淀粉酶检测试剂盒(碘-淀粉比色法)
淀粉酶含量测定
淀粉酶(AMS)测定试剂盒说明书(碘-淀粉比色法)一、 原理：淀粉酶能水解淀粉生成葡萄糖、麦芽糖及糊精，在底物浓度已知并且过量的情况下，家人碘液与未水解的淀粉结合生成蓝色复合物，根据蓝色的深浅可推算出水解的淀粉量，从而计算出AMS 的活力。
二、 试剂组成与配制：（100T ）1、0.4mg/ml 底物缓冲液：60ml ×1瓶，4℃冰箱保存6个月。
2、0.1mol/L 碘贮备液：7ml ×1瓶，4℃避光保存6个月。
0.01mol/L 碘应用液的配制：将碘贮备液：蒸馏水=1:9稀释，现用现配4℃避光保存。
三、 操作表： 测定管（u 管） 空白管（0管）底物缓冲液（ml ）37℃预温5分钟0.5 0.5 待测样本（ml ） 0.1混匀，37℃水浴，准确反应7.5分钟 碘应用液（ml ） 0.5 0.5蒸馏水（ml ）3.0 3.1 混匀，660nm 波长，1cm 光径，蒸馏水调零，测各管吸光度。
*注：不同样本批量测试前需要做预实验，确定最佳取样浓度，将 （空白OD-测定OD 控制在0.05～0.150之间） 四、 计算：1、 单位定义：100ml 血清（浆）中的AMS ，在37℃与底物作用30分钟，水解10mg 淀粉为1个单位。
2、公式：样本测试前稀释倍数空白管吸光度测定管吸光度空白管吸光度样本测试前稀释倍数分钟分钟空白管吸光度测定管吸光度空白管吸光度⨯⨯-=⨯⨯⨯⨯⨯-=801.01005.730105.04.0dl AMSu（此公式适用于测定血清中淀粉酶）血清淀粉酶的含量测定一、实验准备：1、实验器材：移液枪（100~1000ul、10~100ul、1000~5000ul、2~20ul）、5mlEP管、0.5mlEP管、比色皿、100ml烧杯、漩涡仪、水浴箱，分光光度计、计时器。
2、实验药品：NaCl、蒸馏水、0.4mg/ml底物缓冲液、0.1mol/L碘贮备液。
二、实验步骤：1、0.01mol/L碘应用液的配制：将碘贮备液：蒸馏水=1:9稀释，现用现配4℃避光保存。
淀粉酶活力的测定方法
淀粉酶活力的测定方法淀粉酶是一类能够催化淀粉水解的酶，在生物体内和工业生产中都具有重要的作用。
准确测定淀粉酶的活力对于研究酶的性质、生物体的代谢过程以及相关工业应用都具有重要意义。
下面将介绍几种常见的淀粉酶活力测定方法。
一、碘淀粉比色法碘淀粉比色法是一种较为经典且常用的测定方法。
其原理是淀粉经淀粉酶水解后，剩余的淀粉与碘液反应生成蓝色复合物，颜色的深浅与剩余淀粉的量成正比。
通过比色法测定反应后溶液的吸光度，即可计算出淀粉酶的活力。
具体操作步骤如下：首先，准备一系列含有不同浓度淀粉溶液的试管，并向其中加入适量的淀粉酶溶液，在一定的温度和 pH 条件下反应一段时间。
然后，迅速向各试管中加入碘液，使反应终止。
最后，使用分光光度计在特定波长下测定各试管溶液的吸光度。
根据事先绘制的标准曲线，将吸光度值转换为剩余淀粉的浓度，从而计算出淀粉酶水解淀粉的量，进而得出淀粉酶的活力。
这种方法的优点是操作相对简单、成本较低，但缺点是灵敏度相对较低，对于低活力的淀粉酶测定可能不够准确。
二、DNS 法（3,5-二硝基水杨酸法）DNS 法是另一种常用的测定淀粉酶活力的方法。
其原理是淀粉在淀粉酶的作用下水解为还原糖，还原糖能与 3,5-二硝基水杨酸在碱性条件下共热，被还原成棕红色的氨基化合物。
在一定范围内，还原糖的生成量与淀粉酶的活力成正比，通过比色测定棕红色物质的吸光度，即可计算出淀粉酶的活力。
操作过程如下：将淀粉溶液与淀粉酶溶液在适宜条件下反应一定时间后，取出适量反应液，加入DNS 试剂，在沸水浴中加热一段时间，使反应充分进行。
冷却后，使用分光光度计测定溶液在特定波长下的吸光度。
与碘淀粉比色法相比，DNS 法的灵敏度较高，能够更准确地测定低活力的淀粉酶，但操作过程相对复杂一些。
三、斐林试剂法斐林试剂法也是基于淀粉水解产生还原糖的原理。
斐林试剂由硫酸铜和酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液组成，还原糖能将斐林试剂中的二价铜离子还原为一价铜离子，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。
碘比色法测定淀粉含量
碘比色法测定淀粉含量
碘比色法是一种常用的测定淀粉含量的方法。
淀粉与碘形成复合物时，会呈现深蓝色的颜色，根据颜色的深浅可以推测淀粉的含量。
测定步骤如下：
1. 准备样品：将待测的样品（如食物、植物组织等）制成适当的浓度，使其能够被较为准确地测定。
2. 提取淀粉：采用热酸提取法或酶解法将样品中的淀粉提取出来。
其中热酸提取法是将样品加入盐酸或硫酸中，加热至淀粉糊状后进行提取。
酶解法则是使用淀粉酶将样品中的淀粉分解为葡萄糖后进行提取。
