04碘淀粉比色法测定唾液淀粉酶
唾液淀粉酶活性的测定
2、pH对酶活性的影响：取4支试管，分别加入0.4％盐酸、0.1％乳酸、蒸馏水与1％碳酸钠各2mL，再向以上四支试管中各加2mL1％淀粉溶液及2mL淀粉酶试剂，在沸水浴中加热，根据生成红棕色沉淀的多少，说明淀粉水解的强弱。
3、温度对酶活性的影响：取3支试管，各加3mL1％淀粉溶液；另取3支试管，各加1mL淀粉酶液。将此6支试管分为3组，每组中盛淀粉溶液与淀粉酶液的试管各1支，三组试管分别置于0°C、37°C与70°C的水浴中。5分钟后，将各组中的淀粉溶液倒入淀粉酶液中，继续维持原温度条件5min后，立即加2滴碘液，观察溶液颜色的变化。根据观察结果说明温度对酶活性的影响。
（四）操作步骤
1、淀粉酶活性的检测：取一只试管，注入1％淀粉溶液5mL与稀释的唾液0.5-2mL。混匀后插入1支玻璃棒，将试管连同玻璃棒置于37°C水浴中。不是的用玻璃棒从试管中取出1滴溶液，滴加在白磁板上，随即滴加1滴碘液，观察溶液呈现的颜色。此实验延续至溶液仅表现碘被稀释后的微黄色为止。记录淀粉在水解过程中，遇碘后溶液颜色的变化。
低浓度的Cl-离子能增加淀粉酶的活性，是它的激活剂。Cu2+等金属离子能降低该酶的活性，是它的抑制剂。
（三）器材及试剂
1、器材：试管、酒精灯、烧杯、恒温水浴锅、量筒、冰浴、玻璃棒、试管夹、白磁板、试管架、铁三脚架、唾液淀粉酶
2、试剂：1％淀粉溶液、碘液、班氏试剂、0.4％HCl溶液、0.1％的乳酸溶液、1％NaCl溶液、1％CuSO4溶液、0.1％淀粉溶液
3.温度对酶的影响：1号显紫红色，2号为淡黄色，3号为深蓝色。当温度为0度时，蛋白质分子的热运动减慢，即酶分子的活性受到了抑制，使酶的活性降低了，淀粉分解减慢，生成紫红色的糊精；2号处于37度，接近人体温度，酶的活化性能较高，淀粉被分解成麦芽糖和葡萄糖就越快，所以是淡黄色，而当温度为70度时，由于酶是蛋白质，遇到高温时会失活，所以淀粉没有被分解。
碘比色法测定淀粉含量
碘比色法测定淀粉含量
碘比色法是一种常用的测定淀粉含量的方法。
淀粉与碘形成复合物时，会呈现深蓝色的颜色，根据颜色的深浅可以推测淀粉的含量。
测定步骤如下：
1. 准备样品：将待测的样品（如食物、植物组织等）制成适当的浓度，使其能够被较为准确地测定。
2. 提取淀粉：采用热酸提取法或酶解法将样品中的淀粉提取出来。
其中热酸提取法是将样品加入盐酸或硫酸中，加热至淀粉糊状后进行提取。
酶解法则是使用淀粉酶将样品中的淀粉分解为葡萄糖后进行提取。
3. 碘溶液制备：制备适量的碘溶液，一般是用碘酸钾和碘化钾制备。
4. 反应：将提取的淀粉溶液与碘溶液混合，等反应一段时间后，观察溶液的颜色变化。
颜色越深，说明淀粉含量越高。
5. 分光光度计测定：使用分光光度计，将混合溶液置于光管中，通过比较混合溶液的吸光度与已知浓度淀粉溶液的吸光度，可以得出待测样品中淀粉的含量。
需要注意的是，测定淀粉含量时需保证操作准确，并根据测定
的样品选择适当的提取方法。
此外，测定时要排除其他物质对测定结果的干扰，如物质的颜色、光散射等。
唾液淀粉酶最适pH的测定
唾液淀粉酶最适pH的测定【摘要】酶是具有高效催化能力的生物大分子物质,底物浓度相同时,酶的催化活性主要受温度、pH值等因素影响。
温度一定时,酶活力最高时的pH值为该酶在该温度的最适pH。
在不同pH值下,通过测定淀粉酶水解底物的程度,测定唾液淀粉酶的最适pH值。
在不同pH条件下,淀粉被唾液淀粉酶水解,与碘液反应呈现颜色反应,通过对颜色的观察和分光光度计测量产物吸光值的大小,可知底物的反应程度,从而可以判断出唾液淀粉酶的最适pH。
Enzymes are highly efficient catalytic ability of biological macromolecular material, phase at the same time, initial concentration of enzyme catalytic activity was mainly affected by factors such as temperature, pH value. At a certain temperature, the highest enzyme activity of enzyme in the pH value of the temperature of the optimum pH.Under different pH, by measuring the degree of hydrolysis enzyme substrates, determination of salivary amylase optimum pH value. Under the condition