谷氨酰t-RNA还原酶基因(hemA)的高效表达

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某大学生物工程学院《生物化学》考试试卷(636)

某大学生物工程学院《生物化学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（95分，每题5分）1. 转氨酶催化的反应不可逆。

（）答案：错误解析：2. 在大肠杆菌里表达人组蛋白，可直接从人基因组中获取目的基因。

（）答案：正确解析：组蛋白基因不含内含子，因此可从基因组中直接获取它的基因。

3. 从低等的单细胞生物到高等的人类，能量的释放、储存和利用的主要形式均是ATP。

答案：正确解析：4. 嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸的生物合成过程相同，即先合成碱基再与磷酸核糖连接生成核苷酸。

（）答案：错误解析：5. DNA复制时，冈崎片段的合成需要RNA。

（）[山东大学2016研]答案：正确解析：冈崎片段的合成需要RNA引物。

6. DNA分子中没有修饰的C发生自发脱氨基引发突变的可能性比修饰后的5甲基胞嘧啶自发脱氨基引发突变的可能性低得多。

（）答案：正确解析：DNA分子中没有修饰的C发生自发脱氨基后转变为U，很容易被细胞内的BER系统识别和修复。

5甲基胞嘧啶自发脱氨基后转变为T，而T是DNA分子中正常的碱基，不容易被识别和修复，经过一轮复制以后，将导致CG碱基对突变为TA碱基对。

7. 若1个氨基酸有3个遗传密码，则这3个遗传密码的前两个核苷酸通常是相同的。

（）答案：正确解析：8. 具有时空表达特征的基因是奢侈基因。

（）[浙江大学2010研]答案：正确解析：奢侈基因是指不同类型细胞中特异性表达的基因，其产物赋予各种类型细胞特异的形态结构特征与功能。

9. 抑制磷酸果糖激酶可导致果糖6磷酸的积累。

（）答案：正确解析：10. 酰基载体蛋白（ACP）是饱和脂酸碳链延长途径中二碳单位的活化供体。

（）答案：错误解析：线粒体酶系、微粒体酶系与内质网酶系都能使短链饱和脂酸的碳链延长，每次延长两个碳原子。

病理学技术(主管技师)：分子生物学考试题(最新版).doc

病理学技术(主管技师)：分子生物学考试题（最新版）考试时间：120分钟考试总分：100分遵守考场纪律，维护知识尊严，杜绝违纪行为，确保考试结果公正。

1、单项选择题可以稳定已解开的DNA 单链的是（）A.单链DNA 结合蛋白 B.DNA 连接酶 C.pol 和pol D.pol E.解链酶本题答案：A 本题解析：真核生物的至少5种，分别为DNA 聚合酶α、β、γ、δ、ε，其中DNA 聚合酶γ存在于线粒体，其余都在细胞核。

DNA 聚合酶α和δ是复制中起主要作用的酶。

复制开始首先要从复制起始点解开一段双螺旋成单链，单链的稳定需要单链DNA 结合蛋白。

2、单项选择题基因表达中的诱导现象是指（）A.阻遏物的生成 B.细菌利用葡萄糖作碳源 C.细菌不用乳糖作碳源 D.由底物的存在引起代谢底物的酶的合成 E.细菌营养过剩本题答案：D 本题解析：底物作为诱导剂。

姓名：________________ 班级：________________ 学号：________________ --------------------密----------------------------------封 ----------------------------------------------线----------------------3、单项选择题组成核糖体的是（）A.tRNAB.mRNAC.hnRNAD.snRNAE.rRNA本题答案：E本题解析：动物细胞内主要含有mRNA、tRNA、rRNA三种核糖核酸。

其中mRNA含有遗传密码，作为蛋白质合成的模板；tRNA活化、转运氨基酸并识别mRNA上的密码，参与蛋白质的合成，其一级结构中含有较多的稀有碱基；rRNA与蛋白质组成核糖体作为蛋白质合成的场所。

hnRNA是mRNA的前体，在snRNA参与下剪接成成熟的mRNA。

4、单项选择题与5＇-IGC-3＇反密码子配对的密码子是（）A.5＇-GCU-3＇B.5＇-CCG-3＇C.5＇-CGC-3＇D.5＇-CCC-3＇E.5＇-GGC-3＇本题答案：A本题解析：密码子的第1、2碱基分别与反密码子的第3、2碱基配对，密码子的第3碱基与反密码子的第1碱基配对不严格，称”摆动配对”。

