食醋中多种氨基酸检测方法的研究——离子色谱法
离子色谱法测定复方氨基酸注射液(18AA)中阴离子含量
复方氨基酸注射液（18AA）是含有多种氨基酸的肠外营养制剂，属于营养用氨基酸注射液，用于各种应激状态和危重患者的营养支持，临床使用较广［1］。
复方氨基酸注射液引起的不良反应，涉及多个系统、器官，其临床表现复杂多样［2］，其中以静脉炎最普遍，其次为过敏性休克。
除使用方面的原因，静脉炎主要与药物中含山梨醇、电解质等多种成分相关，过敏性休克主要与药品在生产过程中混有其它杂质或其代谢产物及亚硫酸氢钠过敏［3,4］相关。
氯离子、亚硝酸根离子、磷酸根离子是水中常见的阴离子［5］，部分氨基酸结合醋酸根离子成盐，同时制剂过程中调节pH值时也可能引入部分醋酸根［6］，乙二胺四醋酸二钠常用于注射液金属离子络合，亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠用于注射液中作为抗氧剂，以上多种阴离子均有可能在制剂中存在，可能与用药引起的不良反应相关，为监控注射液用药安全，有必要进行检测监控。
离子色谱法需要样品量少，具有专属性、灵敏度、准确度、自动化程度高的优点，适合于分析阴离子、阳离子、有机酸、碱，特别适合分析各种离子，由于多数阴离子的紫外响应值较低，而本制剂中总离子强度较强，为减少解离，以氢氧根作为淋洗液。
本次实验建立离子色谱法同时测定多种阴离子含量的方法，用于测定不同来源复方氨基酸注射离子色谱法测定复方氨基酸注射液（18AA）中阴离子含量周敏，郭艳芳，王烜，程奇珍*江西省药品检验检测研究院，国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，南昌 330029［摘要］目的：建立以氢氧根作为淋洗液的离子色谱法测定复方氨基酸注射液（18AA）中8种阴离子含量的方法。
方法：使用Dionex ICS 1000离子谱仪，Dionex As11阴离子交换色谱柱（250 mm×4 mm），水-20 mmol/L氢氧化钠溶液为淋洗液，梯度洗脱，体积流量1.0 mL/min，柱温30 ℃，进样量20 μL，抑制型电导检测器，检测池温度35 ℃。
柱后衍生交换离子色谱法测定氨基酸组成
柱后衍生交换离子色谱法测定氨基酸组成
柱后衍生交换离子色谱法（Postcolumn Derivatization Ion Exchange Chromatography，PDIEC）是一种常用来测定氨基酸组成的分析方法。
该方法使用带有离子交换功能的柱进行色谱分离，将样品中的氨基酸分离开来。
在柱后，通过衍生化反应将氨基酸与某种试剂发生反应形成带有荧光或紫外可见吸收性质的产物，并通过检测这些产物的荧光或吸收信号来定量分析。
常用的衍生试剂有二硫染料（如二硫苏丹黑D、二硫苏丹红G 等）、芳香酮类（如二硫二羟甲基苯基乙酮，DABS-Cl）等。
这些试剂在与氨基酸发生反应后，会产生被吸收或荧光激发的物质，从而使氨基酸能够被检测到。
PDIEC方法具有高分离能力、高灵敏度和高选择性的优点，能够同时测定多种氨基酸，且对一些特定的氨基酸有较好的分析效果。
同时，该方法还能够测定非天然氨基酸和残基组成，对于生物样品的分析具有较高的应用价值。
总之，柱后衍生交换离子色谱法是一种常用的测定氨基酸组成的分析方法，可用于生物样品的分析和研究。
液相色谱串联质谱测定食醋中生物胺含量
食醋是我国重要的调味品，有两千多年的悠久历史。
酿造的地理环境、原料与工艺的差异，生产出具有不同风味的食醋。
酿造食醋的原料有大米、小麦、高粱、小米、麸皮、含糖分的果类等[1]。
在微生物氨基酸脱羧酶作用下将氨基酸脱羧生成生物胺，通过氨基化和转胺作用也能使醛和酮转化为生物胺[2]。
适量生物胺可促进人体的正常生理活动，但生物胺的浓度超过一定的限度会对人体产生严重的危害[3-4]，损伤人体的神经系统和心血管系统。
因此，建立快速简便地检测食醋中生物胺含量的方法，对保证食醋食用安全具有重要意义。
由于生物胺分子中缺少发色基团，无紫外吸收、也无荧光及电化学活性，因此，分离及测定各类生物胺的含量存在一定的困难。
目前，检测生物胺的方法主要为衍生化-高效液相色谱（high performance liquid chromatography ，HPLC ）[5-7]法。
也有用生物传感器法[8]、毛细管电泳法[9]、薄层色谱法[10]等测定食品中生物胺。