of different pH, starch is saliva amylase hydrolysis, and iodine liquid reaction to colors, through the observation of the color and the size of the spectrophotometer absorbance value measurement products, shows the reaction degree of substrates, which can determine the optimal pH of salivary amylase.【关键词】唾液淀粉酶、最适pH、碘-淀粉比色法【引言】新陈代谢是生命活动的基础。
淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉比色法)
淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉比色法)简介：淀粉酶(Amylase ，AMS)又称1，4-α-D-葡聚糖水解酶，是水解淀粉和糖原的酶类总称。
淀粉酶测定方法主要分为天然淀粉底物方法和确定底物方法，前者的方法有碘-淀粉法，后者有以麦戊糖底物的方法，以4-NP-G 为底物的方法。
Leagene 淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉比色法)其检测原理是血清或血浆等样本中α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等，碘液与未被水解的淀粉结合，生成蓝色复合物，其蓝色深浅与未经酶促反应的空白管比较，可计算出淀粉酶的活力单位。
该试剂盒通过分光光度计检测吸光度值，可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的淀粉酶活性。
如果采用酶标仪检测，则检测的样本数较多，100T 的比色法检测试剂盒可以检测。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 比色杯或96孔板2、 生理盐水3、 蒸馏水4、 分光光度计或酶标仪操作步骤(仅供参考)：1、 KI 工作液：取出KI Solution 恢复至室温，KI Solution ：蒸馏水混匀，即为KI 工作液。
4℃避光可保存一个月。
2、 准备样品：① 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，冻存，用于AMS 的检测。
② 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备，用生理盐水稀释后，可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消编号 名称TE0203 100T TE0203 200T Storage试剂(A): AMS Assay buffer 50ml 100ml 4℃ 试剂(B): KI Solution 5ml10ml 4℃ 避光使用说明书1份除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。
③高活性样品：如果样品中含有较高活性的AMS，可以使用生理盐水或PBS等进行稀释，也可以采用ALP Assay buffer稀释。
淀粉酶活力测定的方法
淀粉酶活力测定的方法
淀粉酶活力测定的方法主要有以下几种：
1. 碘液法：在含有淀粉的溶液中加入淀粉酶，然后加入碘液，根据溶液的颜色变化来判断淀粉酶的活力。
如果淀粉在溶液中完全降解，溶液的颜色将由深蓝色变为无色。
2. 比色法：淀粉酶活力的测定也可以采用比色法。
将含有淀粉的溶液加入淀粉酶，然后在一定时间内加入染色剂，比如碘液或酚酞溶液，根据溶液的吸光度或颜色的变化来测定淀粉的降解程度。
3. 尿液淀粉酶活力法：这种方法适用于测定淀粉酶在尿液中的活力。
将尿液样品加入含有淀粉的溶液中，然后通过碘液法或比色法测定淀粉的降解程度，从而计算出淀粉酶的活力。
以上方法为常见的淀粉酶活力测定方法，具体选择哪种方法应根据实验需求和设备条件进行决定。
实验4 pH值对唾液淀粉酶活性的
实验步骤
取三支试管按下表操作：
加入物(ml)
1
2
3
1%淀粉溶液
PＨ5.7缓冲液 PH6.8缓冲液 PH8.0缓冲液
3
1 0 0
3
0 1 0
3
0 0 1
摇匀后37℃恒温水浴中保温5分钟
稀唾液 2 2 2
• 将上面各管摇匀后放入37℃恒温水浴中保
温。放置10分钟后取出，分别向各管加入
稀碘液 1、葡萄糖标准曲线的制定 • 取8支试管编号，按下表操作：