大肠杆菌hemA基因的高效表达及对5-氨基乙酰丙酸合成的影响

隆ｈｍｅＡ基因克隆到载体，构建表达载体ｐＴ８ —ｈｍ以探讨更佳的重组大肠杆菌ｈｍＥ２ａｅＡ，ｅＡ基因的表达效果。对其蛋白质进行纯化，测得发酵菌液上清液中５一ＡＡ含量达到４．ｇＬ并对上清提取液中卟啉类物质的积累Ｌ２５ｍ／；
维普资讯
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２０．— ６． —
江苏农业科学
２００７年第４期
大肠杆菌ｈｍｅＡ基因的高效表达及对５一氨基乙酰丙酸合成的影响
袁新宇，刘锦妮，王晶，杨琼，雪珍，姜发堂吴，杨明明＇
速酶，ｈｍ由ｅＡ基因编码。本试验在ｐＸ２ｈｒ．ｃｌＤ５￣ＥＴ０一ｅＡＥｏＨｃ表达载ｎｉ体的基础上，质粒ｐＸ２ｈｍ从ＥＴ０～ｅＡ克隆ｈｍｅＡ基因克隆到ｐＴ８表达载体上，建ｐＴ８Ｅ２ａ构Ｅ２ａ—ｈｍｅＡ
合成的反应步骤多、化率低，生产成本居高不转使
下，而且存在着比较严重的环境污染。因此近
大肠杆菌菌株ＥｏｉＨｃ由本实验室保存，．ｃｌＤ５￣大肠杆菌表达宿主Ｂ２１Ｄ３和表达载体ｐＴ８Ｉ（Ｅ）Ｅ２ａ
ＥｏｉＩ（Ｅ）达载体，其蛋白进行纯化。．ｃｌＢ２１Ｄ３表对并对发酵菌液中的５一ＡＡ、Ｌ卟啉类物质的积累量进行初步测定，探讨更佳的重组大肠杆菌ｈｍ以ｅＡ

谷氨酰t_RNA还原酶基因_hemA_的高效表达_李爽

中国生物工程杂志 Ch i n a B iotechnology ,2007,27(6):82~86谷氨酰t -RNA 还原酶基因(he mA )的高效表达李爽1李恒鑫1刘辉1袁新宇2,3杨明明1,3龚月生1*(1西北农林科技大学动物科技学院杨凌 712100 2湖北工业大学生物工程学院武汉 430068)(3武汉阳光广济医药开发有限公司武汉 430068)摘要枯草芽孢杆菌(Bacill u s s ubtilis )中的he mA 基因编码谷氨酰t R NA 还原酶,该酶是B.subtilis 代谢途径中由谷氨酸到5-氨基乙酰丙酸(5-ALA )反应的限速酶。

将B.subtilis 的he mA 基因克隆到pET28a 载体上,并在大肠杆菌(E scherich i a coli )BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE 电泳分析,表达的目的蛋白占总蛋白的20%。

通过分离纯化得到谷氨酰t R NA 还原酶。

重组菌发酵液上清中5-ALA 含量达40.2mg /L ,菌液呈红色,过筛试验和紫外分光光度检测验证显色物质为卟啉类,实验表明,表达的重组蛋白促进了5-ALA 的合成和代谢。

关键词枯草芽孢杆菌谷氨酰-t RNA 还原酶基因高效表达 5-ALA 中图分类号 Q812收稿日期:2007-01-01 修回日期:2007-03-16*通讯作者,电子信箱:gongyuesheng @sohu .co m5-氨基乙酰丙酸(5-a m i nolevui nic aci d ,5-ALA )是生物体内合成四吡咯类物质(血红素、细胞色素、维生素B 12等)的前体。

