常用分子生物学试剂的选择-中文-
分子生物学实验室常用试剂配方
分子生物学实验室常用试剂配方：医药观察之我见2. 常用试剂配方（Prescriptions of Ordinary Reagents）（高媛）. (217)(1) PBS (217)(2) 胰酶Trypin (217)(3) Tris-NH4Cl (217)(4) Running buffer (218)(5) Washing buffer (218)(6) 湿转液 (218)(7) LB培养基 (218)(8) LB培养板 (218)PBS:PBS是磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline）一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用。
主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，由于Na2HPO4和KH2PO4它们有二级解离，缓冲的pH值范围很广；而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。
配置方法：NaCl : 320g 优级纯Na2HPO4. 12H2O 61.44gKCl 8gKH2PO4 8g三蒸水4L烧杯溶解后用HCl调PH为7.2-7.4，细胞用需要高温灭菌，放于超净台冷却，贴上封口膜及标签。
胰酶：Trypsin 一种胰蛋白酶，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上和培养皿壁结合处蛋白降解，使两者分离。
细胞消化胰酶常用工作浓度为0.25%，PH为7.2-7.4，储存液放在-20冻存，使用液放在4度。
Tris-NH4Cl :红细胞裂解液，是一种从人，鼠及其他哺乳动物等体内烦人组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液，应用低渗的原理，改变红细胞渗透压，使得红细胞胀大破裂。
配置方法：2L 体系：NH4Cl : 14.94g 溶于1800mL ddH2O 混匀HCl调节PH为7.2-7.4 过滤Tris : 5.15g 溶于200mL ddH2O3L体系NH4Cl : 22.41g 溶于2700mL ddH2O 混匀HCl调节PH为7.2-7.4 过滤Tris : 7.725g 溶于300mL ddH2ORunning buffer: 4L （5X）Tris: 60.6gGly: 288.3gSDS: 20gddH2O 3.78LWashing buffer: 4L (10X)Tris : 48.6gNaCl : 116.9gTween 20 : 40mLddH2O: 3.9L湿转液：4L (10X)Tris: 121.4gGly: 576.6gddH2O 3.57LLB液体培养基：名字来源于英语lysogeny broth 即溶菌肉汤，应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
分子生物学实验常用试剂、缓冲液的配制方法
实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、1M Tris-HCl□组份浓度1 M Tris-HCl（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L□配置方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
pH值浓HCl7.4 约70mL7.6 约60mL8.0 约42mL4. 将溶解定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl（pH8.8）□配制量1L□配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）□配制量1L□配置方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。
1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL500 mM EDTA（pH8.0）20mL2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
4、3 M 醋酸钠□组份浓度3 M 醋酸钠（pH5.2）□配制量100mL□配置方法1. 称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。
3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。
分子生物学实验常用试剂配制
分子生物学实验常用试剂配制分子生物学实验常用试剂配制(1) 0.01M PBS缓冲液：一袋粉制PBS缓冲液（中杉有售）加1000ml蒸馏水。
0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。
(2) 0.01M枸橼酸盐缓冲液：一袋粉制枸橼酸盐缓冲液（中杉有售）加1000ml蒸馏水。