唐晗等[11]利用化学发光传感器检测食品中生物胺含量。
刘方震[12]利用毛细管电泳技术检测尿样、酱油等样品中的生物胺，分离速度快、效能高并且消耗样品量极少，但选择性差。
李燕君[13]改良了传统的薄层色谱检测方法并成功定性、定量检测黄酒中生物胺的含量。
黄祖新[14]采用高效液相色谱法检测了福建红曲醋中各生物胺含量。
瞿凤梅等[15]采用丹磺酰氯衍生化结合HPLC 的方法检测泡菜中的生物胺含量。
HPLC 方法是常用的检测方法，但需要进行柱前或柱后衍生，具有反应条件苛刻、衍生产物不稳定及前处理耗时较长等不足。
本研究采用液相色谱-串联质谱（liquid chromatography tandem mass spectrometry ，LC-MS/MS ）法测定食醋中多种生物胺的含量，为食醋企业提供可靠数据，以期控制食醋生产过程中生物胺的产生，保证食醋的安全。
1材料与方法1.1材料与试剂食醋样品均购买于许昌市时代广场，样品1，老陈醋（山西）；样品2，黑米醋（广东）；样品3，老陈醋（山西）；样品4，老陈醋（江苏）；样品5，香醋（上海）；样品6，老陈醋（山西）；液相色谱-串联质谱测定食醋中生物胺含量魏泉增1，2，汤雅1，李伟民1，2（1.许昌学院食品与生物工程学院，河南许昌461000；2.河南省食品安全生物标识快检技术重点实验室，河南许昌461000）摘要：为了检测食醋中生物胺，建立了液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS ）的检测方法，检测食醋中精胺、亚精胺、尸胺、腐胺、组胺、酪胺、色胺7种生物胺。
食醋中氨基酸的测定
内容提要
酸碱滴定法（甲醛法） 光学分析法（茚三酮比色法） 分离—电化学检测法 三种分析方法的比较
三种分析方法的比较
甲醛法
• 常量测定，简便； 不能分离多种氨基 酸，受色素影响
茚三酮 比色法
• 国标法 —— 全面、灵敏、简单、 迅速
• 荧光猝灭法 —— 灵敏度高；不能分 离多种氨基酸
分离-电化学 测定
内容提要
酸碱滴定法（甲醛法） 光学分析法（茚三酮比色法） 分离—电化学检测法 三种分析方法的比较
分离—电化学检测法
高效液相色谱--电化学检测法（HPLC-EC）
基本思路：
高效阴离子交换色谱分离 脉冲安培检测法检测
检出限和回收率：
常见的氨基酸检出限：1.7~20.0μg/L之间； 回收率：84％~108％；
谢谢！
Thanks for your attention！
19
酸碱滴定法（甲醛法）
氨基酸：
H2N
HO R C C O-
NH3+
COOH
H
R HO
R C C OH HCHO NH2 H R C COOH N CH2
NaOH
H R C COONa
N CH2
等当点的pH值约为8. 5~9. 5 指示剂：间甲酚紫 终点呈红色
优缺点
优点：
简单易行
缺点：
食醋中色素的干扰，终点时溶液的红色很难确定，滴 定终点灵敏度差，误差也大；
食醋中主要成分是醋 酸，含有少量有机酸和氨 基酸。食醋中的氨基酸能 使食醋鲜味柔和，色泽鲜 艳、气味醇厚。在食醋的 生产中，测定其中的氨基 酸含量对生产和质量监控、 新产品的研制开发具有 十分重要的意义。
内容提要
醋酸成分测定与分析
食醋成分分析俞中锋，陈以满，霍东娟，朱吉氨基酸成分的测定采用高效阴离子交换色谱及脉冲安培检测法分离并测定了食醋中多种氨基酸。
用不同比例的氢氧化钠溶液、乙酸钠溶液及水组成的混合溶液作为淋洗液，以梯度淋洗方式将分离柱上的氨基酸先后洗脱并测定。
用提出的方法分析了4种不同品牌的食醋样品，共测得18种氨基酸，此方法毋需柱前或柱后衍生化操作，对18种氨基酸的检出限在1．7"---20.0,ug/L范围内。
根据测定每种氨基酸中所得保留时间值算得的相对标准偏差(竹一6)均小于1.2％，作标准加入法测定了各氨基酸的回收率，其值在84％～108％之间。
1试验部分1．1仪器与试剂Dionex ICS 2500 BioLC离子色谱装置，包括GSS0四元梯度泵，LC30柱温箱(30℃)，AS50自动进样器(25 pL进样)，ED50A电化学检测器。
Chromeleon 6．5色谱工作站。
氨基酸标准(生化级)储备液均为0．01 mg，为防止微生物生长，用20 mg叠氮化钠溶液稀释配制工作溶液。
氢氧化钠溶液：用球状的氢氧化钠加水配成浓度为19．3 tool·L_1溶液，静置24 h后，取13．1 mL用水稀释至l L，配成浓度为250 mmol·L-1溶液。