5-ALA 作为光动力药物,可以用来诊断治疗皮肤癌、食道癌等疾病。

在农业生产中可以作为除草剂、杀虫剂、壮苗剂、增产剂,还能提高植物的抗盐、抗冻能力[1~3]。

近些年国内外学者对其化学合成进行了大量研究,相比之下生物合成具有原料价廉易得,环境相容性好的特点[1,4],成为近几年研究热点。

重组谷氨酰胺转胺酶基因的原核表达研究

ＧｅｅｗｅｅａｏｌｗｓＰｉａｏｃｎｒｔｎ１０ｍｍｏ／ｎｒｓｆｌｏ：ＩＴＧｆｌｎｅｔａｉ．ｎｃｏｌＬ，ｒｔｔｏｐｅ５／ｎ，ｉｄｃｎｅｅａｕｅ３ｏａｉｎｓｅｄ２０ｒｍｉｎｕｉｇｔｍｐｒｔｒ７
ｌｉａｓ中进行克隆与表达［］上述研究的ＭＴｉｄｎｖ１．Ｇ
表达水平均很低，通过包涵体也难以达到工业生且产ＭＴ规模的要求．有文献报道［，过使用Ｇ另８通］Ｃｒｎｂｃｒｕｌｔｍｃｍ作为宿主系统高效的ｏｙｅａｔｉｍｇｕａｉｕｅ
ＡｂｔａｔＡｒｋｒｏｉｅｐｅｓｏｅｔｒＥ．ｏｉＢ１ｐｓｒｃｐｏａｙｔｃｘｒｓｉｎｖｃｏ — ｃｌＬ２／ＥＴ３ａＭＴＧ（０— ＤＥ３ｗａｏｓｒｃｅｎｈｆｅｔｆ）ｓｃｎｔｕｔｄａｄｔｅｅｆｃｓｏ
部分载体为诱导型启动子，ＬｃＴｃ，如ａ和ａ等此类型
载体可控制目的基因在菌体生长的某个阶段表达，既可避免生长前期蛋白高表达对菌体产生不利影
响，可避免蛋白酶对蛋白的降解．ｐＴ０又Ｅ３ａ与Ｅ．
关键词微生物谷氨酰胺转胺酶；组；因；达重基表
Ｒ３４３文献标识码Ａ文章编号１７ — ３１２Ｌ）４０３ — ５４．１６２４２（ＯＯ０ — ０２０

川大学-生物技术-综合实验报告-学生版

川⼤学-⽣物技术-综合实验报告-学⽣版⽣物技术综合实验⽢薯γ-⾕氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因的克隆和原核表达学⽣：学号：同实验者：<研究背景>⾕胱⽢肽(glutathione, GSH) GSH具有多种重要⽣理功能, 抗⾃由基和抗氧化应激作⽤, 保护细胞膜的完整性等。

γ-GCS是植物细胞中GSH⽣物合成的限速酶, 可以调控GSH的⽣物合成量。

GSH在⽣物体抵御冷害、⼲旱、重⾦属、真菌等胁迫过程中起着重要作⽤, 说明γ-GCS也与植物抗逆过程密切相关。

实验⼀⽢薯叶⽚RNA提取⼀、实验⽬的1. 了解真核⽣物RNA提取的原理；2. 掌握Trizol提取的⽅法和步骤。

⼆、实验原理Trizol?试剂是由苯酚和硫氰酸胍配制⽽成的单相的快速抽提总RNA的试剂，在匀浆和裂解过程中，能在破碎细胞、降解细胞其它成分的同时保持RNA的完整性。

TRIzol的主要成分是苯酚。

苯酚的主要作⽤是裂解细胞，使细胞中的蛋⽩，核酸物质解聚得到释放。

苯酚虽可有效地变性蛋⽩质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加⼊了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基⼄醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。

%的8－羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使⽤可增强抑制作⽤。

异硫氰酸胍属于解偶剂，是⼀类强⼒的蛋⽩质变性剂，可溶解蛋⽩质并使蛋⽩质⼆级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋⽩迅速与核酸分离。