0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠3g，柠檬酸0.4g。
(3)1mol/L的TBS缓冲液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl 调至pH8.0,加水至1000ml。
(4) 1‰DEPC水：1mlDEPC加入1000ml新鲜三蒸水中，剧烈震荡20分钟使充分混匀，37o C至少放置2h或过夜，HIRAYAMA HV-50高压灭菌器高温高压30分钟降解DEPC，4℃保存。
(5) 1%琼脂糖凝胶：取琼脂糖0.2g置烧杯中，加入20ml的1×TAE缓冲液，封闭锥形瓶口，放入微波炉内加热，不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液，待琼脂糖全部熔化后取出摇匀，冷却至60℃左右，加入10mg/ml溴化乙锭（EB）1μl，EB的终浓度为0.5μg/ ml，充分混匀。
将温热的凝胶倒入已经放好梳子的凝胶槽中，厚度约为3-5mm，注意不要有气泡，将凝胶放置室温待其自然凝固。
凝固后从胶槽中轻轻取出梳子。
(6)0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L NaOH调至pH8.0，加水至1000ml。
(7) 50×TAE缓冲液：Tris碱242g，17.4mol/L冰乙酸57.1ml，0.5mol/L EDTA (PH8.0)100ml加蒸馏水至1000ml。
分子生物学常用试剂的配制分子生物学常用试剂的配制LBLuria
分子生物学常用试剂的配制分子生物学常用试剂的配制1．LB(Luria-Bertani)培养液、平板的配制配制每升LB培养液，应在950ml去离子水中加入：细菌培养用酵母提取物（bacto-yeastextract）5g细菌培养用胰化蛋白胨（bacto-tryptone）10gNaCl 10g摇动容器直至溶质完全溶解，用5mol/LNaOH(约0.2ml)调节pH值至7.0，加入去离子水至总体积为1L，在15 1bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min。
LB 琼脂平板的配制：先按上述配方配制液体培养基，临高压灭菌前加入琼脂糖15g /L，同法高压蒸汽灭菌20min。
从高压灭菌器取出培养基时应轻轻旋动以使熔解的琼脂糖能均匀分布于整个培养基溶液中，应使培养基降温至50℃时，加入抗生素等不耐热的物质。
为避免产生气泡，混匀培养基时应采取旋动的方式，然后可直接从烧瓶中倾出培养基铺制平板。
90mm直径的培养皿约需30－50ml培养基，培养基完全凝结后，应倒置平皿并贮存于4℃备用。
2．琼脂糖凝胶的配制根据所需凝胶的浓度秤取琼脂糖，加入相应电泳缓冲液中，用微波炉加热煮沸至琼脂糖完全溶解，加入适量EB 混匀，适当冷却后倾入凝胶铸槽中，插入梳子，凝胶厚度不超过梳孔，如有气泡产生则用玻璃棒驱除，不能过早拔除梳子，应待凝胶完全凝结后才能拔除梳子。
3．P1、P2、P3的配制P1 的配制：在800ml 去离子水中溶入Tris 碱6.06g，Na2EDTA·2H2O 3.72g，用HCl 调整pH 至8.0，用去离子水调整容积至1升，每升P1内加入RNaseA100mg。
P2 的配制：在950ml 去离子水中溶入NaOH 8.0g，20％SDS 50ml，调整容积至1 升。
P3 的配制：在500ml 去离子水中溶入醋酸钾294.5g，用冰醋酸调整pH 值至5.5，用去离子水调整容积至1升。
分子生物学实验室常用试剂配方-ProbeGene2015(精)
分子生物学常用试剂配制与保存一 . 常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine :溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中,使终体积为 10ml 。
分装成小份贮存于 -20℃。
1mol/L精胺(Spermine :溶解 3.48g 精胺于足量的水中,使终体积为 10ml 。
分装成小份贮存于 -20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate:将 77.1g 乙酸胺溶解于水中,加水定容至 1L 后,用 0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白 (BSA :加 100mg 的牛血清蛋白 (组分 V 或分子生物学试剂级,无 DNA 酶于 9.5ml 水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白,盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到 10ml ,然后分装成小份贮存于 -20℃。
8mol/L乙酸钾(potassium acetate:溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中,加水定容到 100ml 。