3. 碘溶液制备：制备适量的碘溶液，一般是用碘酸钾和碘化钾制备。
4. 反应：将提取的淀粉溶液与碘溶液混合，等反应一段时间后，观察溶液的颜色变化。
颜色越深，说明淀粉含量越高。
5. 分光光度计测定：使用分光光度计，将混合溶液置于光管中，通过比较混合溶液的吸光度与已知浓度淀粉溶液的吸光度，可以得出待测样品中淀粉的含量。
需要注意的是，测定淀粉含量时需保证操作准确，并根据测定
的样品选择适当的提取方法。
此外，测定时要排除其他物质对测定结果的干扰，如物质的颜色、光散射等。
淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉比色法)
淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉比色法)简介：淀粉酶(Amylase ，AMS)又称1，4-α-D-葡聚糖水解酶，是水解淀粉和糖原的酶类总称。
淀粉酶测定方法主要分为天然淀粉底物方法和确定底物方法，前者的方法有碘-淀粉法，后者有以麦戊糖底物的方法，以4-NP-G 为底物的方法。
Leagene 淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉比色法)其检测原理是血清或血浆等样本中α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等，碘液与未被水解的淀粉结合，生成蓝色复合物，其蓝色深浅与未经酶促反应的空白管比较，可计算出淀粉酶的活力单位。
该试剂盒通过分光光度计检测吸光度值，可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的淀粉酶活性。
如果采用酶标仪检测，则检测的样本数较多，100T 的比色法检测试剂盒可以检测。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 比色杯或96孔板2、 生理盐水3、 蒸馏水4、 分光光度计或酶标仪操作步骤(仅供参考)：1、 KI 工作液：取出KI Solution 恢复至室温，KI Solution ：蒸馏水混匀，即为KI 工作液。
4℃避光可保存一个月。
2、 准备样品：① 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，冻存，用于AMS 的检测。
② 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备，用生理盐水稀释后，可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消编号 名称TE0203 100T TE0203 200T Storage试剂(A): AMS Assay buffer 50ml 100ml 4℃ 试剂(B): KI Solution 5ml10ml 4℃ 避光使用说明书1份除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。
③高活性样品：如果样品中含有较高活性的AMS，可以使用生理盐水或PBS等进行稀释，也可以采用ALP Assay buffer稀释。
碘-淀粉比色法测定血清淀粉酶 医学课件
空白管
缓冲淀粉溶液 1.0 （37℃预温5min）
测定管1（重复两次） 测定管2
1.0
血清或稀释唾液 -
0.02
立即混匀，置37℃水浴保温7.5min（准确）
碘应用液
1.0
1.0
去离子水
6.0
6.0
充分混匀，以波长660nm，去离子水调吸光度零点，读取各管吸光度值。 测定管2：在试管里留取一份唾液（口水），首先稀释100-500倍。
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试剂与器材
1、0.4g/L缓冲淀粉溶液 成分及作用：可溶性淀粉 （底物）；磷酸氢二钠和磷酸二氢钾（缓冲液），氯 化钠（淀粉酶的激活剂）；甲醛（防腐剂）。 2、0.1mol/L碘储存液 碘酸钾和碘化钾（提供显色反 应的碘）；浓盐酸（稳定剂） 3、0.01mol/L碘应用液
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操作步骤
加入物(ml)
这类底物的结构和分子量确定，溶解度好可以配制 较高浓度，使酶反应初速度达到最大速度，满足零级反应 的要求。这类方法均适合自动化分析，分析速度快，精密 度高，酶的活性可以国际单位表达，目前几乎已完全取代 了天然淀粉为底物的方法。
IFCC推荐方法是对硝基麦芽庚糖苷法（4NP-G7法）
了解
对-硝基苯麦芽庚糖苷法 对-硝基苯麦芽庚糖苷(4-nitrophenyl-α-maltoheptaoside，4NP-G7)为底物，经α-淀粉酶催化，水 解为游离的寡糖(G5，G4，G3)及葡萄糖残基减少的 对-硝基苯寡糖苷(4NP-G2，4NP-G3，4NP-G4)。 4NP-G2、4NP-G3及部分4NP-G4，在α-葡萄糖苷酶