β-巯基⼄醇的主要作⽤是破坏RNase蛋⽩质中的⼆硫键。

在氯仿抽提、离⼼分离后，RNA处于⽔相中，将⽔相转管后⽤异丙醇沉淀RNA。

⽤这种⽅法得到的总 RNA中蛋⽩质和DNA污染很少。

1.材料⽢薯（Ipomoea batatas Lam）叶⽚，品种为徐薯182. 试剂①⽆RNA酶灭菌⽔：加⼊%的DEPC，处理过夜后⾼压灭菌；② Trizol试剂；③氯仿；④异丙醇、75％⼄醇；⑤ TBE缓冲液；⑥上样缓冲液（6×）3. 仪器⾼压灭菌锅、微量移液器、台式离⼼机、超净⼯作台、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、塑料离⼼管、枪头和EP管架四、实验⽅法1. 将叶⽚取出放⼊研钵中，加⼊适量液氮，迅速研磨成粉末，每50-100 mg植物叶⽚加⼊1 mL Trizol试剂，室温放置5 min，使样品充分裂解；2. 每1 mL Trizol试剂加⼊200 µL氯仿，⽤⼿剧烈振荡混匀后室温放置3-5 min 使其⾃然分相；3. 4℃ 12,000 rpm 离⼼15 min，吸取上层⽔相转移到新管中；在上清中加⼊等体积冰冷的异丙醇，室温放置15 min；4. 4℃ 12,000 rpm 离⼼10 min，弃上清，RNA沉淀于管底；5. RNA沉淀中加⼊1 mL 75%的⼄醇（⽤RNase-free⽔配制），温和震荡离⼼管，悬浮沉淀；4℃ 8,000 rpm离⼼2 min，弃上清；6. 室温放置10 min晾⼲沉淀；7. 沉淀中加⼊20µL RNase-free ddH2O，轻弹管壁，以充分溶解RNA，-70℃保存；8. ⽤1%的琼脂糖凝胶电泳进⾏检测，⽤EB染⾊并照相。

高效转化谷氨酰胺合成L-茶氨酸的大肠杆菌菌株及其应用[发明专利]

专利名称：高效转化谷氨酰胺合成L－茶氨酸的大肠杆菌菌株及其应用
专利类型：发明专利
发明人：殷志敏,沈青红,吕志祥,王正才,傅珒,张正平
申请号：CN200910035096.4
申请日：20090915
公开号：CN101643712A
公开日：
20100210
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及微生物学领域，具体涉及一种生物转化合成茶氨酸的大肠杆菌菌株及其应用。

所说的高效转化L－谷氨酰胺和乙胺的大肠杆菌，是大肠杆菌(Escherichia coli)南师一号CCTCC No.M 209166。

该菌株高产茶氨酸合成酶，高效转化谷氨酰胺和乙胺为L－茶氨酸并在工业化生产过程中获得成功；对谷氨酰胺的转化超过80％。

申请人：南京师范大学,常州阿格罗生物科技有限公司
地址：210046 江苏省南京市亚东新城区文苑路1号
国籍：CN
代理机构：南京知识律师事务所
代理人：卢亚丽
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谷胺酰胺转氨酶的基因工程法制备流程