乙酸钠溶液：1 mol/L，称取乙酸钠820 g，用水溶解后稀释到l L，用0．20m尼龙滤膜过滤。
水为去离子水。
为防止淋洗液(氢氧化钠溶液和乙酸钠溶液的混合溶液)吸收空气中二氧化碳，淋洗液瓶上方需要施加大约40～50 kPa的氮气进行保护。
1．2分析条件色谱柱：AminoPac PAl0分析柱(250 mm×2 mm)和保护柱(40 mm×2 ram)。
定量环体积25肛L，柱温箱温度设为30℃。
淋洗液由去离子水、250 mmol·L-1氢氧化钠溶液和l mol·L叫乙酸钠溶液按照一定的梯度程序混合得到(表1)，流速0.25 mL/min。
实验题目食用白醋中hac含量的测定
实验题目食用白醋中H A c含量的测定-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN实验题目食用白醋中HAc含量的测定一、实验目的：1、了解基准物质邻苯二甲酸氢钾的性质及其应用。
2、掌握滴定管、容量瓶、移液管的使用方法和滴定操作技术。
3、掌握NaOH标准溶液的配制、标定及保存要点。
4、掌握强碱滴定弱酸的过程、突跃范围及指示剂的选择原则。
二、实验原理食用白醋中醋酸含量大约在30~50mg.mL-1。
醋酸为有机弱酸（Ka=1.8×10-5），为了测定白醋中醋酸含量，通常标定好的标准NaOH与白醋直接反应，实际反应式为： HAc+NaOH=NaAc+H2O 反应产物NaAc为一元弱碱，滴定突跃在碱性范围内，可选用酚酞指示剂来指示滴定终点。
终点为NaOH滴定至溶液呈浅红色30秒钟不消失即为终点。
根据消耗NaOH溶液的体积即可求得醋酸的含量。
三、仪器及试剂：食用白醋，0.1 mol·dm-3NaOH标准溶液，邻苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4)，酚酞，碱式滴定管，烧杯，锥形瓶，电子天平，量筒，干燥器，铁架台。
四、实验步骤：（一）标定NaOH1、计算邻苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4)的称量范围；（0.4~0.6g）2、用“差重法”准确称取称量范围的邻苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4)于洁净的锥形瓶中；3、在锥形瓶中加入约30ml纯水，在温水浴中加热，摇动使之完全溶解，并滴加2～3滴酚酞；4、用50 cm3的碱式滴定管装入标准氢氧化钠，调节好刻度，记下初读数后，左手控制玻璃珠子，右手摇动锥形瓶使锥形瓶中液体作圆周运动，控制好滴速，当无色—变为浅红色（30秒不褪）（即为滴定终点），停止滴定，取下滴定管，正确读数（终读数）并记下读数，读数结果小数点后保留两位。
5、再分别称取称量范围的邻苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4)于洁净的锥形瓶中，按上述方法重复两次。
（二）食用白醋中HAc含量的测定1、用25mL移液管准确移取食用白醋25.00mL置于250mL容量瓶中，用蒸馏水稀释，并配制成250mL溶液。
食醋中总酸量和氨基酸态氮含量测定方法的比较
食醋中总酸量和氨基酸态氮含量测定方法的比较食醋中总酸量和氨基酸态氮含量是衡量食醋质量的重要指标，也是用于区分不同类型食醋的依据。
目前，主要通过测定方法来测定食醋中总酸量和氨基酸态氮含量，其中最常用的是高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS/MS）技术和氨基酸含量分析仪（AAA）技术。
本文就这两种技术在测定食醋中总酸量和氨基酸态氮含量等方面的优缺点进行比较，以期为食醋质量控制提供参考依据。
首先，针对高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS/MS）技术，它具有准确度高、分析时间短、重复性好等特点，可以快速、准确地测定食醋中总酸量和氨基酸态氮含量。
此外，它还具有检测灵敏度高的特点，可以实现低浓度物质的检测和分析，并且能够实现大规模的批量测定，便于对大量样品进行分析。
然而，HPLC-MS/MS技术也存在一定的不足。
首先，它的设备成本较高，使得普通实验室无法负担；其次，它要求操作人员具备较高的技术能力，而且操作复杂，对操作人员的要求较高；此外，该技术需要消耗大量的实验时间，且测试结果不易解释。