流行性腮腺炎AMY也会大量升高。
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注意事项
1、AMY活性在400U以下时，与底物的水解成良好的线性。如 果结果超过400U，或测定管吸光度小于空白管吸光度一半 时，应加大标本稀释倍数或减少稀释血清加入量，结果乘
淀粉酶的测定方法
淀粉酶的测定方法
淀粉酶的测定方法主要有以下几种：
1. 碘遇法：将待测样品与含有淀粉的试液反应，然后加入碘溶液，观察颜色变化。
淀粉酶能催化淀粉水解产生葡萄糖，当样品中有淀粉酶存在时，反应液中淀粉的含量减少，碘反应呈现淡黄色。
通过比较反应前后颜色的变化程度，可以间接测定淀粉酶的活性。
2. 滴定法：采用淀粉为底物，测定反应液中葡萄糖的含量。
首先将待测样品加入含有淀粉的试液中，然后根据反应的程度，利用滴定法以还原糖作为指示剂测定反应液中葡萄糖的含量，从而计算淀粉酶的活性。
3. 导电度法：利用淀粉酶对淀粉的水解反应产生的葡萄糖使反应液的导电度发生变化来测定淀粉酶的活性。
测定时先将反应液的导电度测定为A，然后加入淀粉酶，反应一段时间后导电度测定为B，根据B-A的差值可以计算淀粉酶的活性。
4. 比色法：利用淀粉酶对淀粉的水解反应产生的葡萄糖与某种试剂发生比色反应，通过测定反应液的吸光度来间接测定淀粉酶的活性。
常用的比色试剂包括间苯三酚、邻苯二酚等。
需要注意的是，不同测定方法的适用范围和操作步骤可能会有所不同，具体选择
哪种方法取决于实验目的和样品特点。
检测淀粉酶活性的方法
检测淀粉酶活性的方法
淀粉酶活性可以使用多种方法来检测，常用的有以下几种：
1.比色法：使用酶活性与颜色变化有关的试剂，如
比色剂，来检测淀粉酶活性。
2.电位检测法：使用电位计来直接测量酶酶解淀粉
过程中产生的电流。
3.磷酸酶试剂盒法：使用含有磷酸的试剂盒，在酶
解淀粉过程中产生的磷酸可以通过酶解磷酸酶来酶消耗，由此反映淀粉酶活性。
4.放射性检测法: 淀粉酶将淀粉分解成葡萄糖，葡
萄糖可以通过磷酸甘油酶合成磷酸甘油，这种合成过程中产生的14C碳可以通过放射性计数来检测淀粉酶活性。
这些方法都有其特点和适用范围，需要根据实验需求来选择最合适的方法。
1.比色法是最常见的检测淀粉酶活性的方法之一，
它通过酶解淀粉产生的葡萄糖或其他物质的颜色变化来检测淀粉酶活性。
常用的比色剂有银离子试剂、染料试剂等。
2.电位检测法是一种直接测量淀粉酶活性的方法，
它通过测量酶解淀粉产生的电流来检测淀粉酶活性。
3.磷酸酶试剂盒法是通过检测淀粉酶酶解淀粉产生
磷酸，再由磷酸酶进行消耗来反映淀粉酶活性。
4.放射性检测法是一种特殊的检测方法，它使用含
有放射性碳的淀粉或磷酸甘油试剂，通过检测放射性碳的计数变化来检测淀粉酶活性。
这些方法都有其优缺点，选择其中一种方法需要根据实验需求和条件来确定，如实验灵敏度、试剂成本、操作难度等因素。
碘-淀粉比色法测定淀粉酶
(七)注意事项
• 底物溶液中不应有游离酚，如有酚则 空白管显红色，说明磷酸苯二钠开始 分解，应弃去不用。
• 铁氰化钾溶液应避光保存，出现蓝绿 色应废弃。 • 加入铁氰化钾溶液后必须立即混匀， 否则显色不完全。
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碘液
(二)试剂
• 淀粉溶液（0.4g/L） • 碘应用液
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(三)操作
加入物
缓冲淀粉溶液(37℃预温) 空白管 0.5 — 0.5 3.1 测定管 0.5 0.1 0.5 3.0
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稀释血清
混匀，置37℃水浴准确15min
碘应用液
蒸馏水
混匀，蒸馏水调零，波长660nm，比色。
(四)单位定义
100ml血清中的淀粉酶，在37℃, 15min水解淀粉5mg为1个单位。
• 检测量
900个检验结果/小时
• 检测项目及种类（共33项）
电解质、急诊项目、普通生化、特殊生化、免 疫、蛋白、药物检测、毒品检测
• 检测样品种类
血清、血浆、尿液、脑脊液
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(四)单位定义
100ml血清在37℃与底物作用15min, 产生1mg酚为1个金氏单位。
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(五)参考值
• 成人 3-13金氏单位
(七)临床意义
• 升高
