解及脱苦工艺研究.以水解度和苦味分值为考察值,对酶解工艺进行优化,确定最佳条件.结果表明:Alcalase 2.4L碱性内切酶最佳酶解条件为加酶量14 000 U/g、酶解温度60℃、酶解pH 8.5、底物质量分数5％,酶解时间2h,最终水解度为45.34％,此时水解液苦味值为4.Flavourzyme 风味蛋白酶对水解液进行二次水解的最优酶解条件为加酶量300 U/g、酶解温度55℃、酶解pH 7.0、酶解时间3h,此条件下大豆分离蛋白水解液苦味值最低为1 2.Alcalase 2.4L碱性内切酶和Flavourzyme风味蛋白酶水解大豆分离蛋白使水解度得到较大提高的同时也解决了水解液的苦味问题.【总页数】5页(P38-42)【作者】孙勇【作者单位】北京市食品研究所,北京100162【正文语种】中文【中图分类】TS214.2【相关文献】1.风味蛋白酶和中性蛋白酶复合酶解大豆分离蛋白制备多肽的研究 [J], 马诗文;高云;吴金龙;郝晓亮2.碱性蛋白酶与外切蛋白酶酶解大豆分离蛋白及脱苦工艺的研究 [J], 张志国;孙晓燕3.Alcalase碱性蛋白酶酶解蚕豆蛋白的研究 [J], 刘淳;张海英;韩涛;卞科4.风味酶和活性炭对大豆分离蛋白水解液脱苦效果比较研究 [J], 李丹丹;江连洲;李杨;王梅;王胜男;蔺建学5.碱性蛋白酶Alcalase凝固大豆分离蛋白的分子间作用力 [J], 栾广忠;程永强;鲁战会;李里特因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
正交实验确定Alcalase水解大豆蛋白的最佳实验条件
正交实验确定Alcalase水解大豆蛋白的最佳实验条件孙显慧【摘要】采用枯草杆菌碱性蛋白酶Alcalase(标注酶活力2.4Au/g)作为水解酶对大豆蛋白进行水解,得到大豆多肽溶液.以大豆蛋白的水解度(DH)来表征大豆蛋白水解反应进行的程度.选择水解反应温度、pH值、酶浓度作为三个影响因素分别取三个水平,以水解度为指标进行三因素三水平正交实验.实验结果得到的最佳实验条件为底物浓度为8％,酶浓度(E/S)为3.6Au/100g底物,温度T60℃以及pH为8.0.【期刊名称】《潍坊学院学报》【年(卷),期】2015(015)006【总页数】3页(P21-23)【关键词】大豆蛋白;碱性蛋白酶Alcalase;正交实验;最佳水解条件【作者】孙显慧【作者单位】潍坊职业学院,山东潍坊261041【正文语种】中文【中图分类】TQ936.2大豆蛋白质的水解方法可分为酸水解、碱水解和酶水解法等多种方法，由于酸碱水解方法存在许多不足之处，如营养成分损失，水解无特异性，副反应多，水解产物感官性能差，反应条件不易控制等，所以在这方面的研究不是太多。
相比而言酶解反应条件温和，反应易于控制，反应过程中营养物质的破坏较小，因此，从1970年代起，日本和美国的研究学者就开始致力于酶水解生产大豆蛋白水解产物的研究。
在我国，从1980年代起也有一些科研人员开始研究大豆多肽的酶解法生产。
目前为止，酶法水解大豆蛋白质生产大豆多肽成了研究的一个重要方向，用于研究大豆蛋白水解的酶主要有胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶及微生物蛋白酶等；由于各种不同的酶对蛋白质作用的位点不同，得到的产物也就不同，不同的酶也可能给产品带来不同的风味，甚至带来难以除去的苦味。
近几年来，有人用微生物发酵技术制备大豆肽［1］，这种方法将酶的生产和应用合二为一，省去了中间步骤，不需要添加额外的酶就可以生产出大豆肽，大大降低了成本，这种制备技术成了大豆多肽研究的一个新的方向。
Alcalase碱性蛋白酶酶解蚕豆蛋白的研究
豆蛋 白水解物。通过单因素试验 ， 调查了 ｐ 、 Ｈ 底物质量分数、 酶用量（ ：） Ｅ ｓ 和酶解温度等 因素对 Ａｃｌ ｅ ｌ ａ 碱性 ａｓ 蛋白酶酶解蚕豆蛋白效果的影响。通过正交试验设计 ， 确定 Ａｃ ａｅ ｌ ｓ 碱性蛋白酶酶解蚕豆蛋 白适 宜的工艺参 ｌ ａ 数： 酶解温度 ６ ０℃ ， 底物质量分数 ３ ， ％ 酶用量（ ：） ％ ，Ｈ９０ 此条件下， Ｅ Ｓ ８ ｐ ． ， 蚕豆蛋 白水解度（ Ｈ 达最大， Ｄ ） 为
温水浴锅 、Ｅ ２ Ｓ 型旋转蒸发器 ： Ｒ ５ Ｃ 一１ 上海亚荣生化 仪器厂 ；Ｈ ９３ Ｄ Ｇ一 ０６型电热恒温鼓风干燥箱 ： 上海精 宏实验设备有限公 司。