另一方面，氨基酸含量分析仪（AAA）技术也是一种常用的食醋中总酸量和氨基酸态氮含量测定方法。
相比于HPLC-MS/MS技术，AAA技术具有操作简单、设备成本低、测试时间短等优点，可以准确、快速地测定食醋中总酸量和氨基酸态氮含量。
此外，它还可以实现连续检测，可以实现大量样品的快速测定，提高了实验效率。
但是，AAA技术也存在一定的不足。
首先，它的灵敏度较低，无法检测低浓度物质；其次，它的重复性较差，测试结果的差异性较大；此外，该技术的精密度也较低，容易产生误差。
总之，HPLC-MS/MS技术和AAA技术都有自身的优缺点，在测定食醋中总酸量和氨基酸态氮含量方面，应根据实际情况灵活选择，以满足食醋质量控制的要求。
食用白醋中总酸量和氨基酸含量（氮）醋酸浓度HAc浓度测定
食用白醋中总酸量和氨基酸含量(氮) 醋酸浓度 HAc浓度测定食用白醋中HAc 浓度的测定一、实验原理醋酸为有机弱酸(Ka=1.8 10 5)，与NaOH反应式为HAc + NaOH-----NaAc + H20反应产物为弱酸强碱盐，滴定突跃在碱性范围内，可选用酚酞等碱性范围变色的指示剂。
食用白醋中醋酸含量大约在30～50 mg mL-1。
二、主要试剂和仪器1. NaOH溶液 0.1mol L 1用烧杯在粗天平上称取4g固体NaOH，加人新鲜的或煮沸除去CO2的蒸馏水，溶解完全后，转入带橡皮塞的试剂瓶中，加水稀释至1 L，充分摇匀。
2.酚酞指示剂 2g L 1 乙醇溶液。
3.邻苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4)基准物质在100～125℃干燥1 h后，置于干燥器中备用。
三、实验步骤1.0.1 m01 L 1 NaOH标准溶液浓度的标定在称量瓶中以差减法称量KHC8H4O4 3份，每份0.4～0. 6g，分别倒入250 mL 锥形瓶中，加入40～50mL蒸馏水，待试剂完全溶解后，加入2～3滴酚酞指示剂，用待标定的NaOH溶液滴定至呈微红色并保持半分钟即为终点，计算NaOH 溶液的浓度和各次标定结果的相对偏差。
2.食用白醋含量的测定准确移取食用白醋25.00mL置于250 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度、摇匀。
用50 mL之一，其主要成分除醋酸外，也有较高含量的有机酸和氨基酸，因此有一定的营养价值。
除此之外，现代医学认为，食用白醋对治病养生，消除疲劳，调节血液酸碱平衡，帮助消化，抗衰老等方面有作用。
此外，过多的食用含酸量高的醋对胃病患者有危害作用。
由此看来，白醋的质量安全与人们的日常生活息息相关。
因此，测定食用白醋的成分和各自的含量，对评判白醋质量，保证人们身体健康，有很大的参考价值。
就目前来看，测定食用醋的总酸量，我们可以用标准NaOH溶液滴定，因为只要Ka 10-7的弱酸都可以用NaOH溶液滴定，反应如下：NaOH+ HAc=NaAc+H2OnNaOH+HnA=NanA+nH2O由于是强碱滴定弱酸，滴定突越在碱性范围内，终点的PH值在8.7左右，所以通常选用酚酞作指示剂，从而测得其总酸度。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
摘
要
采 用 离子 色谱 法对食 醋 中 １ ８种氨 基酸检 测 方 法进 行 了研 究。样 品前 处理 采 用蒸馏 法提 取 ，用强 阳
离子固相萃取柱 （ ｓ ｃ ｘ ）进行净化 ，优化 了仪器条件 、考察 了基体干扰 ，达到了食醋 中 １ ８ 种氨基酸全部分 离并 能 准确 定性 定 量 的 目的 。 该 方 法标 准 曲 线 线 性 相 关 系数 Ｒ ｚ ＞０ ． ９ ９ ９ ，方 法 回 收 率达 ＞８ ５ ％ ，Ｒ Ｓ Ｄ＜ ５ ． Ｏ ％，定性 定量 准确 ，重复 性好 ，精 密度 高。 关键 词 食 醋 ；１ ８ 种 氨基 酸检 测 ；离子 色谱 法
ａ ｍｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｉ ｄ ｉ ｎ Ｖ ｉ ｎ ｅ ｇ ａ ｒ － ＿ 一
Ｉ Ｏｎ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ
梁 宝 爱