谷胺酰胺转氨酶的基因工程法制备流程下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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中图分类号Ｑ８１２
ＡＬＡ［，
。
谷氨酰ｔ－ＲＮＡ还原酶基因高效表达
５一ＡＬＡ
５一氨基乙酰丙酸（５－ａｍｉｎｏｌｅｖｕｉｎｉｃａｃｉｄ，５－ＡＬＡ）是生
本试验将Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ的ｈｅｍＡ基因克隆到载
大量研究，相比之下生物合成具有原料价廉易得，环境相容性好的特点【，引，成为近几年研究热点。５一ＡＬＡ生物合成有两条途径【，Ｃ４途径是由琥珀
体ｐＥＴ２８ａ上，电转化至Ｅｃｏｌｉ宿主ＢＬ２１（ＤＥ３），ＩＰＴＧ诱导后，实现了ｈｅｍＡ基因的高效表达，对其蛋白纯化，
Ｐｒｏｍｅｇａｏ
１．２酶和试剂限制性内切酶及Ｔ４ＤＮＡ连接酶，基因组ＤＮＡ提取试剂盒，质粒小量提取试剂盒，ＤＮＡ纯化回收试剂盒及ＰＣＲ纯化回收试剂盒购自Ｏｍｅｇａ公司；Ｎｉ一ＮＡＴ
酰ＣＯＡ和甘氨酸在限制性酶氨基乙酸合成酶（ＡＬＡｓ）催化下缩合生成５－ＡＬＡ。Ｃ５途径则以谷氨酸为前体，在谷氨酰ｔＲＮＡ合成酶，谷氨酰ｔＲＮＡ还原酶，谷氨酸一１醛转氨酶（ＧＳＡ — ＡＴａｓｅ）系列酶的催化下最终生成５－ＡＬＡ。从谷氨酸到５－ＡＬＡ的三步反应中，限速步骤为谷氨酰ｔＲＮＡ还原酶（ＨｅｍＡ）催化的谷氨酰ｔＲＮＡ还原为ＧＳＡ的反应。在生物体内两分子的５－ＡＬＡ由５一氨基乙酰丙酸脱水酶催化缩合生成胆色素原（ＰＢＧ），进而生成四吡咯尿卟啉原（Ｕｒｏｇｅｎ）ＩＩＩ，尿卟啉原ＩＩＩ则是生物体内所有四吡咯类物质的共同前体。Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ和Ｅｃｏｌｉ均采用Ｃ５途径合成５一
菌株Ｅ．ｃｏｌｉＤＩ－ｌＳｃｔ由本实验室保存，枯草芽孢杆
菌Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ１Ａ７４７由俄亥俄州立大学杆菌保藏中心（ＢＧＳＣ）惠赠。Ｅ．ｃｏｌｉ宿主ＢＬ２１（ＤＥ３）和载体ｐＥＴ２８ａ购自Ｎｏｖａｇｅ；克隆载体ｐＧＥＭ－ＴＶｅｃｔｏｒｓｙｓｔｅｍ购自
亲和层析树脂购自Ｎｏｖａｇｅ公司；ＩＰＴＧ购自华美公司；氨基乙酰丙酸盐标准品购自Ｓｉｇｍａ公司（ＳｉｍａｇＡ一
物体内合成四吡咯类物质（血红素、细胞色素、维生素Ｂ。２等）的前体。５一ＡＬＡ作为光动力药物，可以用来诊断治疗皮肤癌、食道癌等疾病。在农业生产中可以作为除草剂、杀虫剂、壮苗剂、增产剂，还能提高植物的抗盐、抗冻能力Ｊ。近些年国内外学者对其化学合成进行了
ＳＤＳ — ＰＡＧＥ电泳检测，并对发酵产生的５一ＡＬＡ、卟啉类物质定性定量，来探讨Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓｈｅｍＡ基因对Ｅ．ｃｏｌｉ
５－ＡＬＡ代谢途径的影响。粒
代谢途径中由谷氨酸到５一氨基乙酰丙酸（５一ＡＬＡ）反应的限速酶。将Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ的ｈｅｍＡ基因克隆
到ｐＥＴ２８ａ载体上，并在大肠杆茵（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）中诱导表达，ＳＤＳ — ＰＡＧＥ电泳分析，表达的目的蛋白占总蛋白的２０％。通过分离纯化得到谷氨酰ｔＲＮＡ还原酶。重组茵发酵液上清中５一ＡＬＡ含量达４ｏ．２ｍｇ／Ｌ，茵液呈红色，过筛试验和紫外分光光度检测验证显色物质为卟啉类，实验表明，表达的重组蛋白促进了５一ＡＬＡ的合成和代谢。关键词枯草芽孢杆茵
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中国生物工程杂志
ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（６）：８２— ８６
谷氨酰ｔ－ＲＮＡ还原酶基因【ｈｅｍＡ）的高效表达
李爽李恒鑫刘辉袁新宇
（１西北农林科技大学动物科技学院杨凌（３武汉阳光广济医药开发有限公司
杨明明
武汉４３００６８）
龚月生ｈ
武汉４３００６８）
７１２１００２湖北工业大学生物工程学院
摘要
枯草芽孢杆茵（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）中的ｈｅｍＡ基因编码谷氨酰ｔＲＮＡ还原酶，该酶是Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