１２ 试 验 方法 ． １２ １ 蚕豆 蛋 白的提取 ．．
温和 ， 易除杂质和水解度高等优点。Ａｃｌ ｅ ｌ ａ 碱性蛋 ａｓ
Ａｃｌ ｅ ｌ ａ 碱性蛋 白酶对蚕豆蛋 白酶解的影响因素， ａｓ 包
括 ｐ 底物 质量分 数 、 Ｈ、 酶用 量 （ Ｓ 和 酶解 温度 ， Ｅ： ） 初
加工业主要利用蚕 豆生产粉丝 、 粉皮等， 仅利用其中 的淀粉部分 ， 而作 为重要 营养成分 的蛋 白质未被合 理利用 ， 蚕豆多肽的研究还处于空 白。 植物源多肽具有 增强免 疫调节 力 、 衰老 、 抗 抗 氧化和降血 压等作用 。大豆 蛋 白酶 解物 和大米蛋 白酶解物均具有刺激巨噬细胞吞 噬的功能 ， 可激发 非特异 的免疫 防御 系统 ； 大豆肽 对 ・ Ｈ 自由基具 Ｏ 有清除能力 ， 清除率为 ５ ．％； ６５ 燕麦蛋 白酶解物对血 管紧张素转移酶活性 （ Ｃ ） Ａ Ｅ 抑制率为 ８ ．０ － 。 ５４ ％ ６ ］ 刘淳等 发现蚕豆蛋白酶解物具有一定的抗氧化活 性。 目前， 生产多肽的方法有分离提取法 、 化学合成 法 、 因重 组 法 和 酶解 法 等 。酶 解 法具 有 条 件 基
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天然产物研究与开发Nat Prod Res Dev 2006,18:8222824文章编号:100126880(2006)0520822203 收稿日期:2005209212 接受日期:20052112083通讯作者E 2mail :xiaohong0359@Alcalase 碱性蛋白酶对中华稻蝗蛋白水解条件的研究肖 红13,孙宏民2,段玉峰1(1.陕西师范大学食品工程系,西安710062;2.陕西科技大学职业技术学院,西安710060)摘 要:本试验采用Alcalase 碱性蛋白酶对中华稻蝗蛋白进行水解,研究其蛋白酶解条件和酶解物的抗氧化性(用抑制邻苯三酚自氧化率来表示)。
结果表明,实验室最佳酶解条件为:底物浓度1%,pH 值8.0,温度55℃,水解时间4h ,加酶量(V/V ,%)为10%。
在此条件下其酶解物具有明显的抗氧化活性,对邻苯三酚自氧化的抑制率可达40%,水解度为51%。
关键词:中华稻蝗;Alcalase 碱性蛋白酶;抗氧化性;水解度中图分类号:Q556+.9文献标识码:AStudy on the H ydrolytic Condition of Oxya chinensis (Thunberg)Protein with AlcalaseXI AO H ong 13,S UN H ong 2min 2,DUAN Y u 2feng 1(1.Department o f Food Engineering ,Shanxi Normal Univer sity ,X i ’an 710062,China ;2.Shanxi Univer sity o f Science and Technology Polytechnic Institute ,X ’an 710060,China )Abstract :The article researched on the condition of enzym olysis and antioxidation of hydrolysats (it was expressed with the in 2hibition ratio of pyrogallol autooxidation )in the process of Oxya chinensis (Thunberg )protein ’s hydrolysis with Alcalase.Based on the research ,we have g otten the best reaction parameters :substrate concentration 1%,pH 8.0,temperature 55℃,hydrolyt 2ic time 4h ,enzyme 2added contents (V/V ,%)10%.On this condition ,the hydrolysats have obvious antioxidation activity and the inhibition ratio of pyrogallol autooxidation has been over 40%and the degree of hydrolysis is 51%.K ey w ords :Oxya chinensis (Thunberg );Alcalase alkaline protease ;antioxidation ;degree of hydrolysis 可食用昆虫作为一种蛋白质资源在国际范围受到广泛关注[1],而中华稻蝗是昆虫中的一大类群,具有昆虫作为食品新资源的一切特性,其营养丰富,体内富含蛋白质(占干物质的66.37%～85.67%),远高于植物性食物蛋白含量,且含人体所需的必需氨基酸和多种微量元素。