3mol/L乙酸钠(sodium acetate:溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水中, 用冰乙酸调溶液的 pH 至 5.2, 再加水定容到 100ml 。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液 (0.5mol/L , 混合后形成 EDTA 的三钠盐。
或称取 186.1g 的 Na2EDTA·2H2O和 20g 的 NaOH ,并溶于水中,定容至 1L 。
1mol/L HCl:加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。
25mg/ml IPTG:溶解 250mg 的 IPTG (异丙基硫代 -β-D-半乳糖苷于 10ml 水中, 分成小份贮存于 -20℃。
100mmol/L PMSF:溶解 174mg 的 PMSF (苯甲基磺酰氟于足量的异丙醇中, 定容到 10ml 。
分子生物学实验室常用试剂配制方法
分子生物学实验室常用试剂配制方法（转）/experient/Molecular_Biology/20487.html一. 常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA 酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA•2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
分子生物学常用试剂配制表
LB 培养基PBS 缓冲液1x 10x 胰蛋白胨Tryptone 10g/L液体Na2HPO4（8mM/L ）1.14g/L11.36g/L酵母提取物Yeast extract 5g/L Nacl(136mM/L)7.95g/L 79.56g/L氯化钠Nacl10g/L KH2PO4(2mM/L)0.27g/L 2.72g/L 琼脂20g/L固体Kcl(2.6mM/L)0.2g/L 1.94g/L ddWater 至1L 至1LSDS-PAGE 电泳缓冲液5X NaOH 调节pH 至7.4-7.6Tris 15.1g 用前稀释TBS 缓冲液1X 10X甘氨酸94g Tris 2.42g/L 24.2g/L SDS 5g氯化钠Nacl 8g/L 80g/L ddWater 至1L ddWater 至1L 至1LHcl 调节pH 至7.4-7.6WB 湿转转膜液10X 加500ul Tween-20/L 得PBST/TBST Tris 30.3g/用前稀释甘氨酸144g/L细胞破碎缓冲液ddWater 至1L Kcl(300mM)22.37g/L WB 湿转转膜液使用KH2PO4(50mM) 6.81g/L 10X Trans Buffer 100mlEDTA(1mM)0.292g/L 甲醇200ml ddWater 至1L pH8.0ddWater 700ml 10%SDS 50℃加热可促溶解IPTG （1mM/L ）1ul+1ml 菌液SDS 10g IPTG 2.38g10XddWater 至100ml 灭菌ddWater 至10ml稀释10倍后10ul+1ml 菌液10%过硫酸铵APS3周内使用过硫酸铵APS0.2g Amp （50-100ug/ml ）10X1ul+1ml 菌液ddWater 2ml Amp 1g 灭菌ddWater至10ml1.5MTris-Hcl pH 8.8Hcl 调至8.8稀释10倍后10ul+1ml 菌液Tris 18.8g ddWater 至100ml考马斯亮蓝染色液过滤后可循环使用1M Tris-Hcl pH6.8Hcl 调至6.8甲醇500ml Tris 12.12g 乙酸100ml ddWater 至100ml R-250考马斯亮蓝0.5gddWater 至1L考马斯亮蓝脱色液乙醇比例越高脱色越快3705ZZL甲醇/乙醇100-500ml 乙酸50ml ddWater 至1LTAE 50X ELISA 包被液Tris 242g 先溶解再加乙酸后定容Na2CO3 1.59g pH9.6Na2EDTA·2H2O 37.2g NaHCO3 2.93g ddWater 800ml灭菌ddWater 至1L 乙酸57.1ml ddWater 至1L 生理盐水0.9%氯化钠Nacl 9g 灭菌使用SDS 分离胶浓度分离范围ddWater 1L6%50-150kd 8%30-90kd 鲜血培养基10%20-80kd 培养基100ml 约37℃加血12%12-60kd 鲜血5ml 15%10-40kd巧克力培养基同样5%鲜血于≥90℃时加入琼脂糖凝胶琼脂糖1XTAE 1%核酸染料透析袋处理0.2g 20ml 6/8/11孔1ul 2%(W/V)碳酸氢钠+1mmol/L ED TA(pH 8.0)煮沸10min 0.3g 30ml 13孔 1.5ul 0.4g 40ml 18/25孔2ul 0.3g 20ml 1.5%1ul ddWater 清洗0.4g20ml2%1ul1mmol/LEDTA(pH 8.0)煮沸10min包涵体溶解液包涵体洗涤液磷酸钠（20mm ） 3.27g Hcl 调至pH 7.4EDTA （0.5mM ）0.146g Hcl 调至pH8.0氯化钠(300mM)17.53g Nacl （100mM ） 5.844g 咪唑（10mM ）0.68g Tris （50mM ） 6.06g 尿素（8M ）484.8g TritonX-100（1%）10mlddWater 至1L ddWater 至1L 加入后超声10min ，离心20min 0.1M 氯化钙CaCl2感受态用蛋白复性缓冲液CaCl2 1.1g 照紫外灭菌Nacl （100mM ） 5.85g Hcl调至pH8.