（ 国家农副加工产 品及 白酒质量监督检验 中心 山西省食 品质 量安全监督检验研究院 ， 山西太原
食 品 工 程
ＦＯＯＤ ＥＮＧＩ ＮＥＥＲＩ ＮＧ
２ ０ １ ３年第 １ 期
３月 出版
食醋中多种氨基酸检测方法的研究——离子色谱法
Ｒｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ｏ ｆ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｏ ｎ ｍａ ｎ ｙ ｋ ｉ ｎ ｄ ｓ ｏ ｆ
ＬＩ ＡＩ ￣ ｆ Ｇ Ｂａ ｏ —ａ ｉ ‘
０ ３ ０ ０ １ ２ ）
（ Ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｆ ａ ｒ ｍ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｓ ａ ｎ ｄ ｌ ｉ ｑ ｕ ｏ ｒ ｑ ｕ ａ ｌ ｉ ｔ ｙ ｓ ｕ ｐ ｅ ｒ ｖ ｉ ｓ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｉ ｎ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ Ｓ ｈ ａ ｎ ｘ ｉ ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ ｆ ｏ ｏ ｄ ｓ ｍ ｆ ｑ ｕ Ｍ ｉ ￣ｓ ｕ ｐ ｅ ｒ ｖ ｉ ｓ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｉ ｎ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ， Ｓ ｈ ａ ｎ ｘ ｉ Ｔ ａ ｉ ｙ ｕ ａ ｎ ０ ３ ０ ０ １ ２ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
中图分 类号 ： Ｔ Ｓ ２ ６ １ ． ７
文 献标 识码 ： Ａ
文 章 编 ） Ｏ １ — ０ ０ ５ ０ — ０ ３
ｃ ｕ ｒ ｖ ｅ ｉ ｓ ａ ｂ ｏ ｖ ｅ ０． ９ ９９ 。ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ｙ ｒ ａ ｔ ｅ ｏ ｆ ｔ ｈ ｉ ｓ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｉ ｓ ｍｏ ｒ ｅ ｔ ｈａ ｎ ８ ５ ％． ＲＳ Ｄ ｉ ｓ ｌ ｅ ｓ ｓ ｔ ｈａ ｎ ５ ． ０％ ． Ｔｈ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｃ ａ ｎ ｂ ｅ ｕ ｓ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ ａ ｃ ｃ ｕ ｒ ａ ｔ ｅ ｑ ｕ ｌｉ ａ ｔ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ａ ｎ ｄ ｑ ｕ ｎｔ ａ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｍ ｉ ｒ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ， ａ ｎ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｈｉ ｇ ｈ ｒ ｅ ｐ ｒ ｏ ｄｕ ｃ ｉ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｎｄ ａ ｐ ｒ ｅ ｃ ｉ ｓ ｉ ｏ ｎ． Ｋｅ ｙｗｏｒ ｄｓ ｖ ｉ ｎ ｅ ｇ ｒ；ｄ ａ ｅ ｔ ｅ ｍ ｉ ｒ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ １ ８ ｋ ｉ ｎ ｄｓ ｏ ｆ ａ ｍｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｉ ｄｓ ；ｉ ｏ ｎ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｒａ ｇ ｐ ｈ ｙ