在蝗虫蛋白质资源的开发方面,目前我国主要是某些有吃虫习惯的地区少量采食[2],然而在西欧、日本和美国,昆虫的活性肽和蛋白水解物类食品已有各种商品化生产,其产品可用作消化道疾病人的食品、低过敏性食品、老年食品和运动食品及大众型的多肽复合饮料[3],为了充分利用蝗虫蛋白,本实验设计通过对蝗虫蛋白酶法水解,研究其抗氧化性和水解度的变化,为制备抗氧化肽提供有效的依据。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 主要试验材料中华稻蝗(Oxya chinensis (Thunberg ):陕西西安地区;Alcalase 2.4L 碱性蛋白酶(食用级):丹麦诺维信(NOVO );茚三酮:上海化学试剂有限公司;考马斯亮蓝G 2250:润德生物公司;邻苯三酚:天津市化学试剂厂;其他常用试剂(分析纯)1.1.2 主要实验仪器Beckman 121M B 型氨基酸自动分析仪:美国贝克曼公司1.2 分析方法1.2.1 中华稻蝗蛋白质组成分析样品经6m ol/L HCl 在110℃下水解22h 后,抽酸,定容。
用美国贝克曼公司121M B 型氨基酸自动分析仪测定。
1.2.2 酶活力的测定F olin酚法[4]。
经测定液态酶制剂的活力为: 214AU/g。
1.2.3 氨基酸含量的测定茚三酮法[5]。
1.2.4 蛋白浓度的测定考马斯亮蓝[6]。
1.2.5 抗氧化性的测定邻苯三酚法[7]。
取预热4.5m L50mm ol/L pH8.30的Tris2HCl 缓冲液待测样品20μL,后加入10μL50mm ol/L的邻苯三酚(预热),迅速摇匀,在325nm下,每隔30s 测吸光值(A),测4min内的吸光值;邻苯三酚自氧化用蒸馏水代替样品,其它同上,测吸光值(A O);Tris2HCl缓冲液作空白。
抑制率(%)=(A O-A)/A O×100%1.2.6 水解度的计算[8]水解度(%)=h/h tot×100%=(水解后游离氨基酸浓度-水解前游离氨基酸浓度)/(水解液蛋白浓度×htot)×100%其中:h—单位质量蛋白质中被水解的肽键的量(mm ol/g);h tot—单位质量蛋白质中肽键的总量(mm ol/g),根据稻蝗蝗虫蛋白中氨基酸的组成及含量,求得h tot 为7.57。
2 结果与讨论2.1 中华稻蝗的蛋白质组成分析表1 中华稻蝗氨基酸组成T able1 The composition and content of amino acids in Oxya chinensis(Thunberg)氨基酸种类K ind of amino acid 天冬氨酸Asp苏氨酸Thr丝氨酸ser谷氨酸G lu脯氨酸Pro甘氨酸G ly丙氨酸Ala半胱氨酸Cyr缬氨酸Val含量C ontents(%) 4.413 2.04 2.229 6.87 2.564 3.133 6.1930.3581 3.886氨基酸种类K ind of amino acid 蛋氨酸M et异亮氨酸Ile亮氨酸Leu酪氨酸T yr苯丙氨酸Phe赖氨酸Lys组氨酸H is精氨酸Arg 含量C ontents(%)0.9558 2.166 4.465 6.119 2.033 3.782 1.785 3.6322.2 Alcalase水解中华稻蝗蛋白条件的确定2.2.1 加酶量的确定不同酶量的水解效果见图1。
随着加酶量增加其抗氧化和水解度都是先上升后下降,在酶用量达到10%时,抗氧化性(用邻苯三酚的抑制率来表示)可达31.5%,水解度达27.5%。
考虑到经济等方面,选择酶用量为10%较好。
所以选用加酶量为10%。
图1 Alcalase碱性蛋白酶酶用量的选择Fig11 The choose of enzyme2added contents2.2.2 水解温度的确定不同温度的水解效果见图2。