灭菌ddWater 10mlTris （50mM ） 6.06g甘油（5-10%）50ml枸橼酸钠抗凝剂109mM/LGSH （2mM)0.6gNa3C6H5O7·2H2O 32.05g 灭菌后用，以实际分子量计算用量GSSG(0.2mM)0.1gddWater 至1L 尿素(6/4/2/0M)计算1：9血使用ddWater 至1L尿素6-4-2-0梯度分别1LELISA 终止液（2mM/L ）H2SO43705ZZL浓硫酸（98%）21.7ml酸入水中！ddWater 178.3ml。
高中生物常用试剂及其作用
高中生物常用试剂及其作用1.斐林试剂：用于检测还原糖。
成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.05g/ml CuSO4(乙液)。
用法：将斐林试剂甲液和乙液等量混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，现配现用，水浴加热，如待测液中存在还原糖，则呈砖红色。
2.双缩脲试剂：用于检测蛋白质或者多肽（注意：氨基酸不和其发生作用）。
成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.01g/ml CuSO4(乙液)。
用法：向待测液中先加入1ml甲液，摇匀，再向其中加入3~4滴乙液，（先A后B，A大于B）。
摇匀。
如待测中存在蛋白质，则呈现紫色。
3.苏丹Ⅲ：用于检测脂肪。
可将脂肪染成橘黄色苏丹Ⅳ：用于检测脂肪。
可将脂肪染成红色4.碘液：用于鉴定淀粉的存在。
遇淀粉变蓝。
遇糖原变红5.二苯胺：用于鉴定DNA。
在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
6.班氏试剂：由A液（CuSO4溶液）B液（柠檬酸钠和NaCO3溶液）配制而成。
作用及检测原理与斐林试剂相似，但班氏试剂可长期使用。
7.甲基绿和吡罗红：甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。
8.健那绿：检测线粒体，专一性让线粒体染色呈蓝绿色，而细胞质接近无色。
活体染色剂9.龙胆紫溶液或醋酸洋红：碱性染料，用于染色体染色时，前者呈深蓝色，后者呈红色10.改良苯酚品红染液：检测染色体，红色11.溴麝香草酚蓝水溶液：检测CO2，由蓝变绿再变黄12.酸性重铬酸钾溶液：检测酒精，橙色变为灰绿色13.二氧化硅：在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入，可使研磨充分。
14.碳酸钙：研磨绿色叶片时加入，可中和有机酸，防止色素受破坏。
15.丙酮：用于提取叶绿体中的色素16.层析液：(成分：20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成，也可用93号汽油)可用于色素的层析，即将色素在滤纸上分离开17.0.3g/mL的蔗糖溶液：相当于30%的蔗糖溶液，比植物细胞液的浓度大，可用于质壁分离实验。
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PvunitsII 37 ℃ 5’ … G-C-T-C-A-G-OH 3’ … C-G-A-G-T-C-P P-C-T-G-G-A-G … 3’ OH-G-A-C-C-T-C … 5’
影响限制性核酸内切酶活性的因素
DNA样品的纯度：
蛋白质、苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、SDS、NaCl等
措施： 加大酶的用量，1 mg DNA 用 10units 酶 加大反应总体积 延长反应时间
割位置不一致
可变酶：识别序列中的一个或几个核苷酸是可变的 Sunitsbset酶：一种酶的识别序列包含于另一些酶 的识别序列之中
酶切反应注意事项
价格昂贵的酶
决不能用水稀释,以免变性失活。
预先加入除酶以外的所有其他试剂。
取酶立即放于冰上。分装小份避免反复冻融。
使用无菌的新吸头。
少加水,使体积最小,•但保证酶液体积不超过总体积的10％,否
OH P
PstI等产生的3’粘性末端
5’ … G-C-T-C-T-G-C-A-G-G-A-G … 3’
3’ … C-G-A-G-A-C-G-T-C-C-T-C … 5’
PstI 37 ℃ 5’ … G-C-T-C-T-G-C-A-OH 3’ … C-G-A-G-P P-G-G-A-G … 3’ OH-A-C-G-T-C-C-T-C … 5’
3’ … C-G-A-C-T-T-A-A-P
5’ … G-C-T-G-OH
OH-G-C-T-C … 5’
P-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ 退火 4-7 ℃
OH P