——急性胰腺炎、流行性腮腺炎； ——急性胆囊炎、肠梗阻、胰腺癌、胆石 症、溃疡病穿孔及吗啡注射后。
• 降低
——肝炎、肝硬化、肝癌； ——肾功能障碍。
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急性胰腺炎时血、尿淀粉酶升高的不同表现
开始升高时间 高峰时间 恢复时间 血清 尿液 8-12h 12-24h 12-24h 5-7d 2-5d 1-2w
• 儿童
5-28金氏单位
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淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉比色法)
简介：
淀粉酶(Amylase ，AMS)又称1，4-α-D-葡聚糖水解酶，是水解淀粉和糖原的酶类总称。
淀粉酶测定方法主要分为天然淀粉底物方法和确定底物方法，前者的方法有碘-淀粉法，后者有以麦戊糖底物的方法，以4-NP-G 为底物的方法。
Leagene 淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉比色法)其检测原理是血清或血浆等样本中α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等，碘液与未被水解的淀粉结合，生成蓝色复合。
该试剂盒通过分光光度计检测660nm 处吸光度值，可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的淀粉酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 KI 工作液： 4℃避光可保存一个月。
2、 准备样品：
① 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离
心取上清，-80℃冻存，用于AMS 的检测。
② 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备，用生理盐水10倍稀释后，
可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。
③ 高活性样品：如果样品中含有较高活性的AMS ，可以使用生理盐水或PBS 等进行
稀释，也可以采用ALP Assay buffer 稀释。
④ 样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算
单位蛋白重量组织或细胞内的AMS 含量。
3、 AMS 检测：按照下表设置空白管、测定管、待测样本，溶液应按照顺序依次加入，并
注意避免产生气泡。
如果样品中的淀粉酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
样品的检测最好能设置平行孔。
如果使用分光光度计，反应体系设置如下：
编号 名称
TE0203 100T TE0203 200T Storage
试剂(A): AMS Assay buffer 50ml 100ml 4℃ 试剂(B): KI Solution 5ml
10ml 4℃ 避光
使用说明书
1份
测定管空白管AMS Assay buffer 0.5ml 0.5ml
孵育5min。
待测样本0.1ml —
混匀，置于水浴，准确孵育7.5min。
KI工作液0.5ml 0.5ml
蒸馏水 3.0ml 3.1ml
如果使用酶标仪，反应体系设置如下：
测定管空白管AMS Assay buffer 37.5μl 37.5μl
孵育5min。
待测样本3μl —
混匀，置于水浴，准确孵育7.5min。
KI工作液37.5μl 37.5μl
蒸馏水225μl 228μl
4、轻轻混匀，分光光度计或酶标仪检测660nm处吸光度，分光光度计比色杯光径1.0cm，
蒸馏水调零，读取各管吸光度值(即A测定和A空白)。
一般应数小时内检测完毕。
计算结果：
液体样本AMS活力(U/dl)=(A空白-A测定)/A空白×80×稀释倍数
组织AMS活力(U/mg)=(A空白-A测定)/A空白×80/{取样量(0.1ml)×待测样本蛋白浓度mg/ml}
参考区间(37℃，健康人)：
血清淀粉酶活性：80～180U/dl
尿液淀粉酶活性：100～1200U/dl
注意事项：
1、本试剂盒亦可用酶标仪进行检测，但检测的样本数相应增多。
2、待测样品中不能含有AMS抑制剂，同时需避免反复冻融。
3、本试剂盒亦适用于其他样品的AMS测定，尿液检测应先作20倍稀释后测定。
4、AMS Assay buffer如果出现浑浊或絮状物，应弃用。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。