0 试剂处理 试管编号 葡萄糖标准液/ml — 1 0.2 2 0.4 3 0.6 4 0.8 5 1.0 6 1.2 7 1.4
蒸馏水/ml
2.0 2
1.8 2
1.6 2
1.4 2
1.2 2
1.0 2
0.8 2
0.6 2
实验6 唾液淀粉酶的活性测定
实验目的： 1. 学习酶活力，酶活力单位，比活力的测定， 加深对概念的理解； 2. 学会用3,5-二硝基水杨酸测定还原糖的含量
实验原理：
• 在最适条件下，每分钟催化单位量的底物转化为产物所 需的酶量定义为一个活力单位。 • 酶的比活力：用每mg蛋白质酶活力单位数表示，表示 酶的纯度。每隔一段时间测定一次水解的横渡一浓度为 纵坐标，时间为横坐标作图，在图上找出开始部分线形 好的部分求出斜率。进而求出酶的活力与比活力。 • 3,5----二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色 的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的 颜色强度呈现比例关系，利用比色法可测知样品的含糖 量。该方法是半微量测糖法，操作简便，快速，杂质干 扰较小。
pH对酶促反应的影响。
实验5 温度对酶促反应的影响
唾液淀粉酶实验报告
唾液淀粉酶实验报告唾液淀粉酶实验报告引言：唾液淀粉酶是一种消化酶，能够将淀粉分解成较小的分子，为消化系统提供能量。
本实验旨在探究唾液淀粉酶的活性及其受到的影响因素。
实验材料与方法：实验材料：1. 淀粉溶液2. 唾液样本3. 碘液4. 试管5. 恒温水浴6. 酒精灯7. 显微镜8. 盖玻片实验方法：1. 取一定量的淀粉溶液倒入试管中。
2. 加入一滴碘液，观察试管中溶液颜色的变化，记录下颜色。
3. 将一定量的唾液样本加入另一个试管中。
4. 将两个试管放入恒温水浴中，保持温度恒定。
5. 同时开始计时，每隔一分钟，分别取出两个试管中的溶液滴在盖玻片上。
6. 用显微镜观察滴在盖玻片上的溶液，记录下观察结果。
7. 重复以上步骤，分别在不同温度和不同pH值条件下进行实验。
实验结果及讨论：在初始状态下，淀粉溶液的颜色为深蓝色，加入碘液后，颜色变为紫黑色。
这是因为碘液与淀粉反应生成了淀粉碘复合物，导致颜色变化。
在观察唾液淀粉酶活性的实验中，我们发现随着时间的推移，滴在盖玻片上的溶液逐渐变浅，最终变为无色。
这说明唾液淀粉酶能够将淀粉分解成较小的分子，从而使溶液中的淀粉含量减少。
在不同温度下的实验中，我们发现唾液淀粉酶的活性受到温度的影响。
当温度较低时，唾液淀粉酶的活性较低，反应速率较慢；而当温度较高时，唾液淀粉酶的活性较高，反应速率较快。
这是因为温度能够影响酶的构象和分子振动，从而影响酶的活性。
在不同pH值条件下的实验中，我们发现唾液淀粉酶的活性也受到pH值的影响。
在中性条件下，唾液淀粉酶的活性最高；而在酸性或碱性条件下，唾液淀粉酶的活性较低。
这是因为酶的活性受到pH值的影响，过高或过低的pH值会破坏酶的构象，从而降低酶的活性。
结论：通过本实验，我们得出了以下结论：1. 唾液淀粉酶能够将淀粉分解成较小的分子。
2. 唾液淀粉酶的活性受到温度的影响，温度越高，活性越高。
3. 唾液淀粉酶的活性受到pH值的影响，中性条件下活性最高。
唾液淀粉酶活性的测定
酶活性的因素很多，必须在适宜的条件下，才能发挥最佳催化作用；淀粉酶具有
高度专一性，其活性受温度、ｐＨ值、激活剂及抑制剂、酶浓度以及作用时间等多
种因素的影响；每个人产生唾液淀粉酶的量不同，活性强弱也有差异。
关键词：淀粉酶；活性；温度；抑制剂；激活剂；专一性
1
—
—
1％CuSO4（mL）
—
1
—
蒸馏水（mL）
—
—
1
淀粉酶液（mL）
1
1
1
0.1％淀粉溶液（mL）
3
3
3
（五）、实验结果与讨论
1.
加入班氏试剂后
2.PH值对酶活性影响：1号深红色，2号为红棕色，3号为砖红色，4号为偏蓝。因为PH＝1时，超出了淀粉酶有效PH范围，使得酶完全失活，淀粉没有被分解。2号是因为PH=5时，不是淀粉酶的最适范围。3号是因为PH＝7时，为淀粉酶分解的最适PH，淀粉被酶迅速分解生成麦芽糖和葡萄糖。而4号则是因为PH＝9超出了淀粉酶的适宜PH，活性受到或者是部分失活，使淀粉分解较慢。
3.温度对酶的影响：1号显紫红色，2号为淡黄色，3号为深蓝色。当温度为0度时，蛋白质分子的热运动减慢，即酶分子的活性受到了抑制，使酶的活性降低了，淀粉分解减慢，生成紫红色的糊精；2号处于37度，接近人体温度，酶的活化性能较高，淀粉被分解成麦芽糖和葡萄糖就越快，所以是淡黄色，而当温度为70度时，由于酶是蛋白质，遇到高温时会失活，所以淀粉没有被分解。
[8]石渊渊．生物化学实验指导[M].开封：河南大学出版社.