5’ … G-C-T-G-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ 3’ … C-G-A-C-T-T-A-A-G-C-T-C … 5’
则酶液中的甘油会抑制酶活性。
常用内切酶的单位价格比较
产品名称 公司 N 规格 5000 2000 2500 1000 500 价格 280 120 260 280 120 单位价格 0.056 0.06 0.104 0.28 0.24
BamH I
T P N
Bgl II
T
P
N
500
500
228
310
H i n d III
同一菌株中含多个不同的限制性核酸内切酶,表示在该菌株中发现这种酶的先后次序。
限制性核酸内切酶
II 型限制性核酸内切酶的基本特性
识别双链DNA分子中4 - 8对碱基的特定序列 大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧 识别切割序列呈典型的旋转对称型回文结构
EcoR I的切割位点
EcoR I的识别序列
用于分子克隆的工具酶
限制性核酸内切酶
DNA聚合酶
DNA连接酶
核酸酶
核酸修饰酶
如何选择最合适的限制性内切酶
限制性核酸内切酶的生物功能 影响限制性核酸内切酶活性的因素
限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶的生物功能
• 主要存在于原核细菌中，帮助细菌限制外来DNA的入侵
• 识别双链DNA分子中的特定序列，并切割DNA双链 • 细菌的限制与修饰作用
0.456
0.62
Dpn I
T P N 200 5000 3000 5000 2000 400 500 384 280 120 156 310 200 741 1.9175 0.056 0.04 0.03 0.115 0.5 1.482
5’ … G C T G A A T T C G A G … 3’ 3’ … C G A C T T A A G C T C … 5’
EcoRI等产生的5’粘性末端
5’ … G-C-T-G-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’
3’ … C-G-A-C-T-T-A-A-G-C-T-C … 5’
EcoRI 37 ℃
退火 4-7 ℃
OH P
5’ … G-C-T-C-T-G-C-A G-G-A-G … 3’ 3’ … C-G-A-G A-C-G-T-C-C-T-C … 5’
OH P
PvunitsII等产生的平头末端
5’ … G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G … 3’ 3’ … C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C … 5’
星号活性
在非标准反应条件下,也能切割一些与
其特异识别序列类似的序列。在酶的
名称右上角加一个星号(*)表示,•如
EcoRⅠ*。
必须采用规范的实验步骤,坚持应用推
荐的反应条件。
同裂酶(isoschizomer)或异源同工酶:不同来源的限
制酶可切割同一靶序列 同尾酶(isocaunitsdiners)：来源不同、识别序列 不同，•但产生相同粘性末端的酶。 远距离裂解酶(distant cleavage)：识别位点与切
• hsd R：编码限制性核酸内切酶 • hsd M：编码限制性甲基化酶 • hsd S：编码限制性酶和甲基化酶的协同表达
限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶的类型
主要特性
限制修饰 蛋白结构 辅助因子 识别序列
I型
多功能 异源三聚体 ATP Mg2+ SAM TGAN8TGCT AACN6GTGC
II 型
单功能 同源二聚体 Mg2+ 旋转对称序列
III 型
双功能 异源二聚体 ATP Mg2+ SAM
GAGCC
切割位点
距识别序列1kb处 随机性切割
识别序列内或附近 特异性切割
距识别序列下游 24-26bp处
限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶的命名
属名 种名 株名
Haemophilunitss influnitsenzae d 嗜血流感杆菌d株
影响限制性核酸内切酶活性的因素
DNA样品的甲基化程度：
大肠杆菌中的dam甲基化酶在5‘GATC3’序列中的腺嘌呤 N6位引入甲基，受其影响的酶有Bcl I、MboI等，但
BamH I、 Bgl II、Saunits3A I不受影响
大肠杆菌中的dcm甲基化酶在5‘CCAGG3’或5‘CCTGG3’ 序列中的胞嘧啶C5位上引入甲基，受其影响的酶有 EcoR II等 哺乳动物中的甲基化酶在5‘CG3’序列中的C5位上引入甲基
影响限制性核酸内切酶活性的因素
核酸内切酶的缓冲液性质：
高浓度的酶、高浓度的甘油、低离子强度、极端pH值 等，会使一些核酸内切酶的识别和切割序列发生低特 异性，即所谓的Star activity现象
EcoR I在正常条件下识别并切割5‘GAATTC3’序列，但在甘 油浓度超过5%（v/v）时，也可切割 5‘PunitsPunitsATPyPy3’或者5‘AATT3’