随着温度的升高水解度有缓慢下降的趋势,而抗氧化性有增加趋势,在55℃时抗氧化性可达40%,随后逐渐下降,这是因为加热可使蛋白质的结构疏松,暴露出更多的酶作用位点,同时酶活性达到最佳状态所致。
因此酶解温度确定为55℃。
图2 温度的选择Fig12 The choose of hydrolytic temperature2.2.3 pH值的确定不同pH值的水解效果见图3。
随着pH值的升高,在pH为8.0时水解度和抗氧化性都达到最高,因此选用pH为8.0。
图3 pH值的选择Fig13 The choose of pH328 V ol118肖 红等:Alcalase碱性蛋白酶对中华稻蝗蛋白水解条件的研究 2.2.4 水解时间的确定不同水解时间的效果见图4。
由图可见,水解8h 后,水解程度有下降的趋势,抗氧化性在4h 和6h 变化缓慢,考虑到时间的问题,选用4h 为水解时间。
图4 水解时间的选择Fig 14 The choose of hydrolytic time2.2.5 底物浓度的确定不同底物浓度的水解效果见图5。
从图中可看到Alcalase 碱性内切酶水解蝗虫蛋白时,其反应最适底物浓度为1.0%。
而随着底物蛋白浓度的增加,水解效果降低,其原因可能是底物浓度增大后,蛋白不能充分浸润,从而影响了酶对蛋白的作用,故实验确定Alcalase 酶水解蝗虫蛋白的最适反应底物浓度为1.0%。
图5 底物浓度的选择Fig 15 The choose of substrate concentration3 结论本试验研究了中华稻蝗蛋白质酶解的条件及酶解产物的抗氧化性能。
选用Alcalase 碱性蛋白酶为首选酶种,确定其较优的作用条件为酶用量10%,酶解液pH 8.0,酶解温度55℃,最适底物浓度1%,作用时间4h 。
依此条件得到的稻蝗酶解液其抗氧化活性(用对邻苯三酚自氧化的抑制率表示)可达40%,水解度为51%。
尽管尚未对其中起作用的抗氧化多肽进行分离纯化并研究其结构和作用机制,但这是一个有价值的信号,预示蝗虫蛋白经酶解所得到的产物具有一定的功能特性,值得进一步深入研究。
参考文献1 D ong SX (董淑香).Demanded exploitation of food recources —Insect F ood.J Zhengzhou Grain Coll (郑州粮食学院学报),1995,5:18219.2 Hu C (胡萃).Recource Insect and Its Value (资源昆虫及其利用).Beijing :China Argiculture Publishing H ouse ,1996.207.3 K ong BH (孔保华).Reserach status of ative peptide of proteinhydrolysates.China Livestock Product and Food (中国畜产与食品),1999,3:1352137.4 Shi F (史锋).Biochemistry Experiment (生物化学实验).Zhejiang.University Publishing H ouse ,2002.1112113.5 Huang WK (黄伟坤).F ood T est and Alalyse (食品检测与分析).Beijing :China Light Industry Press ,1989.58260.6 Chen J H (陈钧辉).Biochemistry Experiment (生物化学实验).Beijing Science Publishing H ouse ,2003.63264.7 Sun X Q (孙雪奇),Chen QY (陈齐英),Bie X L (别小琳),etal .The choose of wavelength determined the active of S OD withthe method of pyrogallol autooxidation.J Huaxi Med (华西药学杂志),2004,5:4042405.8 Wang HY (王何雅).S tudy on the hydrolysis of enzyme to Oys 2ter protein and active peptide (牡蛎蛋白质的酶法水解及活性肽的研究).Master Paper of Jiangnan University ,2003.428天然产物研究与开发 V ol 118。