低浓度的Cl-离子能增加淀粉酶的活性，是它的激活剂。Cu2+等金属离子能降低该酶的活性，是它的抑制剂。
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碘-淀粉比色法测定唾液淀粉酶
一 实验目的
1、 掌握比色法测定a-淀粉酶的原理；
2、 掌握分光光度计的正确使用方法；
二 实验原理
1、比色法作为一种定量分析的方法，是以生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。
常用的比色法有两种：目视比色法和光电比色法，两种方法都是以朗伯-比尔定律 (A ＝εbc)为基础。
2、血清中α-淀粉酶催化淀粉分子中α-1，4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖及含有α-1，6糖苷键支链的糊精。
ａ-淀粉酶
淀粉 葡萄糖+麦芽糖+糊精
+
碘液 蓝色复合物
在底物过量的条件下，反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合成蓝色复合物，其蓝色的深浅与未经酶促反应的空白管比较，从而推算出淀粉酶的含量。
3、酶活力的大小、即酶量的多少用酶活力单位（U ）（active unit ）表示。
1961年国际生物化学学会酶学委员会提出采用统一的“国际单位”（IU ）来表示酶的活力，规定为：在最适条件（25℃）下，每分钟内催化1微摩尔（μmol ）底物转化为产物所需的酶量定为一个活力单位，即1IU = 1μmol /min 。
这样酶的含量就可用每克酶制剂或每毫升酶制剂含有多少酶活力单位来表示（U/g 或U/ml ）。
4、 计算公式：
A A 1.65100AMY A 55X
-=⨯⨯⨯空白管吸光度测试管吸光度空白管吸光度 其中，A A A -空白管吸光度测试管吸光度
空白管吸光度
代表测定管淀粉的大致水解程度，大小范围为0～l 。
当测定管淀粉未被水解时，其蛋白酶活性为0；当测定管淀粉被完全水解时，其值为1。
1.61515151100
X
⨯⨯⨯⨯中，5151100⨯⨯”为碘一淀粉比色法中淀粉酶活性的单位定义-100ml 唾液中的淀粉酶，在37度5min 水解淀粉5mg 为1个单位，1.6151X ⨯⨯表示实验的测试条件：X 代表稀释后的唾液量，稀释倍数根据个人的情况而定，若50倍稀释唾液0.1ml ，则唾液量为0.002ml ，反应时间为5分钟，1.6g/L 淀粉溶液1.0ml ，即淀粉量为1.6mg 。
1.61515151100
X ⨯⨯⨯⨯含义即为在实验条件下，
Xml 唾液中的淀粉酶在5分钟内水解1.6mg 淀粉，则其活性为32/X 个单位，再将其乘以水解程度，则整个公式代表了测定管淀粉酶的活性。
三 仪器与试剂
仪器：分光光度计及1cm 比色皿；吸量管；水浴锅；量筒；移液器等
试剂：1.6g/L淀粉溶液；蒸馏水；碘化钾-碘溶液
四实验步骤
1、溶液的配制：
（1）淀粉溶液的配制：称取80mg的可溶性淀粉，溶于50ml蒸馏水中，配成1.6g/L 的淀粉溶液；
（2）碘-碘化钾储备液：称取4g碘化钾及2g碘溶于100ml蒸馏水中，作为储备液；
2、取新鲜唾液，取0.1ml唾液进行稀释，稀释倍数根据个人情况而定；
3、唾液淀粉酶的测定：按下表所列在两支干净的比色管中分别加入1ml淀粉，37℃水浴5min后，在测试管中加入稀释的唾液0.1ml，充分混匀，37℃水浴5min后，分别加入0.5ml 的碘化钾—碘溶液，然后再分别在空白管和测试管中加入蒸馏水至刻度线25mL，混匀。
以波长660nm，蒸馏水调零，读取各管吸光度。
加入物（ml）空白管测定管淀粉溶液（37℃水浴5min） 1.0 1.0
稀释唾液0.1
混匀，置37℃水浴水浴5m i n 碘化钾—碘溶液0.5 0.5
蒸馏水加至25mL 加至25mL
五数据处理
六注意事项
1、缓冲淀粉溶液若出现混浊或絮状物，表示缓冲淀粉溶液受污染或变质，不能再用，应重新配制。
2、如测定管吸光度小于空白管吸光度一半时，应加大唾液稀释倍数或减少稀释唾液加入量，测定结果乘以稀释倍数
3、本法亦适用于其他体液淀粉的测定，如尿液、血清等。